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幽门螺杆菌感染、微小核糖核酸与胃癌关系的研究进展
胃癌是威胁人类健康常见的恶性肿瘤之一,占全球癌症死亡原因的第2位,在我国,胃癌病死率约为25/10万人口,占所有恶性肿瘤死亡的23.02％,位居首位[1].胃癌的发病过程是一个集遗传、环境及生活习惯等多因素,多机制、多步骤的演变过程.临床及流行病学调查均已证实,幽门螺杆菌(helicobactcr pylori,Hp)感染是导致胃癌发生的重要致病因素[2-3].1994年世界卫生组织(world health organization,WHO)将Hp认定为人类胃癌第Ⅰ类致癌原.近年来,表现遗传学与肿瘤发生的相关性研究已成为肿瘤病因学研究的重要内容,其中微小核糖核酸(microRNA,miRNA)所介导的基因转录后调控方式的发现,为肿瘤发病机制的研究开辟了新的领域和思路.本文就Hp感染、miRNA与胃癌关系的研究作一简要综述.
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微小核糖核酸(miRNA)联合C反应蛋白检测对肺癌早期的诊断价值
目的 探讨微小核糖核酸(miRNA)联合C反应蛋白(CRP)检测对肺癌早期的诊断价值.方法 选取经病理学确诊为肺癌患者42例作为观察组,另取同期健康体检者30例作为对照组,采用RT-PCR检测法检测并比较两组受试者血清中的miRNA 21,miRNA 141,miRNA 145表达水平,采用速率散射比浊法测定及比较两组受试者血清中CRP,同时采用ROC曲线分析联合检测miRNA和CRP对早期肺癌的诊断价值.结果 观察组患者miRNA 21、miRNA 141和CRP表达水平明显高于对照组,mi RNA 145水平则明显低于对照组,差异比较具有统计学意义(P＜0.05).曲线分析结果显示,miRNA和CRP水平联合诊断肺癌早期的ROC曲线下面积、灵敏度、特异度,均较miRNA、CRP水平单独预测肺癌早期的ROC曲线下面积、灵敏度、特异度高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miRNA联合CRP检测诊断肺癌早期的灵敏度和特异度均较高,诊断价值良好,可以作为肺癌诊断的参考指标.
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CD4+T淋巴细胞差异表达microRNA在ACS患者的筛选和鉴定
目的:通过检测急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者外周血CD4+ T淋巴细胞基因的miRNA,筛选与健康正常人差异表达的miRNA,鉴定对CD4+ T淋巴细胞具有调控作用miRNA,初步阐明miRNA在ACS发病机制中的作用.方法:选取入住我院的确诊为ACS患者20例为ACS组,以疑似ACS而冠脉造影正常的住院患者20例作为正常对照组;首先抽取新鲜外周静脉20 mL,使用密度梯度离心法分离出循环血中的单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),再使用免疫磁珠法(Magnetic cell sorting system,MACS)进一步分离出CD4+ T淋巴细胞;分离的CD4+ T淋巴细胞一部分用于检测纯度,另一部分用于芯片检测.CD4+T淋巴细胞纯度检测采用流式细胞术法(Flow cytometry,FCM)检测,分离所得的CD4+T淋巴细胞纯度,且采用台酚蓝检测活细胞数.CD4+ T淋巴细胞合格后再行下一步实验,即将另一部分CD4+T淋巴细胞采用Trizol法提取其细胞内总RNA后分两部分,一部分提取的RNA采用聚乙二醇(Poly ethylene glycol,PEG)方法分离纯化miRNA,另一部分用于real time PCR备用.用分光光度计测定RNA的浓度,使用凝胶电泳质检RNA的质量,合格后再使用miRNA基因芯片进行杂交,再用Affymetrix GeneChip Scanner 3000基因芯片扫描仪检测CD4+T淋巴细胞差异表达的miRNA.另一部分RNA采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)对部分差异表达的miRNA进行验证.结果:使用MACS法分离出高纯度的人CD4+ T淋巴细胞.Trizol法能够提取其细胞内较完好的总RNA.miRNA芯片杂交检测及数据分析结果显示,ACS患者与正常对照者CD4+ T淋巴细胞中,在ACS患者中表达显著上调的有:miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155,在ACS患者中表达显著下调的有:miR-126和miR-211.实时定量结果显示,与对照组比较,ACS组miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155的基因表达均显著上调,miR-126和miR-221的基因表达均显著下调(P＜0.05),与Affymetrix miRNA基因表达谱芯片检测结果一致.结论:筛选鉴定的ACS患者外周血CD4+T淋巴细胞差异表达的miRNA,可能参与了ACS的发生发展.
