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类叶升麻苷抗H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用
目的:类叶升麻苷对H2O2诱导的PC12细胞损伤的影响.方法:以300μmol/L的H2O2处理PC12细胞,建立氧化损伤模型,并以5、10、20、40、60、80、100μg/ml的类叶升麻苷拮抗其作用.通过倒置显微镜观察细胞形态,采用MTT比色法检测细胞存活率,酶标法试剂盒测定LDH渗漏率,TBA法试剂盒测定胞内胞外MDA含量,WST法试剂盒测定胞内胞外SOD活性.结果:类叶升麻苷浓度从10μ g/ml起,即可显著改善PC12细胞形态,提高细胞的存活率,减少细胞LDH的渗漏,抑制胞内和胞外MDA的生成,提高胞内和胞外SOD酶活性,且随着给药剂量的增加,其对损伤细胞的改善作用也愈强.结论:类叶升麻苷对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有显著保护作用,其机制可能与抗氧化作用有关.
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大黄酸对过氧化氢诱导损伤的血管内皮细胞的保护作用
目的:观察大黄酸对过氧化氢(H2O2)诱导损伤的血管内皮细胞增殖、凋亡、NO、NOS及SOD表达的影响,探讨大黄酸保护血管内皮细胞氧化损伤的可能机理.方法:100μmol/L H2O2造成血管内皮细胞氧化应激损伤模型,采用倒置显微镜观察细胞形态,Hochest 染色观察细胞凋亡情况;MTT法和试剂盒测定各组细胞增殖、NO、NOS的及SOD的表达情况.结果:100μmol/LH2O2可损伤血管内皮细胞、抑制细胞增殖,促进细胞凋亡、降低NO、NOS含量和SOD的活力;而大黄酸则能改善H2O2诱导损伤的血管内皮细胞形态,促进其增殖,抑制其凋亡,提升NO、NOS的含量和SOD的活力,显示大黄酸对血管内皮细胞有一定的保护作用.
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血清氧化-还原态的监测及其与细胞损伤的关系
目的:探讨如何评价体内的氧化还原状态及细胞的氧化还原态改变对细胞增殖、凋亡、损伤等的影响.方法:测定正常人血清的NADPH/NADP+和GSH/GSSG比值,以了解该两项指标对机体氧化还原态的监测能力.并在培养的内皮细胞中加入各种浓度的氧化剂过氧化氢(H2O2)和/或还原剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC),观察NADPH/NADP+和GSH/GSSG比值的变化与细胞活力及损伤之间的关系.以LDH释放率,细胞培养液中脂质过氧化物(LPO)的浓度,细胞增殖活性、细胞凋亡率,观察细胞的增殖、损伤及其与氧化-还原态变化的关系.结果:①在培养的内皮细胞中加入H2O2后,GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值明显降低,细胞氧化还原状态偏向氧化应激方向,细胞出现氧化应激损伤;脂质过氧化物(LPO)生成增多;LDH释放率增加;细胞增殖活力下降;凋亡率增高.氧化应激性损伤程度与GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值呈负相关(p＜0.05).②在各浓度H2O2组中加入0.5mmol@L-1NAC,GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值恢复至接近对照组,上述氧化应激性损害也受到了不同程度的抑制,并在一定范围内呈量效关系.③单独加入NAC,在高浓度NAC1mmol@L-1M和2 mmol@L-1时,GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值明显升高(VS Control,p＜0.01),细胞的氧化-还原态偏向还原应激方向,此时,细胞出现与氧化应激相似的损伤表现:低浓度的0.5mmol@L-1无明显改变.结论:上述结果提示细胞需要一个相对稳定的氧化还原状态,偏离氧化还原的稳态范围,无论是向过度氧化方向或是向过度还原方向,都会引起细胞的损伤.GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值是反映机体氧化还原状态的良好指标.
