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对乙酰氨基酚对心肌细胞H2 O2损伤的保护作用
目的 研究对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)对H2O2引起的心肌细胞损伤的保护作用.方法 原代SD大鼠乳鼠心肌细胞培养,48 h后加入H2O2造成心肌细胞损伤,损伤前1 h加入不同浓度的APAP作为保护剂.损伤6 h后,甲基四唑蓝比色(MTT)法测定线粒体脱氢酶活性,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌细胞中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、Caspase-3活性.结果 H2O2能明显造成心肌细胞损伤, 表现为:细胞活力降低、LDH活性增加、MDA含量增加、SOD活性下降、caspase-3活性增高;20 μmol·L-1、60 μmol·L-1、180 μmol·L-1的APAP对H2O2引起的心肌细胞损伤有保护作用,并随浓度增加保护作用加强.结论 APAP能减轻H2O2对心肌细胞的损伤作用,抑制H2O2引起的培养心肌细胞凋亡.
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GRIM-19在H2O2诱导的晶状体上皮细胞氧化应激中的表达
目的 观察干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因19(GRIM-19)在不同浓度H2O2诱导的人晶状体上皮细胞(HLEC)氧化应激中的表达变化.方法 免疫荧光法检测GRIM-19在正常HLEC中的表达及定位;建立HLEC氧化损伤模型:分别用浓度为0、20、100、300、500和800μmol/L的H2O2处理HLEC 1 h后换液,继续孵育6、24 h;MTT法检测各浓度H2O2对HLEC的生长抑制作用;Western blot法检测6h组HLEC中GRIM-19表达的变化.结果 免疫荧光结果示:GRIM-19主要表达于HLEC细胞质中;MTT结果示:100～800μmol/L H2O2对HLEC有增殖抑制作用,且呈剂量依赖关系,与对照组相比差异有统计学意义(P均＜0.01),20 μmol/L组与空白对照组未见明显差异(P＞0.05);Western blot结果显示:GRIM-19在各浓度组中相对表达量分别为1.466±0.018,1.509±0.038,1.599±0.014,1.709±0.058,1.813±0.010,1.583±0.021,实验组均显著高于空白对照组(P＜0.05),正常对照组与空白对照组未见明显差异.结论 正常HLEC中存在GRIM-19表达.在一定浓度H2O2诱导的氧化应激中,GRIM-19的表达显著增加.
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上调GDF-15表达对H2O2诱导的H9C2心肌细胞生物学特性及PI3K/AKT信号通路的影响
目的:探讨上调生长分化因子-15(GDF-15)的表达对H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响.方法:CCK8法检测不同浓度的H2O2处理H9C2心肌细胞后的细胞增殖情况;H9C2心肌细胞分为Control组、NC组、H2O2组、GDF-15+H2O2组,各组细胞处理24 h后收集细胞,RT-PCR及Western blot分别检测各组细胞中GDF-15的mRNA及蛋白表达;CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况;2',7'-二氯二氢荧光素黄二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测细胞活性氧簇(ROS)水平;Western blot检测Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、PI3K、p-AKT蛋白表达.10 μmol/L的PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理H9C2心肌细胞,通过CCK8法及流式细胞术分别检测GDF-15+H2O2组及PI3K/AKT信号通路抑制剂组细胞活力及凋亡率,Western blot检测Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表达.结果:不同浓度H2O2处理H9C2心肌细胞后,细胞活力均受到抑制,且有浓度依赖性(P<0.05),由于200 μmol/L的H2O2处理H9C2心肌细胞后可抑制将近一半的细胞增殖,选择200 μmol/L的H2O2作为研究对象;与Control组比较,H2O2组GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著降低,凋亡率增加,ROS水平升高,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H2O2组比较,GDF-15+H2O2组细胞GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著增加,凋亡率降低,ROS水平降低,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低(P<0.05).PI3K/AKT信号抑制剂组细胞活力及Bcl-2、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于GDF-15+H2O2组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于GDF-15+H2O2组(P<0.05).结论:上调GDF-15表达可促进H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖,降低细胞凋亡,其机制可能与调节细胞中ROS水平,Ki67、Bcl-2、Bax表达及PI3K/AKT信号通路有关.