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微小核糖核酸与肝癌关系研究
微小核糖核酸( microRNA,miRNA)是一类内源性非蛋白编码的单链小分子RNA,长度约为22个核苷酸,通常在转录后水平调节基因的表达.近期的研究表明miRNA具有癌基因和抑癌基因的作用.miRNA的作用涉及细胞的分化、发育、增殖、凋亡等各个方面,在肿瘤的发生、发展过程中起到重要作用.
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微小核糖核酸与肿瘤关系研究进展
微小核糖核酸(micro ribonucleic acid,miRNA)是一类内生的、较短的单链非编码RNA分子,由21～25个核苷酸组成.近年来,发现其与基因表达、细胞生长发育、肿瘤发生等诸多方面的机制和作用具有相关性.在我国发病率高的泌尿系统肿瘤是膀胱癌,其中来自尿路上皮的移行细胞癌占90％以上.国内外研究表明,miRNA与膀胱癌的发生发展有明显的相关性,miRNA可能在膀胱癌细胞发生发展过程中起关键的调节作用,有望为膀胱癌的临床诊断、判断预后及治疗提供新的解决思路.本文对miRNA的分子生物学特征,其与肿瘤及膀胱癌的关系进行了综述.
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子宫内膜癌组织中miRNA-373的表达变化及其临床意义
目的 观察子宫内膜癌组织中miRNA-373的表达变化,并探讨其临床意义.方法 子宫内膜癌患者30例,手术治疗时均留取癌组织,其中20例同时留取癌旁正常组织(癌旁2 cm以外),实时荧光定量PCR检测子宫内膜癌组织及癌旁正常组织中的miRNA-373,分析癌组织中miR-373表达与子宫内膜癌患者临床病理参数的关系.结果 子宫内膜癌组织及癌旁正常组织中miRNA-373的相对表达量分别为3.045±1.664、1.098±0.419,两者相比,P<0.01.miR-373的相对表达量在临床Ⅰ期与Ⅱ/Ⅲ期子宫内膜癌组织中分别为2.251±0.976、4.437±1.718,在高、中、低分化子宫内膜癌组织中分别为2.114±0.769、3.111±1.732、4.755±1.525,在有、无盆腔淋巴结转移子宫内膜癌患者癌组织中分别为4.465±1.589、2.263±1.455,在肌层浸润深度≥1/2与<1/2的子宫内膜癌患者癌组织中分别为4.598±1.685、2.28±0.989,组间相比,P均<0.05.结论 子宫内膜癌组织中miR-373呈高表达,其表达量与子宫内膜癌恶性程度有关,对子宫内膜癌的预后判断有参考意义,并有可能成为子宫内膜癌的潜在治疗靶点.
关键词： 微小核糖核酸 微小核糖核酸-373 子宫肿瘤 子宫内膜癌 -
高血压患者血清 miR-124、NR3 C2蛋白水平变化及意义
目的：观察高血压患者血清miR-124及核受体亚家族C组成员2（ NR3C2）蛋白的水平变化，并探讨其意义。方法采用real-time PCR法检测115例高血压患者（高血压组）和100例健康受检者（对照组）血清miR-124，采用ELISA法检测血清NR3C2蛋白。比较不同性别、年龄高血压患者血清miR-124及NR3C2蛋白水平。结果高血压组血清miR-124、NR3C2蛋白水平分别为0．32±0．008、（1834．04±56．31） pg／mL，对照组分别为1．00±0．070、（401．91±21．96）pg／mL，两组相比，P均＜0．01。高血压组中，41～59岁、≥60岁者血清miR-124较18～40岁者降低，NR3C2蛋白水平升高（ P均＜0．05）；男性患者血清miR-124水平低于女性患者，NR3C2水平高于女性患者（P均＜0．05）。结论高血压患者血清miR-124水平下调，NR3C2蛋白水平升高，二者可能与高血压的发病有关。
关键词： 高血压 微小核糖核酸 miR-124 盐皮质激素受体 核受体亚家族C组成员2 -
miR-204在子痫前期患者胎盘组织中的表达及对滋养细胞增殖和侵袭功能影响观察
目的 观察miR-204在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达变化及其对滋养细胞增殖、侵袭功能的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测60例子痫前期患者和30例正常妊娠孕妇胎盘组织中的miR-204.采用生物学信息法预测miR-204的可能作用靶基因.采用脂质体转染法转染miR-204模拟物至人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo,CCK8实验检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR和West-ern blotting检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA和蛋白.结果 PE患者和正常孕妇胎盘组织中miR-204的相对表达量分别为2.40±0.16、1.02±0.05,两者相比,P<0.01;重度PE和轻度PE患者胎盘组织中miR-204的相对表达量分别为2.84±0.19、1.96±0.13,两者相比,P<0.01.miR-204作用靶基因可能是MMP-9.与对照细胞相比,转染miR-204模拟物的HTR-8/SVneo细胞的增殖能力和侵袭能力明显降低(P均<0.01)、MMP-9 mRNA和蛋白的表达明显下降(P均<0.01).结论 miR-204在PE患者胎盘组织中表达明显增高.miR-204能够通过下调MMP-9的表达使滋养细胞增殖和侵袭能力下降,与PE的发病有关.
