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胃癌外周血微小核糖核酸表达谱的初步分析
目的 研究胃癌患者外周血微小核糖核酸(miRNA)的表达,初步建立胃癌特征性的循环miRNA表达谱,为深入研究miRNA与胃癌发生、发展并寻找新的分子标志物提供依据.方法 选取6例胃癌患者和6例健康体检者,提取外周血总RNA,进行miRNA表达谱检测和生物信息学分析,采用实时定量PCR技术对芯片检测结果进行验证,对筛选出的显著差异表达miRNA的靶基因进行预测.结果 胃癌组与对照组对比共有54个差异表达miRNA,其中表达上调的miRNA为35个(miRNA-504、miRNA-183、miRNA-938、miRNA-1285、miRNA-576-3p、miRNA-663 等),表达下调的miRNA为19个(miRNA-433、miRNA-193b、miRNA-329、miRNA-409-3p、miRNA-154等).实时定量PCR对其中2个上调miRNA(miRNA-504和miRNA-183)和2个下调miRNA(miRNA-433和miRNA-193b)的验证结果与芯片检测结果间具有较好的一致性.结论 胃癌患者外周血中具有特异性的miRNA表达谱,这些差异表达的miRNA有可能成为新的胃癌诊断分子标志物.
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食管鳞癌中微小核糖核酸-21的作用及对靶蛋白的影响
目的 探讨微小RNA(miRNA)-21对食管鳞癌细胞Eca109和哈萨克族食管癌的促增殖作用及对程序性细胞死亡基因4(PDCD4)表达的影响。方法将食管鳞癌细胞系Eca109分为miRNA-21 Mimics组（转染序列5′-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3′）、miRNA-21抑制剂组（转染序列5′-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3′）、阴性对照组（转染随机序列）和正常对照组（不予转染等任何处理）。细胞按4.5×105个/孔接种于6孔板，基于RNA干扰(RNAi)技术、使用脂质体2000试剂进行细胞转染。采用细胞计数法检测转染后各组细胞的增殖情况。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞的miRNA-21转录水平。采用Western印迹技术检测转染后各组PDCD4蛋白表达情况。检测18对哈萨克族食管癌及其对应的癌旁正常食管组织中miRNA-21转录和PDCD4蛋白表达情况。结果 转染48 h后，与正常对照组比较，miRNA-21Mimics组Eca109细胞数增加36％(P=0.002)，miRNA-21抑制剂组细胞数减少28％(P=0.002)，阴性对照组细胞数变化不明显(P=0.515)。转染48 h后，miRNA-21抑制剂组、miRNA-21 Mimics 组、阴性对照组、正常对照组miRNA-21的相对表达量分别为0.37±0.10、9.17±1.08、0.74±0.23和1.04±0.34,PDCD4蛋白相对表达量分别为1.47±0.11、0.61±0.09、0.89±0.12、0.79±0.02。与正常对照组比较，miRNA-21抑制剂组miRNA-21相对表达量下降(P=0.031)、PDCD4蛋白相对表达量上调（P=0.001），miRNA-21 Mimics组miRNA-21相对表达量上升(P=0.001)、PDCD4相对表达量下调(P=0.030)，阴性对照组则差异无统计学意义（P值分别=0.272和0.541）。18对哈萨克族食管癌组织中16对的miRNA-21相对表达量(0.11±0.09)高于其对应的癌旁正常食管组织(0.03±0.03，P=0.001)，PDCD4蛋白相对表达量（0.92±0.39）低于其对应的癌旁正常食管组织（1.57±0.80，P=0.004），且癌组织中miRNA-21相对表达水平越高，PDCD4蛋白相对表达水平越低（r=-0.538，P=0.046）。结论miRNA-21可能通过抑制PDCD4蛋白表达而促进食管鳞癌细胞Eca109增殖，并且参与哈萨克族食管癌的发生。
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无淋巴结转移结肠癌微小核糖核酸表达谱的初步研究
目的:探讨无淋巴结转移结肠癌微小核糖核酸(microRNA)表达谱,筛选与结肠癌早期发生、发展相关的特异性microRNA.方法:选取手术、病理证实未发生淋巴结转移的结肠癌及大于癌旁5 cm结肠组织标本各3例,抽提分离miRNA,与Agilent microRNA基因芯片杂交,并进行图像和数据分析.运用microRNA特异引物对差异表达的microRNA进行荧光定量实时聚合酶链反应(RT-RCR)验证.结果:筛选出在结肠癌中差异表达的microRNA有14个,其中12个microRNA表达水平增高,分别为miR-106b、miR-135b、miR-18a、miR-18b、miR-196b、miR-19a,miR-224、miR-335、miR-424、miR-20a*、miR-301b和miR-374a;2个microRNA表达水平降低,分别为miR-378和miR-378*.miR-106b和miR-19a下游存住符合要求的靶基凶数目众多.检测了芯片中显示表达上凋的miR-18a和miR-135b在3例结肠癌组织和癌旁组织中的表达,结果显示miR-18a和miR-135b在3例痛组织和癌旁组织中表达均上调;荧光定量RT-PCR结果与microRNA芯片的结果符合.结论:miR-106b、miR-135b、miR-18a、miR-18b、miR-196b等microRNA在结肠癌与癌旁组织中存在差异表达,预测其下游靶基因中大部分与肿瘤相关,提示它们可能在结肠癌早期发生、发展讨程审起着重要的调控作用.
