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益气活血法对气虚血瘀脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性及ICAM-1、MMP-9/-2的影响
目的:研究益气活血法对气虚血瘀脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障(BBB)通透性及细胞间粘附分子( ICAM-1)、基质金属蛋白酶( MMP-2/9)的影响.方法:采用游泳力竭法制作出大鼠气虚血瘀模型,然后用线栓法阻断大鼠大脑中动脉(MCA) 2h,再灌注3d、7d后,测定脑组织脑含水量、伊文思蓝(EB)含量,用免疫组化法测定ICAM-1、MMP-2/9蛋白表达的变化.结果:与模型组比较,各治疗组脑含水量、EB含量、ICAM-1、MMP-2/9蛋白表达水平显著降低,益气活血法优于益气法、活血法.结论:益气活血法具有降低BBB通透性的作用,其机制可能是通过减少ICAM-1、MMP-2/9蛋白表达而发挥BBB保护作用.
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冰片联合灯盏花素对缺氧/复氧损伤血脑屏障通透性的影响
目的 观察冰片联合灯盏花素对缺氧/复氧下血脑屏障(BBB)通透性的影响,探讨其保护BBB的作用机制.方法 培养原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC),在缺氧培养箱中缺氧2h,再复氧24 h,建立单层BMEC体外BBB模型.实验分为正常对照组、模型组、冰片组、灯盏花素组、冰片+灯盏花素组,各给药组给予相应药物干预,检测各组跨内皮细胞电阻(TEER)值和辣根过氧化物酶(HRP)的通透性,ELISA、Western blot检测BMEC中紧密连接蛋白ZO-1及Claudin-5蛋白表达.结果 缺氧/复氧损伤导致TEER值降低,HRP通透率增加,ZO-1及Claudin-5蛋白表达降低;冰片联合灯盏花素可明显改善上述损伤.结论 冰片联合灯盏花素对缺氧/复氧下BBB的损伤具有保护作用,其机制可能与上调ZO-1、Claudin-5蛋白表达有关.
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补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤血脑屏障的影响
目的：观察补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤血脑屏障的保护作用,阐明该方抗脑缺血的机理。方法采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,造模后24 h给药,补阳还五汤组给予补阳还五汤灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃。造模后7 d,评价各组大鼠神经功能并处死取材,四氮唑红染色观察大鼠脑组织梗死体积,HE 染色观察大鼠脑微血管的一般形态,ELISA 检测大鼠脑组织内基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平及血清中血管性血友病因子(vWF)的表达。结果与模型组比较,补阳还五汤组能显著改善神经功能行为评分,减少脑梗死体积,降低MMP-9、MMP-2、VEGF、vWF水平。病理观察结果显示,补阳还五汤组脑组织病理变化较模型组减轻。结论补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其作用可能与保护血脑屏障,抑制MMP-9、MMP-2、VEGF、vWF的表达有关。
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茅莓总皂苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑水肿及血-脑脊液屏障变化的影响
目的:研究茅莓总皂苷(TSRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑水肿及血脑屏障通透性的影响.方法:采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,在大鼠脑缺血2 h再灌注6,24,48,72 h分别测定脑含水量和伊文思蓝含量的变化及茅莓总皂苷各剂量组的影响.结果:与模型组比较茅莓总皂苷各剂量组均能不同程度降低脑含水量和伊文思蓝含量.结论:茅莓总皂苷各剂量组显著降低缺血2h再灌注6,24,48,72 h脑水肿和其对血脑屏障通透性,这可能是其减轻I/R时脑水肿的机制之一.
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石菖蒲对血脑屏障超微结构及通透性的影响
目的:研究石菖蒲对大鼠血脑屏障超微结构及通透性的影响,证实其"醒脑开窍"之药理作用.方法:用电镜观察大鼠大脑皮层血脑屏障的超微结构在给药前后的变化,测定伊文思蓝(EB)的含量,并采用HPLC测定石菖蒲对中枢神经系统药苯妥英钠在脑内的蓄积程度的影响.结果:石菖蒲可以影响大鼠血脑屏障的超微结构,使内皮细胞之间的紧密连接松弛;同时,增加伊文思蓝透过血脑屏障的含量,促进中枢神经系统药苯妥英钠在脑内的蓄积,即增加血脑屏障的通透性.结论:说明石菖蒲能够提高血脑屏障通透性,具有醒脑开窍的药理作用.
