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复方蜥蜴散不同微粒组合剂干预胃癌前病变模型大鼠P53、Survivin的表达及相关性研究
目的:探讨复方蜥蜴散不同微粒组合剂(简称XY)创新模式(独特配方、不同微粒、糊剂给药)抗癌、阻癌及抑癌的分子生物学机制.方法:将120只SPF级SD大鼠随机抽取20只作为空白组,其余100只采用0.02mol/L的甲基硝基亚硝基胍(MNNG)溶液按5mL/kg灌胃等综合因素造模8周,成功制备胃癌前病变(PLGC)大鼠模型后随机分为模型组、复方蜥蜴散80目组、100目组、80目100目等量混合组(XY80组、XY100组、XY80'100组均为1.5g·kg-1·d-1)、维酶素组(0.3g·kg-1·d-1)共5组,每组13只,均作相应处理后应用免疫组化法检测其对胃黏膜组织P53和Survivin表达的影响.结果:各组大鼠胃黏膜组织P53和Survivin的平均吸光度(A):经统计学分析,模型组与空白组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);各治疗组与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);XY各治疗组与维酶素组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),尤以XY80'100组A值低,XY80组、XY100组与XY80'100组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);经Pearson相关分析,Survivin与P53表达呈正相关(P＜0.05),相关系数r=0.899.结论:P53和Survivin在PLGC过程中具有协同作用;复方蜥蜴散不同微粒组合剂创新模式不仅配方独特,而且采用80目和100目等量混合和糊剂给药方式可进一步降低凋亡促进基因P53的突变,下调凋亡抑制基因Survivin的表达,从而实现有效干预PLGC和延缓癌变进程的作用.
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扶正消癌合剂诱导人肺腺癌A549细胞凋亡研究
目的:研究扶正消癌合剂对人肺腺癌A549细胞(以下简称A549细胞)凋亡的影响.方法:制备大鼠含药血清,MTT法检测扶正消癌合剂含药血清对A549细胞增值的影响.Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术观察含药血清对A549细胞凋亡的影响.Western Blot检测含药血清对P53,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Survivin蛋白表达的影响.结果:扶正消癌合剂以时间、剂量依赖方式抑制A549细胞增殖,与DD哈用有协同增效作用,48、72、96h联合组的抑制率分别为28.27％、38.68％、37.98％;其可以诱导细胞的凋亡,且以晚期凋亡为主,凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);其在诱导细胞凋亡过程中,下调Bel-2、Survivin蛋白表达,同时活化P53蛋白表达.结论:扶正消癌合剂可能通过抑制Bcl-2、Survivin蛋白表达,同时活化P53蛋白表达诱导A549凋亡.
关键词： 扶正消癌合剂 肺癌 A549细胞 凋亡 P53 B淋巴细胞瘤-2基因 Survivin蛋白 -
绞股蓝总皂苷对糖尿病肾脏病大鼠巢蛋白的影响
目的:观察绞股蓝总皂苷对糖尿病肾脏病(DKD)大鼠巢蛋白的影响,探讨其降低蛋白尿、内生肌酐清除率、保护肾脏的机制.方法:150只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组,采用摘除单侧肾脏加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法改良复制DKD模型,灌胃4、6、8周后测定血糖(GLU)、24h尿蛋白(24h-UP),内生肌酐清除率(Ccr)、尿微量白蛋白排泄率(UAER),光镜观察肾小球结构改变,Western Blot检测巢蛋白(nestin)、波形蛋白(vimentin)、cdk5/p35蛋白的表达.结果:①治疗8周,与模型组比较,绞股蓝总皂苷高剂量对GLU、24h-UP、Ccr、UAER均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05);绞股蓝总皂苷中剂量组对GLU、24h-UP、UAER较模型组均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05);绞股蓝总皂苷低剂量组对Ccr、24h-UP、UAER较模型组均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05).②与模型组比较,绞股蓝总皂苷高剂量组可显著升高nestin的表达(P＜0.01),绞股蓝总皂苷高、中剂量组可升高vimentin的表达(P＜0.05),各治疗组均可降低cdk5/p35的表达(P＜0.01,P＜0.05).③光镜观察各治疗组肾小球系膜细胞增生减轻,炎性细胞浸润改善.结论:绞股蓝总皂苷可能通过上调nestin达到保护足细胞,降低蛋白尿及提高Ccr,延缓DKD进程的目的.
