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高效液相梯度洗脱法测定灵杞黄斑颗粒中毛蕊花糖苷和丹酚酸B含量
目的 建立同时测定灵杞黄斑颗粒中毛蕊花糖苷和丹酚酸B含量的反相高效液相梯度洗脱法.方法 采用Agilent Eclipse XDB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)进行梯度洗脱,梯度洗脱程序为进样0～8 min,调节流动相A:B(20:80,V/V);8～20 min,流动相A:B(30:70,V/V);20～23 min,流动相A:B(20:80,V/V);流速:1.0 mL·min~(-1),检测波长:334 nm,柱温:30℃,进样量:10μL.结果 毛蕊花糖苷和丹酚酸B分别在1.50～14.97 mg·L~(-1)和18.92～189.23 mg·L~(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.999 8和0.999 9,平均加样回收率毛蕊花糖苷为(99.7±S 1.1)%,RSD=1.12%,丹酚酸B为(99.5±1.0)%,RSD=1.02%,3批样品中毛蕊花糖苷平均含量均不低于36.9μg·g~(-1),RSD均不大于1.54%,丹酚酸B平均含量均不低于344μg·g~(-1),RSD均不大于1.94%.结论 该方法简便、快速、准确、灵敏度高、专属性强,可用于灵杞黄斑颗粒剂的质量控制.
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梯度洗脱高效液相色谱法测定萘丁美酮的含量及其有关物质检查
目的:建立测定萘丁美酮的HPLC方法,并进行萘丁美酮含量测定和有关物质检查.方法:Agilent 1100 型高效液相色谱仪,色谱柱为Agilent Zorbax C-18(150 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相采用梯度洗脱.UV检测波长为254 nm.结果: 本法测定萘丁美酮的线性相关系数为0.9999;日内、日间精密度均小于1%,方法回收率高、中、低3点分别为99.40%,101.60%和97.11%.结论:本方法测定萘丁美酮,专属性强,灵敏度高,重现性好.
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注射用硫酸头孢匹罗有关物质的梯度洗脱HPLC法测定
建立了梯度洗脱高效液相色谱法测定注射用硫酸头孢匹罗的有关物质.采用Kromasil C18色谱柱,以pH 7.0磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相,梯度洗脱,检测波长265 nm.结果显示头孢匹罗与有关物质分离良好.头孢匹罗、7-氨基头孢烷酸和2,3-环戊烯并吡啶分别在1～16 μg/ml、0.5～10 μg/ml和1～10 μg/ml范围内线性关系良好.
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梯度洗脱-高效液相色谱法测定消毒剂中的6种季铵盐
目的 建立梯度洗脱-高效液相色谱法测定消毒剂中苯度氯铵、米他氯铵、西他氯铵、司拉氯铵、苄索氯铵和西吡氯铵等6种季铵盐的方法.方法 采用氰基色谱柱,以甲醇和0.05 mol/L醋酸铵溶液(pH=5.0)为流动相,梯度洗脱,选择263 nm为检测波长,外标法定量.结果 苯扎氯铵同系物在40.0～800.0 mg/L、苄索氯铵20.0～400.0 mg/L、西吡氯铵2.5～50.0 mg/L范围内线性关系良好(相关系数r=0.999 9),低、高浓度加标水平的回收率范围为95.7％～104.7％、101.8％～105.9％,相对标准偏差(RSD)为0.6％～1.5％、0.3％～1.1％,方法检出限为0.8～6.0 mg/L,定量限为2.5～20 mg/L.结论 该方法样品前处理简单,结果准确可靠,适合于同时测定消毒剂中此6种季铵盐的含量.
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反相高效液相色谱法测定烧伤大鼠肠三叶因子
建立了测定大鼠肠三叶因子(ITF)的反相高效液相色谱法,该法简便、灵敏和准确.色谱柱为Hypersil C4(300A,5 μm,4.6×250 mm)以乙腈/三氟乙酸为流动相,梯度洗脱,流速为1 ml/min.在214 nm检测波长下,ITF在1～100 mg/L范围内具有良好的线性关系,检测下限为20 ng.
