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催化动力学光度法测定头发中铜含量
目的:建立简便快速的光度法,用于儿童发样中微量元素铜的测定.方法:氨水介质中,利用Cu2+催化H2O2氧化达旦黄的褪色反应,建立测定发中Cu的实验条件和体系.结果:本方法测定范围为0.05～0.5μgCu2+/25ml,其灵敏度为6.09×10-11g@ml-1.结论:本方法简便快速,用于发样尤其是取样量少的儿童发样中微量元素铜的检测,结果较为满意.
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HMGB1在鉴别过氧化氢诱导心肌细胞凋亡和死亡中作用的研究
目的:观察不同浓度过氧化氢(H2O2)致心肌细胞损伤的作用,探讨心肌细胞凋亡和坏死时HMGB1的表达变化.方法:用H2O2作用于新生SD大鼠心肌细胞,建立心肌细胞损伤模型.观察心肌细胞状态,测定心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)浓度,并对心肌细胞用Western blot检测HMGB1.结果:H2O2致心肌细胞过氧化损伤,细胞存活率明显下降(P＜0.01),培养液LDH增高(P＜0.05),而SOD降低(P＜0.05).Western blot显示HMGB1在正常对照组和H2O2 A组表达量相同,H2O2 B组表达量明显增加.结论:心肌细胞凋亡时HMGB1表达正常、死亡时HMGB1表达增加.
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桔梗多糖对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究
目的 研究桔梗多糖(PGP)对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用机制.方法 建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率;比色法测定细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;DCFH-DA检测细胞内ROS;qPCR、Western Blot方法分别检测NOX2、p22phox和Rac mRNA和蛋白的表达.结果 与模型组相比,PGP预处理24h后,加入终浓度为600μmol/L H2O2处理2h,LDH、MDA含量和细胞内ROS减少,SOD与GSH-Px活性增强,同时,PGP下调NOX2、p22phox和Rac mRNA和蛋白的表达水平.结论 PGP对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制NADPH氧化酶2(NOX2)过表达有关.
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泽泻对H2O2诱导血管内皮细胞损伤的保护作用
目的 观察泽泻含药血清对H2O2诱导损伤的血管内皮细胞活性、形态学、SOD及NO的影响,探讨泽泻含药血清抗氧化损伤的可能机理.方法 100μmol/L H2O2造成血管内皮细胞氧化应激损伤模型,cck-8法检测各组细胞增殖情况；黄嘌呤氧化酶法和硝酸还原酶法检测各组细胞上清液中SOD的活力和NO含量.结果 100μmol/LH2O2可抑制血管内皮细胞活性,降低SOD活力和NO的分泌,而泽泻则能改善100 μmol/L H2O2对血管内皮细胞的损伤,对血管内皮细胞具有一定的保护作用.结论 泽泻可以通过调控抗氧化损伤机制保护血管内皮细胞,这可能是泽泻抗氧化损伤机理所在.
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西红花酸的体外抗氧化作用的研究
目的探讨西红花提取物中西红花酸的体外抗氧化作用.方法采用H2O2和Vc-Fe\+\{2+\}两种羟自由基发生系统, 观察了西红花酸对H2O2系统的羟自由基的清除能力,对肝匀浆及肝线粒体的Vc-Fe\+\{2+\}系统引起的脂质过氧化的抑制作用.结果西红花酸对H2O 2系统的羟自由基有较强的清除能力,并能抑制肝匀浆自氧化和Vc-Fe\+\{2+\}系统羟自由基引起的脂质过氧化,对肝线粒体也有保护作用.结论西红花酸具有较强的抗氧化作用.
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改善肿瘤乏氧环境及乏氧应激释药型抗肿瘤药纳米递送系统研究进展
乏氧是多数实体肿瘤的特征之一,影响肿瘤的侵袭和转移,是抗肿瘤药产生耐药性的一个主要原因.基于高压氧或是血液代用品递送O2至肿瘤部位或是设计能催化肿瘤内源性H2O2分解产生O2的治疗方法,提高肿瘤组织中的含氧量,改善肿瘤乏氧环境,有助于肿瘤治疗.此外,基于肿瘤乏氧微环境设计乏氧应激释药型纳米递送体系,提高靶点药物浓度,提高药物疗效并降低其不良反应.本文主要从缓解肿瘤乏氧微环境以及肿瘤乏氧微环境响应型纳米靶向递药体系进行详细综述,为研究和开发新型抗肿瘤药提供方法学借鉴.
