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二代测序技术在Alport综合症应用中的新进展
Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种遗传性肾病,是由编码α3、α4、α5(IV)胶原三聚体的COL4A3,COL4A4或COL4A5基因突变引起的.AS目前仍缺乏有效的治疗措施,故对AS早期确诊、治疗、延缓进展以及提供AS家系遗传学分析,减少遗传风险意义重大.随着二代测序技术的成熟与广泛应用,为尚未发现热点突变的AS患者基因测序及诊断提供了新方法.同时针对罕见病,建立生物样本库也是未来罕见病研究发展趋势.本文将重点介绍二代测序技术近年来在AS应用及诊断中的进展情况.
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儿童肾病综合征合并Alport综合征2例报道并文献复习
肾病综合征是儿童常见的肾小球疾病,以水肿、大量蛋白尿、低蛋白血症和高胆固醇血症为临床特点,初治患儿中约80%~ 90%为激素敏感.Alport综合征是常见的遗传性肾脏疾病之一,以血尿、感音性耳聋、眼部病变及肾功能进行性减退为主要临床特点.部分Alport综合征可以肾病综合征起病但均为激素耐药型,二者的治疗效果和预后明显不同,临床上应注意鉴别,避免对Alport综合征的过度治疗,但罕见情况下二者也可合并发生,此种情况下不要轻易放弃治疗.本文报道了2例儿童肾病综合征合并Alport综合征患儿的临床、病理特点和诊治过程.
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Alport 综合征精准诊治进展
Alport 综合征是由于编码Ⅳ型胶原α3/α4/α5链的基因突变导致的遗传性肾脏疾病,临床上表现为血尿、蛋白尿及进行性肾衰竭,部分患者合并耳聋和眼部改变。随着医学技术的进步, Alport 综合征的诊断逐渐精确,诊断依据从初的临床表现,到肾组织电镜典型的肾小球基底膜病理改变,再到目前广泛应用的基因突变检测。目前认为 Alport 综合征是可以治疗的疾病,尽早应用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素受体阻滞剂(ARB)可以推迟 Alport 综合征肾衰竭发生。
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47例Alport综合征临床与病理分析
目的 分析不同年龄组Alport综合征患儿的临床与病理特点.方法 回顾性分析我院1990年1月-2007年1月47例住院并且明确诊断为Alport综合征患儿的临床及病理资料.结果 男32例,女15例,男女比例2.1:1,年龄15个月~13岁,平均9.0岁.47例患儿中39例有明确家族史,其中X连锁显性遗传37例;常染色体隐性遗传2例.28例(59.3%)患儿首发症状为肉眼血尿或镜下血尿,14例(29.8%)患儿为蛋白尿、水肿.Alport综合征临床表现为孤立性血尿11例(23.4%)、血尿合并蛋白尿17例(36.2%)、肾病综合征14例(29.8%)、肾功能不全5例(10.6%);孤立性血尿型、血尿合并蛋白尿型见于研究病例中的所有年龄组儿童,而肾病综合征型、肾功能不全型仅见于7~13岁年龄组儿童.肾组织病理显示,33例(70.2%)光镜改变为系膜增生性病变(MsPGN),13例(27.6%)表现为局灶节段性肾小球硬化(FSGS),1例(2.1%)表现为膜增生性肾小球肾炎(MPGN).免疫荧光多以IgM沉积为主19例(40.4%),以IgA沉积为主9例(19.1%),以IgG沉积为主9例(19.1%),免疫荧光阴性10例(21.4%).电镜下39例出现典型的肾小球基底膜病变,8例显示基底膜变薄.47例患儿中46例肾脏和(或)皮肤Ⅳ胶原a链分布异常.结论 Alport综合征男性患儿发病率高于女性.不同年龄组Alport综合征肾脏表现有明显差异,血尿伴随疾病始终,但随着病程延长,尿蛋白量逐渐增加.Alport综合征肾脏病理光镜下无特征表现,主要以系膜增生为主,小年龄组患儿电镜下GBM病变不典型,需结合Ⅳ胶原a链免疫荧光检测明确诊断.