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大鼠排泄物中羟基红花黄色素A的高效液相色谱法测定
目的:建立一种简便、准确、改进的高效液相色谱(HPLC)方法,测定大鼠口服羟基红花黄色素A(HSYA)后粪便和尿液中HSYA的含量.方法:色谱条件:Dikma C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为:A泵,水相(0.5%三乙胺+1%冰醋酸);B泵,有机相(甲醇∶乙腈 ＝23∶2 );梯度洗脱A∶B为84∶16(0.01 min) → 54.7∶45.3 (17.00 min) → 84∶16 (17.01 min) → 84∶16 (22.01 min);平衡时间5 min;检测波长403 nm;代谢笼收集大鼠给药后24 h粪便和尿液.10%三氯乙酸沉淀蛋白及离心后取上清液进样.结果:粪便和尿液中HSYA分别在0.8 μg·mL-1～200 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1～500 μg·mL-1范围内线性关系良好;低检测限分别为0.0016、0.0032 μg·mL-1;提取回收率为82.5%～90.2%;日内精密度小于3.4%,日间精密度小于4.8%.大鼠灌胃给予HSYA水溶液后,HSYA从粪便和尿液中24 h累计排泄回收率分别为44.66%±8.0%、5.58%±1.3%.结论:本方法检测限低,分析简便、准确,适合于大鼠口服HSYA后的排泄研究.
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梯度洗脱HPLC法测定更昔洛韦的有关物质
目的:探讨更昔洛韦原料的有关物质检查方法,并与<中国药典>和国家标准中的方法进行比较.方法:采用安捷伦C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-水为流动相,采用梯度洗脱(0～5 min,甲醇比例为5%;5～30 min,甲醇比例为5%～50%;30～35 min,甲醇比例为50%～5%);检测波长为252 nm;柱温25℃;流速为1.0 mLmin-1.结果与结论:薄层色谱法检测灵敏度不高,不能满足现在高标准的药品有关物质的检测要求;与<中国药典>2005年版的方法相比,改进后的HPLC法更准确,可以更有效、更全面地对本品的有关物质进行检测.
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RP-HPLC法测定盐酸伊托必利片的含量及有关物质
建立RP-HPLC法测定盐酸伊托必利片的含量及有关物质.采用Diamonsil C18 (4.6 mm ×250 mm,5μm)色谱柱,含量测定以0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用稀磷酸或稀氢氧化钾溶液调节pH至4.0)-乙腈(80∶ 20)为流动相,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为258 nm,柱温为30℃.有关物质测定以0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(调节pH至4.0)为流动相A,乙腈为流动相B,进行梯度洗脱(0～ 12 min,80∶20;12～17 min,80∶ 20→60∶40;17～22 min,60∶40;22 ～23 min,60∶ 40→80∶20;23～ 38 min,80∶ 20),体积流量为1.0 mL/min,检测波长为258 nm,柱温为30℃.结果表明,在该色谱条件下,有关物质各杂质峰与主峰之间的分离良好,辅料对主成分的含量测定无干扰.盐酸伊托必利在10～ 200 μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r为0.999 7,检测限为6 ng,平均回收率为100.49％(RSD=0.58％).3批样品含量测定结果分别为100.66％,99.94％,99.73％,单个大杂质分别为0.12％,0.25％,0.19％,总杂质分别为0.47％,0.62％,0.54％.本方法重现性好,专属性强,可用于盐酸伊托必利片的质量控制.
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HPLC法测定阿扑西林的有关物质
建立阿扑西林有关物质测定的HPLC方法.采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱；以0.05 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用2 mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.5)为流动相A,以乙腈为流动相B,进行梯度洗脱；柱温为30℃；体积流量为1.0 mL/min；检测波长为280 nm.结果在该色谱条件下,阿扑西林与各中间体及降解产物均得到良好分离,低检测限与低定量限分别为4.2ng与14.0 ng.所建立的方法适用于阿扑西林的有关物质研究.
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HPLC梯度洗脱法测定美洛西林钠有关物质
目的:建立测定美洛西林钠有关物质的HPLC梯度洗脱法.方法:使用ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0 μm),以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾4.9g和磷酸氢二钾0.45 g,加水溶解并稀释至1 000 mL,用磷酸调节pH至5.7,即得)和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL· min-,柱温为31℃,检测波长为215 nm.结果:美洛西林钠样品中有关物质完全洗出,美洛西林主峰与有关物质峰均达到基线分离；美洛西林钠质量浓度在11.2 ～33.5 mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.997),美洛西林的检测限和定量限分别为12.20和40.25 ng,而美洛西林钠样品中有关物质检测限可达美洛西林钠含量的0.03％.结论:该法对美洛西林钠有关物质的测定灵敏、准确、专属性强,适用于美洛西林钠产品质量控制.
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RP-HPLC梯度洗脱法测定泮托拉唑钠的有关物质及含量
目的:建立泮托拉唑钠及制剂的有关物质及含量的测定方法.方法:采用VP-ODS C_(18)柱(250 mmn×4.6 mm,5 μm);流动相以0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液(用磷酸调节pH至7.0)-乙腈,梯度洗脱,0→30 min(90:10→60:40),30→45 min(60:40→15:85);柱温为40℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为289 nm.结果:泮托拉唑钠与各中间体及降解产物均良好分离,泮托拉唑钠在6.96～48.72 μmL范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9),低检测限与低定量限分别为8.51 ng与17.0 ng.结论:本方法能有效控制泮托拉唑钠有关物质,并可用于含量测定.