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芍药苷对大鼠全脑缺血模型的影响
目的:观察芍药苷对脑缺血后再灌流期间血脑屏障及神经病理改变的影响.方法:采用四血管阻断(4VO)全脑缺血再灌流损伤模型,对模型动物给予芍药苷高、中、低剂量(分别为20,10,5 mg·kg-1)静脉注射,并设假手术组,模型组,阳性对照灯盏花素组.对大鼠神经行为学,缺血区脑组织超氧化歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)含量,透射电镜检查,血脑屏障通透性(BBB),脑组织兴奋性氨基酸(EAA)含量进行检测.结果:芍药苷对4VO完全性脑缺血模型有明显的保护作用;芍药苷可明显增加大鼠脑组织SOD含量,降低MDA含量,减轻脑缺血对脑组织造成的氧化应激损伤;芍药苷能显著改善细胞核、核周质、线粒体、髓鞘的病理改变,对脑缺血发挥保护作用的形态学基础;芍药苷能显著减轻缺血、缺氧造成的EAA含量增加,抑制E从所导致的兴奋性神经毒性.结论:芍药苷具有显著的保护脑缺血后脑水肿、脑组织氧化应激损伤、细胞超微结构病变、血脑屏障作用,其保护机制与抑制细胞内钙离子超载、抗自由基、降低EAA含量有关.
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灯盏细辛对脑缺血再灌注后血脑屏障通透性及脑代谢物质的影响
目的:探讨灯盏细辛治疗脑缺血损伤的作用机制.方法:大鼠100只.制作改良的脑缺血/再灌注模型.其中65只随机分为假手术组、模型组、灯盏细辛治疗组(10%灯盏细辛注射液22.5mg·kg~(-1)).假手术组(n=5)术后1 d处死取材,测定脑含水量、BBB通透性;治疗组和模型组在缺血1.5 h再灌后6,12 h,1,2,4,7 d处死取材,两组每时间点各取5只测定脑含水量、BBB通透性.另外35只大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组.假手术组造模后立即进行T_2加权像(T_2-weighted imaging,T_2WI)、脑代谢物质的检测,1 d时处死取材测定脑梗死比:治疗组和模型组在缺血1.5 h再灌后1,2,4 d进行T_2WI、脑代谢物质检测后处死取材,测定脑梗死比.结果:模型组再灌后6 h脑含水量(77.93±0.68)%增加,4 d脑含水量(83.82±0.49)%达到高峰;BBB通透性在2 d(5.51±0.24)mg·kg~(-1)达到高峰.治疗组4 d脑含水量(82.84±0.65)%比模型组同时间点下降:治疗组2 d BBB通透性(4.62±0.26)mg·kg~(-1)比模型组同时间点下降.活体检测模型组鼠脑T_2WI,再灌1 d后损伤区出现高信号强度区.脑代谢物质检测显示,治疗组比模型组同时间点N-乙酰天门冬氨酸(N-acetyl aspartate,NAA)与肌酐(Cr)比值减低,胆碱((;ho)与肌酐比值增大.2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色,治疗组比模型组同时间点梗死面积比小,2 d时治疗组脑梗死比为(16.78±1.45)%,而模型组为(21.27±1.73)%.结论:灯盏细辛能够减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,其机制可能是通过调节脑缺血再灌注后的物质代谢,稳定BBB,减轻脑水肿.
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对羟基苯甲醛对血脑屏障的保护作用及机制研究
脑缺血过程中由氧化应激导致血脑屏障(BBB)的破坏是引起继发性脑损伤的重要病理反应,该研究目的是探讨天麻酚性成分对羟基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde,p-HBA)对BBB的保护作用及相关机制.BBB主要由血管内皮细胞和星形胶质细胞组成,故该实验以小鼠脑微细血管内皮细胞株(bEnd.3)和星形胶质细胞(astrocyte,Ast)作为BBB模型进行研究.用H2O2诱导bEnd.3和Ast氧化应激的方法复制BBB损伤模型.采用不同浓度H2O2 (0.125,0.25,0.5,0.75 mmol·L-1)诱导bEnd.3和Ast损伤4h;再用0.5 mmol·L-1 H2O2诱导bEnd.3及Ast损伤1,2,4,6h,检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率以筛选H2O2诱导细胞氧化损伤的佳条件.不同浓度p-HBA(12.5,25,50 mg·L-1)干预后,检测bEnd.3和Ast细胞LDH漏出率;采用Western blot法检测正常bEnd.3和Ast以及H2O2诱导损伤后Ast细胞中Nrf2,HO-1和NQO1蛋白表达量的变化;采用免疫荧光法和Western blot法检测p-HBA对bEnd.3中紧密连接蛋白claudin-5和occludin表达的影响.结果显示,0.5 mmol·L-1H2O2诱导bEnd.3和Ast损伤4h为佳条件.不同浓度p-HBA均可降低H2O2诱导bEnd.3和Ast损伤后细胞LDH的漏出率;可增加bEnd.3中claudin-5,occludin,Nrf2,HO-1及NQO1蛋白的表达量;可增加Ast及H2O2诱导损伤后Ast中Nrf2,HO-1和NQO1蛋白表达量.结果提示,p-HBA可保护氧化应激诱导的BBB损伤,其机制与增加bEnd.3紧密连接蛋白claudin-5,occludin的表达及激活bEnd.3和Ast细胞中抗氧化应激Nrf2/ARE通路、增强细胞内源性抗氧化能力有关.
