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  • 沙门菌tHDA等温扩增检测方法的建立

    作者:周冬根;翟敏;罗洁

    目的 建立基于依赖耐热解旋酶核酸等温扩增(tHDA)的沙门菌快速检测方法.方法 从GenBank数据库下载沙门菌侵袭蛋白A (invA)基因,比对确定保守区并设计tHDA引物,并对引物浓度、硫酸镁以及氯化钠浓度等反应条件进行优化.同时评价方法的特异性和灵敏度,并检测模拟样本和真实样本以验证方法的可靠性.结果 建立的沙门菌tHDA检测体系经过优化,结果显示仅沙门菌菌株呈现特异性电泳条带,而志贺菌、副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7、霍乱弧菌等其他5种肠道细菌均为阴性,特异性好;tHDA法检测沙门菌纯培养物的灵敏度为19cfu/μl,检测模拟样本的灵敏度为260 cfu/μl.采用tHDA方法检测18份真实样本,共检出9份沙门菌阳性,与国标法检测结果一致.结论 沙门菌tHDA检测方法快速、灵敏、特异,在食源性疾病检测及监测中具有重要的技术优势.

  • 2010年上海市食源性沙门菌菌型分布和药敏分析以及快速检测方法的建立

    作者:张毅;陈欣钦;宋昌彦

    目的:通过对2010年上海市市售食品中食源性沙门茵污染状况、茵型分布及药敏试验进行分析,初步确定该地区食源性沙门菌的茵型分布及耐药性,为防治因沙门茵感染引起的食源性疾病提供科学依据,并摸索建立了针对沙门菌的快速检测方法.方法:对农贸市场和超市的5类840份市售食品进行沙门茵分离鉴定及耐药性分析,并根据沙门茵的侵袭蛋白A(invA)基因序列设计保守引物,特异性快速检测沙门茵.结果:本次市售食品沙门茵阳性率检出率为4.29%,共36株沙门菌,生禽畜肉所占比例高达91%.主要血型为鼠伤寒沙门茵,德尔卑沙门茵和都柏林沙门菌.36株沙门茵药敏分析显示:所有菌株对头孢类等抗生素敏感较高,但对氨苄西林、麦迪霉素、环丙沙辛、呋喃妥因等存在普遍较多耐药菌株,并在此基础上通过PCR法成功地特异性检测出沙门茵.结论:上海市市售食品沙门茵污染以生禽畜肉为主,对抗茵药物的耐药性较高.目前治疗市售食品中食源性沙门菌引起的食源性疾病应首选头孢内等抗生素.另外PCR快速检测方法也操作简单,特异性强,灵敏度高,对食品中沙门茵污染能起到快速检测和监控.

  • Percoll分离法应用于肉制品中沙门菌核酸快速检测

    作者:王瑞霞;李颖;邵占涛;朱美娟;王彦波;王园园

    目的 用Percoll分离法提取核酸检测肉制品中沙门菌,提高肉制品中沙门菌核酸检测速度.方法 用Percoll分离液从不同增菌时间的增菌液中提取沙门菌DNA进行PCR扩增,与煮沸裂解法提取核酸的PCR结果进行比较,并进行沙门菌定量计数.分析PCR扩增Ct值及扩增曲线形态.结果 用Percoll分离法检测肉制品中沙门菌方法,可以在增菌9h后得到扩增信号,增菌14 h可得到阳性检测结果,Percoll分离液中菌体的回收率仍有待提高.结论 Percoll分离液是一种良好的分离液,可有效去除肉制品中的基质,减少PCR扩增抑制因素,提高沙门菌核酸质量,减少肉制品中沙门菌引起食物中毒致病因子的检测时间.Percoll分离液中菌体的回收技术仍有待优化改进.

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