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载脂蛋白A－Ⅰ模拟肽Reverse－D－4F提高高脂饮食小鼠内皮祖细胞的数量和功能
目的：研究载脂蛋白 A－Ⅰ模拟肽Reverse－D－4F（Rev－D4F）对高脂饮食C57BL／6J小鼠内皮祖细胞（EPCs）动员和EPCs功能的影响。方法：6周龄C57小鼠分为正常饮食、正常饮食并注射Rev－D4F、高脂饮食和高脂饮食并注射Rev－D4F四组。流式细胞术等检测外周血细胞亚群和细胞因子的数量；免疫荧光法测定Sca－1、c－Kit等的表达；MTT等方法检测EPCs的增殖、迁移及体外成血管功能。 Western blotting检测p－eNOS、p－AKT等蛋白的表达。结果：高脂饮食明显降低了EPCs的数量、迁移功能及白细胞中淋巴细胞的比例，但明显增加了C57小鼠血浆白细胞及白细胞中单核细胞的数量及血管内皮生长因子和TNF－α的水平。 Rev－D4F明显抑制了高脂饮食诱导的小鼠血浆外周血细胞亚群数量及细胞因子水平的改变。体外实验表明TNF－α抑制EPCs增殖、迁移和成血管的功能，并降低AKT及eNOS的活性；Rev－D4F能够修复TNF－α对EPCs功能的损伤，激活AKT及eNOS；PI3K抑制剂LY294002（30μmol／L）则明显抑制Rev－D4F对AKT和eNOS的作用，并抑制了Rev－D4F对TNF－α诱导的EPCs损伤的修复作用。结论：Rev－D4F提高高脂饮食C57小鼠外周血EPCs的数量与SDF－1α水平升高及TNF－α水平增加相关，Rev－D4F可能通过PI3K／AKT／eNOS信号通路修复TNF－α诱导的EPCs功能损伤。
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p62－RIP1泛素化调节人卵巢癌耐药细胞的存活与死亡
目的：从p62影响RIP1泛素化，参与NF－κB信号途径活化的角度，探讨人卵巢癌细胞耐药机制。方法：顺铂作用SKOV3及SKOV3／DDP细胞。利用MTT法检测存活率；Western blot法检测RIP1、p62、p－IκBα、IκBα、核蛋白p50、p65；免疫荧光法观察p65入核情况；免疫共沉淀法检测RIP1泛素化，siRNA方法抑制p62蛋白。结果：在SKOV3／DDP细胞中p62和RIP1高表达，顺铂作用下，p62蛋白表达降低，RIP1蛋白变化不明显，p50、p65和p－IκBα／IκBα增加， p65蛋白核内表达增加；SKOV3／DDP细胞RIP1的K63泛素化程度高，K48泛素化程度降低。抑制p62蛋白，RIP1的K63泛素化降低，K48泛素化增加，NF－κB活化程度和细胞存活率降低。结论：SKOV3／DDP细胞中RIP1的泛素化形式可能是NF－κB信号通路活性变化的原因之一。p62可能通过影响RIP1的泛素化形式，参与活化NF－κB信号通路，促进人卵巢癌细胞顺铂耐药的形成。
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生物钟基因Clock对iPSCs分化作用的研究
目的：研究生物钟基因Clock对干细胞分化成熟过程的影响和机制。方法：我们将携带有Oct4、Sox2、c－Myc和Klf4的TetO－FUW－OSKM慢病毒转染入小鼠胚胎成纤维细胞（ MEF）中，利用PCR、免疫荧光法、碱性磷酸酶染色和拟胚体形成实验鉴定细胞的多能性。通过RNAi技术抑制Clock基因表达，观察Clock基因对iPSCs分化的影响。结果：小鼠MEF在转染后12 d形成典型的小鼠ESC样克隆。 RT－PCR显示iPSCs表达多能性基因Nanog、Sox2、Oct4、Dax1、Esg1、ERas、Zfp296和Klf4；细胞碱性磷酸酶染色阳性；细胞免疫荧光检测结果显示有Oct4和SSEA1的表达；培养可见拟胚体的形成。因此，我们成功将小鼠MEF重编程为iPSCs。细胞非定向分化实验发现，转染48 h后，对照组克隆边缘不光滑，有伪足伸出，提示iPSCs存在分化；Clock－siRNA组的iPSCs克隆仍保持边缘光滑，极少有伪足伸出，RT－PCR提示多能性基因Sox2、Oct4和Klf4表达较对照组升高。结论：生物钟基因Clock可能参与了iPSCs的分化过程。