关键词： 血脑屏障 氧化损伤 小鼠脑微细血管内皮细胞株 星形胶质细胞 对羟基苯甲醛 -
华佗再造浸膏对大鼠局灶性脑缺血/再灌注血脑屏障损伤的保护作用及机制研究
目的:观察华佗再造浸膏(Huatuo Zaizao extractum,HTZZ)对栓线法阻断大脑中动脉(middle cerebral artery occlusion,MCAO)致大鼠局灶性脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)损伤的保护作用及其机制.方法:健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为假手术组,MCAO模型组,达纳康组(20 mg·kg-1),HTZZ 高、中、低剂量组(5,2.5,1.25g·kg-1),每组10只,十二指肠单次给药.采用栓线法阻断大脑中动脉,建立大鼠局灶性I/R模型..缺血90min,再灌注24h后,HE染色观察缺血侧病理损伤,透射电镜观察血脑屏障结构,蛋白免疫印记法检测G蛋白偶联受体激酶2(C protein-coupled receptor kinases 2,GRK2),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases,MMP-2)和MMP-9表达.结果:90min MCAO/24h再灌注半暗带皮层脑微血管呈现水肿、线粒体损伤、空泡化、膜损伤和微绒毛减少等.伴随这一变化,损伤侧皮层半暗带脑组织GRK2亚细胞分布从胞浆向胞膜转移,MMP-2和MMP-9表达升高.HTZZ可有效恢复脑缺血再灌注造成的脑微血管内皮水肿和血脑屏障超微结构损伤,减少功能性(膜偶联)GRK2表达,并抑制MMP-2和MMP-9表达.结论:细胞膜偶联GRK2可能是华佗再造丸的有效作用靶点.
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冰片单用及合用西药地西泮后对大鼠脑纹状体4种氨基酸类神经递质含量的影响
目的:探索开窍药冰片单用及合用西药地西泮后对大鼠脑纹状体区兴奋性及抑制性神经递质含量的影响,以期从神经药理学角度探讨冰片对中枢神经系统的作用,观察冰片是否可以协助西药人脑,增加其疗效.方法:利用脑微透析技术采集给药后不同时间段大鼠脑纹状体区的脑脊液样品,运用邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法,磷酸盐梯度洗脱结合荧光检测器检测样品中兴奋性神经递质天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)及抑制性神经递质甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GA-BA)的含量,并进行统计分析.结果:与单用地西泮组相比,合用冰片后大鼠脑纹状体区兴奋性神经递质Asp及Glu含量变化不明显,抑制性神经递质Gly及GABA明显升高.结论:冰片对地西泮透过血脑屏障有一定的促进作用.
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冰片促秦皮甲素透过兔角膜上皮细胞实验研究
眼科外用药中使用冰片,历史悠久,应用广泛.从对<银海精微>、<审视瑶函>、<秘传眼科龙木论>等眼科专著的统计看,冰片在眼科外用方剂中的出现率为55.7% .现代药理实验证实冰片外用时,具有抗菌抗炎作用;在口服后,能促进其他药物透过血脑屏障进入大脑.
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人参皂苷Rg1脂质体制备工艺的优化
人参具有大补元气,补脾益肺,生津,安神的功效,能调节中枢神经系统兴奋和抑制过程的平衡,并能提高学习能力.其主要成分人参皂苷基本上能代表人参的药效指标.药代动力学研究表明,人参皂苷难以通过血脑屏障(BBB)[1].为提高脑血药浓度,增强人参的疗效,增加人参皂苷对血脑屏障的通透性,使人参皂苷更有效的通过BBB具有重要的临床意义.
