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H2O2对平滑肌细胞凋亡及p38MAPK活性的影响
目的: 了解H2O2对兔血管平滑肌细胞(VSMC)p38蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化的影响及其与细胞凋亡的关系.方法:取兔主动脉血管平滑肌细胞培养,加或不加H2O2孵育,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应(MTT)法检测平滑肌细胞活性,以Western杂交检测p38MAPK磷酸化.结果:①随着H2O2浓度增加,VSMC活性呈剂量依赖性降低;②磷酸化p38MAPK的表达随H2O2浓度的增高而增加,且磷酸化的p38MAPK在H2O2作用后15 min时达到峰值.③加用特异性的p38MAPK抑制剂SB203580后可显著降低p38MAPK的活化,并能逆转H2O2诱导细胞凋亡的作用.结论:H2O2通过激活p38MAPK而使平滑肌细胞凋亡增加,这也许是糖尿病患者更易患心血管疾病的原因之一.
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过氧化氢对小鼠脾细胞IL-2基因表达的影响
应用细胞免疫学和分子生物学的斑点杂交技术,探讨H2O2对小鼠脾细胞产生IL-2和IL-2mRNA表达的影响.结果示10-3～10-2mol.L-1 H2O2对小鼠脾细胞产生IL-2有抑制作用,并显著低于对照组(P<0.01);10-4mol.L-1有促进作用(P<0.01);10-8～10-5mol.L-1则影响不明显.斑点杂交结果示10-3mol.L-1 H2O2对小鼠脾细胞IL-2mRNA表达有抑制作用,10-4mol.L-1有促进作用,而10-5mol.L-1影响不明显.以上结果提示H2O2可能是通过影响IL-2mRNA的水平来影响IL-2的产生.
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HO-1介导H2O2 预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用
目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对H2O2 预处理的适应性细胞保护效应的介导作用.方法 PI染色流式细胞仪(Flow cytometer, FCM)检测PC12细胞凋亡,流式细胞仪检测PC12细胞HO-1蛋白的表达.结果 PC12细胞经10 μmol/L H2O2 预处理 90 min后,20、30、50、100 μmol/L H2O2 对PC12细胞凋亡的诱导作用明显下降;10 μmol/L H2O2 预处理 90 min后,PC12细胞HO-1蛋白表达量明显增加;给予10 μmol/L 的HO-1蛋白特异性阻断剂ZnPP后,可显著阻断10 μmol/L H2O2 预处理 90 min 对50 μmol/L H2O2 损伤PC12细胞的保护作用.结论 血红素氧合酶-1(HO-1)介导了H2O2 预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用.
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水中脉冲放电产生H2O2的研究
过氧化氢(H2O2)是强氧化剂,在治理污水中有十分重要的意义,对水中脉冲放电中电压对它的影响进行了研究.结果表明,电压越高,时间越长,H2O2的生成速率减小越快;不同气体成分和流量对H2O2生成也有影响.
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异丙酚对H2O2刺激下细胞内ASK1蛋白激活的影响
目的 探讨在H2O2刺激下,异丙酚对细胞中Daxx-ASK1信号通路的影响.方法 对体外培养的HEK293细胞分为对照组、H2O2刺激组以及H2O2刺激合并异丙酚处理组.采用免疫荧光、Western blot及MTT等方法,观察异丙酚预处理对H2O2刺激下的HEK293细胞存活率以及细胞中Fas死亡结构域相关蛋白(Daxx)的亚细胞定位以及凋亡信号调节激酶1(ASK1)激活的影响.结果 在200～500 μmol/L H2O2刺激下,异丙酚在一定程度上能有效保护细胞,缓解抗氧化应激损伤.进一步实验发现,H2O2刺激细胞后,与H2O2刺激组相比,异丙酚处理组细胞中Daxx蛋白大部分仍然聚集在细胞核中,只有少部分移人到细胞浆中,相应ASK1的激活程度也较低.结论 氧化应激刺激下,异丙酚可通过抑制细胞中Daxx蛋白的出核,进而抑制胞浆中ASK1蛋白的激活,从而起到保护细胞、抑制细胞死亡的效能.
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山楂中有机酸对H2O2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用
目的:探讨山楂中有机酸对H2O2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制.方法:将对数期生长的H9C2心肌细胞随机分为6组:空白对照组、模型组、NAC阳性对照组和山楂有机酸(浓度分别为6.25、25、100μg/mL)组.心肌细胞在100 μg/mL H2O2作用2h后,采用MTT法检测细胞增殖,利用试剂盒测定细胞外液LDH漏出量和GSH-Px活性及细胞内SOD、MDA水平.对心肌细胞进行HE染色,用光学显微镜观察细胞形态变化.结果:与模型组比较,山楂有机酸可促进H9C2心肌细胞增殖,使LDH漏出量和MDA含量显著降低,SOD和GSH-Px活性显著升高(P＜0.05～P＜0.001),并能明显抑制H2O2引起的心肌细胞形态改变.结论:山楂有机酸对H2O2诱导的H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,作用机制可能和有效地改善细胞内抗氧化酶的活性,抑制氧化应激损伤有关.
