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Fenton体系、H2O2损伤红细胞膜分子流变性的比较研究
Fenton反应体系是由H2O2和二价阳离子配制成的反应体系.为区分Fenton反应体系和单纯H2O2作用分别对红细胞膜脂质及蛋白分子流动性影响的不同,本文通过微吸管法、电子自旋共振波谱仪(ESR)、激光拉曼波谱仪等分别对体外Fenton反应体系和单纯H2O2作用30分钟后,及恢复3小时后的红细胞膜剪切弹性模量μ、细胞表面指数Si、膜整体结构、膜蛋白分子τp及脂质分子τl相对旋转时间进行了比较分析.结果发现,①Fenton反应体系导致了红细胞膜的μ值明显增加,但Si无明显改变;②Fenton反应体系使红细胞膜中的β-胡罗卜素构象的卷曲形式增加,提示膜整体结构改变;③Fenton反应体系致使红细胞膜蛋白分子τp及脂质分子τl明显延长;④恢复3小时后除红细胞膜脂分子τl值外,上述改变的可逆性较差;⑤H2O2作用只引起红细胞膜τp值增加,但并未影响膜脂质分子流动性和红细胞变形性;因此证明Fenton反应体系作用后红细胞流变性的改变主要为其中的自由基损伤所致.
关键词： Fenton反应体系 H2O2 红细胞流变性 膜分子流动性 -
二苯乙烯苷对过氧化氢诱导的PC12细胞损伤的保护作用
目的 探讨二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)所致PC12细胞损伤的保护作用.方法 培养PC12细胞给予H2O2(100 μmol/L)诱导细胞凋亡,实验分为空白对照组、H2O2损伤组、高剂量组(TSG 120 μg/L+H2O2)、中剂量组(TSG 60 μg/L+H2O2)和低剂量组(TSG 30 μg/L+H2O2).TSG处理2 h后,加入H2O2损伤细胞,4 h后取细胞测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,采用硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(MDA),黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,噻唑兰(MTT)法检测细胞活力,免疫组织化学方法检测bcl-2的蛋白表达.结果 TSG能提高细胞活力,降低LDH漏出和细胞凋亡率(P<0.05).0.1～1 μmol/L TSG处理后bcl-2的蛋白表达降低(P<0.05).结论 TSG能减少H2O2对PC12细胞的损伤.
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氯膦酸二钠脂质体对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响
目的:探讨氯膦酸二钠脂质体(liposomal clodronate,LC)的制备及对大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PM)功能的影响.方法:利用薄膜法制备LC;分离培养大鼠PM,用不同浓度的LC(50,100,150 μmol/L)分别作用于大鼠PM,然后采用MTT比色法,中性红比色法,检测NO,O2-和H2O2的含量来评估巨噬细胞功能.结果:在三种不同浓度LC的干预下,MTT结果显示巨噬细胞的生长受到明显抑制( P<0.01);巨噬细胞吞噬中性红结果表明其吞噬功能受到明显抑制,抑制率分别为17.4%,25.8%和38.0%;巨噬细胞分泌NO、O2-的能力也受到明显抑制,与对照组相比差异具有显著性(48.398±0.667,27.664±0.566,25.626±0.184vs 91.714±1.726;0.289±0.017,0.256±0.013,0.216±0.003 vs 0.342±0.022,均P<0.05);巨噬细胞产生H2O2的能力仅在100 μmol/L与150μmol/L时受到明显抑制(0.261±0.002,0.213±0.015 vs 0.277±0.003,均P<0.05).结论:LC对大鼠PM功能具有抑制作用.
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脑心通对H2O2诱导的大鼠内皮细胞凋亡的影响
现代的观点认为动脉粥样硬化的始动环节为血管内皮完整性的破坏,其中内皮细胞凋亡与增生的不平衡是极为重要的因素.吸烟、高脂血症、高血糖、氧化应激等均可导致内皮细胞过度凋亡、血管内膜解剖结构的破坏及血管功能的紊乱.目前,对细胞凋亡及抗凋亡机制的研究较多,抗氧化、抑制氧自由基是研究的热点.脑心通为中药复方制剂,我们于2010年10月至2011年7月,采用H2O2制备人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡模型,并通过血清药理学方法观察含脑心通血清对细胞凋亡的影响.