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精制清开灵干预缺血性脑损伤药理作用机制研究进展
缺血性脑血管病严重威胁人类健康,而且其病理机制非常复杂,涉及兴奋性氨基酸毒性、氧自由基产生、钙超载、炎症反应等多个方面.中药清开灵注射液对脑血管病具有较好的临床疗效,因此对其药理作用机制的研究具有重要意义.该文综述了近年来新型复方中药——精制清开灵注射液治疗脑缺血的药理作用的相关研究,从调节炎症反应、神经营养因子、血脑屏障和血管保护及其他4个方面阐述了其单一有效组分及组分配伍治疗缺血性脑损伤的药理作用机制,为进一步研究提供参考.
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冰片促进药物透过血脑屏障的研究进展
恶性肿瘤、癫痫、老年痴呆、脑缺血等脑部疾病,致残、致死率均很高.目前对治疗该类疾病的药物研发较多,应用成效较为明显,但是由于许多药物不能够通过血脑屏障或通过量较少,达不到控制疾病的作用,因此颅内病变治疗效果差.以冰片为代表的芳香开窍中药有效成分脂溶性强、相对分子质量极小,易挥发,易快速透过血脑屏障进入脑组织,还可促进其他中枢治疗性药物透过血脑屏障,该药对脑组织的损害性小并且具有双向调节血脑屏障通透性的作用,对治疗脑部疾病有重要的理论意义和应用价值.
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芳香开窍中药对血脑屏障通透性的调节作用及其机制研究进展
血脑屏障的天然屏障作用,在保护脑组织的同时也限制了众多药物的入脑转运.芳香开窍类中药能够开窍醒脑、调节血脑屏障通透性,体现出引药上行和脑保护的特性.该文以常见芳香开窍中药冰片、麝香、苏合香、安息香和石菖蒲为代表,综述了近年来芳香开窍中药对血脑屏障通透性调节作用的研究进展,并对其调节机制进行了探讨.此外,结合近年来芳香开窍中药在现代制剂中的应用,笔者认为后续研究应拓宽此类中药的应用,将其芳香开窍的特性与现代药剂学的新剂型、新技术相结合,为脑部疾病的治疗提供新的思路与方法.
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RGDyC与PEG共修饰的PAMAM树状大分子载三氧化二砷脑胶质瘤靶向递药系统的制备及体外评价
三氧化二砷(ATO)是中药砒霜的有效成分,已有研究表明其对多种肿瘤具有良好的生长抑制及促凋亡作用,但由于毒性大和透血脑屏障(BBB)难等问题严重限制了其在脑胶质瘤治疗方面的应用.聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM) 作为一种人工合成的高分子化合物,具有渗透性及稳定性强且生物相容性好等优点,且第5代PAMAM的空间结构更立体,是药物载体的理想选择.该课题采用RGDyC和PEG共同修饰第5代PAMAM,并通过核磁共振氢谱图证明了该纳米载体的成功合成;纳米粒度-电位分析仪和透射电镜图分析显示其平均粒径大约集中在20 nm左右;体外释放实验表明,该递药系统不仅具有缓释效果,同时还有一定的pH敏感特性;细胞结果显示,经RGDyC和PEG共修饰后的PAMAM与未经修饰组相比,细胞毒性显著降低,且该递药系统具有更好的体外跨血脑屏障(BBB)抗肿瘤效果,同时也进一步证明了RGDyC的肿瘤靶向作用.
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冰片对血脑屏障通透性的双向调节作用影响因素及机制探讨
有关冰片的研究较多但缺乏规律性总结以及作用机制的深入分析.该文综合整理和分析了近20余年来有关冰片对血脑屏障的影响因素及其作用机制.依据现有研究结果得出如下结论:冰片对血脑屏障通透性影响因素有:①不同来源冰片旋光性差异对作用效果无显著影响;②冰片剂量在50.00~200.00 mg·kg-1单用或者配伍使用并不影响其作用方向,仅影响其作用强度;③冰片单用对生理性血脑屏障能开放其通透性,对病理性血脑屏障能降低其通透性;④冰片对于不同大脑疾病模型的血脑屏障,单用或配伍麝香使用均能降低其通透性;⑤冰片配伍黄芪、梓醇、葛根素对病理性血脑屏障通透性有促开放和促进药物透过的作用.冰片对血脑屏障通透性双向调节作用的靶点和机制,与大脑内皮细胞的特殊结构即紧密连接的结构与功能,以及高表达的P-gp外排作用和低胞饮内运作用有关.冰片可通过抑制NF-κB下调P-gp,降低外排作用,提高血脑屏障通透性;也可通过促进血脑屏障胞饮作用,提高血脑屏障通透性;可通过抑制IL-1β,MMP-9表达,对抗其对血管外基膜和紧密连接的降解,降低血脑屏障通透性;通过影响Ca2+-eNOS-NO,VEGF-eNOS-NO等通路对血脑屏障通透性可能具有双向调节作用.冰片调控血脑屏障通透性作用的详细机制较为复杂,有待进一步阐明.