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miR-215在进展期结肠直肠癌中的表达及其临床意义
目的:研究miR-215在结肠直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达及其临床意义.方法:研究对象是我院2007年1月至6月的进展期CRC病人,从入选病人的石蜡包埋组织中提取microRNA,进行实时定量PCR检测.结果:共有42例CRC病人入选,男25例,女17例；直肠癌18例,结肠癌24例.miR-215在CRC组织中的表达水平低于配对的癌旁正常组织(P＜0.001)；CRC组织中miR-215下降不明显者的生存时间较长(P=0.035)、P53表达水平较高(r=0.556,P＜0.001).结论:miR-215可能成为CRC的预后标志物.
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miRNA在间充质干细胞成骨分化过程中的作用
间充质干细胞作为种子细胞在组织工程和再生医学领域有极大的应用前景，尤其是在骨组织工程中的应用受到了广泛关注。间充质干细胞的成骨分化机制复杂，受到多方面因素的影响，不同种类的miRNA可分别参与抑制或促进间充质干细胞的成骨分化，在其分化过程中具有核心作用。本文对不同作用的miRNA进行归类和总结，期待为未来的研究提供思路。
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肠炎和肠炎相关结直肠癌miRNA表达检测及生物信息学分析
背景与目的：炎症性肠病(inflammatory bowel diseases，IBD)为一组慢性肠道疾病，包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)与克罗恩病(Crohn’s disease，CD)。肠炎相关性结直肠癌(colitis-associated col-orectal cancers，CAC)是由IBD癌化形成的一种恶性肿瘤。该研究通过检测UC、CD和CAC组织中相关微小核糖核酸(miRNA)的水平，初步探讨其作为肠炎癌转化分子标志物的可能性，并对在肠炎和CAC中显著变化的一组miRNAs进行靶基因归集和生物信息学分析，为以miRNAs为靶点的基因治疗提供理论和实验基础。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR)技术，检测13例UC组织、3例CD患者组织、12例CAC组织及8例正常肠组织中16种miRNAs的表达。通过生物信息学对显著变化的一组miRNA进行靶基因分析，将文献中已报导的所有靶基因进行汇总，并利用DAVID数据库对靶基因进行功能富集分析(GO-analysis)和信号转导通路富集分析(KEGG-analysis，BIOCARTA-analysis)。结果：炎症相关miR-146a和癌症相关miR-27a、miR-29a、miR-20a、miR-21在UC、CD和CAC中的表达都显著高于正常结肠组织，且这一组miRNA的靶基因都富集在癌症相关通路、免疫信号相关通路和炎癌转换相关通路上。结论：miR-146a、miR-27a、miR-29a、miR-20a和miR-21可能是参与肠炎向结直肠癌转化的一组miRNA。
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微小核糖核酸的分子机制及其在药物设计中的应用
微小核糖核酸(miRNA)是一类长约19～23个核苷酸的内源性非编码核糖核酸(RNA),与基因的表达调控密切相关.其在生长发育、细胞分化与增生、细胞凋亡、激素分泌、脂肪代谢及癌症的发生发展等生命活动中具有重要作用.miRNA作为潜在的药物开发新靶点引起关注,基于miRNA的分子机制及其在药物研发中的应用值得探讨.
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微小核糖核酸在白塞病发病中的作用及其临床应用前景
微小核糖核酸(miRNA)是核糖核酸干扰的内源性介质,通过诱导转录后靶基因表达沉默发挥生物学作用.miRNA对机体免疫细胞具有多种调控功能,参与固有免疫和适应性免疫的调节.异常表达的miRNA通过调节免疫细胞炎性因子参与白塞病(Behcet's disease,BD)的发病,可能成为BD诊断的标志物和治疗靶点.本文从miRNA调节自身免疫,部分miRNA参与BD发病的机制,miRNA潜在的临床应用价值等进行综述.