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过氧化氢诱导人黑素细胞氧化应激损伤模型的建立
目的：建立不同浓度的H2O2诱导人黑素细胞系PIG1产生氧化应激状态的模型，为进一步研究白癜风氧化应激发病机制奠定基础。方法分别以不同浓度的H2O2处理人黑素细胞系PIG124 h，光学显微镜观察黑素细胞形态学变化，流式细胞仪检测细胞凋亡情况及细胞内活性氧簇(ROS)水平，CCK-8法检测处理后细胞活性，硫代硫酸巴比妥法检测细胞脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)产生情况。结果随着作用浓度的增加，黑素细胞体积变小，树突数量减少，长度缩短，凋亡及坏死逐渐增加；以0 mmol/L浓度作为对照，0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、2.00 mmol/L的H2O2分别处理人黑素细胞系PIG124 h后，细胞凋亡率分别为6.8%、11.5%、15.6%、22.7%、38.7%和57.5%；细胞活性随着作用浓度的增加而逐渐降低，细胞内ROS水平及MDA含量随着作用浓度的增加而逐渐升高，1.00 mmol/L浓度处理24 h后开始与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。结论该文摸索出了H2O2引起人黑素细胞氧化应激损伤的佳实验浓度，并成功建立了人黑素细胞氧化应激损伤模型。
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外阴阴道念珠菌病阴道乳酸杆菌的分布及作用
目的 通过对外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)患者与正常妇女阴道乳酸杆菌优势菌种和产H2O2能力的比较,初步探讨乳酸杆菌在VVC发病中的作用.方法 以66例VVC患者为实验组,50例正常妇女为对照组.1.将阴道分泌物接种在MRS乳酸杆菌琼脂培养基上,在CO2环境下培养,采用微量生化试验鉴定乳酸杆菌;2.将乳酸杆菌接种在H2O2鉴定培养基上,根据显色鉴定是否产H2O2.结果 1.两组在乳酸杆菌的分布上无差别(P＞0.05),均以嗜酸乳酸杆菌、詹氏乳酸杆菌和卷曲乳酸杆菌为优势菌种;2.对照组H2O2阳性乳酸杆菌的分离率明显高于实验组,分别为23例(46%)和6例(9.09%),有显著性差异(P＜0.01);3.两组内三种优势乳酸杆菌产酸能力相似(P＞0.05),但两组间相比,VVC组嗜酸乳酸杆菌和卷曲乳酸杆菌产H2O2能力较对照组下降(P＜0.05).结论 1.VVC患者与正常妇女阴道内乳酸杆菌菌种分布相似;患VVC后阴道嗜酸乳酸杆菌和卷曲乳酸杆菌产酸能力下降;2.VVC的发生与H2O2阳性乳酸杆菌的数量有关.
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产H2O2的乳酸杆菌在性传播疾病中的作用
产H2O2的乳酸杆菌在女性生殖泌尿道感染所起的作用一直以来都是研究热点,近年的研究无论在体内或是体外,大多是关于细菌性阴道病、淋病、HIV感染及念珠菌性阴道炎与产H2O2的乳酸杆菌的关系,并认为缺乏产H2O2的乳酸杆菌在上述疾病发生发展中起重要作用.