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参麦注射液对鼠肾小管细胞株NRKSIE氧化性损伤影响的实验研究
通过H2O2致鼠肾小管细胞损伤模型建立,研究参麦注射液(SMI)对H2O2所致的小管细胞氧化性损伤的影响.实验结果表明,SMI对H2O2致的小管细胞氧化性损伤具有明显的保护和治疗作用,其疗效略优于辅酶Q10(CoQ10),证实SMI能明显提高受损的小管细胞有氧代谢功能,并能保护未受损小管细胞,从而为SMI治疗肾脏疾患提供了依据.
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亚砷酸联合抗坏血酸诱导多发性骨髓瘤细胞株凋亡机制的研究
目的研究砷剂联合抗坏血酸协同诱导多发性骨髓瘤细胞株凋亡的机制.方法将培养的MM细胞株KM3分为:①对照组;②ATO单药组;③ATO+AA组;④AA单药组;⑤ATO+α-生育酚组;⑥α-生育酚单药组.分别检测细胞活力、细胞凋亡率、线粒体膜电位和细胞内GSH、H2O2水平.结果①ATO诱导MM细胞凋亡,AA增强其作用,α-生育酚减弱其作用;②AA降低细胞内GSH水平,α-生育酚升高细胞内GSH;③AA和α-生育酚均升高细胞内H2O2水平;④ATO降低细胞线粒体膜电位,AA增强ATO的作用,α-生育酚减弱其作用.结论砷剂诱导肿瘤细胞凋亡敏感性与细胞内GSH水平呈负相关,砷剂通过降低细胞线粒体膜电位,诱导细胞凋亡.AA通过降低细胞内的GSH水平,增加细胞对砷剂的敏感性.选择其他的还原剂无此作用.
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曲美他嗪通过抑制MicroRNA-423-5p凋亡信号通路保护H2O2引起的心肌缺血再灌注损伤
目的 探讨曲美他嗪通过microRNA-423-5p(miR-423-5 p)凋亡信号通路对H2O2引起的缺血再灌注损伤保护作用的分子生物学机制.方法 培养小鼠心肌细胞,先以CCK-8和TUNEL检测对比观察H2 O2对心肌细胞活性及凋亡的影响,同时以RT-q-PCR定量检测各组心肌细胞内miR-423-5p表达的情况.再通过质粒转染细胞上调和下调miR-423-5p的表达,观察心肌细胞的活性及凋亡情况.后在H2O2诱导组中加入不同浓度曲美他嗪,检测miR-423-5p和下游通道的表达以及细胞活性和凋亡情况.结果 以H2O2处理小鼠心肌细胞会上调miR-423-5p的表达,同时降低心肌细胞的活性并引起凋亡(P＜0.01).以质粒转染心肌细胞提高miR-423-5p表达可以降低心肌细胞活性并引发凋亡;降低miR-423-5p表达则可以减轻H2O2引起的细胞活性降低及凋亡效应(p＜0.01).在H2O2处理组中加入曲美他嗪可以下调miR-423-5p的表达,同时减轻心肌细胞活性降低及凋亡比例(p＜0.01).结论 H2O2通过上调心肌细胞中的miR-423-5p表达诱导心肌细胞活性降低并引起凋亡,曲美他嗪通过抑制该miR的表达从而减少H2O2对心肌细胞活性的损伤并减少凋亡.
