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伴IgA沉积的微小病变肾病综合征患者血清IgA1糖基化缺陷的检测
目的 通过对伴IgA沉积的微小病变肾病综合征(MCNS-IgA)患者血清中IgA1分子糖基化缺陷程度的检测,探讨MCNS-IgA的可能的病理分类归属. 方法 选择北京大学人民医院肾内科MCNS-IgA患者10例,微小病变肾病综合症(MCNS)患者10例、大量蛋白尿IgAN (H-IgAN)患者10例为对照.用双抗体夹心ELISA法检测各组患者血清IgA1的相对浓度,用黑木凝集素检测IgA1分子的α2,6唾液酸水平,花生凝集素检测IgA1分子的半乳糖水平,蜗牛凝集素检测IgA1分子的N-乙酰氨基半乳糖水平,计算经血清IgA1浓度校正的各糖基水平.观察MCNS-IgA组患者血清IgA1分子糖基化缺陷情况,并且与H-IgAN及MCNS组进行比较.结果 与MCNS组相比,MCNS-IgA肾病患者血清IgA1的α2,6唾液酸(1.232±0.250比较1.379±0.623,P=0.455)、半乳糖缺失(0.204±0.053 vs 0.229±0.088,P=0.454)水平及N-乙酰氨基半乳糖暴露(0.191±0.039 vs0.205±0.068,P=0.626)水半无明显差异.但其血清IgA1分子α2,6唾液酸缺失(1.232±0.250vs 0.756±0.243,P=0.015)及N-乙酰氨基半乳糖的暴露(0.191±0.039比0.258±0.066,P=0.025)显著低于H-IgAN组,半乳糖缺失少,但未达统计学差异(0.204±0.053比0.139±0.038,P=0.052). 结论 MCNS-IgA组患者血清IgA1糖基化水平上显示了与IgA肾病不同的特点,提示其可能是微小病变伴IgA分子的非特异性沉积.
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过表达α2,3-唾液酸转移酶基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响
目的 研究过表达α 2,3-唾液酸转移酶(ST3GalⅢ)基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响.方法 构建ST3 GalⅢ慢病毒表达载体,转染MDA-MB-231细胞.将转染细胞分为空白组(未转染,Mock cells,M)、对照组(转染对照慢病毒,Parent cells,P)和实验组(转染慢病毒载体,ST3 GalⅢ,ST3).用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测转染后ST3 GalⅢmRNA及蛋白表达,流式细胞术分析转染后ST3GalⅢ催化形成下游产物唾液酸化Lewis抗原(SLeX)变化;用细胞黏附实验、Transwell小室检测MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响.结果 RT-PCR与Western bolt显示对照组和实验组中ST3GalⅢmRNA相对表达量分别为0.91 ±0.04,1.85 ±0.08;蛋白相对表达量分别为0.94±0.04,1.96±0.10;实验组mRNA和蛋白表达分别为对照组1.84倍和1.76倍(P＜0.05);实验组细胞表面SLeX含量为92.86±4.41,为对照组的1.61倍,含量明显升高(P＜0.05).细胞黏附检测结果表明,空白组、对照组和实验组的OD570nm分别为0.32 ±0.02,0.29±0.01和0.46±0.03;细胞侵袭能力结果表明,空白组、对照组和实验组的OD570 nm分别为0.93±0.02,0.81±0.01和1.46±0.13,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 过表达ST3 GalⅢ基因可提高MDA-MB-231细胞侵袭能力.
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慢病毒载体法建立乳腺癌GFP-ST3稳定细胞株
目的 慢病毒载体法建立乳腺癌GFP-ST3稳定细胞株.方法 采用PCR扩增α2,3-ST全长基因片段,克隆至慢病毒载体进行测序分析,将重组慢病毒载体转染人乳腺癌细胞,嘌呤霉素抗性筛选,经荧光显微镜观察、实时定量PCR、West-ern blot检测α2,3-ST的表达.结果 成功构建了慢病毒载体pGLV5-H1-GFP-ST3,体外转染乳腺癌细胞后,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,α2,3-STmRNA表达和蛋白水平均明显升高(P＜0.05),获得稳转细胞株.结论 成功构建了绿色荧光蛋白为报告基因的α2,3-ST慢病毒载体,并在MDA-MB-231中稳定表达,为进一步研究乳腺癌细胞膜连α2,3-唾液酸水平增高与其侵袭和转移潜能的调控提供实验模型.
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右美托咪定辅舒芬太尼用于全麻病人的术后镇痛
目的 评价右美托咪定联合舒芬太尼用于全麻病人术后镇痛镇痛效果及安全性.方法 择期行腹部手术术后自愿行病人自控式镇痛的病人40例,随机分成两组,Ⅰ组为对照组,给予生理盐水+舒芬太尼+止吐药静脉自控镇痛泵;Ⅱ组为实验组,给予右美托咪定+舒芬太尼+止吐药静脉自控镇痛泵.观察两组患者术后48h内的血压(BP)、心率(HR)、脉搏氧饱和度(SpO2)、呼吸频率(RR)的变化情况、术后镇痛、镇静评分以及镇痛并发症的情况.结果 血流动力学实验组较对照组更为平稳;术后2-8 h内镇痛VAS评分比较,实验组明显优于对照组,镇静分级无差异;术后恶心、呕吐的发生率的比较,对照组明显多于实验组.结论 对于全麻下行腹部手术的病人,右美托咪定辅助舒芬太尼用于术后镇痛与单纯应用舒芬太尼术后镇痛相比,患者术后的心血管稳定性较好,对术后镇痛的满意度高;且不良反应恶心呕吐明显减少,且在适当的药物剂量下呼吸抑制的发生率低.
