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山楂叶总黄酮对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制的研究
目的探讨山楂叶总黄酮(flavone mixture of crataegus leaves,FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其分子机制.方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率,用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3P20蛋白及用RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA表达量的变化.结果与模型组比较FMCL 100μg/ml剂量组PC12细胞凋亡率下降,Bcl-2蛋白及mRNA表达量明显升高,而Bax、Caspase-3P20蛋白及Bax mRNA表达量明显降低(P<0.05或P<0.01),且在一定范围内存在剂量依赖关系.结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因及蛋白的表达从而抑制Caspase-3活化有关.
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槲皮素对H2O2所致乳鼠培养心肌细胞损伤的保护作用
目的 观察槲皮素(QUE)对H2O2所致乳鼠培养心肌细胞损伤的保护作用.方法 原代培养的新生Wistar乳鼠,随机分为正常对照组、H2O2损伤组和3种剂量QUE保护组.用比色法观察乳鼠心肌细胞培养液的乳酸脱氢酶(LDH)、脂质过氧化产物-丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,并用电镜观察心肌细胞形态学改变.结果 H2O2损伤组乳鼠心肌细胞培养液中LDH和MDA含量显著增高,SOD活性降低(与对照组相比,P＜0.01),心脏超微结构损伤严重;QUE保护组与H2O2损伤组相比,LDH和MDA明显降低,SOD活性升高,心肌形态学变化减轻.结论 槲皮素对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞损伤有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化损伤有关.
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贯叶金丝桃苷对心肌细胞作用的初步研究
目的 研究贯叶金丝桃苷(Hyp)对原代培养大鼠心肌细胞的初步作用.方法 对出生1～3 d的SD大鼠乳鼠分离心肌细胞进行原代培养,以不同浓度的贯叶金丝桃苷给药,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测Hyp对心肌细胞的毒性,并观察Hyp对H2O2损伤心肌细胞的影响.结果 Hyp体外对心肌细胞的TC50 =8.946 g/L,TC10=0.028 g/L.Hyp各剂量组可显著降低H2O2损伤的心肌细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)含量,同时可以降低H2O2损伤所导致的心肌细胞死亡.结论 Hyp对心肌细胞的生长抑制率低；可以对抗H2O2所造成的损伤,对心肌细胞有保护作用.
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山莨菪碱的体外抗氧化作用
目的探讨山莨菪碱的体外抗氧化作用.方法红细胞溶血、肝匀浆MDA生成及脑匀浆MDA生成.用比色法测定.结果山莨菪碱体外给药能明显抑制红细胞自氧化溶血或H2O2所致红细胞溶血,并抑制小鼠肝、脑匀浆自发性或Fe2+-VC诱发的脂质过氧化反应终产物丙二醛(MDA)的生成.结论山莨菪碱对血细胞和组织细胞具有膜保护作用.
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银杏叶提取物对H2O2致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用
目的:研究银杏叶提取物在H2O2所致乳鼠心肌细胞损伤中所起到的保护作用.方法:分别以不同浓度的H2O2处理乳鼠心肌细胞24h,采用MTT法检测H2O2对细胞的损伤作用;将乳鼠心肌细胞分成4组:对照组,H2O2组,EGB+H2O2组,EGB组,通过细胞形态学、MTT法及LDH(乳酸脱氢酶)指标检测处理后细胞的生长活力和凋亡情况.结果:H2O2对乳鼠心肌细胞的损伤作用呈剂量依赖性;H2O2可显著诱导乳鼠心肌细胞凋亡,而EGB(50μL/mL)可明显抑制它的作用.结论:EGB对H2O2所致的乳鼠心肌细胞损伤有明显的保护作用.
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参葵通脉颗粒含药血清对H2O2致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用
目的 观察参葵通脉颗粒含药血清对H2O2致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法 H2O2与心肌细胞共孵育刺激细胞损伤后,弃去细胞培养上清液,换用参葵通脉颗粒含药血清培养液共培养.分光光度法检测乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK-MB、MDA水平,酶联免疫法检测细胞内ATP水平,Western blot检测细胞中p-AMPKoα、AMPKoα、GLUT4、FAT/CD36、CPT-1表达.结果 与模型组比较,参葵通脉颗粒组LDH、CK-MB、MDA水平显著降低(P＜0.05),ATP水平及p-AMPKα/AMPKα、GLUT4、FAT/CD36、CPT-1表达显著升高(P＜0.05).结论 参葵通脉颗粒对H2O2致乳鼠心肌细胞损伤具有良好保护作用,其机制可能与调控糖脂代谢酶、改善心肌细胞能量代谢障碍有关.