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冠心病与肺炎衣原体感染的临床研究
目的测定冠心病患者阿奇霉素治疗前后血肺炎衣原体DNA及特异性免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)抗体滴度,探讨肺炎衣原体感染与冠心病的相关性.方法选择150例冠心病患者(冠心病组)及同期临床可疑冠心病而进行冠状动脉造影正常的55例病例作为对照组,应用巢式聚合酶链反应测定外周血单核细胞中肺炎衣原体DNA,用间接微量免疫荧光法测定IgG抗体滴度.冠心病组采用随机、双盲和安慰剂对照的方法分别给予阿奇霉素及安慰剂治疗6个月,于治疗后1周,1,3,6,12个月复查免疫荧光抗体滴度,研究结束时对阳性病例复查肺炎衣原体DNA.结果冠心病患者肺炎衣原体DNA阳性49例,阳性率33%,对照组仅1例阳性,阳性率为2%,冠心病组与对照组比较阳性率明显增高.冠心病组中55例无症状型冠心病组阳性16例,阳性率为29%,48例不稳定型心绞痛亚组阳性19例,阳性率为40%,47例急性心肌梗死亚组阳性14例,阳性率为30%,冠心病各亚组间阳性率无差异.治疗后DNA转阴率阿奇霉素组为87%,安慰剂组为59%,治疗组疗效明显优于对照组.治疗前IgG抗体滴度冠心病组较对照组明显增高,治疗后无明显变化.结论冠心病患者肺炎衣原体DNA阳性率及肺炎衣原体特异性抗体增高,阿奇霉素治疗后DNA转阴,抗体滴度无变化,检测DNA临床价值更大.
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心房颤动患者血清肺炎衣原体特异性抗体的检测
目的调查心房颤动患者的肺炎衣原体感染.方法应用间接微量免疫荧光法测定血清肺炎衣原体特异性IgG和IgM抗体滴度.结果44例心房颤动患者肺炎衣原体感染率为70%;而45例健康对照者的感染率为42%,差异有统计学意义(P＜0.05).既往感染率:心房颤动患者组和对照组分别为42%和87%;急性感染率:心房颤动患者和对照组分别为0%和18%.两组患者肺炎衣原体特异性IgM抗体均呈阴性.结论心房颤动患者肺炎衣原体感染率显著高于正常健康对照者.
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凉膈散药物血清对脂多糖诱导体外培养巨噬细胞核转录因子-κB的影响
目的观察凉膈散药物血清对脂多糖(LPS)诱导的体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞核转录因子-κB(NF-κB)变化的影响,探讨凉膈散解毒作用的细胞信号转导调控机制.方法制备凉膈散药物血清;提取并体外培养小鼠腹腔巨噬细胞;以凉膈散药物血清及LPS共同刺激已培养细胞,免疫荧光法检测巨噬细胞NF-κB亚基p65,用激光扫描共聚焦显微镜观察并测定各组小鼠腹腔巨噬细胞核的p65的荧光表达情况.结果小鼠巨噬细胞经LPS刺激1 h后,其核内的荧光强度(代表p65的表达量)显著增强.与LPS刺激组相比:抑制剂TLCK组、凉膈散药物血清不同剂量组的荧光强度值均较低,有显著性差异,以TLCK及凉膈散大剂量组强度值低,中、小剂量组次之;空白血清不同剂量组则均无显著差异.药物血清不同剂量组之间有显著差异,呈剂量依赖性关系;空白血清不同剂量组之间无显著性差异.结论 不同剂量凉膈散药物血清均能抑制LPS所致的细胞核内p65升高,且呈剂量依赖性,这可能是凉膈散解毒作用的细胞信号转导机制之一.