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15D-PGJ2对小鼠耳蜗基底膜螺旋神经节氧化损伤的防护作用
目的：研究PPARγ激动剂15D-PGJ2对H2O2诱导的离体小鼠耳蜗螺旋神经节氧化损伤的防护作用。方法分离生后3-5 d的小鼠耳蜗基底膜,培养24 h后不同浓度PPARγ激动剂15D-PGJ2(10μM,30μM)预处理24h,再分别加入含有不同浓度H2O2(3mM,6mM)的培养基培养24小时。采用NF200免疫荧光染色方法行离体耳蜗基底膜螺旋神经纤维免疫荧光染色，在免疫荧光显微镜下观察各组螺旋神经纤维形态以及密度改变。结果3mM H202单独作用于原代培养的基底膜螺旋神经节24h时，螺旋神经纤维呈节断状损失改变,神经纤维逐渐变细局部断裂,染色变淡,神经纤维数量明显降低。随着H202浓度的增加，受损伤的螺旋神经微丝数目呈明显增加趋势。10μM 15D-PGJ2预处理24小时能提高H202损伤后基底膜螺旋神经纤维的数量。30μM 15D-PGJ2预处理组螺旋神经纤维数量明显增加。随着15D-PGJ2浓度提高,其保护作用加强。结论 PPARγ激动剂15D-PGJ2可减轻H2O2诱导的离体小鼠耳蜗基底膜螺旋神经节氧化损伤。
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 螺旋神经节 H2O2 15d-PGJ2 -
急性运动诱导大鼠骨骼肌线粒体生物合成:H2O2参与介导PGC-1α转录
目的:线粒体产生的活性氧(ROS)是多种重要细胞信号转导通路的调节中心,本文拟探讨运动源性的过氧化氢(H2O2)是否作为信号分子参与了运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成过程.方法:以大鼠急性递增负荷跑台运动为模型,连续观察和分别测定对照组(C),运动中45min、90min、120min 150min(分别以E45、E90、E120和E150组表示)及运动后恢复3h、6h、12h、18h和24h(分别以R3h、R6h、R12h、R18h和R24h组表示)各时间点骨骼肌组织中H2O2 浓度,PGC-1α、NRF-1、Tfam、COX IV Mrna表达,PGC-1α、Tfam、COX IV和P38mapk蛋白含量以及P38mapk活性的变化.结果:1)与对照组比较,E45组骨骼肌H2O2浓度即开始呈现显著性增加,并持续到R6h组(均P<0.001);在R12h组出现短暂降低后,又持续显著性增加至R24h组(均P<0.001);2)E150和R3h组PGC-1α Mrna表达与对照组相比显著增加(P<0.01和P<0.001);随后,R6h～R18h组PGC-1α Mrna表达降低(P>0.05),R24h组PGC-1α基因表达又呈现显著性增加(P<0.05).PGC-1α蛋白含量滞后于其基因表达,在R6h和R12h组中显著增加(均P<0.001);3)R3h～R12h组骨骼肌NRF-1tuRNA表达较对照组显著增加(P<0.01和P<0.001).随后,NRF-1基因转录开始下降(P>0.05);4)除E150组外,从E90～R24h组的骨骼肌Tfam Mrna均较对照组显著增加(P<0.01和P<0.001).E45和E90组的Tfam蛋白含量较对照组呈现短暂的显著增加(P<0.001),在E120组降低后又呈现显著性增加,直至R24h组(均P<0.001);5)E120组骨骼肌COX IV基因表达较对照组显著增加(P<0.05),恢复期R3h～R18h组呈显著性增加(均P<0.001).运动中各组COX IV蛋白含量较对照组未呈现显著增加,但恢复期各时间段COX IV蛋白水平均呈显著性增加(均P<0.001);6)骨骼肌p38 MAPK活性(磷酸化p38 MAPK)在E90～R6h组,R18h～R24h组呈显著性增加(分别P<0.05、P<0.01和P<0.001).仅R3h组p38 MAPK蛋白含量较对照组呈显著性增加(P<0.05).结论:一次急性运动即可影响COX IV基因和蛋白表达,诱导骨骼肌线粒体生物合成;运动源性的H2O2可能通过先行激活P38mapk磷酸化和继发诱导P38mapk信号通路两个途径影响PGC-1α基因转录和线粒体生物合成的下游信号级联反应.