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肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤后NF-κB P65表达的影响
目的 探讨L-肌肽对H2 O2诱导PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)凋亡的保护机制.方法 在H2 O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,加入肌肽作用于细胞,采用MTT比色法检测肌肽对PC12细胞的增殖抑制作用；RT-PCR法检测凋亡相关基因NF-κB P65 mRNA的表达变化；免疫组化SABC法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和NF-κB P65的表达,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.结果 不同浓度的肌肽对H2 O2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用,20 mmol/L浓度时达大值(p＜0.05).20 mmol/L的肌肽作用于PC12细胞可降低NF-κB P65的mRNA表达,降低NF-κB P65蛋白的表达,流式细胞仪检测显示肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡率.结论 肌肽对H2 O2损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能是通过抑制NF-κB P65的表达来抑制PC12细胞的凋亡而实现的.
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丙酮酸对过氧化氢诱发PC12细胞损伤的保护作用
目的 研究丙酮酸对过氧化氢(H2O2)诱发小鼠嗜铬细胞瘤瘤细胞(PC12细胞)损伤的保护作用并初步探讨其保护机制.方法 将培养的PC12细胞分为三组:正常对照组;损伤组;保护组,在用H2O2处理前30 min加入丙酮酸.通过细胞形态学方法,化学比色法测定琥珀酸脱氢酶(MTT)含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放量,超氧化物歧化酶(SOD)含量和丙二醛(MDA)含量,观察丙酮酸的神经保护作用.结果 通过形态学方法,保护组细胞数显著比损伤组多,受损变圆的细胞数较少.保护组可明显降低细胞LDH释放量和细胞内的MDA含量(P＜0.01);提高MTT测定值和SOD活性.结论 丙酮酸对H2O2诱发PC12细胞损伤有显著的保护作用.
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茶多酚对H2O2诱导HL-6O细胞癌基因表达的影响
目的观察茶多酚对H2O2诱导HL-60细胞癌基因表达的影响,同时观察细胞DNA片段化程度的变化.方法用二苯胺法对小片段DNA进行分析,流式细胞仪观察癌基因表达变化.结果H2O2打断DNA的能力与其作用浓度及时间有关,H2O2可使细胞c-fos,c-jun,c-myc,bcl-2,p53表达发生变化,茶多酚可以影响H2O2诱导的DNA损伤及癌基因表达.结论茶多酚在一定浓度下,可以抑制H2O2诱导的DNA氧化损伤,并抑制癌基因表达的变化.高浓度茶多酚可以增强H2O2的效应.
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茶多酚对HL-60细胞氧化损伤时DNA双链残余率的影响
目的观察茶多酚对HL-60细胞氧化损伤时DNA双链残余率的影响.方法采用DNA荧光解旋法(FADU)对DNA双链残余率进行检测.结果过氧化氢可以对细胞DNA造成损伤,细胞浓度为1.5×109/L时,过氧化氢浓度在0.1～0.5 mmol/L时与DNA双链残余率有良好的线性关系.茶多酚浓度在10～80 mg/L时过氧化氢诱导的DNA氧化损伤具有明显的抑制作用(P＜0.05),但茶多酚浓度过高,DNA双链残余率有减少趋势.结论过氧化氢可以造成HL-60细胞DNA的氧化损伤,茶多酚具有保护细胞,抑制DNA氧化断裂程度,在一定浓度范围内,茶多酚的抗氧化作用与其浓度成正比,过高浓度的茶多酚则抗氧化能力下降.