关键词： 缺血再灌注损伤 MicroRNA-423-5p H2O2 曲美他嗪 -
H2O2下调miR-21对MC3T3-E1细胞成骨分化影响的研究
目的 探讨H2O2诱导的miR-21下调对MC3T3-E1细胞成骨分化的作用及机制.方法 取MC3T3-E1细胞系,培养传至第7代进行实验.取MC3T3-E1细胞,以不同浓度H2O2(0、40、80、160、320μmol/L)培养,经实时荧光定量PCR检测miR-21表达、MTS法检测细胞活性,选择H2O2合适实验浓度.取MC3T3-E1细胞分为空白对照组(A组)、H2O2组(B组)、成骨诱导组(C组)、H2O2+成骨诱导组(D组),对应培养后实时荧光定量PCR检测miR-21表达以及成骨标志基因Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ alpha 1,Col1a1)表达,Western blot检测磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况,分析H2O2对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.然后再取MC3T3-E1细胞,分为H2O2组(A1组)、H2O2+成骨诱导组(B1组)、H2O2+miR-21抑制剂+成骨诱导组(C1组)、H2O2+miR-21抑制剂阴性对照+成骨诱导组(D1组);以及H2O2组(A2组)、H2O2+成骨诱导组(B2组)、H2O2+siRNA-PTEN阴性对照+成骨诱导组(C2组)、H2O2+siRNA-PTEN+成骨诱导组(D2组);对应培养后检测成骨标志基因(Runx2、OPN、Col1a1)表达以及细胞外钙基质沉积情况,分析下调miR-21或沉默PTEN对细胞成骨分化的影响.结果 结合实时荧光定量PCR检测以及MTS法结果,选择160μmol/LH2O2进行实验.第1、2周B组miR-21相对表达量低于A组(P＜0.05),D组低于C组(p＜0.05);第2周C组PTEN蛋白相对表达量均低于A、D组(P＜0.05);第1、2周D组Runx2、OPN及Col1a1 mRNA相对表达量均低于C组(P＜0.05),茜素红染色显示D组钙基质沉积少于C组.C1组PTEN蛋白相对表达量高于D1组(P＜0.05);第1、2周B1、D1组Runx2、OPN mRNA相对表达量均高于C1组(P＜0.05),第2周B1、D1组Col1a1 mRNA均高于C1组(P＜0.05);茜素红染色显示C1组钙基质沉积少于B1、D1组.第1周D2组OPN、Col1a1 mRNA相对表达量高于B2、C2组(p＜0.05),第3周茜素红染色显示D2组钙基质沉积明显多于B2、C2组.结论 H2O2抑制MC3T3-E1成骨分化可能与miR-21下调有关.
关键词： H2O2 氧化应激 miR-21 成骨分化 MC3T3-E1细胞 -
氧化应激活化RAW264.7巨噬细胞对MC3T3-E1成骨细胞迁移、增殖及成骨基因表达影响的实验研究
目的 探索氧化应激活化RAW264.7巨噬细胞对MC3T3-E1成骨细胞迁移、增殖及成骨基因表达的影响.方法 取MC3T3-E1细胞系及RAW264.7细胞系,分别培养传至第7代进行实验.利用不同浓度(0、25、50、100 μmol/L)H2O2刺激RAW264.7细胞,MTS检测培养1、3、6h后细胞增殖率,采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒检测培养1h时细胞内SOD含量,筛选H2O2引起RAW264.7细胞氧化应激的佳浓度和作用时间,并对应收集RAW264.7细胞(加或不加H2O2处理)24h上清液.取第7代MC3T3-E1细胞,分别以100μL无血清DMEM培养基(A组)、未氧化应激RAW264.7细胞上清液(B组)、氧化应激RAW264.7细胞上清液(C组)培养,采用MTS法检测细胞增殖情况,行划痕实验检测细胞迁移能力;另取细胞分为4组,空白对照组,以完全培养基培养;阳性对照组,以含50μg/mL维生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸钠的完全培养基进行成骨诱导培养;正常对照组,以含50 μg/mL维生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸钠的完全培养基及未氧化应激RAW264.7细胞上清液培养;实验组,以含50 μg/mL维生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸钠的完全培养基及氧化应激RAW264.7细胞上清液培养.培养3、7、14d,RT-PCR检测细胞内成骨相关基因ALP、Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ,COL-Ⅰ)、骨钙素(osteocalcin,oc)、骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)表达水平.结果 MTS和SOD检测结果显示:25 μmol/L H2O2刺激1h为构建RAW264.7细胞氧化应激模型佳浓度和作用时间.细胞生长检测显示:1、2、3dB、C组细胞增殖率显著高于A组(P＜0.05),C组低于B组,其中2、3d时组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).划痕实验显示12 h时B、C组MC3T3-E1细胞迁移显著快于A组,C组快于B组,细胞迁移距离比较差异有统计学意义(P＜0.05);24 h时B、C组划痕已被细胞爬满.除3d外,实验组各时间点ALP、Runx2、OC、BSP mRNA相对表达量均较阳性对照组明显降低,OPN、COL-Ⅰ mRNA相对表达量较空白对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 H2O2构建RAW264.7细胞氧化应激模型的佳浓度为25μmol/L、作用时间为1h.氧化应激活化RAW264.7巨噬细胞上清液能促进MC3T3-E1成骨细胞迁移、抑制其增殖及成骨相关基因的表达.