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非小细胞肺癌患者血浆miR-10b、miR-122、miR-16和miR-183水平及其与总生存期的关系
目的 观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆miR-10b、miR-122、miR-16、miR-183水平,并探讨其与患者总生存期( OS)的关系. 方法 选择NSCLC患者40例,其中术后复发32例、无复发8例. 采用实时荧光定量PCR法检测血浆miR-10b、miR-122、miR-16、miR-183. 以各miRNA水平均数为界值,将NSCLC患者分为miRNA高水平和低水平,分析不同miRNA水平与患者OS的关系. 结果 无复发者血浆miR-183水平高于复发者(P<0.05),其余miRNA水平二者比较P均>0.05. miR-183低水平者OS高于高水平者(P<0.05),其余miRNA不同水平者OS比较P均>0.05. Cox比例风险回归模型分析显示,miR-183是NSCLC患者OS的独立影响因素( HR=2.854,95%CI为1.154~7.055,P<0.05). 结论 miR-183可能是NSCLC患者OS的独立影响因素,而miR-10b、miR-122和miR-16与患者OS无关.
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大鼠 BMSCs 向心肌样细胞分化过程中miR－128对 Nkx2－5基因的调控作用
目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞（ BMSCs）向心肌样细胞分化过程中miR－128对Nkx2－5基因的调控作用。方法分离培养大鼠BMSCs，应用5－氮杂胞苷将其诱导为心肌样细胞，采用Real－time PCR法检测诱导6、10、14、18、22 d时miR－128、Nkx2－5基因的表达。用生物信息学方法对miR－128和Nkx2－5基因的靶向匹配关系进行预测，显示miR－128与Nkx2－5 mRNA的3′UTR结合情况良好。提取心肌细胞总RNA，扩增Nkx2－5 mRNA 3′UTR片段，构建Nkx2－53′UTR－pmirGLO荧光素酶报告载体，双荧光素酶检测转染Nkx2－53′UTR－pmirGLO以及miR－128模拟物或对照miRNA的荧光强度，鉴定miR－128与Nkx2－5的靶向关系。结果将诱导6 d的Nkx2－5和miR－128的表达量分别设为1，诱导10 d的Nkx2－5表达量为4．33±1．32、22 d为14．78±6．05，诱导10 d的miR－128表达量为0．7762±0．0543、22 d为0．1976±0．0836。 miR－128与Nkx2－5的表达呈负相关（r＝－0．546，P＝0．021）。相对于转染对照miRNA（设定其荧光素酶活性为1），转染miR－128能使Nkx2－53′UTR－pmirGLO的荧光素酶表达下降为0．4354±0．0726。结论 miR－128通过结合Nkx2－5 mRNA 3′UTR抑制其表达，具有负性调控BMSCs向心肌样细胞分化过程中Nkx2－5表达的作用。
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系统性红斑狼疮患者外周血白细胞唾液酸转移酶表达变化及机制探讨
目的：观察系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血白细胞唾液酸转移酶（ST8SIA）的表达变化，并探讨其机制。方法选择SLE患者（观察组）和健康志愿者（对照组）各24例，采用RT-PCR法检测外周血白细胞ST8SIA1～6 mRNA；对有统计学意义的ST8SIA mRNA，采用基因芯片技术分析血浆中靶向其3′非翻译区（3′UTR）的miR-NA。结果两组外周血白细胞均无ST8SIA2、ST8SIA3、ST8SIA5 mRNA表达；观察组ST8SIA1、4、6 mRNA相对表达量分别为1．524±0．229、13．780±1．669、2．238±0．387，对照组分别为1．129±0．106、1．087±0．089、0．550±0．054；两组ST8SIA4、6 mRNA比较，P均＜0．05。靶向调节ST8SIA4 mRNA的miRNA表达下降12条、升高1条，靶向调节ST8SIA6 mRNA的miRNA表达下降、升高各4条。结论 SLE患者外周血白细胞中ST8SIA4、ST8SIA6 mR-NA表达升高，与对其进行靶向调控的miRNA表达异常有关。