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回心草单体成分对H2O2诱导心肌细胞损伤的保护作用研究
目的建立过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞损伤模型,并在此模型上研究胡椒碱、胡椒酸甲酯、咖啡酸甲酯、尿嘧啶苷对心肌细胞损伤的保护作用.方法用H2O2诱导造成原代培养的心肌细胞损伤模型,将单体化合物分为3个剂量组,作用于正常和损伤的心肌细胞,利用全自动生化分析仪对细胞悬液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同功酶(CK-MB)含量进行测定.结果回心草各单体成分对正常心肌细胞无明显影响.胡椒碱和胡椒酸甲酯各剂量组作用的心肌细胞悬液中LDH和CK-MB值与模型组对照有非常显著性差异(P<0.01),咖啡酸甲酯对CK-MB有非常显著性差异(P<0.01),尿嘧啶苷无显著性差异(P>0.05).结论对H2O2诱导的心肌细胞损伤,胡椒酸甲酯和胡椒碱具有明显的保护作用,咖啡酸甲酯具有部分保护作用,尿嘧啶苷无保护作用.
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银杏叶提取物对低氧复氧、H2O2和谷氨酸损伤时谷氨酸引起的大鼠星形胶质细胞[Ca2+]i变化的影响
目的研究银杏叶提取物对低氧复氧、H2O2和L-谷氨酸损伤时谷氨酸升高大鼠星形胶质细胞[Ca2+]i的影响.方法钙荧光探针Fluo-3/AM标记胞浆内游离钙离子,激光扫描共聚焦显微镜测定[Ca2+]i的变化.结果在低氧复氧、H2O2以及高浓度的L-谷氨酸损伤后,外源性谷氨酸(27μmol·L-1)均不能引起培养乳大鼠星形胶质细胞正常的[Ca2+]i升高,反而使[Ca2+]i分别降低(3.3±1.6)%,(81±11)%和(81±7)%;损伤前预先给予GbE(10mg·L-1)不能明显改善星形胶质细胞的谷氨酸反应,但预先给予GbE(100mg·L-1)后,27μmol·L-1谷氨酸可使损伤的星形胶质细胞[Ca2+]i分别升高(135±98)%,(117±93)%和(89±36)%.结论低氧复氧、H2O2以及高浓度的L-谷氨酸均能损伤星形胶质细胞的谷氨酸反应,影响神经细胞与胶质细胞的双向交流.GbE能明显逆转不同损伤后谷氨酸诱导星形胶质细胞[Ca2+]i的异常变化,使星形胶质细胞在不同损伤时能维持正常功能,该作用可能与GbE的脑保护作用有关.
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茶多酚对大鼠皮层神经元的保护作用研究
目的 探讨茶多酚对酸环境致神经元损伤的保护作用.方法 通过体外培养大鼠皮层神经元建立"酸环境"损伤模型,模拟由于体内缺血缺氧而形成的酸环境.在损伤过程中分别加入高、中、低剂量茶多酚干预.比色法检测细胞培养液中H2O2、LDH和MDA含量.结果 茶多酚能降低酸性环境介导皮质神经元损伤引起的细胞培养液中H2O2、LDH和MDA含量.结论 茶多酚的神经保护作用机制可能与其抗氧化性有关.
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黄芩茎叶中黄酮提取物对过氧化氢诱导的大鼠皮层神经元损伤的保护作用
目的:考察黄芩茎叶黄酮提取物(SSF)对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠原代皮层细胞损害的保护作用.方法:100μmol·L-1 H2O2作用大鼠原代皮层细胞150 min,测定细胞存活率、形态、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的产生、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)/Na+-K+-ATP酶的活性以及SSF对H2O2引起大鼠原代皮层细胞上述指标异常改变作用.结果:H2O2明显降低大鼠原代皮层细胞存活率,使细胞形态发生异常变化,增加LDH和MDA生成,显著降低SOD/GSH-Px/Na+-K+-ATP酶的活性.18～76 μg·mL-1SSF预处理细胞24 h明显反转上述变化.结论:SSF对H2O2引起的神经损伤具有保护作用,该作用有利于神经退行性疾病的治疗.
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复方丹参注射液对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
目的:探讨复方丹参注射液(ISM)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡保护作用的机制.方法:在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,采用MTT比色分析测细胞存活率,Hoechst-PI荧光染色和流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况,RT-PGR检测par-4和NF-gB P 65基因mRNA表达,Western b1ot检测Par-4和NF-κB P 65蛋白表达.结果:不同剂量ISM预处理1 h可提高PC12细胞的存活率,降低par-4和NF-κB P 65的mRNA表达以及蛋白表达.结论:ISM可剂量依赖性地对抗H2O2的神经毒性作用,其机制可能与降低凋亡基因par-4的表达有关.