关键词： 氧化应激 H2O2 MC3T3-E1细胞 RAW264.7细胞 成骨分化 -
应用Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4测定H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的[Ca2+]i变化
背景与目的肺癌是世界范围内常见的恶性肿瘤，Ca2+对于肿瘤细胞凋亡有重要的调控作用。实时监测肺癌细胞内Ca2+水平，有助于深入研究Ca2+介导肺癌细胞凋亡的分子机制。本研究旨在观察Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用，实时测定胞浆Ca2+浓度（[Ca2+]i），探讨[Ca2+]i与细胞凋亡的关系，并比较两种Ca2+探针在荧光强度及[Ca2+]i测定值方面的差异。方法采用Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4负载细胞，1 h后用不同浓度的H2O2刺激细胞，激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果在相同的探针浓度、负载时间和相同的图像采集参数的条件下，选定细胞内fluo-4平均荧光强度高于fluo-3。50 mM H2O2刺激后，A549细胞胞浆内[Ca2+]i迅速升高，通过公式计算发现采用fluo-3探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是112.2 nM-1,069.6 nM，采用lfuo-4探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是7.6 nM-505.4 nM。同时发现经H2O2刺激后，凋亡细胞百分比明显增加（P<0.01）。结论H2O2促进A549细胞内Ca2+释放，诱导细胞凋亡。Ca2+探针lfuo-4可能更适合于监测含量较低的细胞中[Ca2+]i变化。
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17β-雌二醇抗心肌细胞氧化应激损伤的Nrf2/HO-1信号通路的分子机制
目的 观察17β-雌二醇(E2)对H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,探讨其可能的分子机制.方法 将细胞分为对照组、H2O2组、E2组、抑制剂组.用MTF法观察心肌细胞的活性;用Western Blot技术检测Nrf 2的蛋白表达;用RT-PCR技术观察Nrf 2下游靶基因HO-1的mRNA水平.结果 100 μmol· L-1H2O2可使H9 C2细胞活性显著下降,E2预处理可有效阻止H2O2诱导的心肌细胞损伤;Nrf2的蛋白表达自E2和H2O2共同培育2h时即显著高于对照组,6h达到高峰;E2也诱导了H2O2处理后H9C2细胞HO-1 mRNA水平及其蛋白表达的升高;ICI 182,780明显逆转了E2的心肌保护作用.结论 E2可有效降低H2O2诱导的心肌细胞损伤,Nrf 2/HO-1信号通路的上调可能是其重要的分子机制.
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H2O2致Hep-G2细胞凋亡及其分子机制初探
目的本研究旨在探索H2O2诱导Hep-G2发生凋亡及其致凋亡发生的分子机制.方法采用免疫细胞化学技术与特异性抗体初步探索了经H2O2处理的Hep-G2细胞Fas、bcl-2、P53、P21、Caspase3等与细胞凋亡和生长抑制基因的表达情况.结果检测结果表明H2O2处理的Hep-G2细胞的Fas和Caspase3基因表达增加, bcl-2基因表达减少,而P53、P21基因的表达未见明显改变,提示Fas、Caspase3和 bcl-2基因在H2O2诱导的细胞凋亡中起重要作用;bcl-2通过抑制诱导凋亡所致的细胞永生化,可能在肿瘤的发生、发展中起重要作用.P53、P21、保持不变,可能反映了H2O2诱导的细胞凋亡不依赖P53途径.
