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microRNA 在糖尿病肾病中的作用
糖尿病肾病（ diabetic nephropathy，DN）是糖尿病患者常见的微血管并发症之一，也是终末期肾病的重要病因，肾小球硬化是本病的特征，但其发病机制仍不清楚。因此，深入认识糖尿病肾病的发病机制，干扰其发病环节，不仅可以减轻患者的痛苦，而且对减轻国家在卫生经济费用方面的负担也有重要意义。微小核糖核酸（ microRNA，miRNA）是一类非编码的微小RNA，近些年有研究发现miRNA在基因中的调控作用，可能成为糖尿病肾病的一种新的诊断标志物和治疗靶点。在本文中作者对与糖尿病肾病有关的miRNA的作用作一综述。
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血清miRNA-122和miRNA-221在原发性肝癌患者的表达及其诊断价值
目的 探讨微小核糖核酸122 (miRNA-122)和miRNA-221在原发性肝癌(PHC)患者血清中的表达及其诊断意义.方法 采用RT-PCR技术检测45例PHC患者(PHC组)及50例正常人(对照组)血清miRNA-122和miRNA-221表达,检测血清甲胎蛋白(AFP)浓度.结果 与对照组比较,PHC组miRNA-122及miRNA-221表达水平上调(P.＜0.05).计算miRNA-122和miRNA-221的曲线下面积分别为0.917和0.945,PHC诊断灵敏度分别为89.20％和97.29％,特异度为77.78％和77.78％,准确度为87.27％和90.90％.rniRNA-122和miRNA-221的表达与AFP无明显相关性.结论 血清miRNA-122及miRNA-221可作为PHC潜在的临床诊断标记物,联合检测血清AFP,可以明显提高PHC的早期诊断率.
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NEDD9基因miRNA干扰质粒的构建及鉴定
目的 构建神经元表达发育下调基因9 (NEDD9)特异性微小核糖核酸(miRNA)干扰质粒,检测其在胃癌SGC-7901细胞中的干扰效果.方法 根据GenBank中提供的NEDD9基因序列,设计4种NEDD9靶向干扰序列(MR0112-1、MR0112-2、MR0112-3和MR0112-4)及1种阴性对照干扰序列(MR0112-N),连接到pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体中,构建重组质粒.重组质粒转染人胃癌细胞株SGC-7901;采用FQPCR和Western blot法检测转染前后SGC-7901细胞中NEDD9mRNA及蛋白的表达.结果 测序表明,4种干扰质粒的干扰序列及读框完全正确.FQ-PCR和Westernblot结果显示,转染MR0112-1、MR0112-2、MR0112-3和MR0112-4质粒后其NEDD9表达较未处理组分别下降88.01％、96.70％、78.55％和81.34％ (P＜0.05),以MR0112-2干扰效果为明显.阴性质粒组NEDD9 mRNA表达与未处理组比较无明显变化(P＞0.05).结论 成功构建了NEDD9干扰质粒,为进一步研究NEDD9基因表达在胃癌增殖、迁移、侵袭过程中的作用提供实验基础.