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X连锁显性遗传Alport综合征的产前基因诊断
目的 Alport综合征(AS)是常见的遗传性肾脏疾病,预后较差,无特异有效的治疗.X连锁显性(XLAS)是其主要遗传方式,因COL4A5基因突变或COL4A5和COL4A6两个基因突变所致.通过对两个XLAS家系进行遗传咨询和基因诊断,并对其中一个家系实施产前基因诊断,探讨AS产前基因诊断的方法及临床应用价值.方法 对两个XLAS家系进行详细的遗传咨询后,采用巢式PCR扩增外周血淋巴细胞COL4A5 mRNA的整个编码区序列筛查两个家系的基因突变,然后扩增COL4A5相应的外显子从基因组DNA水平进一步证实突变.产前基因诊断通过羊水细胞cDNA和DNA两个水平来检测胎儿突变情况,通过PCR扩增Y染色体性别决定基因SRY联合核型分析检测胎儿性别,通过三个X染色体微卫星标记(AR、DXS6797和DXS6807)连锁分析除外羊水中母体细胞污染的可能.结果 突变筛查显示家系一为新发突变,先证者COL4A5第2696~2705位缺失GTATGATGGG共10个碱基,但母亲外周血基因组DNA不携带该缺失突变,通过遗传咨询,该家系未进行羊水穿刺和产前基因诊断.家系二COL4A5基因第4271位G被A取代,1424位G>E,家系其他患者包括孕母均携带该突变.对家系二孕母进行了羊水穿刺和产前基因诊断.羊水细胞cDNA和DNA水平检测均显示胎儿无突变,PCR扩增SRY基因和羊水细胞核型分析均显示胎儿为男性.连锁分析显示羊水细胞中无母体细胞污染,且间接提示胎儿从母体遗传了携带正常COL4A5等位基因的X染色体.结论 基于外周血淋巴细胞cDNA水平的COL4A5基因突变检测技术可快速用于XLAS产前基因诊断时家系基因突变筛查,有利于客观进行遗传咨询;产前基因诊断时联合cDNA和DNA两个水平检测胎儿基因突变情况更准确可信,PCR扩增SRY基因可以快速鉴定胎儿性别,X染色体微卫星标记连锁分析不但可以排除羊水中母体细胞污染,而且可以间接证明胎儿是否携带致病等位基因.
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X-连锁Alport综合征的听力表现与皮肤α5(Ⅳ)胶原表达的关系
目的:探讨中国人X连锁Alport综合征患者的听力表型与皮肤组织Ⅳ型胶原α5链表达的关系。方法收集2008年8月至2013年8月期间确诊为X连锁Alport综合征的31例患者临床资料,采用纯音听阈测试或ABR+40Hz相关电位检查+声导抗+耳声发射的方式进行听力评估,并采用免疫组化染色检测皮肤组织基膜Ⅳ型胶原α5链的表达,采用Pearson相关分析方法分析二者的关系。结果31例X连锁Alport综合征中听力下降患者均表现为轻、中度感音神经性聋。听觉损害共28例(90.3%),其中22例男性中中度12例,轻度5例,轻微损害5例;女性6例,轻度3例,轻微损害3例。按皮肤Ⅳ胶原α5链染色分级,阴性17例均为男性,其中听力正常4例(3例OAE异常),听力下降13例(轻度4例,中度9例);大部阴性与可疑阳性各1例,均为男性,分别为中度和轻度;连续±2例(男性),正常和中度各1例;间断阳性3例均为女性,均为正常或轻度;连续++7例(男3,女4),其中听力正常4例,听力下降3例(2例轻度,1例中度)。染色阴性的11例听力下降患者听阈与年龄呈正相关(P=0.043,r=0.616)。结论X连锁Alport综合征患者皮肤组织Ⅳ胶原α5链的表达男性低于女性,听力表现与皮肤组织Ⅳ胶原α5链的表达有一定的关系,其中Ⅳ胶原α5链表达阴性的患者听力下降程度与年龄存在相关性,但也存在听力正常的患者,说明还有其他因素影响患者的听力。皮肤组织中Ⅳ胶原α5链表达在一定程度上能反映耳蜗基底膜中Ⅳ胶原α5链的表达和功能。
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儿童Alport综合征的听力学特征多样性研究
目的:探讨儿童Alport综合征(Alport Syndrome AS)听力学特点多样性及预后。方法分析2007-2013年北京儿童医院确诊的43例AS患者的听力学特点,病理改变及临床特点并进行电话随访,并进行统计学分析。结果43例诊断为AS儿童中男性36例,女性7例,年龄22个月-13岁,中位数年龄8岁,听力正常组33例,听力异常组10例。①23.2%AS患儿合并感音神经性聋,并且全部为男性,中度聋常见占70%;②听力曲线图包括谷型7例(70%)、陡降型2例(20%)、平坦型1例(10%);其中有30%听力曲线呈非对称分布;③比较耳听力正常组及耳听力异常组肾脏病理间差异性,存在耳部症状的患者,电镜足突病变较重,两组间差异有统计学意义;④电话回访发现正常听力组有近1/3的受访者诉听力有下降,而全部听力异常组的受访者听力进行性下降,1例重度听力损失患儿发展为终末期肾病结论耳部病变是AS的常见症状,其听力曲线多样,并有部分呈非对称分布,儿童期听力损失呈进行性下降趋势,听力异常是显著足细胞病变一个指标。
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Alport综合征眼部表现
Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种主要累及肾脏,同时伴眼、耳等其他器官损害的遗传性疾病,具有多种遗传方式.临床上以进行性肾功能损害、高频感音神经性耳聋、眼部改变为特征.AS可伴有多种眼部改变,但通常认为特征性眼部异常仅包括前圆锥状晶状体、黄斑部视网膜斑点及赤道部视网膜斑点三种.AS患者的眼部表现不仅有助于本病的诊断,亦有助于评价肾脏损害的程度及预后.眼部治疗主要针对影响视力的前圆锥状晶状体患者,超声乳化联合人工晶状体植入术是较为理想的选择,可取得良好的疗效.