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NALP3炎性复合体及p38MAPK信号通路在氧化应激中的作用及阿魏酸钠的干预机制
目的 探讨氧化应激时成纤维细胞(NIH-3T3)中NALP3炎性复合体、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的变化及阿魏酸钠的干预机制.方法 将NIH-3T3细胞分为6组:对照组;H2O2 (200 μmol/L)刺激组;阿魏酸钠(400 μg/mL)组;H2O2 +N-乙酰半胱氨酸(H2O2200 μmol/L+ NAC 5 mmol/L)组(抗氧化组);H2O2+p38 MAPK抑制剂(H2O2 200 μmol/L+ SB203580 5μmol/L)组(p38 MAPK阻断剂组);阿魏酸钠干预(H2O2 200 μmol/L+阿魏酸钠400 μg/mL)组.培养24 h后,荧光定量PCR检测各组NIH-3T3细胞中NALP3、Caspase 1及p38α mRNA的表达;培养48 h后,Western blot检测各组NIH-3T3细胞中NALP3、p-p38和p38蛋白的表达量(p-p38为p38活化表示形式,p38 MAPK信号通路的活化用p-p38/p38表示);培养24 h后,ELISA检测各组细胞的上清液中白细胞介素(IL)-1β的含量.结果 相比于对照组,H2 O2的刺激可以上调NIH-3T3细胞中NALP3、Caspase-1及p38α mRNA的表达,NALP3及p-p38/p38蛋白的表达量,以及IL-1β分泌均增加(P均＜0.05);抗氧化组、p38 MAPK阻断剂组及阿魏酸钠干预组相较于H2 O2刺激组,NALP3、Caspase-1及p38α mRNA的表达量以及NALP3、p-p38/p38蛋白的表达量均降低,IL-1p的释放也减少(P均＜0.05);而抗氧化组、p38MAPK阻断剂组及阿魏酸钠干预组间上述指标的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿魏酸钠可能通过抑制p38 MAPK通路的活化降低NALP3炎性复合体、Caspase-1和IL-1p的表达,从而下调炎症级联反应.
关键词： H2O2 NALP3炎性复合体 p38 MAPK 阿魏酸钠 IL-1β -
NALP3炎性复合体及ERK信号通路在氧化应激中的作用及阿魏酸钠的干预机制
目的 探讨氧化应激时人肺上皮细胞(A549)中NALP3炎性复合体、细胞外调节蛋白激酶(ERK)的表达变化,阿魏酸钠(SF)的干预作用及其可能的机制.方法 培养A549细胞,分为空白对照组,H2O2刺激组,阿魏酸钠组,caspase-1抑制剂(Z-VAD)组,ERK阻断剂(PD98059)组,阿魏酸钠+H2O2组.其中H2O2刺激组用H2O2 200 μmol/L培养细胞2h,阿魏酸钠组用阿魏酸钠400 μg/mL处理细胞30 min,Z-VAD组、PD98059组、阿魏酸钠+H2 O2组分别用Z-VAD 20 μmol/L、PD98059 50μmol/L、阿魏酸钠400μg/mL预处理A549细胞30 min后加入H2O2 200 μmol/L培养2h,采用实时荧光定量PCR检测各组A549中caspase-1、NALP3mRNA的表达,Western blot检测caspase-1、NALP3、磷酸化ERK(p-ERK)、ERK蛋白含量;ELISA法检测各组A549上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)含量.结果 与空白对照组比较,H2O2可使A549细胞caspase-1、NALP3mRNA及caspase-1、NALP3、p-ERK/ERK蛋白水平表达增强,IL-1β分泌增加(P均＜0.05),而阿魏酸钠组与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).与H2O2刺激组比较,Z-VAD组、PD98059组和阿魏酸钠+H2O2组caspase-1、NALP3 mRNA及蛋白表达降低,p-ERK/ERK蛋白表达降低,IL-1β分泌下降(P均＜0.05),Z-VAD组或PD98059组与阿魏酸钠+H2O2组间上述作用差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿魏酸钠可能通过抑制ERK活化,减少caspase-1、NALP3及IL-1β的表达,从而减轻氧化应激导致的炎症级联反应.