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天麻及电针对大鼠脑缺血再灌注损伤及 P53基因表达的影响
目的:探讨天麻及电针对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元P53基因的表达及血浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响.方法:参照Zea Longa等的线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,腹腔注射天麻超微粉,电针刺激"人中"、"百会"穴,运用免疫组化和图像分析技术计算P53基因表达的百分率;分别运用黄嘌呤氧化酶法及硫代巴比妥酸法测定血浆中SOD及MDA的含量.结果:天麻及电针可显著抑制大鼠脑缺血再灌注损伤神经元P53基因的表达,提高血浆中SOD的含量,降低MDA的含量.结论:天麻及电针对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用.
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乾坤胶囊治疗肺癌的临床研究
目的:评价乾坤胶囊治疗肺癌的临床疗效并探讨该复方中药制剂抗肺癌的作用机理.方法:对100例经细胞病理学证实的肺癌患者,随机分为乾坤胶囊组(胶囊组)34例,化疗组33例,化疗+胶囊组(综合组)33例.从临床症状、免疫指标、血象、生活状态(Karnofsky评分标准)、体重及p53、PCNA的表达等方面进行了前瞻性对比治疗研究.结果:胶囊组、综合组、化疗组的总有效率分别为94.1%、90.9%、57.5%.经统计分析,胶囊组、综合组与化疗组比较均有显著性差异(P＜0.01及P＜0.05).显示乾坤胶囊对肺癌患者能明显改善症状、增加体重、有效地提高生存质量、显著地提高细胞免疫功能(NK细胞、LAK细胞、IL-2、CD3、CD4、CD4/CD8)、降低p53及PCNA阳性细胞数.结论:乾坤胶囊治疗肺癌疗效确切,无不良反应.其机理是全面提高患者的免疫功能,抑制p53及PCNA的表达.
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两种木贼提取物对高血脂大鼠内皮凋亡及p53、caspase-3表达干预
目的:观察木贼提取物对高血脂大鼠内皮细胞周期、凋亡及相关基因突变型p53、caspase-3蛋白的表达.结果:两种木贼提取物均能显著降低TG、VLDL水平;下调突变型P53、caspase.3基因蛋白表达,抑制内皮细胞凋亡;正丁醇提取剩余物升高HDL作用突出.
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通心络胶囊对大脑中动脉栓塞模型大鼠Caspase-3、P53、HSP70表达的影响
目的:观察通心络胶囊对大脑中动脉栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO)模型大鼠Caspase-3、P53、HSP70表达的影响,探讨通心络胶囊在缺血脑保护中的作用及可能机制.方法:MCAO模型雄性SD大鼠随机分3组:MCAO模型组、MK-801组、通心络胶囊组.各组大鼠在缺血24h后冰冻切片机切各组大鼠大脑,分别行Caspase-3、P53、HSP70免疫组化染色,于高倍物镜下选择标记阳性细胞表达明显的区域,对其相邻5个视野区采用HP1000高清晰度彩色病理图像分析系统计算免疫阳性细胞.结果:缺血24h后,Caspase-3、P53值在通心络组、MK-801组的表达较模型组明显减少(P＜0.05),且通心络组较MK-801组表达更少(P＜0.05);HSP70在通心络组和MK-801组的表达较模型组明显增多(P＜0.05),且通心络组较MK-801组表达更多(P＜0.05).结论:通心络胶囊能够明显抑制Caspase-3、P53的表达,促进HSP70的表达.
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血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠骨髓源内皮祖细胞衰老及p53、SIRT1蛋白表达的影响
目的 观察血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠骨髓源内皮祖细胞(EPCs)衰老及对p53、SIRT1蛋白表达的影响,探讨其抗衰老的作用机制.方法体外培养EPCs,加入100 nmol/L AngⅡ诱导细胞衰老,建立EPCs衰老模型,随机分为正常组、模型组、miR-34a抑制剂组、血府逐瘀汤5％药物血清组、血府逐瘀汤10％药物血清组、血府逐瘀汤15％药物血清组.β-半乳糖苷酶染色法检测内皮祖细胞衰老,Western blot检测EPCs中p53蛋白、SIRT1蛋白的表达.结果与正常组比较,模型组EPCs衰老数量明显增多(P<0.01),p53蛋白表达量明显升高(P<0.01),SIRT1蛋白表达量明显降低(P<0.01);与模型组比较,miR-34a抑制剂组和5％、10％、15％药物血清组EPCs衰老数量显著减少(P<0.01),miR-34a抑制剂组和10％、15％药物血清组p53蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),miR-34a抑制剂组和10％、15％药物血清组SIRT1蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与miR-34a抑制剂组比较,5％、10％、15％药物血清组EPCs衰老数量显著增多(P<0.05,P<0.01),p53蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),SIRT1蛋白表达明显下降(P<0.01);与5％药物血清组比较,10％、15％药物血清组EPCs衰老数量明显减少(P<0.01),p53蛋白表达显著降低(P<0.01),SIRT1蛋白表达显著升高(P<0.01);与10％药物血清组比较,15％药物血清组EPCs衰老数量明显减少(P<0.01),p53蛋白表达差异不明显,SIRT1蛋白表达明显升高(P<0.01).结论血府逐瘀汤能延缓EPCs的衰老,可明显降低衰老EPCs中p53蛋白的表达,显著增加衰老EPCs中SIRT1蛋白的表达,其中以15％药物血清组效果佳.