关键词： 神经元表达发育下调基因9 胃癌 微小核糖核酸 -
脂肪干细胞分化成血管内皮细胞前后miRNA的差异表达
目的：探讨人脂肪间充质干细胞向血管内皮细胞诱导分化前后microRNA （miRNA ）的差异表达，预测其靶基因。方法对人脂肪间充质干细胞诱导成的血管内皮细胞进行鉴定后，提取人脂肪间充质干细胞向血管内皮细胞诱导分化前后的 miRNA ，微阵列芯片检测表达谱的变化，对有显著差异的miRNA进行实时荧光定量PCR验证，通过TargetScan、Miranda、PITA 、RNAhybrid和microTar五个数据库预测靶基因。结果筛选、验证出四个显著差异表达的miRNA。其中，miR‐29b‐3p和miR‐5096为显著上调，miR‐143‐3p和 miR‐145‐5p为显著下调。预测到 OCT4、SOX2、KLF4、TGFB2、IGF1、TAF11、TMEM169、UHRF1和OSBPL6等相关靶基因。结论人脂肪间充质干细胞向血管内皮细胞诱导分化前后存在显著差异性表达的miRNA ，提示这些miRNA在其分化中有重要的调控作用。
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miR-193a-3p对人Hep-2喉癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响
目的 探讨miR-193a-3p对人Hep-2喉癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及相关机制.方法 用脂质体2000将miR-193a-3p成熟体模拟物(A组)及相应的阴性对照片段(B组)转染Hep-2细胞,以未转染组(C组)作空白对照.MTT法测定各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,Transwell侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力,实时定量PCR法检测各组miR-193a-3p的表达,Western blot检测抗凋亡因子髓细胞白血病基因(Mcl-1)蛋白的表达.结果 与B、C组相比,转染48 h后,A组细胞增殖率降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),穿过聚碳酸酯膜的细胞数减少(P＜0.01),miR-193a-3p表达水平升高(P＜0.05),Mcl-1蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 miR-193a-3p可能通过调控Hep-2细胞中Mcl-1基因的表达,抑制细胞的增殖、侵袭能力,促进其凋亡.
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血清微小RNA-409-3p表达在乳腺癌早期诊断中的价值
目的 探讨血清微小RNA(miR)-409-3p表达水平在乳腺癌早期诊断中的潜在价值.方法 采用实时荧光定量PCR检测50例乳腺癌患者外周血、肿瘤组织和癌旁组织以及50例健康女性外周血miR-409-3p表达水平,分析miR-409-3p表达在血清与组织中变化趋势的相关性.结果 乳腺癌患者肿瘤组织中miR-409-3p表达水平低于癌旁组织,乳腺癌患者血清中miR-409-3p表达水平亦低于健康女性(P＜0.05).乳腺癌患者血清中miR-409-3p变化趋势与组织中保持一致.结论 血清miR-409-3p表达能反映乳腺癌的发生,有可能成为乳腺癌早期临床诊断的重要标记物.
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微小RNA-1271对胰腺癌中Rab34表达的影响
目的 探讨微小RNA-1271 (miR-1271)对胰腺癌中Rab34表达的影响.方法 收集22例胰腺癌患者癌组织和对应癌旁组织标本.采用qRT-PCR检测癌组织和癌旁组织Rab34和miR-1271 mRNA表达水平,IHC和Western blot检测Rab34蛋白表达水平.细胞转染法检测miR-1271模拟物对胰腺癌细胞Rab34表达的影响,双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-1271结合Rab34的3'非翻译区靶位点.结果 与癌旁组织相比,Rab34 mRNA和蛋白在胰腺癌组织中表达升高(P＜0.05),miR-1271mRNA表达降低(P＜0.05).miR-1271模拟物转染后抑制了胰腺癌细胞Rab34蛋白的表达.Rab34是miR-1271作用的靶基因.结论 Rab34可能是胰腺癌的分子标志物,miR-1271可调控其表达.
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微小核糖核酸作为胃癌诊断生物标志物的筛选及验证
目的 筛选可作为胃癌诊断生物标志物的微小核糖核酸(miRNA).方法 提取100例胃癌患者和60例健康体检者的血清RNA,采用定量PCR芯片分析和荧光定量PCR检测胃癌患者血清miRNA水平的异常,采用ROC曲线分析候选miRNA对胃癌的诊断效能.结果 与健康体检者相比,在胃癌患者中鉴定得到5个水平上调和4个水平下调的miRNA;ROC曲线分析验证,这9个miRNA共同诊断胃癌的AUC为0.934[95％CI(0.877～0.992)](P＜0.01).结论 检测多种在胃癌患者中水平异常的miRNA组合能够作为胃癌诊断的潜在指标.