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反相离子对梯度洗脱色谱法测定甲麻芩苷那敏片中3组分含量
目的:建立测定甲麻芩苷那敏片中3组分(盐酸甲基麻黄碱、黄芩苷和马来酸氯苯那敏)含量的反相离子对HPLC法.方法:采用色谱柱Inertsil ODS-3(250 mm×4.6 mm,5 μm,柱温30 ℃),以[0.2%辛烷磺酸钠溶液-三乙胺(100∶0.2,磷酸调节pH至4.3)]-甲醇(50∶50)为流动相A,以甲醇为流动相B,流动相B的比例由1%～98%匀速递增进行洗脱;检测波长为215 nm;流速为1.0 mL/min.结果:盐酸甲基麻黄碱、黄芩苷及马来酸氯苯那敏的线性范围分别为0.5～25 μg(r=0.999 8),0.3～17 μg(r=1.000)和0.01～0.5 μg(r=1.000),平均回收率分别为100.3%(RSD=1.3%)、99.9%(RSD=1.1%)和99.6%(RSD=1.2%).结论:本文建立的方法简单、迅速,可用于甲麻芩苷那敏片中3组分的含量测定.
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溶质线性梯度保留时间的多元回归预测模型
目的:建立准确预测反相高效液相色谱线性梯度条件下溶质保留时间的数学模型.方法:应用小二乘法构建了溶质保留与梯度参数的多元线性回归模型,并采用了两种不同品牌色谱柱及两种中药提取液对该模型进行了验证.结果:两种不同色谱柱的实验数据均能很好拟合预测模型,对粉葛提取液中14个组分和金银花提取液中13个组分保留时间预测总的平均相对偏差分别为(1.64±1.25)%(n=84),(1.28±0.95)%(n=78),明显低于两种常用梯度保留公式的预测偏差.结论:所建立的回归模型计算简单且对复杂体系中弱保留及强保留组分均能准确地预测.
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黄体酮药物中一种新的杂质的高效液相色谱测定法
目的:建立新的测定黄体酮中有关物质的高效液相色谱法,并对杂质的类别进行初步确定.方法:在中国药典和英国药典收载的黄体酮质量标准的基础上,对流动相系统进行了优化;用高效液相色谱梯度洗脱法完成了黄体酮及有关物质的分离,并通过LC-MS对可能的杂质进行了初步确定.结果:本文建立的方法可使各有关物质较好的分离,分离的新杂质与欧洲药典上"可能的杂质"项下的一个杂质基本吻合.结论:本法快速、准确,适用于黄体酮中有关物质的分析,并优于中国药典法.
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盐酸去甲万古霉素纯度控制方法的改进
目的:改进盐酸去甲万古霉素质量控制的方法.方法:在中国药典与美国药典方法的基础上,优化了两种不同的流动相系统(三乙胺-乙腈-四氢呋喃系统和磷酸氢二铵-甲醇系统),用梯度洗脱对盐酸去甲万古霉素及其有关物质进行分离.结果:与中国药典方法相比,分离效果显著提高,两种方法在2.5～40 μg范围内,峰面积与进样量线性关系良好,检测限10 ng.结论:改进后的RP-HPLC方法能更加真实的反映去甲万古霉素及其有关物质的含量.
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HPLC梯度洗脱法测定血浆中柳氮磺吡啶及其代谢物
目的:建立人血浆中柳氮磺吡啶(SASP)及其代谢物磺胺吡啶(SP)、乙酰磺胺吡啶(AcSP)浓度的高效液相色谱(HPLC)测定方法. 方法:液相分离采用Hedera ODS-2 分析柱,柱温:30℃,以甲醇0.05 mol/L乙酸铵溶液(含0.1%三乙胺)溶剂系统梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,进样量20 μl;检测波长243 nm.以苯巴比妥(PB)为内标,血浆样品用甲醇沉淀蛋白质后取上清液进样分析. 结果:血浆中其他组分均不干扰样品的测定;在 0.5～100 mg/L范围内SP 、AcSP和 SASP均呈良好的线性关系,相关系数r均＞0.999 2;提取回收率 (n=5) 分别为97.1%～101.3%、97.7%～103.3%、94.9%～102.3%;日内相对标准偏差(RSD)分别为1.44%～3.04%、1.76%～3.85%、2.12%～3.22%,日间RSD分别为 2.01%～3.69%、2.11%～3.99%、2.56%～3.56%. 结论:本方法操作简便、选择性好、准确、灵敏,可用于柳氮磺吡啶的药代动力学研究.