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shRNA靶向沉默ST8SIA4基因表达对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响
目的 探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默α2,8-唾液酸转移酶4(ST8SIA4)表达对乳腺癌BT549细胞侵袭、迁移的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting检测乳腺癌BT549细胞和乳腺正常上皮MCF-10A细胞中ST8SIA4 mRNA和蛋白水平.采用LipofectamineTM2000向BT549细胞随机转染成功构建的靶向沉默ST8SIA4表达的shRNA载体片段(沉默组)或无义shRNA片段(对照组),转染48 h后采用QPCR检测ST8SIA4 mRNA水平,Western blotting检测ST8SIA4、磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、神经纤毛蛋白2(NRP2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况,Transwell实验和划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力.结果 与MCF-10A细胞相比,BT549细胞的ST8SIA4 mRNA和蛋白水平均升高(P＜0.05).转染48 h后,沉默组的ST8SIA4 mRNA和蛋白水平分别为0.19±0.02和0.13±0.02,均低于对照组的0.98± 0.11和0.52±0.05(P＜0.05);沉默组的侵袭细胞数、迁移率及p-Akt、NRP2和TNF-α蛋白相对表达量分别为(39.5±4.2)个、(16.9±1.3)%、0.22±0.03、0.31±0.04和0.27±0.06,均低于对照组的(91.3±8.5)个、(38.4±3.9)%、0.58±0.07、0.55±0.05和0.46±0.05,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ST8SIA4基因在乳腺癌BT549细胞中高表达,沉默其表达可抑制侵袭和迁移过程,可能与上调p-Akt、NRP2和TNF-α蛋白表达有关.
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血α1、α2、β、γ球蛋白及κ、λ轻链在儿童支原体肺炎的意义
目的 通过对肺炎支原体肺炎( MPP )儿童患者的血清中α1、α2、β、γ球蛋白及免疫球蛋白κ轻链、λ轻链含量结果进行统计分析,探讨血α1、α2、β、γ球蛋白及κ、λ轻链在MPP发病中的意义.方法 选取我院儿科2016年1月到2017年1月期间收治的MPP儿童患者120例为研究对象,作为MPP组,同时选取120例来我院健康儿童作为对照组,分别检测两组儿童血清中α1球蛋白区带(α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶、α1脂蛋白、甲胎蛋白)、α2球蛋白区带(结合珠蛋白、α2巨球蛋白、铜蓝蛋白)、β球蛋白区带(转铁蛋白、β脂蛋白、补体C3、f纤溶酶原)γ球蛋白区带(IgG、IgM、IgA、IgD、IgE及C反应蛋白)以及κ轻链、λ轻链的含量.结果 (1)α1球蛋白区带,与对照相比,MPP组α1酸性糖蛋白和α1抗胰蛋白酶均升高,但α1抗胰蛋白酶升高的更显著(P<0.05);α1脂蛋白和甲胎蛋白均降低,但两组之间无统计学意义(P>0.05);(2)α2球蛋白区带,与对照组相比,MPP组结合珠蛋白、α2巨球蛋白和铜蓝蛋白均升高,但两组之间只有结合珠蛋白差异具有统计学意义(P<0.05);(3)β球蛋白区带,与对照组相比,转铁蛋白和f溶酶原降低,且两组之间无统计学意义(P<0.05).β脂蛋白和补体C3均升高,且两组之间补体C3差异具有统计学意义(P<0.05).(4)γ球蛋白区带,与对照组相比,MMP组IgG、IgM、IgD、CRP、IgE均明显升高,但IgG、IgM、CRP升高的更显著(P<0.05),IgA明显降低(P<0.05);(5)与对照组相比,MPP组κ轻链、λ轻链均升高,但差异不具有统计学意义(P>0.05).结论 MPP儿童患者的血α1、α2、β、γ球蛋白的变化可作为支原体肺炎的辅助诊断.
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系统性红斑狼疮患者外周血白细胞唾液酸转移酶表达变化及机制探讨
目的：观察系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血白细胞唾液酸转移酶（ST8SIA）的表达变化，并探讨其机制。方法选择SLE患者（观察组）和健康志愿者（对照组）各24例，采用RT-PCR法检测外周血白细胞ST8SIA1～6 mRNA；对有统计学意义的ST8SIA mRNA，采用基因芯片技术分析血浆中靶向其3′非翻译区（3′UTR）的miR-NA。结果两组外周血白细胞均无ST8SIA2、ST8SIA3、ST8SIA5 mRNA表达；观察组ST8SIA1、4、6 mRNA相对表达量分别为1．524±0．229、13．780±1．669、2．238±0．387，对照组分别为1．129±0．106、1．087±0．089、0．550±0．054；两组ST8SIA4、6 mRNA比较，P均＜0．05。靶向调节ST8SIA4 mRNA的miRNA表达下降12条、升高1条，靶向调节ST8SIA6 mRNA的miRNA表达下降、升高各4条。结论 SLE患者外周血白细胞中ST8SIA4、ST8SIA6 mR-NA表达升高，与对其进行靶向调控的miRNA表达异常有关。