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Tpc1808对H2O2诱导的C6细胞氧化应激性损伤的保护作用
目的:研究Tpc1808对H2O2诱导的C6细胞氧化应激性损伤的保护作用.方法:采用细胞培养、基因转染、MTT、LDH、免疫荧光组织化学、Western印迹等技术,以星形胶质瘤C6细胞为研究对象,以H2O2作为氧化应激刺激物,建立细胞损伤模型.结果:当终浓度为100μmol/L的H2O2作用于C6细胞24h后,MTT减小,LDH增加,细胞出现明显凋亡;转染Tpc1808基因的细胞受到保护,grp75表达量增加,与对照组相比有显著差异.结论:Tpc1808基因可以保护H2O2引起的C6细胞氧化应激性损伤,该保护作用可能是通过增加grp75表达实现的.
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氧化剂辅助铸型标本碱腐蚀方法
制作保存骨或骨关节血管铸型标本多采用碱腐蚀~([1-6]),而常用的碱腐蚀法为Ca(OH)2饱和的乙醇碱腐蚀法~([3-6])、饱和次氯酸钠溶液腐蚀法~[7]及多碱混合溶液腐蚀法~[8],笔者根据碱腐蚀作用原理,探索采用氧化剂,如过氧化氢溶液(H2O2)、氨水(氢氧化氨)等添加到碱腐蚀溶液中,加强对制作保存骨关节血管铸型标本碱腐蚀的作用,取得较满意的效果.
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H2O2体外抗棘阿米巴作用研究
目的检测H2O2的抗棘阿米巴(Acanthamoeba spp.)作用.方法自角膜炎患者角膜刮片分离获得棘阿米巴复合体(Acanthamoeba lugdunensis-Acanthamoeba quma).于培养基(PYG)培养传代.实验前将棘阿米巴用新鲜的PYG培养1 d使其活化,配成2.5×106/ml细胞悬液加入细胞培养板,实验组各孔分别加入不同浓度H2O2,对照组加等量PYG,28 ℃ 24 h后实验组更换新鲜PYG继续培养3 d.取细胞悬液滴片,瑞氏染色,观察细胞形态变化.用定量培养法作棘阿米巴生长曲线,观察其增殖速率.用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,观察H2O2对棘阿米巴成活率的影响.用乳酸脱氢酶(LDH)测定法测定H2O2对棘阿米巴的损伤.结果棘阿米巴滋养体在O.125%H 2O2作用下,不可逆转地成为包囊,20～120 h增殖率为O;1%H2O2可使其破裂.结论H2O2具有较强的抗棘阿米巴作用,有可能成为预防棘阿米巴角膜炎的理想药物.
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不同浓度H2O2的桩表面处理对玻璃纤维桩与树脂水门汀黏结强度的影响
目的:研究不同浓度的H2O2表面处理对纤维桩与树脂水门汀之间黏结强度的影响.方法:选择2种不同种类的玻璃纤维桩各18支,随机分为6组,A组(对照组)、B组(单纯硅烷化处理)、C组(3％H2O2+硅烷化处理)、D组(10％H2O2+硅烷化处理)、E组(20％H2O2+硅烷化处理)和F组(30％H2O2+硅烷化处理).将各组纤维桩与树脂水门汀进行黏结,形成圆柱状树脂块,将每个树脂块切割成7个1.0 mm厚的薄片进行推出实验,记录数据并采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.测试后的试件置于光学显微镜下,观察其破坏模式.结果:Tenax玻璃纤维桩黏结强度值A1-F1组分别为(22.35±3.43) MPa、(22.75±1.92) MPa、(27.21±3.60) MPa、(32.32±2.19) MPa、(36.15±2.32) MPa和(40.51±2.37) MPa,Macthpost玻璃纤维桩黏结强度值A2-F2组分别为(17.29±3.23) MPa、(17.01±3.18) MPa、(20.48±2.1 1) MPa、(23.60±2.60) MPa、(27.65±3.77) MPa和(30.52±2.99) MPa.Tenax及Matchpost组中,除了A组和B组无显著差异(D0.05)外,其余每2组间相比,差异均有显著性(P＜0.05).结论:使用H2O2溶液处理Tenax及Matchpost玻璃纤维桩表面再涂以硅烷偶联剂,可明显提高2种玻璃纤维桩与树脂水门汀之间的黏结强度.30％H2O2溶液处理玻璃纤维桩表面的黏结强度高,可使其更利于黏结.