关键词： 凉膈散 脂多糖 巨噬细胞核转录因子-κB 免疫荧光法 激光扫描共聚焦显微镜 -
联合检测九项呼吸道病原体IgM抗体对小儿呼吸道感染的诊断意义
目的 探讨小儿呼吸道感染九项呼吸道病原体IgM抗体联合检测的临床意义.方法 选择2016年8月至2018年8月本院收治的呼吸道感染患儿82例,采用间接免疫荧光法对其血清中9种病原体IgM抗体进行检测,记录并分析IgM抗体试剂检测结果的准确性及对临床治疗的指导意义.结果 82例标本中共检出43例阳性病原体,总阳性率为52.44％,其中31例检出有1种病原体感染,阳性率为37.80％,以MP高,占28.05％(23/82),IFB占9.76％(8/82);9种病原体感染中,MP单一感染率高于混合感染率,差异有统计学意义(P＜0.05);剩余8种病原体单一感染与混合感染相比,差异均无统计学意义(均P＞ 0.05);82例患儿中,有75例经对症用药后病情迅速好转,2例混合感染患儿出现窒息现象,经抢救后恢复,另有5例患儿感染后治疗效果不够理想,经长时间治疗及护理后病情好转出院.结论 九项呼吸道病原体IgM抗体联合检测能够及时准确的诊断出小儿呼吸道感染病原菌,利于为临床治疗提供一定指导意义.
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微波快速免疫荧光法在肾活检中的应用
免疫荧光细胞化学技术自应用于肾脏疾病以来,对肾脏疾病的诊治,尤其是免疫病理研究起了重要的推动作用,已成为肾脏疾病诊断的一个重要组成部分.多年来,我科将快速免疫荧光技术用于肾活检冰冻切片的免疫荧光染色,通过与常规的免疫荧光法比较,快速免疫荧光技术具有染色时间短、结果反应完全、背景清晰等特点,现介绍如下.
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超高倍直接镜检法检测男性加德纳菌感染的诊断价值
目的:探讨超高倍显微镜直接镜检法检测男性阴道加德纳茵(GV)感染的诊断价值.方法:采用超高倍显微镜直接镜检法和免疫荧光法分别对122例男性尿道分泌物进行GV的平行检测.结果:超高倍显微镜直接镜检法与免疫荧光法结果比较,符合率89.3%,敏感度98.7%,特异度73.3%.结论:超高倍显微镜直接镜检法可作为检测男性GV感染的筛查实验,且具有方便快捷,敏感度高,不易漏诊的特点,有临床实用价值.
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成人急性淋巴细胞白血病MIC分型及预后分析
目的:分析成人急性淋巴细胞白血病(ALL)的MIC分型与临床及预后的关系.方法:70例ALL病人常规进行细胞形态学和细胞化学染色,其中46例行G显带或R显带技术分析细胞遗传学特征,52例应用单克隆抗体间接免疫荧光法检测细胞免疫表型.结果:法英美协作组(FAB)制订的急性白血病分型(FAB分型)中ALLL1(原始和幼淋巴细胞以小细胞为主)15例,L2(原始和幼淋巴细胞以大细胞为主)52例,L3(原始和幼淋巴细胞以大细胞为主,大小较一致,细胞内有明显空泡,胞浆嗜碱性,染色深)3例;作细胞遗传学分析的46例中22例核型异常,Ph阳性ALL10例;52例细胞免疫表型分析结果为BALL23例,TALL16例,T/B细胞系伴髓系抗原表达(My+)6例,未分化型7例.结论:核型异常尤其是Ph染色体是预后不良因素,后者有独立预后价值;免疫表型CD7+提示预后不良;缓解后治疗方案直接影响预后.综合分析ALL患者的MIC分型有利于判断预后,指导治疗.
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免疫荧光检测在肾活检组织中的应用体会
1961年Dixon开始在肾脏疾病中应用免疫荧光技术,对肾脏的免疫病理研究起了重要的推动应用.肾穿刺活检在我区除少数大医院能开展外,大多数医院尚未进行,并且免疫病理检测基本上采用免疫组化技术.2004年7月至11月,我科对60例肾活检标本进行免疫荧光法检查,取得良好效果,提高了对不同肾病人的检出率.现将操作中的技巧及经验介绍如下.
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脾切除前后外周血T细胞亚群变化的研究
目的 了解创伤性脾破裂不同术式手术前、后外周血T淋巴细胞亚群的变化.方法 用免疫荧光法检测脾切除、部分脾切除和裂口修补术手术前、后患者外周血T淋巴细胞亚群的变化.结果 与对照组比较,切脾组与非切脾术后CD3+降低,CD8+升高,CD4+/CD8+降低,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),上述指标切脾组比非切脾组更为明显(P＜0.05).结论 脾切除术后可加重机体细胞免疫功能紊乱,Ts细胞增加,Th/Ts比例失调,应根据病情选择不同术式.