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血管紧张素Ⅱ对小鼠胰岛β细胞 miR-375表达的影响
目的：观察血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）对小鼠胰岛β细胞微小RNA-375（ miR-375）表达的影响。方法将对数生长期的小鼠胰岛β细胞株MIN-6随机分为4组，A、B、C组分别加入终浓度为10－4、10－5、10－6 mol／L的AngⅡ，D组加入等体积的PBS。收集各组培养24 h及B组培养24、48、72 h后的细胞，采用RT-PCR法检测miR-375。结果培养24 h后，A、B、C、D组miR-375相对表达量分别为3．75±0．01、3．13±0．23、1．12±0．17、1．00±0．00；A、B组与C、D组比较，P均＜0．05；C组与D组比较，P＞0．05。培养24、48、72 h后，B组miR-375相对表达量分别为3．13±0．23、2．84±0．02、2．80±0．01；B组各时点miR-375相对表达量两两比较，P均＞0．05；而与D组比较，P均＜0．05。结论 AngⅡ可上调小鼠胰岛β细胞中miR-375的表达。
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miR-200c 基因重组慢病毒载体质粒构建及其人结肠癌多药耐药动物模型的建立
目的：构建共同表达人miR-200c基因和荧光素酶基因的慢病毒（Lentivious）表达载体质粒，实现该重组体在人结肠癌多药耐药细胞中的稳定整合以及动物模型的建立，为进一步研究miR-200c调控大肠癌多药耐药提供实验基础。方法将miR-200c基因克隆至慢病毒pGC-Lentivirus表达载体中，测序鉴定后，包装重组慢病毒表达质粒，并进行滴度测试。利用细胞转染技术，将携带miR-200c过表达的慢病毒载体质粒转染到人结肠癌多药耐药细胞株HCT-116／L-OHP中，并接种于裸鼠皮下，以空病毒载体作为对照。待肿瘤生长2周后，随机分为4组，分别给予生理盐水和奥沙利铂（ L-OHP），4周后处死裸鼠，剥取肿瘤，测量肿瘤体积。结果病毒滴度测试佳滴度为2×108 TU／mL。 qPCR结果显示，转染miR-200c-Lentivirus病毒质粒的人结肠癌耐药细胞中miR-200c表达高于转染空载体组以及空白对照组，P均＜0．01。活体成像观察证实，带有荧光素酶的HCT-116／L-OHP-miR-200c-luc细胞在动物体内可被快速而灵敏的检测到，可以准确地观察肿瘤的生长情况。与HCT-116／L-OHP-luc组相比，HCT-116／L-OHP-miR-200c-luc组对L-OHP的敏感性更强，P＜0．05。结论成功构建携带人miR-200c基因慢病毒载体质粒，实现重组体在人结肠癌HCT-116／L-OHP多药耐药细胞中的稳定整合，并建立了带有荧光素酶miR-200c过表达的人结肠癌多药耐药动物模型。
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肺癌细胞及组织中miR-181a、miR-200a、miR-200c表达变化及意义
目的：观察肺癌细胞及组织中 miR-181a、miR-200a、miR-200c 的表达变化，并探讨其临床意义。方法选择人肺癌细胞系NCI-H1299、NCI-H358、H460、A549及人正常支气管上皮细胞HBE，10例肺癌患者的癌组织及其相应癌旁组织。采用RT-PCR法检测各细胞系及组织中的miR-181a、miR-200a、miR-200c，并分析miRNA表达与临床参数的关系。结果 NCI-H1299、NCI-H358、A549细胞中miR-181a相对表达量均低于HBE细胞，NCI-H1299、NCI-H358、H460、A549细胞中miR-200a相对表达量均低于HBE细胞，NCI-H358、H460细胞中miR-200c相对表达量均高于HBE细胞，P均＜0．05。肺癌及癌旁组织中miR-181a和miR-200a相对表达量比较，P均＞0．05；肺癌组织中miR-200c相对表达量高于癌旁组织，P＜0．01。有淋巴结转移的肺癌患者miR-200a相对表达量低于无淋巴结转移者，P＜0．01；其余miRNA相对表达量与临床病理参数均无关，P均＞0．05。结论 miR-181a、miR-200a在肺癌细胞株中表达普遍降低，而miR-200c在肺癌细胞及组织中表达普遍升高，可能与肺癌的发病有关。
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LV3-KiSS1-miRNA 的构建及其在体内外沉默效应观察