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CDK11p58在H2O2诱导PC12细胞凋亡中表达及意义
目的:观察CDK11p58在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的表达及机制.方法:以H2O2处理PC12细胞和(或)过表达CDK11p58及其激酶突变的载体后,蛋白质免疫印迹观察CDK11p58的表达,流式细胞分析术分析PC12细胞的凋亡.结果:将CDK11p58表达载体转入PC12细胞中,在予H2O2处理细胞后,过表达CDK11p58的PC12细胞凋亡较未过表达明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).在转染双突变CDK11p58表达质粒PC12细胞中,H2O2诱导细胞凋亡较对照组无增高,但较转染全长的CDK11p58的表达质粒的细胞组有显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:CDK11p58可以促进H2O2诱导的PC12细胞的凋亡.
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早期生长反应因子1在H2O2损伤的晶状体上皮细胞中的表达及其意义
目的 探讨早期生长反应因子1(early growthresponse-1,Egr-1)在经H202损伤后的晶状体上皮细胞中的表达及其意义.方法 用SP免疫组化法测定经H2O2处理后2 h、8 h、24 h的晶状体上皮细胞中Egr-1的表达,用MAIS300图像分析系统测定其光密度值,采用t检验分析其在各时间点的表达水平.结果 在H2O2作用后2 h的晶状体上皮细胞中,Egr-1多为强阳性表达,平均光密度值为0.55±0.08;在H2O2作用后8 h的晶状体上皮细胞中,Egr-1多为阳性表达,平均光密度值为0.40±0.09;两组比较,差异有非常显著的统计学意义(P<0.01).在H2O2作用后24 h的晶状体上皮细胞和对照组晶状体上皮细胞中,Egr-1未见表达,平均光密度值为0.结论 Egr-1在H202损伤后的晶状体上皮细胞中早期表达,可能为氧化损伤引起的白内障的早期反应之一.
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PI-3K在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用
目的 研究磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)在H2O2诱导PC12细胞凋亡中的作用.方法 采用H2O2诱导PC12细胞制作凋亡模型,通过MTT法、Hoechst/PI荧光双染及流式细胞术分析使用PI-3K特异抑制剂LY294002预处理对H2O2诱导PC12细胞凋亡作用的影响.结果 100 μMH2O2处理PC12细胞24 h,细胞出现明显凋亡;LY294002预处理1 h后凋亡细胞数增多(P＜0.05).结论 PI-3K对H2O2诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用.
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酰化4-羟基查耳酮对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的抗氧化保护作用及初步机制
目的：研究查尔酮化合物B1、B2对过氧化氢（H2O2）诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其对Nrf2/ARE信号通路的影响。方法：建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的模型，用MTT法检测化合物B1和B2的抗氧化活性及细胞毒性；用实时荧光定量PCR（real-time PCR）法检测其对转录相关因子Nrf2调控基因谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位（GCLC）、血红素氧合酶-1（HO-1）mRNA表达的影响；用Hoechst染色检测其对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。结果：分别加了B1、B2的细胞孵育1 h后，B1、B2对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤无保护作用，而孵育24 h后，B1、B2均具有较好的保护作用，两者在浓度为10μmol/L时对细胞无毒性；B1对Nrf2下游GCLC、HO-1基因的表达无明显影响，而B2可明显激活GCLC、HO-1基因的表达，且明显抑制H2O2诱导的PC12细胞的凋亡。结论：B1、B2均对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有较好的抗氧化保护作用，B2的作用机制可能是通过激活Nrf2/ARE抗氧化信号通路来实现，B1可能是通过其他机制起到抗氧化作用。
关键词： 查尔酮 合成 抗氧化 H2O2 Nrf2/ARE信号通路 -
丹酚酸A对H2O2所致大鼠脑微血管内皮细胞氧化损伤保护的实验研究
目的 观察丹酚酸A对H2O2所致大鼠脑微血管内皮细胞(RCMECs)氧化损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞,用H2O2损伤的方法建立氧自由基损伤模型.采用丹酚酸A进行干预后,分别测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、血栓素B2(TXB2)水平、6-酮基前列腺素1α(6-keto-PGF1 α)的含量,以及细胞内和培养液中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性.结果 H2O2致RCMECs氧化损伤后,细胞LDH释放水平、TXB2和MDA的含量均明显增加,同时6-keto-PGF1 α含量和SOD活性显著下降;而丹酚酸A预处理后能呈浓度依赖性的降低RCMECs氧化损伤后LDH水平、TXB2含量和细胞内外的MDA含量,提高受损细胞6-keto-PGF1 α的表达和细胞内外SOD活性.结论 丹酚酸A对H2O2所致RCMECs氧化损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关.