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NALP3及NF-κB信号通路在氧化应激反应中的作用及阿魏酸钠的干预效应
目的 检测氧化应激时人肺上皮细胞(A549)炎性复合体NALP3、核转录因子-kappa B(NF-KB)基因和蛋白的表达,探讨阿魏酸钠对其的干预作用及可能的作用机制.方法 培养A549细胞,分为对照组、H2 O2(100μmol/L)应激组、NF-KB阻断剂组(PDTC+H2O2组)、阿魏酸钠干预组(阿魏酸钠+H2O2组),其中PDTC(100μmol/L)和阿魏酸钠(400 μg/mL)预处理30 min后加入H2O2(100 μmol/L),培养2h后,采用实时荧光定量-PCR (qRT PCR)检测NALP3、NF-κB (P65) mRNA的表达;Western blot检测NALP3、IKBα蛋白的表达;酶联免疫吸附(ELISA)测定细胞上清中白介素1β(IL-1β)的表达.结果 与对照组比较,H2O2可使A549细胞NALP3mRNA、NALP3蛋白水平表达增强,NF-κB(P65) mRNA表达上调、IKBα降解增强,IL-1β分泌增加(P均＜0.05);而阿魏酸钠及NF-KB阻断剂PDTC可抵抗H2O2对A549细胞的作用,与H2O2应激组比较,下调NALP3mRNA、NALP3蛋白、NF-κB (P65) mRNA表达,IKBα降解减少,IL-1β分泌下降(P均＜0.05),并且阿魏酸钠与NF-KB阻断剂PDTC上述作用差异无统计学意义.结论 阿魏酸钠可能通过抑制NF κB的活化,减少NALP3及IL-1β的表达,从而减轻氧化应激导致的炎症反应.
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蜕皮甾酮对H2O2诱导的PC12细胞毒的保护作用
目的观察蜕皮甾酮(ecdysterone,ECR)对H2O2作用不同时间诱导PC12毒的保护作用.方法通过MTT(3-4,5-dimethylthiazolyl-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT) 法检测H2O2对PC12的毒性及ECR的保护作用.PC12 细胞的形态学改变通过荧光显微镜观察(acridine orange/ethidium bromide染色,AO/EB),完整无损的 PC12 细胞呈绿色,受损或死亡细胞呈橘黄色和红色.结果 1、 25、 50和100μmol·L-1 ECR与 PC12 细胞分别作用6h,12h and 24h时,PC12细胞的 MTT 吸光值无明显改变;50、100、200μmol·L-1 H2O2分别与PC12 作用 6h,12h,24h时,PC12细胞的 MTT 吸光值明显降低(P＜0.05,P＜0.01 andP＜0.01); 如果用不同浓度的ECR(1、25、50and 100μmol·L-1 )预处理PC12 细胞0.5 h 后,再加入H2O2 (100μmol·L-1) 并分别作用6h,12h,24h,则PC12细胞的MTT吸光值相对增加(P＜0.05 at 50μmol·L-1,P＜0.01 at 100μmol·L-1).AO/EB 染色后荧光显微镜下观察,ECR对H2O2引起的PC12细胞损伤有保护作用.结论 ECR能够相对增加PC12细胞的存活率,对H2O2的PC12细胞毒性有保护作用.
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赤藓糖醇对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护机制
目的 探讨赤藓糖醇对PC12细胞氧化损伤的保护机制.方法 用H202造成PC12细胞氧化损伤模型,采用Western-blot的方法检测赤藓糖醇对Caspase-9、Caspase-12、Hsp70、TXNIP蛋白表达的影响.结果 赤藓糖醇可抑制H2O2损伤PC12细胞的Caspase-9表达(P＜0.05),对Caspase-12、Hsp70、TXNIP的表达没有明显影响.结论 赤藓糖醇可通过抑制线粒体途径的细胞凋亡发挥其抗氧化作用.