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SATB2的3'UTR荧光素酶报告基因载体的构建及miR-31靶基因验证
目的 构建特异AT序列结合蛋白2(SATB2)的3′非翻译区(3′UTR)荧光素酶报告基因载体行微小RNA-31(miR-31)靶基因验证.方法 应用生物信息学预测软件TargetScan、MirBase和PicTar对miR-31靶基因进行预测,选定靶基因SATB2的3′UTR克隆到带有萤火虫荧光素酶的真核表达载体(PGL3-control)下游,通过双荧光素酶报告基因检测miR-31对靶基因SATB2的3′UTR的调控能力.Western blot检测miR-31模拟物/抑制物瞬时转染人高转移肺腺癌细胞95D对SATB2蛋白表达的影响.结果 成功构建SATB2的3′UTR表达载体PGL3-SATB2.双荧光素酶报告基因分析表明,miR-31能够作用于SATB2的3′UTR.Western blot检测结果显示,与空白组相比,转染miR-31模拟物组的SATB2的蛋白表达降低(P<0.01),而转染miR-31抑制物组的SATB2的蛋白表达升高(P<0.01).结论 miR-31作用于SATB2的3′UTR可在转录后水平上调SATB2蛋白的表达.SATB2是miR-31的靶基因,有望成为肿瘤生物治疗的靶点.
关键词： 微小核糖核酸 肺癌 特异AT序列结合蛋白2 -
淋巴细胞相关miRNAs在肺炎支原体肺炎患儿的表达差异
目的 研究淋巴细胞相关微小核糖核酸(miRNAs)在肺炎支原体肺炎(MPP)患儿的表达差异.方法 采用miRNA芯片技术筛选MMP患儿12例(A组)和非MPP患儿12例(C组)血液淋巴细胞中差异表达的miRNAs,RT-PCR方法验证芯片检测结果和检测参与淋巴细胞调节相关的特异性miRNAs表达情况.结果 A组初步建立MPP患儿血液淋巴细胞中miRNAs异常表达谱,筛选出105个上调表达的miRNAs和133个下调表达的miRNAs.与C组相比,A组30个miRNAs上调大于5倍,10个miRNAs上调大于10倍,133个miRNAs下调小于0.5倍(P＜0.05).A组miRNA-181a、miRNA-152-3p、miRNA-126-3p、miRNA-29c-3p和miRNA-20-3p表达水平均高于C组(P＜0.05).结论 miRNAs在MPP患儿血液淋巴细胞中存在差异表达,可能通过调节淋巴细胞功能参与免疫反应.
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微小 RNA 多态性与中国女性人群乳腺癌发病及病理特征的相关性研究
目的：探讨6个微小 RNA （ microRNA ）多态性位点（ rs11614913， microRNA－196a2；rs3746444， hsa－mir－499；rs2910164，microRNA－146a；rs2292832，microRNA－149；rs6505162，microRNA－423；rs895819，microRNA－27a）与中国女性乳腺癌发病风险及病理特征的相关性。方法采用病例对照研究，选取350例乳腺癌患者为病例组及350名正常女性为对照组，采用Massarray SNP技术检测6个多态性位点的基因型，采用免疫组化法检测乳腺癌组织中的雌激素受体及孕激素受体表达，分析各基因型与乳腺癌发生的关系及与乳腺癌病理参数的关系。结果 rs3746444GG基因型在病例组中（OR＝1．71，95％CI：1．16～2．52）的频率显著高于对照组。分层分析结果显示，在绝经后的人群中，rs3746444GG基因型病例组中的频率（ OR＝2．19，95％CI：1．16～4．15）显著高于对照组。 rs3746444GG基因型在肿瘤分期0～Ⅱ组（OR＝1．92，95％CI：1．17～3．13）、淋巴结转移组（OR＝2．20，95％CI：1．28～3．79）、孕激素受体阴性组中（OR＝2．19，95％CI：1．25～3．82）分布频率均显著高于正常对照组。在绝经后人群中，rs2910164GG基因型在病例组中（OR＝2．19，95％CI：1．16～4．15）的分布频率显著高于对照组。而在绝经前的人群中，rs2910164GG基因型在病例组中（ OR＝0．49，95％CI：0．25～0．98）的分布频率显著低于对照组。结论rs3746444GG基因型与乳腺癌发病风险相关，特别是在绝经后人群中风险更高。 rs2910164GG基因型与乳腺癌的发病风险相关性与妇女是否绝经有关。
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MicroRNA 与神经胶质瘤关系的研究进展
微小核糖核酸（ microRNA， miRNA）是一类重要的非编码小分子RNA，主要在转录后水平调控靶基因表达，在细胞增殖、分化、凋亡等多种生理病理过程中发挥重要作用。研究表明，miRNA的异常表达与神经胶质瘤发生发展密切相关，它们参与胶质瘤的分子病理机制，是潜在的分子标志物和治疗的新靶点，文中就miRNA与胶质瘤关系的研究作一综述。
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微小核糖核酸对食管癌的研究进展
微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的单链小分子核糖核酸,与肿瘤的发生、发展密切相关,癌组织miRNA表达谱与癌旁正常组织差异显著,具有癌组织特异性,是潜在的肿瘤标记物.文中就近年来miRNA与食管癌关系的研究做一综述,探讨miRNA在食管癌的检测、诊断、治疗以及预后判断上的可行性及其临床意义.