目的：构建靶向KiSS1基因的miRNA慢病毒质粒（LV3-KiSS1-miRNA），并观察其在人胚肾293T细胞及SD大鼠体内的沉默效应。方法利用四质粒系统合成LV3-KiSS1-miRNA，分别用LV3-KiSS1-miRNA （观察组）、LV3-N-miRNA （对照病毒组）、细胞培养液（空白对照组）与 KiSS1的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-KiSS1共转染293T细胞，72 h后采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（ GFP）阳性表达率，RT-PCR法检测细胞中的KiSS1 mRNA。将90只21日龄SD大鼠随机分为3组各30只，分别侧脑室注射LV3-KiSS1-miRNA（干扰病毒组）、LV3-N-miRNA （对照病毒组）和生理盐水（生理盐水组）40μL，采用RT-PCT法检测30、35、45日龄时大鼠下丘脑组织中的KiSS1 mRNA。结果空白对照组中无GFP表达，而观察组与对照病毒组的GFP表达率分别为89．4％、94．2％。观察组与对照病毒组、空白对照组比较KiSS1 mRNA表达量减少（P均＜0．01），沉默效率达到86％；对照病毒组与空白对照组比较，P＞0．05。干扰病毒组大鼠各日龄时下丘脑组织中KiSS1 mRNA表达水平明显低于生理盐水组和对照病毒组（P均＜0．05）。结论成功构建LV3-KiSS1-miRNA，并能高效、稳定地抑制293T细胞及SD大鼠下丘脑组织中KiSS1 miRNA的表达。
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干细胞来源外泌体在心肌梗死后心脏修复的研究进展
外泌体是细胞与细胞之间进行信息交流的重要媒介物质,是一类由哺乳动物细胞通过旁分泌方式分泌的天然内源性纳米级囊泡.外泌体可促进心肌细胞存活,促进内皮细胞增殖、迁移及血管新生,从而促进心肌梗死后心脏修复.本文旨在对干细胞来源的外泌体在心肌梗死后心脏修复的研究现状及面临的问题进行综述.
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miRNAs调控肝星状细胞生物学活性机制研究进展
肝星状细胞(HSCs)是肝纤维化形成的主要细胞,其生物学活性已成为防治肝纤维化重要的治疗靶点.但是,迄今尚无十分有效的逆转肝纤维化的治疗手段.微小RNA (miRNA)是转录后水平的细胞调控因子,多项研究发现miRNA通过参与HSC的活化、增殖和凋亡等生物学活性的调控,在肝纤维化的发生、发展过程中具有重要作用,有望成为肝纤维基因治疗的新靶点.
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非编码 RNA 靶向治疗神经胶质瘤研究进展
神经胶质瘤临床常用的治疗方法效果较差，基因靶向治疗是一种新兴的治疗方法。其中，以microRNAs （miRNAs）、长链非编码RNA（lncRNAs）等非编码RNA为治疗靶点的治疗已成为神经胶质瘤的研究热点。 miRNA-21、miRNA-15b、miRNA-124、lncRNAs、小干扰RNA、Piwi相互作用RNA等可抑制胶质瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡，提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，降低肿瘤细胞的侵袭能力。
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miRNA 在胰腺癌发生、发展及临床应用中的研究进展
胰腺癌是危害大的恶性肿瘤之一，早期侵袭与转移是其预后不良的重要因素；微小RNA（ miRNA）是由21～25个核苷酸组成的非蛋白编码的小RNA家族，近年来研究表明其在胰腺癌的发生、侵袭、转移中扮演重要角色，并可作为胰腺癌的治疗靶点及诊断、预后判断的重要指标。
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常染色体显性遗传性多囊肾病早期诊断标志物研究进展
常染色体显性遗传性多囊肾病是常见遗传性肾脏疾病.虽然疾病早、中期,肾脏囊肿呈持续增大,但多数患者肾功能仍处于正常水平.因此,临床需能预测疾病发生、发展的敏感生物学标志物.总肾体积、肾血流量是已知预测常染色体显性遗传性多囊肾病进展的指标.肽素、中性粒细胞明胶酶蛋白、微小核糖核酸等也可能是早期预测常染色体显性遗传性多囊肾病的敏感指标.本文就常染色体显性遗传性多囊肾病早期诊断标志物的研究进展作一综述.
关键词： 常染色体显性遗传性多囊肾病 肽素 中性粒细胞明胶酶蛋白 尿酸 微小核糖核酸 尿蛋白组学