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新生树鼩海马神经干细胞的体外培养与鉴定
目的 分离培养树鼩海马神经干细胞,并对其进行鉴定.方法 应用加有B27添加剂、碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的培养液对新生树鼩海马部脑细胞进行体外培养,并进行传代.采用免疫组织化学及免疫荧光法对培养细胞的Nestin抗原进行鉴定.结果 从新生树鼩海马部分离的细胞可连续传代和不断增殖形成神经球,神经球在含血清培养基中具有多向分化能力,Nestin表达阳性.结论 采用特定的培养液可以在体外培养树鼩海马神经干细胞.
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自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断价值
目的 探讨自身抗体检测对自身免疫性肝病诊断的意义. 方法 采用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA)和用免疫印迹法对抗可溶性肝抗原,肝胰抗原(抗SLA/LP)、抗肝肾微粒体抗体Ⅰ型(抗LKM-1)和抗肝特异性胞浆抗原Ⅰ型抗体(抗LC-1)等肝脏疾病相关的自身抗体进行检测.另用酶联免疫吸附实验检测AMA-M2. 结果自身免疫性肝病中,自身免疫性肝炎(AIH)组SLA/LP阳性率20.0%,LKM-1阳性率16.0%,LC-1阳性率8.0%,SMA阳性率52.0%,AMA阳性率12.0%,AMA-M2阳性率4.0%;原发性胆汁性肝硬化(PBC)组SLA/LP阳性率2.6%,SMA阳性率15.4%,AMA阳性率94.9%,AMA-M2阳性率为97.4%.原发性硬化性胆管炎(PSC)和非自身免疫性肝病组抗肝抗原自身抗体阳性检出率为0,健康体检者出未检出抗肝抗原自身抗体.自身免疫性肝病组中MH和PBC的阳性检出率明显高于非自身免疫性肝病组,差异有统计学意义(x2=34.46,P<0.05).结论 自身抗体检测对自身免疫性肝病诊断、分型具有较高的临床价值.
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加德纳菌感染流行病学调查及实验室快速检测方法评价
目的 分析加德纳菌感染流行病学特征,评价免疫荧光法、唾液酸酶法的诊断效能.方法 取680例阴道分泌物标本,采用免疫荧光法检测加德纳菌,同时进行唾液酸酶测定,以Amsel法为"金标准",比较两种方法的诊断结果.结果 680例受检妇女中,检出GV阳性285例,20～30岁年龄组阳性率明显高于31～40、41～50、＞50岁年龄组(P＜0.05、0.01);31～40岁年龄组明显高于＞50年龄组(P＜0.01);不孕不育、不良怀孕、细菌性阴道病患者阳性检出率分别为16.67％、23.30％、55.87％;免疫荧光法灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值、阴性预测值均略高于唾液酸酶法,差异无统计学意义(95.44％ vs 89.47％,91.90％ vs 90.63％,93.38％vs91.90％,89.47％ vs 87.33％,96.54％ vs 92.27％) (P＞0.05).结论 细菌性阴道病与加德纳菌感染有明显的年龄相关性,免疫荧光法具有灵敏度高、特异性强的特点.
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降钙素原乳胶增强免疫比浊法与免疫荧光法的相关性
目的：探讨乳胶增强免疫比浊法与免疫荧光法定量检测降钙素原（PCT ）的分析性能。方法乳胶增强免疫比浊法采用美国贝克曼库尔特公司 AU5800全自动生化分析仪，免疫荧光法采用 mini VIDAS 全自动荧光免疫分析仪，检测相应配套高值、低值质控品，计算日内及日间的精密度，检测相应试剂非同批号定值标准品的偏倚程度，对2组检测方法的相关性进行分析评价。结果乳胶增强免疫比浊法检测 PCT 高值质控品日内精密度及日间精密度分别为2．89％、3．84％，低值质控品日内精密度及日间精密度分别为1．81％、3．77％；免疫荧光法检测 PCT 高值质控品日内精密度及日间精密度分别为2．42％、3．83％，低值质控品分别为2．03％、3．43％；乳胶增强免疫比浊法检测 PCT 高值定值标准品与低值定值标准品的偏倚分别为3．30％、－2．49％，免疫荧光法检测 PCT 高值定值标准品与低值定值标准品的偏倚分别为2．88％、3．63％；乳胶增强免疫比浊法在检测范围内线性良好（Y ＝1．0281X －0．2894，R2＝0．9947），免疫荧光法在检测范围内线性良好（Y ＝1．0798 X ＋0．1794，R2＝0．9928），2种方法相关性良好（Y ＝0．3572X ＋0．2845，R2＝0．9942）。结论乳胶增强免疫比浊法检测 PCT 性能良好，灵敏度高，操作简便，且由于其成本低，更值得临床推广应用。
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儿童肺炎支原体感染的两种实验方法检测的比较
目的 研究探讨该院两种方法学对儿童肺炎支原体感染的检测.方法 惠州市龙门县人民医院就诊的咳嗽伴发热患儿392例,年龄为1～12岁(平均3.5岁),其中男200例,女192例,住院诊断分别为:肺炎82例,支气管炎82例,上呼吸道感染42例,支气管哮喘72例,哮喘性支气管炎36例,支气管扩张28例,发热查因50例.分别用凝集法和间接免疫荧光法对肺炎支原体抗体进行检测,汇总各病例进行分析.结果 检出样本的阳性率凝集法30.1％高于间接免疫荧光法28.1％.经配对资料x2检验,二者差异无统计学意义(P＞0.05).结论 每种方法都是对其他诊断方法的一种证实和有效的确认,各种方法之间是一种互补的关系,可以更好地指导临床用药.