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反相高效液相色谱法测定烧伤涂膜中黄芩苷和大黄素的含量
目的:研究以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法同时测定烧伤涂膜中黄芩苷、大黄素含量的方法.方法:采用Lichrospher C18(150 mm×4.6 mm)柱,以甲醇-0.2%膦酸为流动相梯度洗脱,检测波长280 nm,流速为1.0 ml/min.结果:黄芩苷在0.712～3.00mg/ml范围内线性关系良好,r=0.998 2,平均回收率为97.74%,相对标准差(RSD)为2.37%(n=9).大黄素在0.212～0.895 mg/ml范围内线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为97.67%,RSD为1.92%(n=9).结论:此法操作简便,结果可靠,重现性好,可作为该产品的质量控制方法.
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变波长紫外液相色谱法测定果汁中5种人工合成色素
液相色谱法测定人工合成色素,已成为国标GB/T5009.35-2003第一法[1].我们应用该方法在测试果汁样品的色素含量时,采用单一的254 mm波长有明显的杂质干扰峰.有文献报道测定色素的液相色谱法,其选用的是二极管阵列检测器[2].在实际工作中我们采用紫外检测器,变化波长的方法,在254 nm测定柠檬黄、苋菜红,498 nm测定胭脂红、日落黄,600 nm测定亮蓝,以流动相的梯度洗脱,一次性地将含有5种色素的样品分离,可以避免杂质在紫外区的吸收对样品测定的干扰,保持基线平稳,并使胭脂红、日落黄、亮蓝的灵敏度得以提高.
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HPLC测定利格列汀的有关物质
目的 建立梯度洗脱高效液相色谱法测定利格列汀原料杂质的方法.方法 色谱柱为Agilent C18柱,流动相A为磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠2.0 g,加水1 000 mL溶解,并用磷酸调节pH值至2.5±0.1),流动相B为甲醇-乙腈(55∶45),以1.0 mL·min-1流速;检测波长为226 nm;柱温为30℃,进样量为10μL.结果 8-[(3R)-哌啶-3-氨基]-7-(2-丁炔基)-3,7-二氢-3-甲基-1-[(4-甲基-2-喹唑啉基)甲基]-1H-嘌呤-2,6-二酮(杂质A)、8-[(3R)-3-氨基-1-哌啶基]-7-(3-溴-2-丁烯基)-3,7-二氢-3-甲基-1-[(4-甲基-2-喹唑啉基)甲基]-1H-嘌呤-2,6-二酮(杂质B)、8-[(3R)-3-甲酰胺基-1-哌啶基]-(7-(2-丁炔基)-3,7-二氢-3-甲基-1-[(4-甲基-2-喹唑啉基)甲基]-1H-嘌呤-2,6-二酮(杂质C)和利格列汀及其他未知杂质均能达到很好的分离,且杂质A、杂质B、杂质C与利格列汀分别在0.59～5.91 μg·mL-1(r=0.999 9),0.59～5.86 μg·mL-1(r=0.999 8)、0.58～5.79 μg·mL-1(r=0.999 5)和1.32～13.22 μg·mL-1(r=0.999 7)内具有良好的线性关系.杂质A、杂质B、杂质C平均回收率(n=9)分别为99.12％(RSD=2.9％)、99.35％(RSD=2.4％)和98.52％(RSD=1.1％).结论 本方法灵敏快速、准确、可靠,专属性强,可作为利格列汀的杂质检查.
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HPLC测定替卡西林钠及注射用替卡西林钠克拉维酸钾中的有关物质
目的 建立测定替卡西林钠及注射用替卡西林钠克拉维酸钾中有关物质的高效液相色谱梯度洗脱法.方法 采用HPLC梯度洗脱法,色谱柱为Waters XBridgeTM C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);以0.01 mol·L-1磷酸氢二铵溶液(pH 7.0)为流动相A,0.01 mol·L-1磷酸氢二铵溶液(pH 7.0)-甲醇(50:50)为流动相B,梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;检测波长为220 nm;柱温为30℃.结果 与等度洗脱法比较,梯度洗脱法具有更强的分析杂质的能力,样品中各成分的分离度及检出灵敏度均满足有关物质测定要求.替卡西林杂质A与破坏条件下产生的降解杂质与主成分峰分离较好;替卡西林的低检出限为4.8 ng,克拉维酸的低检出限为7.3 ng;原料药与制剂样品中替卡西林杂质A均＜1.5％,大单个杂质均＜2.0％,总杂质均＜4.0％.结论 本方法专属性好,灵敏度高,可用于替卡西林钠原料药和注射用替卡西林钠克拉维酸钾中有关物质的测定.
关键词： 梯度洗脱 高效液相色谱法 替卡西林钠 注射用替卡西林钠克拉维酸钾 有关物质
