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葡萄胎的遗传学分类与病理分类的关系
目的探讨葡萄胎的复合微卫星DNA序列多态性的遗传学分类与病理学分类的关系. 方法采用9个位点(F13A01、FESFPS、VWA、CSF1P0、TPOX、TH01、D16S539、D7S820、D13S317)复合微卫星序列-PCR方法对47例葡萄胎病例标本进行分析,与病理学分类结果进行比较和统计分析. 结果 47例葡萄胎病例中,33例为遗传学完全性葡萄胎,14例为遗传学部分性葡萄胎,40例为病理学完全性葡萄胎,7例为病理学部分性葡萄胎,采用Kappa一致性检验,结果Kappa=0.346±0.148(P＜0.01). 结论复合STR多态性分析可用于葡萄胎的遗传学分类;葡萄胎的病理学类型与遗传学类型无一致性关系.
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广东地区正常人群DXS15,CA13,CA22位点多态性研究
本研究探讨广东人群中与FⅧ基因紧密连锁的微卫星DNA序列DXS15、CA13、CA22的多态性及其在血友病A基因诊断中的应用价值.用聚合酶链反应(PCR)和毛细管电泳的方法分析了中国广东地区无血缘关系的正常女性的3个位点长度多态性,其中包括111名女性的DXS15位点多态性.共222条X染色体;87名女性的CA13位点多态性,共174条X染色体;94名女性的CA22位点多态性,共188条X染色体.结果表明:中国广东人群中,DXS15位点检出11种等位片段,其长度范围是140-160 bp,杂合度为82%,多态信息含量(polymorphism informarion content,PIC)为0.82.CA13位点检出6种片段,其长度范围是145-155 bp,杂合度为56.2%,PIC值为0.56.CA22位点检出4种片段,其长度范围是79-85 bp,杂合度为50%,PIC为0.41.结论:研究人群与文献报道的白种人群相比发现,上述3种微卫星DNA多态性在种族和分布上有差异.DXS15、CA13、CA22在中国广东地区是具有高度多态性的遗传标记,可用于血友病A的连锁分析,对血友病A携带者的检出和产前诊断具名重要价值.
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BAT-26预测散发性大肠癌的复制错误
目的:微卫星不稳定(microsatellite instability MSI)是DNA 复制错误(replication error RER+)的标记,BAT-26系位于错配修复基因hMSH2中的单腺苷酸重复序列位点,曾被报道无需正常对照就可用于预测散发性大肠癌RER状况,我们选择BAT-26并与其他双核苷酸重复序列位点进行比较加以验证与评价.方法:经病理确诊的散发性大肠癌肿瘤组织60例,常规抽提DNA,采用PCR-银染法分析6个(CA)n双碱基重复微卫星序列和BAT-26位点,并用自动荧光DNA序列分析法检测BAT-26;同时以PCR-SSCP法检测RER+病例hMSH2基因5,7,8,1 2,13,15外显子突变;RER+判断依6个(CA)n位点中出现2个或以上MSI为标准.结果:RER+散发性大肠癌占18%(11/60),6例RER+肿瘤检出hMSH2基因突变.含hMSH2基因突变的6例RER+病例中有3例BAT-26不稳定(BAT-26+),44例RER-散发性大肠癌均为BAT-26-.与(CA)n位点结果比较,BAT-26预测RER的阳性符合率为50%,阴性符合率为100%,BAT26+在预测散发性大肠癌RER+特异性为100%,敏感性为50%.PCR-银染和自动荧光DNA序列分析两种方法检测BAT-26 MSI结果一致.结论:单用BAT-26作为预测RER状况的指标尚有缺陷,需结合其他微卫星位点进行综合分析.
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微卫星序列多态性在葡萄胎遗传物质来源分析中的应用研究
目的探讨复合微卫星DNA序列多态性分析在葡萄胎的遗传物质来源鉴别中的价值.方法采用9个位点(F13A01、FESFPS、VWA、CSF1P0、TPOX、TH01、D16S539、D7S820、D13S317)复合微卫星序列-PCR 方法对47例葡萄胎病例标本进行分析.结果DNA完全来自父方的葡萄胎(遗传学完全性葡萄胎)33例,DNA来自双亲的葡萄胎(遗传学部分性葡萄胎)14例.结论复合STR多态性分析作为一种快速简捷的方法可有效用于葡萄胎的遗传物质来源的分析.