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儿童Alport综合征眼部表现
目的 探讨儿童Alport综合征的眼部表现.设计回顾性病例系列.研究对象北京大学第一医院儿科确诊的3~16岁Alport综合征患者19例.方法 分析患儿的性别、年龄、病程、听力检查、肾功能检查等资料,以及详细的眼部检查结果包括视力、裂隙灯检查、散瞳眼底检查、彩色眼底照相等.主要指标年龄、病程、裂隙灯检查、散瞳眼底检查所见.结果 7/19例(36.8%)患者具有眼部改变,其中斑点样视网膜改变3例,周边视网膜色素紊乱及血管白鞘4例,晶状体混浊2例,因白内障已行手术治疗1例.2例患者慢性肾功能不全;3例患者感音神经性耳聋.结论 儿童Alport综合征患者眼部异常出现较少且较轻,可能与患者年龄较小有关.本文报告的部分患儿发现周边视网膜色素紊乱及血管白鞘是否为其特征性改变有待进一步观察.
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多重竞争性荧光PCR检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变
目的:探讨多重竞争性荧光PCR在X连锁Alport综合征分子诊断中的应用.方法:选择20例在北京大学第一医院确诊且未进行基因诊断的X连锁Alport综合征患者为研究对象,同时选择2例经多重连接依赖性探针扩增技术检测到COL4A5基因大片段缺失突变的患者作为阳性对照和1例经肾活检组织电子显微镜检查证实非Alport综合征的男性作为正常对照.首先应用多重竞争性荧光PCR技术扩增COL4A5基因53个外显子和4个参照基因,对于检测到COL4A5基因缺失第1外显子者,进而应用相同技术扩增COL4A5基因外显子1~4、COL4A6基因外显子1~4、两基因共用启动子以及3个参照基因;对于检测到拷贝数缺失者,应用琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增后的PCR产物或直接测序.结果:两例阳性对照应用多重竞争性荧光PCR技术检测到的COL4A5基因缺失突变与应用多重连接依赖性探针扩增技术检测到的COL4A5基因缺失突变一致.20例患者中6例(30%)明确了基因型,其中2例患者具有累及COL4A5和COL4A6两个基因5'端的大片段缺失,2例患者具有累及COL4A5基因30个外显子以上的大片段缺失,1例患者具有累及COL4A5基因至少1个外显子的大片段缺失,1例患者具有COL4A5基因缺失13个碱基的小的缺失突变,未检测到重复突变.结论:多重竞争性荧光PCR技术可用于检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变,是对该病分子诊断检测方法的重要补充.
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Alport综合征耳部损害的研究进展
Alport 综合征(AS)是一以基底膜(又称基膜)改变为特征、临床表现为进行性遗传性肾炎伴耳部及眼部损害的一种家族性遗传性疾病.本文综述了Alport 综合征耳部损害的致病基因、临床表现、诊断及治疗,并对其发病机制作一分析.
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Alport综合征患者尿肾状杆细胞诱导成多能干细胞系的建立
目的:将Alport综合征(AS)患者尿肾状杆细胞诱导成多能干细胞(iPSCs).掌握建立iPSCs细胞系的技术与方法.方法:利用慢性病毒介导4种转录因子(OCT4,Sox2,KLF4,c-myc)诱导从尿液中分离出的尿肾状杆细胞,建立诱导成干细胞样的克隆.挑选成功诱导的iPSCs克隆进行扩大培养,并对克隆进行免疫荧光检测,克隆形态观察,RT-PCR分析iPSCs细胞相关基因,体外三胚层分析及核型鉴定.结果:成功地从尿肾状杆细胞诱导成iPSCs,所获得的iPSCs可以表达人胚胎干细胞多能性分子标记,具有体外分化3个胚层的能力.在培养过程中能始终保持核型的稳定,并且能自我增殖、更新、分化.结论:从Alport综合征患者尿液中的尿肾状杆细胞成功诱导成iPSCs,为今后研究AS提供了良好的细胞模型.
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Alport综合征一家系发病情况调查并文献复习
Alport综合征(Alport syndrome,AS)系一种遗传性疾病,与基底膜病变有关,临床并非少见,常伴有其他器官的损害,狭义的遗传性肾炎称为AS,又称眼耳肾综合征、家族性肾炎、遗传性进行性肾炎.