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酶联荧光分析法测定肌钙蛋白I的临床应用
目的：探讨酶联荧光分析（ELFA）法测定肌钙蛋白I（cTnI）的临床应用。方法分别采用ELFA法和化学发光免疫分析（CLIA）法测定血清样品中cTnI的浓度，对ELFA法进行精密度试验、线性试验、回收试验和干扰试验；并对 ELFA 法与CLIA法测定cTnI的结果进行相关性分析。结果 ELFA法测定cTnI浓度，高值（30．00μg/L cTnI）和低值（0．12μg/L cTnI）的批内变异系数（CV）分别为2．81％和1．62％，批间CV分别为5．67％和3．52％。ELFA法检测cTnI的可信检测范围为0．00～30．00μg/L。当总胆红素浓度小于450μmol/L ，血红蛋白浓度小于1．5 g/L ，三酰甘油浓度小于7．0 mmol/L时，ELFA法测定cTnI无干扰。ELFA法与CLIA法测定cTnI浓度具有良好的相关性（r＝0．971）。结论 ELFA法具有较好的精密度、回收率和线性范围，与CLIA法具有较好的相关性，且检测快速简便，适用于急诊检验，能满足临床要求。
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免疫荧光法检测阴道加德纳菌的方法学评价
目的：探讨运用免疫荧光法检测阴道加德纳菌（GV）的临床应用价值。方法选取2015年4～12月进行细菌性阴道炎检测的2612例患者作为研究对象，每例患者取双份阴道分泌物标本，分为两组，观察组采用免疫荧光法进行检测，对照组采用分离培养法进行检测，分析免疫荧光法检测GV的敏感度、特异度、准确度以及阳性检出率。结果免疫荧光法检测GV的敏感度为94．31％，特异度为90．75％，准确度为91．20％；分离培养法阳性检出率为34．99％，免疫荧光法阳性检出率为39．01％，两者比较，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论免疫荧光法检测GV具有灵敏度高、特异性强、阳性检出率高、诊断时间短的优点，适用于临床检测。
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住院患者鼻咽灌洗液标本中呼吸道感染病毒检测及耐药性分析
目的 对住院患者鼻咽灌洗液标本中的呼吸道感染病毒进行检测及耐药性分析.方法 选取2016年该院住院患者3091例,其中呼吸道感染患者556例,采集受试对象鼻咽灌洗液进行研究.采用免疫荧光法检测呼吸道病毒抗原谱,并进行病毒耐药性分析.采用SPSS17.0统计软件包完成数据处理.结果 呼吸道感染病毒检出阳性率为17.99％,其中11月高,阳性率为35.63％,与其他月比较差异有统计学意义(P<0.05);阳性率超过全年平均水平的高发月为10―12月.病毒分布特征总体以呼吸道合胞病毒阳性率高,进一步对该院呼吸道感染阳性率超过全年平均水平的高发月(10―12月)进行深入分析,结果提示,此阶段18岁以下患者病毒检出阳性率为32.61％,18～60岁者为30.71％,60岁以上者为28.62％,3个年龄段阳性率及男、女性之间的差异均无统计学意义(P>0.05).58株A3型流感病毒中检出43株对金刚烷胺耐药,总耐药率为74.14％.结论 病毒分布特征总体以呼吸道合胞病毒阳性率高,且在儿童患者人群中占比高.