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微卫星分析在头颈鳞状细胞癌临床中的应用研究
微卫星（microsatellite）是由1～6个核苷酸组成的重复单元串联排列而成的DNA序列。微卫星序列短，数目巨大，种类多，分布广，多态性高，具有较高的遗传稳定性，非常适合敏感的聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增，是出色的遗传标记。但直到1993年在大肠癌中首次发现肿瘤的微卫星不稳定性（microsatellite instability）以后［1］，微卫星的研究才引起人们浓厚的兴趣。肿瘤微卫星不稳定性是指肿瘤组织与其相应非肿瘤组织相比，其结构性等位基因的大小发生了改变，即微卫星重复单元的增加或丢失。肿瘤中比微卫星不稳定性更常见的是微卫星的杂合性缺失（loss of heterozygosity, LOH）。
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用FISH法检测肺癌印片标本中性染色体数目的异常(简报)
遗传物质的不稳定性是人类恶性肿瘤的特征之一,它既可表现在核苷酸水平上微卫星序列的不稳定,也可表现在染色体水平上的数目和结构异常.研究表明,在人类各种肿瘤中均有相关染色体数目的变化(增多或减少),其中包括性染色体数目的改变,据报道在非何杰金淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、前列腺癌、卵巢颗粒细胞瘤、直肠癌等肿瘤中都有性染色体数目异常的现象,说明性染色体数目的异常在人类许多肿瘤中是一种较常见的现象.然而在肺癌中尚未见有类似的报道,本工作采用本室建立的双色荧光原位杂交(FISH)技术检测16例肺癌印片标本中X染色体和Y染色体数目的变化.
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代谢酶的基因多态性与疾病遗传易感性的关系
基因多态性是指正常人群中在某一基因位点上存在着2个或2个以上不同等位基因的现象.出现基因多态性的原因可以是单核苷酸变异,或是某些高重复序列(如微卫星序列等)的拷贝数变异[1].基因多态性的研究对筛选和保护易感人群并采取有效的干预措施具有十分重要的意义.随着聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析等分子生物学技术的发展,外源性代谢酶的基因多态性与疾病遗传易感性间的关系已得到了较深入的研究.下面着重对几大类主要的外源性代谢酶的基因多态性与疾病遗易感性的关系加以综述.
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中国汉族人群DXS15位点多态性研究及其应用
目的研究中国人群FⅧ基因旁微卫星序列DXS 15的多态性.方法用聚合酶链反应(PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,检测67名中国汉族人共103条X染色体DXS15位点的重复序列长度变化.结果中国人群中该位点有8种等位片段,多态信息量(polymorphism information content,PIC)为0 844.应用该位点多态性对一血友病甲家系进行连锁分析,一名可疑携带者被确认为正常人.结论该位点为血友病甲的高多态遗传标记之一,对血友病甲的携带者诊断和产前诊断具有重要价值.
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胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类分子表达降低的机制研究
目的:探讨胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类抗原表达水平异常的分子机制.方法:以胃癌细胞系BGC823、MGC803和SGC7901为对照,利用流式细胞仪检测细胞表面HLA-Ⅰ类复合物的表达情况,Western blot检测HLA-Ⅰ类分子重链及轻链表达情况,半定量RT-PCR检测HLA-Ⅰ类分子重链、轻链和抗原加工分子mRNA水平的表达情况,并利用HLA基因区域的微卫星序列检测MKN细胞HLA基因在DNA水平的完整性.结果:胃癌细胞系MKN表面HLA-Ⅰ类复合物表达降低,重链A及B/C位点蛋白无表达而轻链表达无异常.在mRNA水平,胃癌细胞系MKN存在重链A、B、C各位点和抗原加工分子TAP1、LMP2、Tapasin、PA28β的表达缺失.微卫星DNA扩增结果初步显示,MKN细胞无HLA基因区域DNA的大片段丢失.结论:胃癌细胞系MKN HLA-Ⅰ类分子复合物表达降低可能是由HLA-Ⅰ类分子重链及其加工分子在转录水平改变而引起的.
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中国汉族人群FⅧ基因内微卫星序列的多态性研究
目的 研究中国汉族人群FⅧ基因13内含子（CA）n重复序列（CA-13）的多态性。方法 用聚合酶链反应（PCR）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（测序胶）的方法，检测69名中国汉族人共103条X染色体的FⅧ基因CA-13的长度变化。结果 中国汉族人群中该位点有7种等位片段，多态信息量（PIC）为50.22％。结论 该位点为甲型血友病的高多态遗传标记之一，对甲型血友病的携带者诊断和产前诊断具有重要价值。
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细粒棘球绦虫基因型的微卫星分析
目的 利用细粒棘球绦虫微卫星序列为分型标记,建立高效、快速、简便的鉴定细粒棘球绦虫基因型技术.方法 采用FAM和HEX两种不同荧光染料分别标记细粒棘球绦虫的Sca、Emsk、C106 微卫星序列引物,利用荧光PCR-基因扫描技术鉴定新疆不同地区CE病人细粒棘球绦虫分离株的基因型.结果 44例CE病人的66个分离株标本经PCR及微卫星标记鉴定均为细粒棘球绦虫,其中43例病人的65个细粒棘球绦虫分离株标本为G1基因型;1例病人的1个细粒棘球绦虫分离株标本为G6基因型.结论 微卫星标记能够从基因水平快速、精确地鉴定新疆细粒棘球绦虫分离株的基因型,对细粒棘球绦虫的流行病学和致病性研究有重要价值.