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EGF受体在H2O2诱导的大鼠胸主动脉血管收缩中的作用
目的 研究表皮生长因子受体(EGFR)是否参与了H2O2诱导的大鼠胸主动脉血管收缩过程。方法 用EGFR阻断剂肝素、酪氨酸激酶抑制剂(AG1478)分别从受体外和受体内阻断EGFR，测定H2O2诱导的去内皮大鼠胸主动脉血管收缩张力。结果 300μM H2O2诱导的缩血管作用可以被3μM的AG1478所拮抗(P＜0.05)，100mg／L肝素对30μMH2O2引起的血管环收缩阻断作用不明显(P＞0.05)。结论 H2O2的缩血管作用可部分介导EGFR。
关键词： 表皮生长因子受体(EGRF) 主动脉 血管环 H2O2 大鼠 -
神仙草叶多糖提取及过氧化氢脱色工艺研究
目的 对神仙草叶多糖进行提取,并通过H2O2对所提取的多糖进行脱色处理.方法 采用传统热水浸提法对多糖进行提取,用苯酚-硫酸法测定其含量,在单因素试验的基础上,应用响应面试验法对H2O2脱色神仙草叶多糖工艺进行优化.结果 热水浸提法得到多糖的提取率为17.7％,H2O2脱色神仙草叶多糖的佳工艺为H2O2体积分数40％,温度50℃,时间3h.在此条件下,多糖的脱色率与保留率分别为45.3％和78.2％ 结论 H2O2脱色法效果明显,操作简便,对多糖破坏较小,可应用于神仙草叶多糖.
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银杏内酯B对H2O2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响
目的 研究银杏内酯B(Ginkgolide B,GB)对H2O2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响.方法 将对数生长期的H9c2心肌细胞随机分为5组:空白对照组、H2O2干预组、GB(50、100和200μmol/L)干预组.检测细胞存活率、培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量、细胞中氧自由基(ROS)含量和抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量;检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,检测NF-kB蛋白表达并进行半定量分析.结果 与H2O2干预组比较,GB(100、200 μmol/L)干预组细胞存活率显著升高;培养液中AST、CPK、LDH含量和细胞中ROS、MDA含量显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡状况明显改善、凋亡率显著降低,NF-kB蛋白表达显著下调;其中GB(200μmol/L)干预组GSH-Px活性显著降低.结论 GB能够有效提高细胞存活率,改善抗氧化酶活性、降低ROS含量、降低氧化应激损伤,下调NF-kB蛋白表达、降低细胞凋亡率,提示GB对H2O2诱导H9c2心肌细胞氧化应激具有抑制作用.
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胡桃楸树皮乙醇提取物的抗氧化研究
目的 探讨胡桃楸树皮乙醇提取物(AEBJ)对X线照射损伤小鼠的抗氧化活性.方法 将60只雄性健康昆明小鼠随机分为假照射组,照射对照组,高、低剂量照射给药组和高、低剂量单纯给药组共六个试验组,测定小鼠肝组织匀浆中H2O2与MDA的含量.结果 高、低剂量AEBJ照射给药组均能抑制照射所致的H2O2的含量增高,高剂量 AEBJ照射给药组能抑制照射所致的MDA含量增高,低剂量AEBJ照射给药组对照射所致的MDA含量无影响.结论 胡桃楸树皮乙醇提取物对X线照射损伤小鼠具有一定的抗氧化活性.