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miRNA与肝胆胰肿瘤的关系
微小核糖核酸(micro RNA,miRNA)是一类新发现的非蛋白编码的小分子RNA,能在基因水平对细胞进行调控.近的许多研究证实,miRNA与各种肿瘤的发生、发展关系密切,其中一些miRNA和肝、胆、胰肿瘤的发生和发展有关,对肝、胆、胰恶性肿瘤的早期诊断、治疗和判断预后有重要意义.本文时miRNA的发现、生物学特性及在肝、胆、胰肿瘤细胞中的潜在调节作用进行综述.
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釉基质蛋白诱导MC3T3-E1细胞成骨分化过程中微小核糖核酸的表达
目的 探讨微小核糖核酸(micro ribonucleicacid,miRNA)是否参与到釉基质蛋白(EnamelMatrix Derivative,EMD)诱导的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞成骨分化的过程,并对发生显著变化的miRNA进行分析.方法 将MC3T3-E1用含EMD(刺激组)/不含EMD(对照组)的培养液培养0天、7天和14天,检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,实时聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分析成骨分化标记物ALP、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙素(osteocalcin,OC)的信使RNA(mRNA)水平的表达变化.利用基因芯片技术分析miRNA的相对表达.结果 0天、7天、14天的ALP染色结果显示随着培养时间的增加,两组ALP活性均逐渐增强,EMD刺激组ALP活性增强较对照组更为明显.RT-PCR结果表明,与对照组相比,ALP、BSP、OC的mRNA表达量均显著增加,ALP与OC均于14天时表达量达到峰值,BSP则于7天时处于峰值表达,EMD刺激组MC3T3-E1成骨活性更强;各期11个miRNA表达上调,28个miRNA表达下调,其中miR-335-5p,miR-503已被证实可参与促进骨形成,而miR-30家族(miR-30a,-30b,-30c和-30d)则被证实参与抑制成骨.结论 miRNA参与EMD诱导的MC3T3-E1细胞的成骨分化过程,这一发现可以为了解EMD促进成骨分化的机理及临床应用提供指导.