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丹参素对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的保护作用研究
目的:探讨丹参素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用.方法:采用MTT法测定丹参素对正常和H2O2损伤HUVEC活性的影响,筛选出低有效剂量,并确定丹参素保护HU-VEC氧化损伤的浓度.通过活体探针标记、流式细胞术定量分析丹参素对损伤HUVEC细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位的影响.结果:丹参素对正常HUVEC的活性无影响；而丹参素(25、50、250 μmol/L)能显著降低H2O2诱导的HUVEC活性,具有一定的剂量依赖性、细胞活性分别为H2O2损伤组的120.72％、177.48％和736.48％ (P＜0.01).丹参素可明显降低H2O2诱导的HUVEC内ROS水平(P＜0.01)和提高线粒体膜电位(P＜0.05,P＜0.01).结论:丹参素对H2O2诱导HUVEC损伤的保护作用可能是通过抑制细胞内ROS产生、减少线粒体膜损伤而发挥抗氧化作用.
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H2O2对体外正常人黑素细胞和角质形成细胞共培养模型中黑素合成功能的影响
目的 探讨不同浓度H2O2对黑素细胞(melanocyte,MC)和角质形成细胞(keratinocyte,KC)共培养体系的细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)表达的影响.方法 培养原代人表皮MC和KC,建立共培养模型.采用MTT法测定细胞增殖,NaOH法测定细胞黑素含量,实时PCR方法观察TYR基因的表达.结果 KC和MC以3:1浓度混合时,可形成稳定共培养模型.高浓度H2O2作用下,共培养细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05),TYR基因表达显著降低(P＜0.05)；低浓度H2O2(＜0.1 mrmol/L)作用下,细胞增殖受到轻度抑制,TYR基因表达增高(P＜0.05).结论 H2O2对MC与KC共培养体系的作用复杂,对黑素合成功能可呈现双向作用.
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过氧化氢预处理对抗氧化应激诱导的PC12细胞凋亡
氧化应激可明显地诱导细胞凋亡.本研究旨在探讨H2O2预处理能否对H2O2诱导的PC12细胞凋亡产生保护作用及ATP敏感性K+(ATP-sensitive potassium,KATP)通道在其中的作用.采用PI染色流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测PC12细胞凋亡.结果表明,经10μmol/L H2O2预处理90 min的PC12细胞,分别在20、30、50和100 μmol/L H2O2作用24 h后,其细胞凋亡率明显下降,与未经H2O2预处理的PC12细胞相比,差异极显著(P＜0.01),表明H2O2预处理对H2O2诱导PC12细胞凋亡具有保护作用.用10μmol/L的KATP通道激动剂pinacidil(Pin)可显著减少30和50 μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡,10μmol/L的KATP通道拮抗剂glybenclamide(Gly)则可显著地抑制甚至取消KATP通道激动剂Pin对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用,但并不影响H2O2预处理对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用;然而,当联合应用H2O2预处理与Pin时,对PC12细胞凋亡的保护作用明显大于各自的抗凋亡作用.提示KATP通道开放不仅对H2O2诱导PC12细胞凋亡具有保护作用,而且与H2O2预处理一起产生抗PC12细胞凋亡的协同作用,但KATP通道开放可能不参与H2O2预处理的适应性保护作用.
关键词： 预处理 H2O2 PC12细胞 凋亡 ATP-敏感性钾通道 -
过氧化氢诱发的小脑皮质凋亡神经元膜K+通道电流的变化
用新生SD大鼠小脑皮质细胞进行培养,用Ara-C抑制非神经元生长,以H2O2诱发神经元凋亡.用膜片箝细胞贴附式观察了凋亡神经元膜钾离子通道电流的变化,结果表明,凋亡小脑皮质神经元膜K+通道在不同箝位电压下,通道电流(IK)幅度小于正常神经元的,单位电导小于正常神经元的,通道的平均开放时间、开放概率、短开放及长开放时间常数亦均小于正常神经元的.说明小脑皮质凋亡神经元K+通道活动减弱.