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针刺联合紫杉醇对小鼠Lewis肺癌细胞凋亡相关因子p53、bcl-2蛋白表达的影响
目的 本实验采用针刺联合抗癌新药紫杉醇对Lewis肺癌小鼠进行治疗,探讨针药结合对肿瘤的治疗作用及机制.方法 Lewis肺癌移植瘤小鼠48只,体重18～22 g,随机分为4组,即模型组、针刺组、药物组、针药结合组,每组12只.观察小鼠的生存状态、肿瘤体积的动态变化,应用Western Blotting法观察肿瘤组织中凋亡相关因子p53、Bcl-2蛋白表达情况.结果 针刺、紫杉醇、针刺联合紫杉醇均有抑瘤作用,但针药结合抑瘤作用强,且能改善实验动物的生存状态.各组中均有p53、bcl-2蛋白表达,模型组表达高;与模型组比较,针刺组、药物组、针药结合组表达明显低于模型组,有显著差异;针药结合组与针刺组和药物组比较,有显著差异.结论 针刺加紫杉醇具有联合抑制野生型p53基因突变,降低bcl-2蛋白表达的作用,两者具有协同效应.
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大黄素对肝癌细胞SMMC-7721抑制作用及P53、C-myc蛋白的表达
目的研究大黄素对肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用和P53、C-myc蛋白的表达.方法应用MTT法观察大黄素、5-FU对SMMC-7721的生长抑制作用,免疫组化法染色(SP法)测定细胞凋亡时P53、C-myc蛋白的表达情况.结果大黄素对肝癌细胞SMMC-7721有明显的生长抑制作用,其IC50为21.6 mol/L.大黄素对SMMC-7721的抑制作用优于5-FU(P<0.05);大黄素作用于细胞后,P53、C-myc蛋白均有一定程度下调,而C-myc下调较P53明显.结论大黄素对SMMC-7721有明显的生长抑制作用,作用于SMMC-7721后P53、C-myc蛋白的表达均有下调.
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p53、Bcl-2、Bax在葡萄胎组织中的表达及其意义
目的:研究抑癌基因p53及Bcl-2、Bax在葡萄胎组织中的表达及其意义.方法:应用Western Blot检测26例恶性葡萄胎组、26例无恶性葡萄胎组、22例正常早孕绒毛组标本中p53、Bcl-2、Bax的表达.应用统计软件SPSS13.0对检测进行统计学分析,p<0.05为差异有显著性.在正常对照组、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中p53蛋白的阳性逐渐增加,恶性葡萄胎组与正常早孕绒毛组织中相比有显著差异(P<0.01),恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组相比有显著差异(P<0.05).正常对照组、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中Bcl-2蛋白的阳性表达量逐渐增加,恶性葡萄胎组与正常早孕绒毛组织中相比有显著差异(P<0.05),恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组两组相比无显著性差异(P>0.05).在正常对照组中、无恶性葡萄胎组、恶性葡萄胎组中Bax表达量逐渐增加.恶性葡萄胎组、无恶性葡萄胎组与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),恶性葡萄胎组与无恶性葡萄胎组相比无显著性差异(P>0.05).
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p53及Survivin在子宫内膜腺肌症中的表达及意义
目的:研究抑癌基因p53及凋亡抑制因子Survivin在子宫内膜腺肌症中的异常表达,探讨其形成的原因.方法:以30例子宫内膜异位症患者为研究组,取其异位内膜和在位内膜(未孕17例、已孕19例),以同期30例正常子宫内膜标本为对照组.应用Western Blot检测p53以及Survivin在异位内膜、在位内膜和正常子宫内膜组织中的表达.用统计软件SPSS13.0对检测结果进行统计学分析,P<0.05为差异有显著性.结果:在正常子宫内膜、在位内膜(已孕)、在位内膜(未孕)、异位内膜p53蛋白的阳性表达量呈逐渐增加,其中子宫内膜异位症中的在位内膜、异位内膜与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),在位内膜(已孕)、在位内膜(未孕)两组无明显差异(P>0.05).在正常子宫内膜、在位内膜(已孕)、在位内膜(未孕)、异位内膜蛋白的阳性Survivin表达量逐渐增加.子宫内膜异位症中的在位内膜、异位内膜与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),异位内膜、在位内膜(未孕)与正常内膜相比差异具显著性(P>0.05).