关键词： 微小核糖核酸 成骨分化 MC3T3-E1细胞 釉基质蛋白 -
TNF-a对BMP-2诱导下小鼠BMSCs成骨分化miRNA表达的影响
目的：探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导下小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的微小核糖核酸（micro ribonucleicacid, miRNA）表达谱的影响。方法给予小鼠BMSCs以下分组刺激：①阴性对照组（ctrl）；②阳性对照组（pos）：BMP-2（200ng/ml）刺激48h；③实验组（48h）：BMP-2（200ng/ml）+TNF-α（10ng/ml）刺激48h；④实验组（72h）：BMP-2（200ng/ml）+TNF-α（10ng/ml）刺激72h，48h和72h后分别提取RNA,应用miRNA芯片检测获得miRNA表达谱，筛选部分差异表达的miRNA进行荧光实时定量PCR（ RT-PCR）验证。结果 miRNA表达谱分析结果表明，与阳性对照组相比，48h双因子刺激下检测到表达上调超过1.5倍的miRNA有44个，72h刺激下检测到22个miRNA，72h与48h相比，检测到24个表达上调超过1.5倍的miRNA，RT-PCR验证与芯片结果基本相符合。结论 miRNA参与调控TNF-α模拟炎症状态下BMP-2诱导BMSCs的成骨分化过程，且相关miRNA在TNF-α作用下表达上调，可能参与调控TNF-α的抑制成骨作用。由此可进一步解释炎性因子对成骨细胞分化的抑制机制，为发现新的药物靶点提供理论依据。
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miR-200c通过激活Wnt/β-连环蛋白信号通路诱导膀胱癌细胞阿霉素耐药
目的:探讨miR-200c表达与膀胱癌细胞阿霉素(DOX)耐药的关系.方法:过表达或抑制miR-200c表达后,检测DOX对膀胱癌细胞(RT4、RT112、T24和TCCSUP)生长抑制作用的变化.Western blot检测miR-200c对Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响,检测Wnt/β-连环蛋白信号激活剂Wnt3a干预对miR-200c诱导膀胱癌DOX耐药作用的影响.结果:抗miR-200c转染后,T24和RT4细胞DOX的耐药性显著下降.DOX干预后,与对照组细胞相比,抗miR-200c转染组膀胱癌细胞凋亡和S期积累明显增加.此外,抗miR-200c转染组膀胱癌细胞中Dkk1,Kremen2和sFRP2等Wnt/β-连环蛋白信号的负调控蛋白表达明显升高,Wnt/β-连环蛋白信号通路活性明显下降.Wnt3a干预能够拮抗抗miR-200c转染的膀胱癌细胞生长抑制作用.结论:miR-200c表达与膀胱癌细胞DOX耐药密切相关,且Wnt/β-连环蛋白信号通路激活介导了miR-200c诱导的膀胱癌细胞DOX耐药性.
关键词： 膀胱癌 阿霉素 微小核糖核酸 miR-200c Wnt/β-连环蛋白信号通路 -
miR-125 a-5 p在非小细胞肺癌血清中的表达及其意义
目的 探究miR-125a-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达情况,分析miR-125a-5p与临床病理特征之间的相关性及其在NSCLC早期诊断中的意义.方法 收集2017年7月至2018年3月安徽医科大学附属巢湖医院44例NSCLC患者为试验组和20例体检的健康志愿者为对照组.采用Q-PCR术检测NSCLC患者和健康者外周血清miR-125a-5p的表达量,并评估其临床意义.结果 试验组血清miR-125a-5p相对表达量为0.025(0.017,0.051),低于对照组的0.050(0.034,0.117),差异有统计学意义(P<0.05).试验组患者miR-125a-5p的表达量与临床TNM分期呈负相关性(r=-0.688,P<0.05),而在性别、年龄、吸烟、组织分型间差异无统计学意义,与癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)水平均无相关性(P>0.05).试验组患者CEA、CYFRA21-1的表达量与临床TNM分期均无相关性(P>0.05).结论 miR-125a-5p在NSCLC患者血清中表达下调,对NSCLC早期诊断优于CEA、CYFRA21-1,可能成为NSCLC早期诊断的重要生物学指标.
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基于核酸检测诊断结核分枝杆菌感染的研究进展
结核病是由结核分枝杆菌感染而引起的传染性疾病。实验室诊断技术的不断进步，为结核病的诊断及治疗提供了多种选择方案。核酸检测是利用分子生物学的理论和技术，通过直接探查核酸的存在状态，从而对人体的状态与疾病做出诊断的方法。近年来，核酸诊断技术的发展极大地推动了实验室的快速诊断，本文就结核杆菌感染后细菌核酸及宿主微小核糖核酸检测方面的新方法、新技术进行综述。
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miRNA-27a及其多态性rs895819与肿瘤关系的研究进展
微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是长度为21～25 nt的非编码小分子单链RNA,参与转录后基因表达调控,对细胞的增殖、凋亡和分化及肿瘤的发生起重要作用.miRNA-27a及其多态性rs895819对肿瘤的发生、发展、预后有调节作用.本文就miRNA-27a及其多态性rs895819与肿瘤关系的研究进展进行综述.