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茶多酚对H2O2致HL-60细胞氧化损伤时DNA中8-羟基鸟嘌呤含量的影响
目的观察茶叶的主要成分茶多酚(Teapolyphenol，TP)对 HL-60细胞DNA中8-羟基鸟嘌呤(8-oh-G)变化的影响。方法利用气相色谱仪(GC/FID)、气质联用仪(CGC/MS-SIM)测定DNA中8-羟基鸟嘌呤含量，同时观察细胞丙二醛(MDA)含量、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比值变化。结果 TP作为抗氧化剂在一定的浓度范围可以减少DNA的氧化损伤产生8-羟基鸟嘌呤的含量，但当TP高达到一定浓度时反而增高8-羟基鸟嘌呤的含量。结论 TP对细胞DNA氧化损伤有抑制和促进两方面作用，这与TP的浓度有关，即一定浓度时TP具抗氧化作用，而高浓度时具足进过氧化氢的氧化作用。
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原代培养的皮质神经元缺血性损伤模型的建立
目的 建立方便有效的神经元拟缺血性损伤的离体模型.方法 以原代培养Wistar大鼠乳鼠大脑皮层神经元为研究对象,不同浓度H2O2及Glu与细胞作用24h后,检测细胞活力,LDH漏出量及细胞形态学改变.结果 6.25μmol/L～200μmol/L H2O2及12.5μmol/L～50μmol/L Glu均可降低神经元生长能力,增加乳酸脱氢酶漏出量;细胞形态有不同程度病理变化.结论 H2O2与Glu引起的细胞损伤模型是两种方便有效的神经元拟缺血性损伤模型.
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活性氧对神经母细胞株SH-SY5Y细胞L型钙通道电流的影响
目的探讨氧自由基导致神经元钙超载的发生机制.方法在神经母细胞株SH-SY5Y细胞体外培养的基础上,采用全细胞膜片钳技术,观察H2O2对SH-SY5Y细胞L型钙电流(ICa,L)的影响.结果 (1)H2O2能够明显增加峰值ICa,L,且该作用具有浓度依赖性.(2)H2O2使ICa,L的I-V相关曲线下移,但对其形状和大激活电位无明显影响.结论 H2O2对L型钙通道有明显的增强作用,此可能是其导致神经元钙超载的机制之一.
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H2O2对PC12细胞par-4和NF-κBP65基因表达的影响
目的探讨H2O2对PC12细胞前列腺细胞应答凋亡蛋白-4(prostate apoptosis response-4,par-4)和核转录因子-κBP65(NF-κBP65)基因表达的影响.方法用不同终浓度H2O2(0～400nmol/L)处理PC12细胞8h,或终浓度200nmol/LH2O 2处理PC12细胞不同时间(0～8h),采用RT-PCR检测par-4、NF-κBP65 mRNA表达变化,Western blot检测Par-4和NF-κBP65蛋白表达的变化.结果随H2O 2浓度从100～400nmol/L增加,par-4、NF-κBP65 mRNA表达和Par-4、NF-κBP65蛋白表达水平逐渐增加;200nmol/L H2O2作用PC12细胞0～8h,par-4mRNA表达和Par-4蛋白表达,在2～8h随时间延长表达增加;在0～8h NF-κB P65 mRNA表达和NF-κBP65蛋白表达无明显变化.结论H2O2可时间、剂量依赖性的增加par-4 mRNA表达和Par-4蛋白表达;H2O2可剂量依赖性的增加NF-κBP65 mRNA表达和NF-κBP65蛋白表达;NF-κBP65 mRNA表达和NF-κBP65蛋白表达无时间依赖性.
关键词： H2O2 PC12细胞 前列腺细胞应答凋亡蛋白-4 核转录因子-κB -
槲皮苷对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用
目的 探讨槲皮苷对H2O2所致的PC12细胞凋亡的保护作用及机制.方法 PC12细胞培养后,MTT检测细胞存活率的方法进行H2O2损伤模型的摸索和槲皮苷药物浓度的筛选,将PC12细胞分为对照组、模型组和不同剂量槲皮苷组.用400 μmol H2O2刺激PC12神经元细胞使其发生凋亡复制阿尔茨海默病(AD)模型,MTT法检测PC12细胞存活率、硫辛酰胺脱氢酶催化的INT显色反应检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量和DAPI荧光核染色观察细胞凋亡形态学改变,Western blot方法检测Cytc和caspase-3表达的变化.结果 400 μmol H2O2诱导PC12细胞损伤明显,与模型组比较,槲皮苷组PC12细胞存活率显著提高(P＜0.01),凋亡率显著下降(P＜0.01),LDH释放量和凋亡相关蛋白Cytc和caspase-3的表达显著减少(P＜0.01).结论 槲皮苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞凋亡线粒体途径中凋亡相关蛋白Cytc和caspase-3的表达有关.