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微卫星不稳定性与疾病关系的研究
微卫星序列是指广泛分布于染色体基因组中具高度多态性的简单串联重复序列,重复单位仅为2～6个核苷酸,重复次数可达10～50次.真核细胞常见的微卫星序列是(CA)n,约有5×104～7×105(CA)n重复散在于整个基因组.微卫星序列的重复单位可以是完全相同、可以是具有间隔的重复单位或部分完全相同、部分具有间隔的重复单位,微卫星不稳定性是指重复单位的数目出现增加或减少,这种不稳定性反映在人类多种疾病中.
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醛糖还原酶基因(AC)n二核苷酸串联重复序列不同等位基因的筛选
研究了醛糖还原酶基因转录起始点上游-2.1kb处的微卫星DNA标记--(AC)n二核苷酸串联重复序列7种等位基因(Z+6,Z+4,Z+2,Z,Z-2,Z-4和Z-6)的筛选方法.首先自人外周血提取基因组DNA后设计一对引物进行PCR扩增,获得长度为132～144bp的DNA片段.选取等位基因为纯合子的个体DNA标本的PCR扩增产物,经纯化后直接测序以确定等位基因的种类;并以确定的等位基因为标准,用尿素/甲酰胺聚丙烯酰胺凝胶电泳￣银染显色法对各种等位基因进行筛选.该法操作简便、快速、准确度高,利于大量标本的筛选,也适用于其它二核苷酸重复序列等位基因的筛选.
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雄激素受体基因(CAG)n重复多态性与前列腺癌
前列腺癌(prostate cancer, PC)是雄激素依赖性肿瘤,雄激素介导其作用的受体(androgen receptor, AR)在PC的发生、发展中起着重要的作用.已发现AR基因内的(CAG)n三核苷酸重复/微卫星序列具有多态性,其多态性分布存在人种差异.国外有研究提示(CAG)n重复序列与PC的发病有关,但尚无定论.目的:建立AR基因(CAG)n重复数的测定方法,研究中国人正常人群中该重复的多态性分布,与其他人种进行比较,并探讨(CAG)n重复多态性与PC发病之间的关系.方法:应用建立的[α-32P]dCTP掺入不对称PCR-变性PAGE(变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)方法和双链DNA循环测序法测定107名正常中国男性和2例PC患者外周血白细胞、以及34例PC石蜡切片标本中的癌组织细胞和癌旁正常组织细胞内AR基因(CAG)n重复数.结果:正常男性体内AR基因(CAG)n序列明显的重复多态性,其重复数目的范围大致为11～29,以22居多,平均21.60;显著大于美国黑种人(以18为多),而与美国白种人(以21为多)无显著差异.PC患者(CAG)n重复数从16至22,平均20.06,显著低于正常男性(P＜0.05);癌细胞和癌旁正常组织细胞的(CAG)n重复数相同,表明在我们检测的PC癌组织中无该序列重复数目改变的AR基因体细胞突变.结论:中国人AR基因(CAG)n序列呈重复多态性,后者在不同种族人群中的总体分布存在差异;PC患者体内该重复数显著低于正常男性,提示AR基因(CAG)n重复偏小可能与PC的发病相关联.本研究为探讨PC发病与遗传背景的关系打下了一定的基础.
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广西莪术EST-SSR标记开发及其在遗传多样性分析中的应用
目的:分析姜黄表达序列标签(EST)中简单重复序列(SSR)位点的分布特点,开发近缘种广西莪术EST-SSR引物,探讨EST-SSR用于进行广西莪术遗传多样性分析及分子育种的可行性.方法:下载NCBI中公布的姜黄EST 12 678条,利用SSR-FINDER搜索SSR位点,筛选符合条件的序列,采用Primer 5.0设计SSR引物,挑选30个表现型差异较大的广西莪术种质进行引物有效性及多态性检测,对50份广西莪术种质进行遗传多样性分析.结果:12 678条EST序列含有SSR位点1 243个,其中二核苷酸出现频率为50.36％,三核苷酸31.54％,四核苷酸10.30％,以AT/TA和CT/GA出现频率高.利用Primer 5.0设计引物共325对,聚合酶链式反应(PCR)检测表明,104对引物可以扩增出理想PCR产物,在至少30份不同种质广西莪术中检测到48对SSR引物具有多态性,占设计引物的38.09％.遗传多样性分析研究,聚类分析结果表明50份广西莪术种质在相关系数0.7处,聚类为2类,遗传相似性系数变化范围较窄.结论:姜黄EST资源中含有高频率的SSR位点,且EST-SSR标记开发效率较高.本研究开发了48对广西莪术EST-SSR标记,并筛选出富含SSR位点的候选序列,用聚类图验证了植物之间的亲缘关系,为广西莪术遗传多样性分析和分子育种研究提供参考.