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海康灵含药血清在体外对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用
目的 观察海康灵含药血清(HKL-serum)对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用.方法 采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞过氧化氢(H2O2)损伤模型.通过观察细胞形态,测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,检测HKL-serum对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用.结果 同造模组比较,10%,15%HKL-serum能减轻H2O2引起的SH-SY5Y神经细胞的损伤,明显提高细胞的存活率,减少LDH的释放量.结论 结果显示,HKL-serum对SH-SY5Y神经细胞损伤具有明显的保护作用.
关键词： 海康灵 H2O2 SH-SY5Y神经细胞 -
总丹酚酸和银杏叶提取物对血管平滑肌细胞保护作用的比较
目的对丹参水溶液提取物总丹酚酸和银杏叶提取物EGb761对血管平滑肌细胞损伤的保护作用进行了比较研究.方法选用培养的10～20代大鼠血管平滑肌细胞用于实验研究.细胞用H2O2(100μmol·L-1)处理1 h造成细胞氧化损伤模型,采用MTT方法观察总丹酚酸和EGb761对H2O2损伤细胞生存率的影响,同时以乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)3种物质变化作为指标,观察了总丹酚酸和EGb761对H2O2损伤血管平滑肌细胞的保护作用.结果总丹酚酸100,10μg·mL-1能显著提高细胞的存活率,而总丹酚酸1 μg·mL-1和EGb761 100,10,1μg·mL-1对细胞的存活率没有明显的升高作用;总丹酚酸100μg·mL-1,EGb761 100,10,1μg·mL-1均能显著降低H2O2损伤细胞上清液中LDH的量,总丹酚酸10,1 μg·mL-1作用不显著;EGb761 100,10μg·mL-1能明显降低细胞上清中MDA的量,EGb761 1 μg·mL-1及总丹酚酸100,10,1 μg·mL-1作用不明显;总丹酚酸100,10,1 μg·mL-1和EGb761 100,10μg·mL-1明显降低H2O2损伤引起NO的释放.结论总丹酚酸和EGb761对H2O2损伤的血管平滑肌有保护作用,但作用机制似乎有所不同,需要做进一步研究.
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淫羊藿总黄酮注射液对H2O2诱导心肌细胞损伤的影响
目的观察淫羊藿总黄酮注射液(EFI)对H2O2诱导心肌细胞损伤的保护作用.方法通过体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,MTT法检测心肌细胞增殖状况,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,透射电镜观察心肌细胞超微结构.结果 H2O2可剂量依赖性增加对心肌细胞增殖的抑制率,100 μmol/L H2O2作用12 h后心肌细胞凋亡率为(23.94±3.52)%,高于正常对照组的(1.98±1.22)%;心肌超微结构呈凋亡特征性变化;100、200、400 mg/L EFI可剂量依赖性降低心肌细胞抑制率,显著降低心肌细胞凋亡率,分别为(15.12±3.61)%、(9.38±3.14)% 和(4.49±0.52)%;且能改善心肌细胞超微结构变化.结论淫羊藿总黄酮注射液对H2O2诱导的心肌细胞损伤具有保护作用.
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苦参素对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤保护作用的研究
目的 研究苦参素(oxymatrine,OMT)对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用.方法 无菌环境下分离并培养乳鼠心肌细胞72h后随机分为空白对照组、H2O2(200 μmol/L)干预组、OMT(20、40、60μmol/L)+H2O(200μmol/L)干预组,每组设10个复孔.药物干预12h后,MTT法检测细胞存活率,采用氧敏感荧光探针DCFH-DA检测氧自由基(ROS);测定细胞中抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,检测细胞培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡并计算凋亡率,Western blot法检测细胞中caspase-3 、NF-κB蛋白表达并进行半定量分析.结果 与H2O2(200μ mol/L)干预组比较,OMT(40、60μ mol/L)干预12h能够显著提高H2O2诱导损伤乳鼠心肌细胞存活率,降低ROS含量,改善SOD、GSH-Px、CAT活性并降低MDA含量,降低培养基中AST、CPK、LDH含量,降低细胞凋亡率,降低caspase-3 、NF-κB蛋白表达,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P ＜0.01).结论 苦参素可能通过改善抗氧化酶活性而提高氧自由基清除能力、抑制促凋亡蛋白表达而降低细胞凋亡,对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤起到保护作用.
