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RGDyC与PEG共修饰的PAMAM树状大分子载三氧化二砷脑胶质瘤靶向递药系统的制备及体外评价
三氧化二砷(ATO)是中药砒霜的有效成分,已有研究表明其对多种肿瘤具有良好的生长抑制及促凋亡作用,但由于毒性大和透血脑屏障(BBB)难等问题严重限制了其在脑胶质瘤治疗方面的应用.聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM) 作为一种人工合成的高分子化合物,具有渗透性及稳定性强且生物相容性好等优点,且第5代PAMAM的空间结构更立体,是药物载体的理想选择.该课题采用RGDyC和PEG共同修饰第5代PAMAM,并通过核磁共振氢谱图证明了该纳米载体的成功合成;纳米粒度-电位分析仪和透射电镜图分析显示其平均粒径大约集中在20 nm左右;体外释放实验表明,该递药系统不仅具有缓释效果,同时还有一定的pH敏感特性;细胞结果显示,经RGDyC和PEG共修饰后的PAMAM与未经修饰组相比,细胞毒性显著降低,且该递药系统具有更好的体外跨血脑屏障(BBB)抗肿瘤效果,同时也进一步证明了RGDyC的肿瘤靶向作用.
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树枝状聚合物PAMAM包覆葛根素脂质体角膜渗透性研究
目的:研究树枝状聚合物PAMAM包覆葛根素(puerarin,PUE)脂质体的角膜渗透特性.方法:制备PAMAM G2和PAMAM G3包覆的葛根素脂质体,以葛根素水溶液和未包覆葛根素脂质体为对照,进行兔离体角膜渗透试验,同时考察包覆脂质体中,不同的摩尔投料比(PAMAM/磷脂=0.1%,0.5%,1.0%,2.0%),PAMAM对角膜渗透性的影响,计算渗透参数.结果:PAMAM/磷脂摩尔比为1.0%(PAMAM G2)和0.5%(PAMAM G3)的包覆脂质体的P_(app)(表观渗透系数),J_(ss)(稳态流量)均明显高于葛根素水溶液和未包覆脂质体(P<0.01),且PAMAM/磷脂摩尔比为1.0%(PAMAM G2)和0.5%(PAMAMG3)包覆脂质体的促角膜渗透性高于其他比例包覆的脂质体(P<0.01).结论:PAMAM包覆葛根素脂质体可以显著改善葛根素在兔眼部的角膜渗透性,作为眼用载体有希望增加药物的眼部吸收和生物利用度.
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类风湿关节炎吸附剂的制备及间隔臂作用的研究
本研究以各种不同性质的氨基酸为配基通过共价键将其固定在纤维素凝胶微球上制备了类风湿关节炎吸附剂,研究了间隔臂长度和种类对吸附剂吸附性能的影响.结果表明以苯丙氨酸(Phe)或色氨酸(Trp)为配基的吸附剂对类风湿因子有较高的清除率,是较好的配基;吸附剂的间隔臂对其吸附性能有较大影响,随着间隔臂的加长,吸附剂对类风湿因子的清除率相应增加:以Phe为配基时对IgGRF的清除率由48.7%增加到59.6%,以Trp为配基时对IgGRF的清除率由46.2%增加到60.1%:采用支化间隔臂可明显提高配基的固定量,吸附剂对类风湿因子的清除率亦显著提高(以Phe为配基时对IgGRF的清除率为74%).以长耳白兔为动物模型进行体外血液灌流实验显示此类吸附剂对血液中血细胞、血浆蛋白、血浆电解质的影响很小,该吸附剂的血液相容性良好.
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PAMAM纳米载体介导pCTGF-shRNA抑制小鼠腹膜间皮细胞CTGF的表达
目的 研究G9 PAMAM纳米载体介导的结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(shRNA)质粒(pCTGF-shRNA)对小鼠腹膜间皮细胞CTGF表达的影响.方法 设计并构建质粒pCTGFl-shRNA、pCTGF2-shRNA和阴性对照pHK-shRNA;应用G9 PAMAM将质粒分别转染4.25%葡萄糖刺激下的第3代小鼠腹膜间皮细胞;采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测细胞CTGF mRNA水平,采用Western Blot检测CTGF蛋白含量.结果 4.25%葡萄糖可刺激小鼠腹膜间皮细胞CTGF的mRNA和蛋白表达明显上调.pCTGFl-shRNA转染组和pCTGF2-shRNA转染组的CTGF表达较高糖组明显下调(P＜0.05),尤其以pCTGF2-shRNA组显著.pHK-shRNA转染组与高糖组比较,差异无显著性(P＞0.05).结论 G9 PAMAM纳米载体可介导pCTGF-shRNA转染原代小鼠腹膜间皮细胞,并能抑制高糖诱导的CTGF表达上调,提示PAMAM介导的pCTGF-shRNA可有效地用于腹膜纤维化的基因治疗.