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Alport综合征一家系误诊报告
Alport综合征又称遗传性肾炎、家族性肾炎及遗传性进行性肾炎[1],或称眼耳肾综合征;临床表现主要是血尿、进行性肾功能衰竭,伴或不伴感音性耳聋和眼特征性改变.由于该病常需临床病理及基因两方面的诊断,因此确诊相当困难,易被误诊,现将一家系误诊情况报告如下.
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Alport综合征表现为难治性肾病综合征
[病例]男,6岁2个月.因发现肉眼血尿、眼睑水肿3年人院.患儿以无痛性全程肉眼血尿及眼睑水肿起病,在当地医院查尿蛋白(+++),隐血(+++);血白蛋白27.8 g/L,临床诊断"肾病综合征",肾活检病理诊断为"IgM肾病",予醋酸泼尼松片30 mg、1/d,雷公藤总苷片5mg、3/d,福辛普利等治疗,1年半后醋酸泼泥松片减量完毕并改服中药汤剂,治疗期间尿蛋白(+)~(++),始终有镜下血尿存在,偶有肉眼血尿,遂来我院求进一步诊治.
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中国Alport综合征一家系的基因突变检测与临床表型分析
目的:应用高通量测序技术,检测一个中国遗传性肾病家系的致病基因突变,探讨靶区域捕获和高通量测序方法在遗传性肾病基因筛查中的可行性. 方法:收集家系临床资料和外周血样本;分析先证者的临床资料,并观察肾穿组织病理,采用目标区域捕获和高通量测序技术,对先证者355个遗传性肾病相关基因的外显子进行突变筛查;应用Sanger测序,在其他家庭成员中进行突变位点验证及突变-表型共分离分析,并对突变位点进行多物种的保守性分析. 结果:结合临床检验结果和肾活检病理观察,先证者符合慢性肾小球肾炎,不排除Alport综合征的可能. 基因筛查发现,该家系可确诊为X染色体显性遗传Alport综合征,家系中所有女性患者均为X染色体COL4A5基因c. 3641G>A( p. Gly1214Glu)杂合突变,而男性患者均为该位点的半合子. 且该位点在多个物种中具有高度的序列保守性. 结论:该遗传性肾病家系是X染色体显性遗传Alport综合征,致病突变位点为COL4A5 c. 3641G>A(p. Gly1214Glu). 靶区域捕获和高通量测序技术成本低、高通量、准确性高,适用于遗传性肾病家系的基因突变筛查.
关键词: 遗传性肾病 Alport综合征 高通量测序 COL4A5基因突变 -
Alport综合征听力异常与肾损伤及其预后相关性分析
目的 探讨Alport综合征(AS)听力异常与肾损伤及预后的关系.方法 分析2004-2013年杭州市中医院肾内科确诊的21例AS患者的听力异常、病理改变及临床特点并进行随访.根据听力异常情况分为听力异常组和听力正常组,比较基线资料,选取肌酐升高1.5倍或终末期肾脏疾病作为终点事件,采用Kaplan-Meier方法进行生存分析.结果 基线资料两组差异无统计学意义,听力异常组AS患者电镜下足细胞病变较为显著,肾功能预后差.听力异常组有5例进入终点事件,听力正常组2例进入终点事件(P=0.05).结论 耳部病变是AS的常见症状,听力异常是显著足细胞病变及肾功能预后不良的一个指标.
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Alport综合征一个家系基因分析研究
目的 研究Alport综合征(AS)致病基因COL4A5突变情况.方法 收集并抽提2005年上海地区AS患者及其所有家庭成员29例的基因组DNA,并根据致病基因设计相关引物,分别检测患者和100个正常人血液DNA以及患者皮肤的cDNA碱基序列.结果 发现AS基因组DNA的COL4A5基因c.609 +5G>A高度保守区存在5G>A突变,而100个正常人均无该突变,该位点尚未见文献报道;同时发现患者COL4A5基因mRNA不能正常翻译.而COL4A5基因已报道的位点,并未在本家系中发现.结论 AS患者c.609 +5G高度保守存在5G>A突变,证实该变异可能使COL4A5基因剪接发生错误而导致基因mRNA不能正常翻译.
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电镜在遗传性肾小球疾病诊断中的应用价值
电镜检查在肾活检病理诊断中发挥着重要作用,多数肾活检病理诊断病例需要依靠电镜明确诊断或起到重要的辅助诊断作用.对于遗传性肾小球疾病其重要性更为突出,薄基底膜病诊断完全依靠电镜,而Alport综合征、Fabry病、胶原Ⅲ肾小球病等的肾组织超微结构改变均具特异性,因此高度怀疑遗传性肾小球疾病者应保证足够的组织行电镜检查.