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加减清营汤对H2O2损伤的血管内皮细胞保护作用研究
目的:观察加减清营汤对H2O2损伤的血管内皮细胞的保护作用.方法:体外培养内皮细胞ECV304,用380μmol/LH2O2损伤细胞,大鼠随机分成正常组、模型组、加减清营汤组和阳性药物对照组,用血清药理学方法给药,检测各项指标.结果:与模型组比较,加减清营汤含药血清组的NoS活性、T-AOC显著提高,MDA含量、LDH活力显著降低(P
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干扰硫氧还蛋白-1对H2O2诱导PC12细胞超氧化损伤的保护作用
目的 探讨硫氧还蛋白-1(sulfiredoxin-1,Sixn-1)对H2O2诱导的PC12细胞超氧化损伤的保护作用及其可能机制.方法 在Lipofectamine 2000的介导下,分别将pLVT574、pLVT575和pLVT576干扰质粒转染PC12细胞,同时设空白对照组(正常培养细胞)及阴性对照组(转染pLVT4质粒),普通显微镜和倒置荧光显微镜下观察转染效率,并采用RT-PCR和Western blot法分别检测转染细胞中Srxn-1基因mRNA转录和蛋白表达的水平.采用不同终浓度(50、100、150、200、250、300 μmol/L)的H2O2诱导PC12细胞,建立超氧化细胞损伤模型,MTT法检测Srxn-1对细胞存活率的影响,并采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞SOD活性及MDA含量.结果 镜下观察可见,转染后细胞死亡数较多,胞体缩小;有绿色荧光,转染效率达50％.si-Srxn-1-575组细胞中Sixn-1基因mRNA转录及蛋白表达水平较空白对照组明显下降(P＜0.05).终浓度为200 μmol/L的H2O2处理12 h后,PC12细胞的存活率为66％; H2O2+si-Srxn-1-575组的细胞存活率(49.3％)明显低于空白对照组(65.2％)(P＜0.05).H2O2+ si-Srxn-1-575组细胞中SOD活性[(10.319±1.362)U/mg pro]明显低于H2O2+空白对照组[(15.7±1.138) U/mg pro],MDA含量[(5.507±0.297)nmol/mg pro]明显高于H2O2+空白对照组[(3.41±0.281) nmol/mg pro](P均＜0.05).结论 Srxn-1对H2O2损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与其发挥内源性抗氧化作用有关.
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二苯乙烯苷通过上调XIAP抑制人脐静脉内皮细胞凋亡
目的:二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)具有抗炎、抗氧化、抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)等作用.课题组前期研究表明TSG对过氧化氢(H2O2)诱导损伤的内皮细胞具有保护作用,并抑制内皮细胞的凋亡,但机制尚未完全明确.本研究目的在于探讨TSG是否通过影响X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、Caspase-9的表达来抑制细胞凋亡.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为正常对照组、模型组(300 μmol·L-1H2O2)、TSG预处理组(10 μmol·L-1 TSG+300 μmol·L-1 H2O2)、Embelin与TSG联合处理组(30 μmol·L-1 Embelin+10 μmol·L-1TSG+300μmol·L-1 H2O2)、TSG单独处理组(10μmol·L-1TSG)、Embelin组(30 μmol·L-1 Embelin).采用MTT法检测细胞增殖率,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核形态,RT-PCR和Western blot检测XIAP、Caspase-9的表达.结果:与空白对照组相比,H2O2组内皮细胞增殖率降低,核损伤明显,XIAP表达显著性下降,Caspase-9表达显著增加(P＜0.01);与H2O2组比较,经TSG预处理后,细胞增殖率增加,核损伤减轻,XIAP的表达上升,Caspase-9表达减少,差异均有显著性(P＜0.01).与TSG预处理组比较,用XIAP阻断剂Embelin与TSG联合处理后,内皮细胞活力下降,XIAP表达显著降低,Caspase-9表达增加(P＜0.01).结论:TSG具有抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡作用,其机制与增加XIAP的表达,抑制Caspase-9的表达有关.