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反义miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性的研究
目的 探讨as-miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-FU化疗敏感性的效果.方法 透析法制备5-FU/PAMAM载体,透射电镜观察形态,紫外分光光度计检测载药率和包封率;流式细胞仪检测转染效率并分析细胞凋亡比例;MTT法检测共转染后细胞生长抑制效果;免疫荧光检测Ki67和Bcl-2蛋白表达;Trauswell检测细胞侵袭能力变化.结果 纳米微粒形态规整;平均包封率为66.21%,平均载药量为31.77%;PAMAM转染效率为70.53%;共转染组细胞生长显著抑制(F=273.345,P=0.000);凋亡比例升高(F=43.21,P=0.000),Ki67、Bcl-2表达均下调;细胞侵袭能力显著下降.结论 PAMAM可以有效同载as-miR-21和5-FU,且更加有效地抑制U251脑胶质瘤细胞的体外生长并增加对5-Fu的化疗敏感性.
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组氨酸修饰pH敏感PAMAM-His/DOX复合物的制备及体外评价
目的:构建组氨酸(His)修饰pH敏感响应的载抗肿瘤药物阿霉素(DOX)复合物PAMAM-His/DOX,并对其进行表征及初步评价.方法:通过控制His和PAMAM的投料比,合成3种不同His修饰程度的PAMAM-His载体;采用物理包埋的方式将DOX包载在PAMAM的疏水空腔内制备系列载药复合物.对各载药复合物的粒径、电位、包封率、载药量、体外释放行为等进行考察,并采用MTT法评价各复合物对乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒性作用.结果:PAMAM-His/DOX复合物的粒径均在10 nm左右;随着His修饰程度的增加,其Zeta电位降低,且对抗MCF-7的细胞毒性增加;体外释放实验结果表明复合物具有明显的pH酸敏感特性,并且在酸性条件下(pH 5.0),药物累积释放量与His修饰程度成正比.结论:本实验成功制备并初步评价了3种His修饰程度的PAMAM-His/DOX,为下一步的体内外抗肿瘤研究奠定了理论基础.
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PAMAM树状大分子的合成及其计算机模拟
目的利用分子模拟确定G3、G4和G5PAMAM树状大分子精确的3D结构.方法在SGI Octane2计算机工作站下,用Insight II 2000软件模拟了真空条件下树状大分子的空间结构.结果 G3到 G5PAMAM树状大分子结构从开放、不对称结构向闭合、对称结构转变,因此,G5PAMAM树状大分子内部有空腔外部有氨基活性官能团.结论计算机模拟研究表明:G5PAMAM树状大分子是一类具有空间三维结构且高度有序的球状高分子化合物,其内部空腔和外表面官能团为结合大量和不同种类的药物分子提供了可能.
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树枝状高分子聚酰胺-胺(PAMAM)对水杨酸增溶作用研究
本文用发散法合成了以乙二胺为核的聚酰胺-胺(PAMAM 0.5-4.5代),考察了不同分子代数、不同载体浓度的PAMAM对水杨酸的包载和增溶作用,结果表明:PAMAM分子对此类药物有着良好的增溶作用,其效果高代优于低代,整代优于半代,而半代的PAMAM有着单分子胶束的性质和载药量稳定的特点.结果表明PAMAM树枝状高分子作为弱酸性难溶性药物的载体有着良好的应用前景.
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肿瘤靶向药物载体的肿瘤细胞靶向性研究
目的 研究多肽介导的肿瘤靶向药物载体的制备及其细胞摄取性能.方法 以丁二酸酐为手臂将SP5-52多肽共价结合到第4代聚酰胺-胺(PAMAM)型树枝状高分子材料(G4)上,荧光分子异硫氰酸荧光素(FITC)为检测探针,以SP5-52多肽连接G4制备靶向药物载体G4-FITC-SP5-52,以阿霉素(DOX)为模型药物,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色试验检测载体的细胞毒性,流式细胞术比较连接SP5-52前后细胞对载体的吸收情况,倒置荧光显微镜观察肿瘤细胞对载体及药物的吸收情况.结果 经乙酰化修饰的靶向载体具有良好的生物相容性,在4 μmol/L浓度下24 h的细胞存活率高于80％；流式细胞仪检测结果表明靶向载体对非小细胞肺癌H460细胞具有良好的靶向性,游离SP5-52多肽可以抑制载体的靶向性；靶向载体可以通过物理包埋的方式载阿霉素,并对阿霉素的释放具有缓释作用；倒置荧光显微镜观察结果显示靶向载体可以使阿霉素更大量的进入肿瘤细胞.结论 G4-FITC-SP5-52体外展示出了良好的肿瘤靶向性,有可能成为临床肿瘤治疗的靶向药物载体.