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茶多酚抑制过氧化氢诱导的牙周膜细胞损伤
目的：探讨茶多酚（Tea polyphenols，TP）对过氧化氢（H2O2）诱导的牙周膜细胞损伤的保护作用及其机制。方法构建H2 O2诱导牙周细胞损伤模型。细胞随机分为正常对照组、H2 O2组、H2 O2＋TP组。 MTT检测细胞活力，流式细胞仪检测细胞凋亡。试剂盒检测各组细胞中丙二醛（ MDA）含量和超氧化物歧化酶（ SOD）活性。 Western blot 检测细胞中 caspase?3、caspase?12、Bcl?2和Bax的表达。 Elisa检测细胞中IL?1β和IL?6的表达情况。结果 H2 O2处理会降低牙周膜细胞的活性，并且浓度越高，细胞活性降低越明显。茶多酚可抑制在H2 O2介导下牙周膜细胞的活性降低、凋亡升高，MDA含量增加，SOD活性降低，caspase?3、caspase?12和Bax的表达升高，Bcl?2的表达降低，以及IL?1β和IL?6的表达增高。结论茶多酚对H2 O2诱导的牙周膜细胞损伤有明显的保护作用，其机制与减轻细胞氧化应激损伤、抑制线粒体凋亡通路和降低细胞炎性水平有关。
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依达拉奉对H2O2致星形胶质细胞损伤的保护作用
目的:观察依达拉奉(EDA)对H2O2损伤后的星形胶质细胞活力的影响及其细胞内谷胱甘肽(GSH)含量、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:应用MTT法检测星形胶质细胞活力;Tietze法检测细胞内GSH含量;Western-blot法检测细胞内iNOS的表达.结果:H2O2作用24 h后可呈浓度依赖性地抑制星形胶质活力;EDA可逆转H2O2导致的星形胶质细胞活力的下降,胞内GSH含量的降低以及iNOS表达的增加.结论:EDA可改善H2O2所致的星形胶质细胞的氧化损伤.
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免疫球蛋白IgG对H2O2所致内皮细胞损伤的抑制作用及其机制
目的 探讨免疫球蛋白IgG对H2O2诱导的内皮细胞的黏附分子和趋化因子的表达及作用机制.方法 IgG和H2O2加入内皮细胞中孵育2h,应用RT-PCR以及实时定量RT-PCR检测黏附因子(ICAM-1、VCAM-1、E-selectin)及趋化因子(MCP-1、CXCL-1、MIP-2)的mRNA及蛋白表达;进一步应用Western blot检测IgG对H2O2诱导的p38、ERK1/2和JNK1/2的磷酸化情况.结果 H2O2可显著诱导黏附分子(ICAM-1、VCAM-1和E-selectin)、趋化因子(MCP-1、CXCL-1、MIP-2)的表达,而IgG对H2O2诱导的这些因子的表达有抑制作用;且IgG可抑制H2O2诱导的p38、JNK1/2和ERK1/2的磷酸化.结论 IgG对H2O2诱导的内皮细胞黏附分子及趋化因子表达的抑制作用可能通过抑制p38、JNK1/2、ERK1/2的信号通路实现,这可能是IgG调节内皮细胞炎症的机制之一.
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黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其对Trx表达的影响
目的 探讨黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其作用机制.方法 采用体外培养细胞的方法,建立SH-SY5Y细胞H2O2损伤模型.分设药物组(50,100,200μmol/L)、H2O2损伤组、阴性对照组.采用MTT法检测细胞活力,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞的Trx表达的变化.结果 同H2O2损伤组比较,黄芩苷能明显减轻H2O2引起的SH-SY5Y细胞的损伤,同时Trx表达升高.结论 黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能是黄芩苷通过上调Trx表达,起到抗氧化作用,继而起到抗凋亡的作用.
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浒苔多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用
目的 研究浒苔多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法 用水提法提取浒苔多糖,除蛋白后用DE-52离子交换柱进行纯化.用MTT法检测纯化的浒苔多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用.结果 纯化的浒苔多糖能明显改善H2O2导致的细胞损伤,与H2O2处理组相比,浒苔多糖100,200和300 μg/mL组可使细胞存活率升高.结论 浒苔多糖对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用.
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西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用
目的 研究西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用.方法 建立H2O2诱导PC12细胞损伤模型,化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶活性,并在显微镜下观察其形态学特征.结果 200 μmoL/L H2O2诱导PC12细胞,10 h呈明显损伤作用,250 μg/mL 西洋参皂苷对H2O2致PC12损伤的细胞有增殖作用.结论 西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧能力有关.