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二苯乙烯苷抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡
目的:研究二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用.方法:运用四甲基偶氮唑盐还原法(MTT法)和流式细胞术筛选建立细胞凋亡模型的H202合适浓度以及检测不同浓度TSG时H2O2诱导HUVECs的增殖率和凋亡率;Hoeehst33258染色观察细胞凋亡形态.结果:MTT及流式法筛选300μmol/L为H2O2作用于细胞的适凋亡浓度.MTT和流式结果显示,与H2O2(300μmol/L)损伤组比较,10μmol/L与100μmol/L TSG预处理组细胞的增殖率增加(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.01);Hoechst33258染色观察TSG能降低H2O2诱导的细胞凋亡,使细胞凋亡数减少.结论:TSG能抑制H2O2诱导的HUVECs凋亡,从而起到保护血管内皮细胞的作用.
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RNAi特异性抑制A20基因对H2O2诱导的HUASMC细胞表型的影响
目的:通过采用锌指蛋白A20基因干扰技术观察其对H2O2诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞(HUASMC)超微结构影响,以初步研究锌指蛋白A20在氧化还原方面对细胞的保护作用.方法:将培养的人脐动脉血管平滑肌细胞随机分六组,空白组;A20siRNA组;scramble siRNA组;H2O2组;H2O2+A20siRNA组;H2O2+scramble siRNA,采用RT-PCR,Western-blotting方法观察A20基因表达变化,应用透射电镜观察细胞超微结构改变.结果:空白组A20mRNA与蛋白有微弱表达,A20siRNA组较空白组表达减少(P＜0.05);H2O2组A20mRNA与蛋白表达明显高于空白组但显著低于H2O2+A20siRNA组(P＜0.05)干扰效率大约55%.空白组平滑肌细胞(VSMC)电镜下呈典型的"收缩表型";H2O2组VSMC表型发生明显改变,呈"合成表型"H2O2+A20siRNA组成典型的合成表型且肌丝明显减少,细胞器及分泌物增多.结论:A20基因可以抑制H2O2损伤诱导的血管平滑肌细胞表型转化.
关键词： H2O2 锌指蛋白A20 基因干扰 人脐动脉血管平滑肌细胞 超微结构 -
黄芪皂苷IV对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的保护作用
目的:探讨黄芪皂苷对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的保护作用.方法:以H2O2诱导SD大鼠心肌损伤细胞模型为基础,用黄芪皂苷IV预处理进行干预.MTT法检测不同时段细胞凋亡情况,Western blot和RT-PCR检测24h时段Cyclin D1蛋白和mRNA表达水平.结果:H2O2对SD大鼠心肌细胞的损伤呈时间依赖性.H2O2可显著诱导SD大鼠心肌细胞凋亡.而这一作用可被黄芪皂苷IV显著抑制.结论:黄芪皂苷IV对H2O2诱导的SD大鼠心肌细胞损伤有明显保护作用.
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蒺藜皂苷对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用
目的 探讨蒺藜皂苷(GSTT)对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用.方法 用H2O2刺激PC12细胞使其发生氧化应激损伤,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率及线粒体膜电位变化,Hoechst33258染色观察PC12细胞核形态,琼脂糖凝胶电泳观察DNA ladder图谱.结果 与模型组比较,GSTT各剂量组可使PC12细胞存活率提高(P<0.001,P<0.01),凋亡率降低,线粒体膜电位回升,细胞核浓染致密数减少,无典型DNA ladder条带,且在一定范围呈剂量依赖性.结论 蒺藜皂苷对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与稳定线粒体膜电位有关.
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肌肽对H2O2、Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的保护作用
目的研究肌肽对H2O2和β淀粉样蛋白片段(Aβ25-35)诱发PC12细胞损伤的保护作用.方法将培养的PC12细胞分为3组:正常对照组;损伤组,分别加入H2O2和Aβ25-35;保护组,在用H2O2、Aβ25-35处理前30min加入肌肽.用LDH法、MTT法观察肌肽的神经保护作用.结果保护组LDH活性显著少于损伤组(P<0.01);MTT测定结果显著高于损伤组(P<0.01).结论肌肽对H2O2和Aβ25-35诱发PC12细胞损伤有显著的保护作用.