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外阴阴道假丝酵母菌病患者阴道乳杆菌的功能变化
目的 分离、纯化、鉴定外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者阴道乳杆菌菌种;绘制VVC患者阴道内分离的卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌的生长曲线,检测其产酸能力、产H2O2能力,分析VVC患者阴道乳杆菌的功能变化及临床意义,为VVC的病因及治疗提供理论基础.方法 体外培养VVC患者阴道分泌物中的乳杆菌,分离、纯化,并用分子生物学技术鉴定;测定24h菌液浊度法绘制VVC患者及健康女性阴道内分离的4种乳杆菌的生长曲线;检测24h菌液pH值对比VVC患者与健康女性阴道内分离的卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌的产酸能力;绘制H2O2浓度标准曲线,定量检测摇菌3h菌液的产H2O2的量,对比VVC患者与健康女性阴道内分离的卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌的产H2O2能力.结果 共分离培养了34株VVC患者阴道乳杆菌,经鉴定,分属于乳杆菌的4个种.VVC患者与健康妇女相比,阴道内卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌的增殖速度差异无统计学意义(P＜0.05).健康女性加氏乳杆菌与卷曲乳杆菌的产酸能力比VVC患者强(P＜0.05);詹氏乳杆菌的产酸能力两组差异无统计学意义(P＞0.05);而VVC患者发酵乳杆菌的产酸能力比健康女性强(P＜0.05).VVC患者阴道内分离的卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌的产H2O2量均明显少于健康妇女(P＜0.05).结论 本研究为进一步构建中国女性阴道来源的乳杆菌菌种库、进行阴道来源的乳杆菌的相关研究提供菌种.VVC状态下,念珠菌的增多,阴道微环境的改变,并未影响阴道内定植的乳杆菌的生长速度.阴道内乳杆菌的产酸功能并不是抑制VVC的关键.阴道内乳杆菌产H2O2能力可能为抑制VVC的关键.
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银杏内酯B对H2O2诱导H9C2心肌细胞损伤保护作用研究
目的:研究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对H2O2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制.方法:将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为4组:空白对照、H2O2(200μmol/L)干预、GB(100μmol/L)+H2O2(200μmol/L)干预、GB(200μmol/L)+H2O2(200 μmol/L)干预,每组设10个复孔.经药物干预16h后观察各组细胞形态,采用MTT法检测细胞存活率;检测培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性;测定细胞中抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;酶联免疫法(ELISA)测定培养液中炎性因子(CRP、TNF-α、IL-1、IL-6)含量水平;采用流氏细胞术检测细胞凋亡状况并计算细胞凋亡率,采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测细胞中bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞中NF-κB蛋白表达并进行半定量分析.结果:与H2O2干预组比较,GB(100、200μ mol/L)+H2O2(200μmol/L)干预组细胞培养液中AST、CPK活性和TNF-α、IL-6、CRP、MDA含量均显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡率显著降低;bcl-2 mRNA表达显著上调、Bax mRNA表达显著下调,bcl-2/Bax表达比值显著升高,差异均具有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);其中GB(200μmol/L)+H2O2(200μmol/L)干预组细胞生存状态明显改善、存活率显著升高,LDH活性、IL-1含量以及NF-κB蛋白表达量显著降低,细胞中GSH-Px活性显著升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:GB对H2O2诱导损伤H9C2心肌细胞具有保护作用,作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,上调抑凋亡基因bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高bcl-2/Bax表达比值,下调NF-κB蛋白表达,降低炎性因子含量相关.