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乳腺癌的内科治疗及研究进展
乳腺癌是全球女性常见的恶性肿瘤,且呈现逐年上升的趋势.目前发现与乳腺癌相关的基因有BRCA-1、BRCA-2、P53等.除此以外,乳腺癌的发生还与生殖因素有着密切关系.
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皂角刺抑制小鼠宫颈癌U14的生长及对增殖细胞核抗原和p53表达的影响
目的:研究皂角刺醇提物对小鼠宫颈癌U14生长的抑制作用及对增殖细胞核抗原(PCNA)和突变型p53蛋白表达的影响.方法:观察皂角刺醇提物对U14实体瘤和腹水瘤的抑瘤率和生命延长率,并用免疫组化SP法检测PCNA和突变型p53蛋白阳性细胞表达数.结果:以阴性对照组为基数,皂角刺醇提物3个剂量组及环磷酰胺(CTX)阳性对照组实体瘤各组抑瘤率分别为47.44%,59.49%,63.92%,73.42%(P＜0.01);腹水瘤各组生命延长率分别为52.21%,67.26%,78.76%,95.58%(P＜0.01).同时各组药物对PCNA和突变型p53蛋白的表达水平也有不同程度抑制作用(P＜0.01,P＜0.05).结论:皂角刺对小鼠宫颈癌U14的生长有一定的抑制作用,其机制可能与抑制PCNA和突变型p53蛋白的表达有关.
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桦木酮酸对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞周期及相关蛋白表达的影响
目的:研究桦木酮酸对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞周期及相关蛋白表达的影响.方法:采用流式细胞仪检测H22肿瘤细胞细胞周期的变化以及P53蛋白的表达变化;免疫组化法检测H22细胞中的PI3K和AKT蛋白.结果:随桦木酮酸剂量的增加,H22细胞S期和G2期的含量逐渐增多且P53蛋白的表达随之升高,而PI3K和AKT蛋白的表达降低.结论:桦木酮酸可能上调P53的活性,抑制PI3K和AKT蛋白,从而抑制细胞的存活通路促凋亡.
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苦参总碱和美洲大蠊提取物对孕激素受体阴性的子宫内膜癌细胞株JEC的作用研究
为了探讨苦参总碱、美洲大蠊提取物及两者联合用药对孕激素受体(PR)阴性的子宫内膜癌细胞株JEC的作用.笔者通过MTT法、流式细胞仪、Western blot检测苦参总碱、美洲大蠊提取物和两者联合用药后对JEC细胞的生长抑制、细胞周期及P53和c-erbB-2基因蛋白的表达影响.结果发现,①MTT法:苦参总碱和美洲大蠊提取物对JEC的生长均有抑制作用,且联合给药后抑制作用显著提高.②流式细胞仪分析:苦参总碱组细胞在G0/G1期的比例上升,美洲大蠊提取物组细胞在G2/M期比例上升,联合给药组的G0/G1期比例较其他2组显著上升,细胞生长受到抑制(P＜0.05).③Western blot法:苦参总碱组、美洲大蠊提取物组和联合给药组作用JEC细胞后,P53蛋白的表达水平上调,c-erbB-2蛋白表达水平下降(P＜0.05).以上结果说明苦参总碱、美洲大蠊提取物及联合给药对JEC细胞的生长均有抑制作用,且能通过上调P53和下调c-erbB-2蛋白的表达诱导细胞周期阻滞,抑制细胞增殖.
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甘草与白术配伍对IEC-6细胞p53,p21基因表达的影响
通过研究不同剂量甘草与白术配伍对DFMO模型小肠上皮细胞(IEC-6)增殖及p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,探讨甘草与白术配伍对细胞增殖影响的分子基础.采用流式细胞术分别检测药物对IEC-6细胞分裂速度及细胞周期的影响,qRT-PCR检测药物对IEC-6增殖相关基因p53,p21 mRNA的影响,Western blot检测药物对IEC-6细胞p53,p21蛋白表达的影响.白术颗粒可上调DFMO模型IEC-6细胞内p53,p21 mRNA和蛋白的表达水平;而甘草颗粒与白术颗粒不同比例配伍均能显著下调单独白术颗粒作用对DFMO模型IEC-6细胞p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,促进IEC-6细胞的增殖.对于DFMO模型IEC-6细胞,配伍用药甘草能调和白术对小肠上皮细胞的影响.
