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DSS诱导的急性实验性肠炎免疫细胞内GSH/GSSG与炎症损伤及细胞因子的关系
目的探讨硫酸葡聚糖钠(dextran sodium sulphate,DSS)诱导的小鼠肠炎模型腹腔巨噬细胞和脾细胞中还原型谷胱甘肽(GSH),氧化型谷胱甘肽(GSSG)的变化特征及其与Th1/Th2型细胞因子IFN-γ,IL-4的分泌及黏膜GSH表达与炎症损伤的关系.方法实验组小鼠给予含5%DSS的蒸馏水自由饮用7天之后处死,采集腹腔巨噬细胞及脾细胞,检测腹腔巨噬细胞及脾细胞中GSH与GSSG的变化.分离出的病变结肠一部分评价其病理学,另一部分结肠及脾脏培养后检测其IL-4、IFN-g的表达.结果DSS诱导的实验性肠炎小鼠腹腔巨噬细胞中的GSH较对照组降低,而GSSG较对照组增多,且GSH/GSSG比值明显减低.其脾细胞内GSH较对照组明显降低,GSH/GSSG比值较对照组降低但差异不明显.DSS诱导的实验性肠炎组病变结肠的IL-4明显升高,而其脾脏分泌的IFN-γ明显降低.结论DSS实验性肠炎中腹腔巨噬细胞是以氧化型巨噬细胞表形为主的.腹腔巨噬细胞及脾细胞中GSH的消耗、GSH/GSSG比值的减低与黏膜损坏及IL-4分泌增多、IFN-γ分泌减少相关.
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GSH/GSSG在染氟成骨细胞中的变化
目的 通过对谷胱甘肽(GSH)代谢研究来探索氟对成骨细胞氧化应激的影响.方法 取材昆明小鼠乳鼠颅骨来源的成骨细胞进行原代培养并传至第3代,用高效液相色谱仪对不同浓度染氟的成骨细胞内GSH、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量进行检测.结果 在含氟1.0、2.0 mgF-/L培养液中作用24-72 h,成骨细胞的GSH水平多有不同程度的增高,在12.0、20.0 mgF-/L氟水平作用下,GSH水平达到高;染氟24-72 h的成骨细胞在0.5、1.0、2.0 mgF-/L培养液孵育下,细胞的GSSG水平有不同程度的下降(除48 h的0.5、1.0 mgF-/L组细胞外);暴露于氟24 h的成骨细胞在含氟0.5、2.0 mgF-/L培养液孵育下,细胞的GSH/GSSG比值有不同程度的提高;氟暴露48 h组,成骨细胞在2.0、8.0mgF-/L氟水平作用下,GSH/GSSG比值亦明显增加.结论 低剂量氟作用下GSH含量和GSH/GSSG比值增加,而GSSG水平下降,说明成骨细胞处于活跃的抗氧化状态,进一步证明了成骨细胞内氧化应激水平明显增强.
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基于主成分分析的茶叶预防肺癌药效物质研究
目的:采用主成分分析(PCA)法研究6种茶叶预防肺癌的药效物质基础.方法:以UPLC对各茶叶中各成分进行含量测定,MTT法检测CSE诱导的NHBE细胞的存活率,5,5-二硫二硝基苯甲酸(DTNB)比色法测定GSH/GSSG(还原型/氧化型谷胱甘肽)的比例,采用主成分分析计算共有峰面积的相关系数矩阵、特征值和方差贡献率,确定其具有预防肺癌的化学成分.结果:6种茶叶中龙井保护NHBE细胞损伤的作用强,其IC50为0.2559mg/mL,使GSH/GSSG的比例由0.142恢复至0.858,且具有剂量依赖性；主成分分析得出GCG预防肺癌的贡献率为79.602％,GA的贡献率为11.307％,两者之和为90.909％.结论:不同品种茶叶对NHBE细胞的保护作用不同,主成分分析法确定GCG和GA是茶叶中预防肺癌的主要活性成分.
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血清氧化-还原态的监测及其与细胞损伤的关系
目的:探讨如何评价体内的氧化还原状态及细胞的氧化还原态改变对细胞增殖、凋亡、损伤等的影响.方法:测定正常人血清的NADPH/NADP+和GSH/GSSG比值,以了解该两项指标对机体氧化还原态的监测能力.并在培养的内皮细胞中加入各种浓度的氧化剂过氧化氢(H2O2)和/或还原剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC),观察NADPH/NADP+和GSH/GSSG比值的变化与细胞活力及损伤之间的关系.以LDH释放率,细胞培养液中脂质过氧化物(LPO)的浓度,细胞增殖活性、细胞凋亡率,观察细胞的增殖、损伤及其与氧化-还原态变化的关系.结果:①在培养的内皮细胞中加入H2O2后,GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值明显降低,细胞氧化还原状态偏向氧化应激方向,细胞出现氧化应激损伤;脂质过氧化物(LPO)生成增多;LDH释放率增加;细胞增殖活力下降;凋亡率增高.氧化应激性损伤程度与GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值呈负相关(p＜0.05).②在各浓度H2O2组中加入0.5mmol@L-1NAC,GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值恢复至接近对照组,上述氧化应激性损害也受到了不同程度的抑制,并在一定范围内呈量效关系.③单独加入NAC,在高浓度NAC1mmol@L-1M和2 mmol@L-1时,GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值明显升高(VS Control,p＜0.01),细胞的氧化-还原态偏向还原应激方向,此时,细胞出现与氧化应激相似的损伤表现:低浓度的0.5mmol@L-1无明显改变.结论:上述结果提示细胞需要一个相对稳定的氧化还原状态,偏离氧化还原的稳态范围,无论是向过度氧化方向或是向过度还原方向,都会引起细胞的损伤.GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值是反映机体氧化还原状态的良好指标.