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微小核糖核酸荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立及其在急性肺损伤中的表达分析
目的 探讨微小核糖核酸(miRNA)荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法的建立条件,并运用这一方法对急性肺损伤中miRNAs的表达进行分析.方法 设计miRNA特异的颈环结构反转录引物,对miRNA进行反转录,得到miRNA的环状脱氧核糖核酸(cDNA).分析miRNA cDNA定量PCR过程中的标准曲线和熔解曲线,确定该检测方法的检测灵敏性和特异性.应用miRNA的荧光定量PCR检测方法分析脂多糖(LPS)诱发的急性肺损伤小鼠中miRNA的表达.结果 miRNA特异的颈环结构反转录引物实现了miRNA长度的延长.通过对心肌特异表达的miRNA-1进行实时荧光定量PCR检测,表明miRNA-1是心肌组织特异表达的miRNA.通过该方法对LPS诱发的急性肺损伤小鼠(急性肺损伤组)进行分析,发现与对照组比较,急性肺损伤组的miRNA-23a的相对表达量显著降低(P＜0.05),miRNA-155、miRNA-451的相对表达量显著升高(P值均＜0.01),miRNA-21的相对表达量未发生改变(P＞0.05).结论 本实验建立的miRNA实时荧光定量PCR具有较高的精确性和特异性,通过该方法发现多种miRNA在LPS诱发的急性肺损伤中异常表达.
关键词： 微小核糖核酸 A549肺腺癌细胞株 脂多糖 急性肺损伤 颈环结构 -
miR-196a在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
目的 探讨微小核糖核酸-196a(microRNA-196a,miR-196a)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达水平及其相应临床意义.方法 从44例NSCLC组织及其相应癌旁组织中提取总RNA,并使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测miR-196a的相对表达量,分析NSCLC患者临床TNM分期及无病生存期(DFS)与miR-196a表达水平之间的关系.结果 miR-196a在86.36％(38/44)的NSCLC组织中相对高表达;临床分期Ⅲ期+Ⅳ期的NSCLC患者肿瘤组织中miR-196a的相对表达量(153.87±32.57)显著高于Ⅰ期(88.99±35.89)及Ⅱ期患者(96.37±46.53)的相对表达量(P均＜0.01).肿瘤组织中miR-196a高表达的NSCLC患者其中位DFS(15个月)显著短于miR-196a低表达患者(27个月,P＜0.05).结论 NSCLC组织中miR-196a高表达提示临床预后不佳,miR-196a有望作为NSCLC预后预测的分子标志物.
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上调miRNA-100对胃癌SGC-7901细胞侵袭和转移的影响
目的 探讨微小核糖核酸(miRNA)-100对人胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移能力的影响.方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为空白对照组、阴性对照组和miRNA-100转染组.应用脂质体法,miRNA-100转染组、阴性对照组分别用构建的miRNA模拟物、阴性对照转染SGC-7901细胞.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞中miRNA-100的表达水平,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Tranwell实验检测细胞的侵袭能力.结果 RT-PCR结果显示,miRNA-100转染组miRNA-100的表达量明显高于空白对照组和阴性对照组(P均＜0.05).细胞划痕实验显示,与空白对照组及阴性对照组比较,24 h和48 h时miRNA-100组周边细胞迁移至中央划痕区的距离明显增大,差异有统计学意义(P均＜0.01).Transwell实验显示,与空白对照组和阴性对照组相比,转染miRNA-100后,穿越小室的SGC-7901细胞数目明显减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 转染miRNA-100可使SGC-7901细胞的迁移能力明显降低、细胞的侵袭能力被抑制,上调miRNA-100能抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭、转移能力.
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microRNA-454在肿瘤中的研究进展
微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类进化保守、长度约为22个核苷酸的小分子非编码RNA.miRNA是以RNA形式发挥生物学功能的单链短分子,通过与靶mRNA结合,抑制目标基因翻译或降解mRNA.目前,人类基因组中已确认的miRNA有1 000多种,其中miRNA-454因其重要的基因调控作用受到了广泛的关注.在多种肿瘤细胞及炎症细胞中均存在miRNA-454的异常表达,故推测其与肿瘤的发生、发展密切相关.随着研究的深入,miRNA-454可能成为新的肿瘤标志物及肿瘤基因治疗的新靶点.