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基于microRNA-34a/SIRT1/p53通路探讨三七皂苷R1对血管内皮细胞衰老的影响
该研究旨在探讨三七皂苷R1能否通过调控miRNA-34a/SIRT1/p53通路发挥延缓H2O2诱导的血管内皮细胞衰老的作用.以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为研究对象,建立H2O2诱导的衰老模型,以白藜芦醇作为阳性对照药,实验分为青年组、H2O2模型组、三七皂苷R1组、白藜芦醇组.药物组提前加入三七皂苷R1(30 μmoL·L-1)或白藜芦醇(10 μmoL· L-1)干预24 h,然后用H2O2(100 μmoL·L-1)造模4h,后换成完全培养基培养24h.采用衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法鉴定细胞衰老程度,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,WST-1法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,QRT-PCR检测miRNA-34a,SIRT1和p53的核酸表达,Western-blot技术检测SIRT1,p53和衰老相关蛋白p21,p16的蛋白表达.结果发现,与模型组相比,三七皂苷R1组和白藜芦醇组可有效减低衰老内皮细胞的β-半乳糖苷酶染色阳性率,增强细胞增殖能力和SOD活力,减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,抑制了miRNA-34a和p53的核酸表达,促进了SIRT1的核酸表达,此外抑制了p53,p21和p16的蛋白表达,促进了SIRT1的蛋白表达,差异均有统计意义(P＜0.05).该研究表明,H2O2诱导的衰老的内皮细胞可以作为衰老研究的模型,三七皂苷R1延缓血管内皮细胞衰老的效果明显,其机制可能是通过调控miRNA-34a/SIRTl/p53通路延缓了血管内皮细胞衰老的进程.
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恶性肿瘤组织中HSP70、P53表达与中医热证的关系
目的探讨中医热证和非热证恶性肿瘤患者瘤组织中HSP70和P53的表达.方法采用S-P免疫组化法进行HSP70、P53阳性检测以及采用ELISA法和RT-PCR法检测恶性肿瘤组织中HSP70和HSP70mRNA表达含量.结果(1)结肠癌热证组、热证合计组HSP70、P53阳性率均明显高于各非热证组(P＜0.05);(2)结肠癌热证组、鼻咽癌热证组、肺癌热证组以及热证合计组中HSP70表达含量均高于各非热证组(P＜0.01);(3)结肠癌热证组、肺癌热证组以及热证合计组中HSP70mRNA的表达含量均高于非热证组(P＜0.01).结论在恶性肿瘤的热证阶段HSP70和P53阳性表达率以及HSP70表达含量显著高于非热证阶段.
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三氧化二砷对鼻咽癌患者放疗增敏作用与增殖和凋亡相关蛋白关系
目的 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)放疗增敏对鼻咽癌增殖和凋亡相关蛋白的影响.方法 将74例T1～4N0～1M0期鼻咽癌患者随机分为单纯放疗(简称放疗组)和ATO增敏组(简称增敏组),观察两组患者放射治疗40Gy时鼻咽肿瘤和颈部淋巴结消退情况.每个患者在治疗前及放疗20 Gy后的24 h各取材1次.免疫组化EnVision法测定增殖核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bax和p53蛋白表达.结果 放射治疗40 Gy时增敏组和放疗组的鼻咽肿瘤消退率分别43.6%(17/39例)和20.0%(7/35例),差异有显著性(χ2=4.684,P=0.003);两组颈部淋巴结消退速度差异无显著性.治疗剂量为20 Gy的PCNA、Bcl-2、Bax和p53蛋白表达均下调,但仅增敏组PCNA和Bax差异有显著性(Z值分别-2.449和-3.031,P值分别为0.014和0.002).两组24例肿瘤消失患者中,PCNA、Bax和p53蛋白下调与治疗前比较,差异有显著性(Z值分别为-2.656、-2.359和-1.999;P值分别为0.008、0.018和0.046);肿瘤未消失患者中,仅PCNA下调,与治疗前比较差异有显著性(Z=-32.815,P=0.015).结论 ATO对鼻咽癌患者有放射增敏作用,其增敏机制可能通过下调PCNA及凋亡相关蛋白,抑制肿瘤增殖和诱导凋亡有关.