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中药化学成分透血脑屏障研究中MDCK-pHaMDR细胞模型和操作规程的建立
建立MDCK-pHaMDR细胞模型和标准操作规程,用于评价中药化学成分透血脑屏障的吸收转运.通过MDCK-pHa-MDR单层细胞的电镜下形态学特征、跨膜电阻、罗丹明123的胞内蓄积和双向转运以及阳性对照药咖啡因和阿替洛尔的转运程度等指标对MDCK-pHaMDR细胞模型进行评价.MDCK-pHaMDR细胞模型具有良好的完整性、紧密性和P-gp的稳定表达,阳性药物的转运结果与文献值一致.建立的MDCK-pHaMDR细胞模型的各项指标均符合要求,可用于中药化学成分透血脑屏障的吸收转运研究.
关键词： MDCK-pHaMDR细胞 中药化学成分 血脑屏障 吸收转运 -
冰片促进葛根素和梓醇口服吸收入脑的研究
从细胞水平和动物水平考察冰片对葛根素和梓醇口服吸收及穿透血脑屏障入脑的影响,筛选适合梓葛复方口服制剂的冰片浓度.采用原代大鼠脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞共培养建立体外血脑屏障模型,利用此模型研究6.25 ～ 100mg·L-1冰片对葛根素、梓醇转运的影响.小鼠分别灌胃给予0,25,50,100 mg·kg-1冰片溶液后再立即灌胃给予葛根素(200mg·kg-1)、梓醇(45 mg·kg-1)纳米晶混悬液,比较葛根素、梓醇在血浆和脑组织中的药动学参数.脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞共培养7d后,屏障功能基本形成.与未加入冰片组相比,冰片质量浓度为12.5 ～100 mg·L-1时,葛根素、梓醇跨血脑屏障模型的渗透系数显著增大(P＜0.05),冰片作用于共培养模型2h后的跨内皮细胞电阻值极显著降低(P＜0.01).小鼠灌胃50 mg·kg-1和100mg· kg-1冰片能显著促进葛根素的口服吸收,但冰片对梓醇的口服吸收无显著影响.100 mg·kg-1冰片组葛根素的AUC脑/AUC血显著高于其余3组(P＜0.05),梓醇则是50 mg·kg-1组高(P＜0.05).就脑组织AUC而言,葛根素以100 mg· kg-1组大,显著高于其余各组(P＜0.05);梓醇以50 mg· kg-1组大,但与100 mg· kg-1组无显著性差异.可见,冰片能促进葛根素、梓醇口服给药的入脑量,质量浓度以100 mg·kg-1为佳.
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MD-HPLC联用研究中药苏合香对西药舒必利脑药和血药浓度的影响
目的:为了观察中药苏合香对联用药西药舒必利血药与药脑浓度的影响,探讨苏合香开窍作用与增加胃肠屏障与血脑屏障透过性的关系,并研究苏合香与舒必利联用的相互作用.方法:大鼠连续口服用药1周后,进行脑部与颈部安装探针手术,平衡1h后,利用血微透析法与脑微透析法分别在(30,60,90,120,150,180 min)各时间段采集大鼠右心房内血液中与脑海马组织中的透析液,利用反相高效液相荧光色谱系统检测样品中舒必利的含量,利用统计学方法比较2组给药后脑中及血液中的舒必利含量.结果:舒必利合用苏合香组的大鼠脑中和血中舒必利浓度明显高于单用舒必利组,单用舒必利组大鼠血中和脑中舒必利的浓度比值为1∶0.2,舒必利与苏合香合用组血脑比增加为1∶0.3,与单用舒必利组相比,舒必利与苏合香合用组的舒必利脑浓度上升39％,血浓度上升69％.结论:苏合香能够明显增加舒必利在大鼠脑中和血中的浓度,说明苏合香能够促进舒必利透过胃肠屏障与血脑屏障,该研究从药理学角度揭示了苏合香“开窍”的机制是促进了胃肠屏障及血脑屏障通透性增加.