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溃疡性结肠炎相关分子机制研究进展
溃疡性结肠炎(UC)是一种弥散的慢性非特异性炎性肠病.UC难以根治、易复发,引起肠道反复损伤,终形成息肉,甚至恶变形成结肠癌.UC的发生、发展和治疗的分子机制仍不清楚.本文就相关细胞信号分子的研究进展在UC发病和治疗中的作用机制及中药治疗调控这些信号分子的研究进展进行综述,以期为UC治疗提供新思路和有益线索.
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交感-肾素-血管紧张素系统基因及其表观遗传参与高血压的形成机制和研究进展
原发性高血压(essential hypertension,EH)由于其较高的发病率和病死率,已经成为影响人类健康的重大疾病之一,可导致脑卒中、冠心病、肾脏疾病等,全球总患病率逐年增高,预计在2025年,全球EH的患者可达到15.6亿[1].EH是遗传因素和环境因素(压力)相互作用所导致的一种复杂性病症.有研究表明,交感神经系统、肾素-血管紧张素系统和内分泌系统参与血压的调节,其中交感-肾素-血管紧张素系统在EH的发生、发展中起着关键作用[2].本文就交感-肾素-血管紧张素系统基因及其表观遗传参与高血压的形成机制和研究进展做一综述如下.
关键词： 交感-肾素-血管紧张素系统 高血压 基因 表观遗传学 微小核糖核酸 -
MicroRNA-146与肿瘤
微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类长度约为21～23个核苷酸(nucleotide,nt)的内源性小单链非编码RNA,在机体进化过程中高度保守,通过转录后调节机制参与机体各器官的生物学功能.miRNAs介导的基因表达在维持正常的细胞周期、分化、凋亡、代谢等方面发挥着作用[1].
关键词： 微小核糖核酸 微小核糖核酸-146 肿瘤 核因子-κB -
miR-21和miR-93表达水平与三阴性乳腺癌发生发展的相关性研究
目的 探讨miR-21和miR-93的表达水平与三阴性乳腺癌(TNBC)发生发展的相关性.方法 选择行乳腺癌根治术的女性患者86例,收集癌组织与正常乳腺组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-21和miR-93的相对表达量,并分析其与临床病理特征的相关性.结果 miR-21和miR-93在TNBC组织中相对表达量高于癌旁组织;TNBC组织中,miR21高表达54例,占62.79％,miR-93高表达50例,占58.14％;miR-21和miR-93在肿瘤直径＞5 cm、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期以及淋巴结转移的患者中高表达率显著增高(P＜0.01);miR-21和miR-93的表达水平与患者年龄、月经状态、病理分级无明显相关性.癌组织中miR-21与miR-93表达水平呈显著正相关(r=0.761,P＜0.01).结论 miR-21与miR-93在TNBC中表达异常增高,且与肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移有关,可作为TNBC诊断及判断预后的辅助指标.
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星形细胞瘤患者癌组织和血清miR-497表达下降及其临床意义
目的 检测星形细胞瘤患者癌组织和血清中miR-497的表达水平及治疗前后血清miR-497的变化,探讨其作为分子标志物的可能性.方法 采集8例星形细胞瘤患者癌组织、4例癌旁组织、3例正常脑组织以及133例治疗前患者的(WHOⅡ级55例、Ⅲ级45例和Ⅳ级33例)血清样本,用实时荧光定量RT-PCR法检测miR-497含量,并以80例年龄、性别匹配的健康人作对照.对其中14例患者进行术前、术后血清miR-497含量的比较,ROC曲线分析miR-497对星形细胞瘤的诊断价值.结果 miR-497在癌组织中的表达量明显低于癌旁组织和正常脑组织(F=13.78,P＜0.05),在患者血清中的浓度也显著降低[(112.69±54.58) fmol/L vs(254.32±142.12) fmol/L,t =10.31,P＜0.01].用于星形细胞瘤诊断的miR-497 ROC曲线下面积(AUCROC)为0.894 (95％ CI,0.853～0.935),敏感性为82％,特异性为90％.血清miR-497在患者术后明显上升[术后(165.69±56.87) fmol/L vs术前(93.77±38.50) fmol/L,=3.92,P＜0.01].结论 星形细胞瘤患者癌组织和血清miR-497低表达,miR-497有望作为该病诊断及预后评价的检测指标.
