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血清氧化-还原态的监测及其与细胞损伤的关系
目的:探讨如何评价体内的氧化还原状态及细胞的氧化还原态改变对细胞增殖、凋亡、损伤等的影响.方法:测定正常人血清的NADPH/NADP+和GSH/GSSG比值,以了解该两项指标对机体氧化还原态的监测能力.并在培养的内皮细胞中加入各种浓度的氧化剂过氧化氢(H2O2)和/或还原剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC),观察NADPH/NADP+和GSH/GSSG比值的变化与细胞活力及损伤之间的关系.以LDH释放率,细胞培养液中脂质过氧化物(LPO)的浓度,细胞增殖活性、细胞凋亡率,观察细胞的增殖、损伤及其与氧化-还原态变化的关系.结果:①在培养的内皮细胞中加入H2O2后,GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值明显降低,细胞氧化还原状态偏向氧化应激方向,细胞出现氧化应激损伤;脂质过氧化物(LPO)生成增多;LDH释放率增加;细胞增殖活力下降;凋亡率增高.氧化应激性损伤程度与GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值呈负相关(p＜0.05).②在各浓度H2O2组中加入0.5mmol@L-1NAC,GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值恢复至接近对照组,上述氧化应激性损害也受到了不同程度的抑制,并在一定范围内呈量效关系.③单独加入NAC,在高浓度NAC1mmol@L-1M和2 mmol@L-1时,GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值明显升高(VS Control,p＜0.01),细胞的氧化-还原态偏向还原应激方向,此时,细胞出现与氧化应激相似的损伤表现:低浓度的0.5mmol@L-1无明显改变.结论:上述结果提示细胞需要一个相对稳定的氧化还原状态,偏离氧化还原的稳态范围,无论是向过度氧化方向或是向过度还原方向,都会引起细胞的损伤.GSH/GSSG和NADPH/NADP+比值是反映机体氧化还原状态的良好指标.
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一种简便、准确的血清氧化及还原型辅酶II的分光光度测定法的建立
由于辅酶 II 在正常细胞稳态及许多代谢异常中均非常重要,寻找一个简便而可靠的方法测定氧化型及还原型辅酶 II 对于了解机体的氧化还原稳态将非常有益.本法是对Nisselbam法稍加改进,运用一个敏感的酶循环反应以分光光度法测定血清中的辅酶 II,结果显示标准曲线线性关系良好,加样回收较完全.用本法测定的27例健康献血员,血清NADPH、NADP+及其比值NADPH/NADP+分别为8.385±1.516nmol/ml,3.624±0.985nmol/ml,2.3612±0.805,男女性别无明显差异.本法灵敏、准确、重现性好、费用低、操作简便,是测定氧化型及还原型辅酶II的较佳选择.
关键词： NADPH/NADP+ 分光光度法 血清