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赤藓糖醇对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用
目的 研究赤藓糖醇对PC12细胞氧化损伤的保护作用.方法 用H2O2造成PC12细胞氧化损伤模型,通过观察细胞形态,测定细胞存活率(MTT法)、LDH泄漏量和GSH含量,探讨赤藓糖醇对PC12细胞氧化损伤的保护作用.结果 赤藓糖醇可减轻H2O2对PC12细胞的氧化损伤程度,明显提高细胞存活率(P＜0.05),减少细胞LDH泄漏(P＜0.01),提高细胞内GSH含量(P＜0.01).结论 赤藓糖醇在体外具有抗氧化损伤的作用.
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大蒜素对人脐静脉细胞抗氧化损伤保护作用
目的：研究大蒜素（Allicin）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的保护作用及其作用机理。方法建立H2O2诱导HUVEC细胞的氧化应激凋亡模型；采用MTT、RT-PCR、Western-blot等方法检测来探究大蒜素对其保护作用与可能作用机制。结果大蒜素能够减少H2O2诱导HUVEC的凋亡；使基因eNOS的表达显著增加；使凋亡相关PARP蛋白切割减弱、前体Caspase-3蛋白表达增加，Bax蛋白表达减弱。结论大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡具有较好的保护作用，对氧化应激状态下的HUVEC细胞起保护作用。
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原代脐静脉内皮细胞NFKB1基因启动子区缺失型较插入型P50蛋白表达降低
目的 探讨核因子κB1基因(NFKB1)启动子区-94位点插入/缺失ATTG碱基(-94ins/del ATTG)多态性在氧化应激中对人原代脐静脉内皮细胞(HUVEC) NF-κB信号通路中P50、P65水平的影响.方法 分离并培养HUVEC,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)法将HUVEC分为插入型(Ⅱ型)、缺失型(DD型)以及杂合子型(ID型),并依据其基因型分型在空白组及H2O2诱导组中分为Ⅱ型、ID型、DD型3个亚组;H2 O2建立HUVEC氧化应激模型,采用CCK-8法检测细胞增殖活性选取适宜的H2 O2诱导浓度及时间;Western blot法检测各组HUVEC总蛋白及核蛋白P50、P65蛋白水平.结果 共收集23例HUVEC,其中Ⅱ型8例、ID型9例、DD型6例;CCK-8试剂盒确定H2O2诱导浓度为200 μnol/L,诱导时间为12 h;在空白组及H2O2诱导组中纯合子DD型P50蛋白水平均较Ⅱ型显著降低.结论 NFKB1 (rs28362491)基因多态性对P50蛋白表达影响显著.
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IL-1β双相调节血管平滑肌细胞膜电位机制研究
目的 观察不同浓度白介素(IL)-1β对血管平滑肌细胞膜电位的影响,探讨IL-1β通过过氧化氢(H2O2)调节血管平滑肌细胞BKca通道活性的机制.方法 实验分组按照不同浓度分为对照(生理盐水处理)组、IL-1β浓度分别为1、10、50 ng/ml组;按照与IL-1β共培养时间分组为30 min、24h、48 h组),通过激光共聚焦显微镜检测细胞膜电位探针DIBAC4(3)标记的大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMCs)膜电位,观察catalase(H2O2清除剂)、IBTX(BKca通道开放剂)、NS1619(BKca通道阻滞剂)、4-AP(Kv通道阻断剂)对ASMCs膜电位的影响.结果 ①IL-1β对ASMCs膜电位具有双向调节作用,即短时间处理膜电位超极化;长时间处理膜电位去极化,且均有浓度依赖性特征.②IL-1β通过H2O2调节BKca通道,进而影响膜电位;③IL-1β短时间处理ASMCs通过H2O2调节膜电位;长时间处理至少部分通过H202调节膜电位.结论 IL-1β对血管平滑肌细胞膜电位存在时间相关的双相调节作用,这一作用可能通过H2O2(短时间)上调BKca通道活性或(长时间)下调BKca通道活性来实现.
关键词： 白余素-1β BKCa通道 H2O2 大鼠主动脉平滑肌细胞 膜电位