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杜仲总黄酮对H2O2诱导的IEC-6细胞氧化损伤的保护作用
目的:研究杜仲总黄酮对H2O2诱导IEC-6细胞氧化损伤的保护作用.方法:利用H2O2致IEC-6细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率;采用微量酶标法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,观察细胞的损伤程度;硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,WST-1法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果:与H2O2处理组相比,杜仲总黄酮各剂量组能使细胞存活率明显升高(P＜0.01),细胞培养液中LDH的漏出量减少,细胞内MDA含量降低,SOD活性明显升高(P＜0.05).结论:杜仲总黄酮对H2O2诱导的IEC-6细胞氧化损伤具有明显的保护作用.
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珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用
目的:观察珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制.方法:Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100,200 μg/mL)孵育24 h后,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定心肌细胞Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定心肌细胞Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值.结果:珠子参总皂苷(100,200 μg/mL)能显著改善心肌细胞活性,有效保护线粒体膜电位的稳定,抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内活性氧(ROS)含量；下调Bax mRNA表达,上调Bcl-2mRNA表达及Bcl-2与Bax的比值；降低H2O2所致新生大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性.结论:珠子参总皂苷对H2O2诱导心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与其稳定心肌细胞膜、清除ROS及调节心肌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase 9表达有关.
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大豆异黄酮活性组分对H2O2诱导的PC12细胞损伤的影响
目的:探讨大豆异黄酮活性组分对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法:以H2O2损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型,采用光学显微镜观察细胞形态,MTT法判断细胞的存活率,LDH法检测细胞的损伤程度.结果:不同浓度大豆异黄酮能明显改善H2O2导致的细胞甲瓒减少,大豆异黄酮处理组细胞存活率明显高于H2O2处理组(P＜0.01);而LDH漏出率则明显低于H2O2处理组(P＜0.05).结论:大豆异黄酮活性组分对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有保护作用.
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胡黄连苷-Ⅱ在体外对PC12神经细胞损伤的保护作用
目的: 考察胡黄连苷-Ⅱ对PC12神经细胞损伤的保护作用.方法: 采用细胞培养的方法,建立PC12神经细胞双氧水(H2O2)损伤模型.通过观察细胞形态,测定细胞存活率(MTT法),乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,细胞内氧化活性物质(ROS)水平,检测胡黄连苷-Ⅱ对PC12细胞损伤的保护作用.结果:同造模组比较,胡黄连苷-Ⅱ 0.5、5.0 mmolL-1能减轻H2O2引起的对PC12神经细胞的损伤,明显提高细胞的存活率,减少LDH的释放量,降低细胞内ROS水平.结论:胡黄连苷-Ⅱ对PC12神经细胞损伤具有明显的保护作用.
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Calpain抑制剂ALLN对H2O2诱导的661W细胞损害的影响
目的 探讨ALLN (N-acetyl-leu-leu-norleucinal)在过氧化氢(H2O2)对661W光感受器细胞的毒性损害过程中的可能影响.方法 MTT法测定H2O2对661W细胞活性的影响;Western blot法检测在H2O2作用661W光感受器细胞中不同时间点Calpain 1和Calpain 2的蛋白水平.结果 MTT结果表明,H2O2作用于661W细胞24 h后,661W细胞数明显下降;100 μmol·L-1的H2O2作用于661W细胞12、18、24 h,Calpain 1和Calpain 2的蛋白水平随H2O2作用时间的延长而增加;MTT法测定661W细胞活性,发现ALLN+H2O2组细胞活性明显比单纯H2O2组高;MTT法检测不同浓度ALLN组(25、50、100、200 μmol·L-1)的细胞活性,结果显示ALLN组细胞活力与空白对照组无明显差别.结论 Calpain抑制剂ALLN可减轻H2O2对661W细胞的毒性损害作用,为光感受器细胞氧化损伤及保护提供了实验依据.