关键词： 星形细胞瘤 微小核糖核酸 实时荧光定量聚合酶链反应 分子标志物 -
男性不育症患者精浆miR-106b水平变化及意义
目的 检测男性不育症患者精浆全基因组微小核糖核酸(miRNAs)表达谱,筛选差异表达的miR-106b,探讨其作为男性不育症分子诊断指标的可行性.方法 收集163例男性不育症患者及126例正常生育男性精浆,分别混合;用Solexa测序技术分别检测弱精症、非梗阻性无精症和正常生育男性的混合精浆中692种miRNAs的表达,用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)对表达异常的miR-106b在单个样本中逐一进行验证.结果 Solexa测序结果显示,19种miRNAs在不育症患者精浆中的表达量与健康男性相比变化＞2倍,miR-106b在弱精症和无精症患者中分别上调了6.89倍和2.61倍.qRT-PCR结果表明,弱精症组miR-106b含量[中位数(四分位数)]为719.35(518.49,1 183.39) fmol/L,与正常生育组的291.35(148.83,421.56) fmol/L比较,明显升高(U =91.00,P＜0.01);无精症患者miR-106b的含量则明显降低,为60.07(18.38,292.52))fmol/L(U=195.00,P＜0.01).ROC曲线分析显示,miR-106b诊断弱精症和无精症的曲线下面积(AUCROc)分别为0.844 (95％ CI,0.734～0.954)和0.720 (95％ CI,0.575～0.864);鉴別弱精症和无精症的AUGROc为0.902 (95％ CI,0.822 ～0.982).结论 男性不育症患者精浆miR-106b表达水平与正常生育男性存在明显差异,有望成为男性不育症诊断和鉴别诊断的辅助指标.
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2型糖尿病及其微血管并发症患者血清miR-661水平变化及其辅助诊断价值
目的 观察2型糖尿病(T2DM)及其微血管并发症(T2DMC)患者血清miR-661水平变化并分析其临床辅助诊断价值.方法 用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测60例T2DM患者、60例T2DMC患者及60例健康对照者血清中miR-661水平,同时测定空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和糖化血红蛋白(HbA1c)等指标水平,ROC曲线、相关性分析及Logistic regression分析血清miR-661对T2DM及T2DMC的诊断价值.结果 qRT-PCR结果显示,T2DM患者和T2DMC患者血清miR-661相对含量[中位数(四分位数)][M(P25,P75)]分别为230.1(83.6,426.2) fmol/L和441.3 (212.9,1 021.0) fmol/L,与健康人对照组的118 (63.6,192.4) fmol/L相比,均升高(U值分别为1 207和435,P均＜0.01);血清miR-661 T2DM的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.665(95％ CI =0.565～0.765,P＜0.01),T2DMC的AUCROC为0.879(95％CI=0.821 ～0.938,P＜0.01),区分T2DM及T2DMC的AUCROC为0.694(95％ CI=0.600～0.788,P＜0.01);相关性分析结果显示血清miR-661水平与FPG和LDL-C呈正相关(r值分别为0.291和0.149,P均＜0.05),与HDL-C呈负相关(r为-0.243,P＜0.01);进一步用单因素和多因素Logistic regression分析结果显示,血清miR-661是T2DM和T2DMC的独立危险因素(P均＜0.01).结论 血清中表达升高的miR-661是T2DM及T2DMC患者潜在辅助诊断标志物及独立危险因素.
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肾病综合征患儿肾活检组织miRNA检测及意义
目的 分析肾病综合征患儿肾活检组织miRNA的表达水平,并探讨其作为区分肾病病理亚型潜在标志物的可能性.方法 收集肾病综合征患儿肾组织活检标本41例,包括系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN) 22例、微小病变(MCD)8例和毛细血管内增生性肾小球肾炎(ECPGN) 11例,以8例无肾功能不全的成人肾组织为对照组.RT-qPCR检测各组肾组织中miR-191、miR-151-3p、miR-150、miR-19b和miR-30a-5p的表达水平,并分析其与肾功能相关临床指标的相关性.结果 与正常肾组织相比,肾病综合征患儿肾组织中miR-191明显上调(P＜0.01),miR-151-3p明显下调(P＜0.01).此外,MCD组miR-150表达水平明显低于对照组、MsPGN组和ECPGN组(P均＜0.05).miRNA在肾组织中的表达与临床血清学指标IgG、TP和Cr均呈正相关,与TC呈负相关(P均＜0.05).结论 miRNA在肾病综合征患儿肾组织中的表达与病理分型有关,miR-150具有潜在区分肾病患儿MCD型与其他亚型的鉴别诊断价值.