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3种不同脱敏方式对牙本质小管封闭作用的实验研究
目的:研究3种不同脱敏方式对牙本质小管的封闭效果.方法:制取35颗离体牙的牙本质盘,0.5 mol/L EDTA脱矿使得牙本质小管开放,按照处理方法的不同随机分为4组:空白组(A)5颗,Er∶YAG激光组(B)10颗,生物活性玻璃组(C)10颗,Pamam组(D)10颗.后3组再分为刷牙前和刷牙后2个亚组,每组5颗:B1、C1、D1组为刷牙前,B2、C2、D2组为刷牙后.通过扫描电镜(scanning electron microscopy,SEM)比较刷牙前后各脱敏组牙本质小管的封闭效果.结果:SEM观察发现B、C、D组均有明显的封闭物堵塞了牙本质小管口.A组暴露率显著高于其余各组.且C2、D2、C1、D1、B1组小管面积暴露率均显著低于B2组.Er∶YAG激光组(B2)刷牙后小管封闭效果稍差,而生物活性玻璃组(C1、C2)和Pamam组(D1、D2)刷牙前后封闭效果无显著差异.结论:3种不同的脱敏剂均能较好地封闭牙本质小管,但封闭效果存在差异,建议临床选择应用.
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聚酰胺-胺对永生化的人角膜上皮细胞的毒性
目的 考察一种新型药物载体——聚酰胺-胺[ poly(amidoamine),PAMAM]对体外培养的角膜上皮细胞的毒性作用,为其在眼部药物载体的应用提供理论依据.方法 建立应用于PAMAM毒性研究的角膜上皮细胞模型,通过细胞毒性分析测定不同浓度(10g· L-1、1 g·L-1、0.1g·L-1、0.01 g·L-1、0.001 g·L-1)、不同代数(G3.0、G3.5、G4.0、G4.5、G5.0)的PAMAM在共同孵育5 min、15 min、60 min对角膜上皮细胞存活率的影响并计算其IC50值.结果 整代PAMAM( G3.0、G4.0、G5.0)和半代PAMAM( G3.5、G4.5)均随着代数的增大,细胞毒性增加,且在一定浓度范围内细胞毒性随着药物浓度增大、药物接触的时间延长而增加.半代PAMAM细胞毒性均低于整代.G3.0、G3.5、G4.5 PAMAM在1g·L-1及以下浓度毒性反应均为合格,G4PAMAM在0.1g·L-1浓度及以下毒性评级大部分为合格,而G5 PAMAM只在0.01 g·L-1和0.001 g·L-1下部分毒性评级合格.结论 低代或半代PAMAM可能更适合作为眼部药物给药的载体,也可考虑通过结构修饰等手段降低高代PAMAM毒性.
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PAMAM作为抗肿瘤药物载体研究进展
树枝状大分子是一类新型的高分子材料,具有高度枝化、结构可控、单分散等特点,其中聚酰胺-胺型大分子(Polyamidoamine,PAMAM)由于能提高药物的水溶性、靶向性和生物利用度,已在抗肿瘤药物载体领域有着广泛的应用.本文将就PAMAM作为一种新型的抗肿瘤药物载体的研究进展进行综述.
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聚乙二醇化聚酰胺-胺树枝状材料的制备及其细胞毒性研究
目的 聚酰胺-胺树枝状材料(PAMAM)作为药物载体具有较好的结构优势,通过聚乙二醇(PEG)修饰后,制备低毒的复合物.方法 调整PAMAM与PEG比例合成PAMAM-PEG复合物,并用1-H-NMR,粒径-Zeta电位仪对其进行表征；采用MTT法检测细胞的存活率和溶血试验考察细胞溶血毒性.结果 本实验获得了三种PAMAM-PEG复合物；与PAMAM处理组比较,复合物处理的KB细胞存活率显著提高,细胞的溶血率显著降低,并呈剂量—效应依赖性.结论 PAMAM具有一定的细胞毒性,随聚乙二醇化程度的增加,其对KB细胞体外抑制活性降低,溶血毒性降低.
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聚酰胺-胺形树状大分子表面修饰的研究进展
PAMAM是目前研究较为广泛的树状大分子之一,其本身无免疫原性、遗传毒性,作为基因载体转染效率高、毒性小、适用性广,因而在基因治疗方面有很好的应用前景.对PAMAM表面基团进行修饰,可减少表面正电荷数目,降低其细胞毒性,提高转染效率.本文主要介绍近几年PAMAM表面修饰的研究进展.