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远志皂苷对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用
目的:观察远志皂苷(Tenuigenin TEN)对过氧化氢(H2O2)所致PC12细胞损伤的保护作用.方法:以H2O2损伤PC12细胞为氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞存活率;采用紫外分光光度法测定LDH漏出量,观察细胞的损伤程度;硫代巴比妥酸法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性.结果:TEN能明显改善H2O2导致的细胞损伤,与H2O2处理组相比,20、10 mg/L组可使细胞存活率升高,LDH漏出量明显降低,降低MDA含量,提高SOD活性.结论:TEN对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用.
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菟丝子黄酮类组分对H2O2损伤PC12细胞的保护作用
目的:探讨菟丝子中黄酮类组分(CF)对氧化损伤的肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(Pheochromocytoma,PC12)的保护作用及其可能的作用机制.方法:从菟丝子中提取纯化黄酮类活性成分(CF),采用MTT法检测细胞活力,DPPH测定CF在无细胞体系中对自由基的清除能力,利用Hoechst 33258染色和流式细胞仪技术对凋亡细胞进行形态观测和比例测定.结果:0.3～0.5 mmol/L H2O2能够剂量与时间依赖性降低PC12细胞的存活率,诱导细胞凋亡.不同剂量CF预处理可提高PC12细胞存活率,明显抑制细胞的凋亡,降低细胞的凋亡比率;CF对DPPH自由基的清除率呈剂量依赖性增强.结论:CF对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用,其机制可能是通过清除自由基、提高抗氧化酶活性从而抑制细胞的凋亡.
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H2O2对五味子鲜果次生代谢影响及机制研究
目的:探讨外源H2O2对五味子鲜果次生代谢的影响及其机制.方法:采用0.004、0.4和40 μmol/LH2O2处理五味子鲜果,研究H2O2、抗氧化酶活性及木脂素类成分积累三者之间关系.结果:在外源H2O2的作用下,种子内的H2O2含量在第5、6天才开始升高.超氧化物歧化酶(SOD)变化无规律,抗坏血酸过氧化物酶(APX)无明显变化;过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)在前4天无明显变化,第5、6天活性升高.苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性与CAT和POD表现出相同的变化趋势,在第5、6天显著升高.PAL活性升高促进木脂素类成分生物合成,0.4 μmol/L H2O2处理组五味子果实中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素含量比对照分别提高26.6％、26.5％、35.4％、16.8％和27.3％.结论:H2O2提高了五味子抗氧化酶活性和次生代谢水平,促进五味子木脂素类成分的生物合成,提高五味子药材的质量.
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芒果苷对H2O2诱导的BRL细胞氧化损伤的保护作用
目的 探讨芒果苷对过氧化氢诱导的正常大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用.方法 选取正常大鼠肝细胞株BRL,通过过氧化氢诱导法制备细胞氧化损伤模型,实验设对照组、H2O2组、芒果苷组.HE染色、台盼蓝染色观察细胞形态变化和存活率变化;比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达变化.结果 对照组BRL细胞贴壁生长良好,排列紧密.H2O2诱导后细胞形态不规则,胞膜皱缩,贴壁能力下降;细胞存活率降低;抗氧化酶SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P＜0.05);Bax和Caspase-3蛋白表达升高(P＜0.05)、Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05).与H2O2组相比,芒果苷可显著改善H2O2引起的细胞形态变化,提高细胞存活率;提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P＜0.05);抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P＜0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P＜0.05).结论 芒果苷对BRL细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与其提高细胞清除氧自由基能力和抑制细胞凋亡有关.
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西红花酸对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用
目的 通过H2O2诱导PC12细胞损伤,建立氧化应激损伤的体外模型,以探讨西红花酸对细胞损伤的保护作用及其相关机制.方法 观察不同浓度(0、50、100、200、300、400 μmol/L)H2O2损伤PC12细胞12 h,用CCK-8检测细胞活力；不同浓度(0.1、1、5、10 μmol/L)西红花酸预处理PC12细胞24 h,观察西红花酸对H2O2(200 μmol/L)损伤细胞后的恢复作用,CCK-8检测细胞活力；罗丹明Rh123染色,流式检测线粒体膜电位(MMP)；DCF-DA染色荧光照相术检测活性氧(ROS)水平；Western blot检测磷酸化ERK1/2的表达情况.结果 H2O2(0～400 μmol/L)作用PC12细胞12 h后,细胞活力分别为(100±4.1)％、(102±1.9)％、(89±11.2)％、(52±2.6)％、(42±1.6)％、(8±0.4)％,细胞损伤呈明显的浓度依耐性;西红花酸预处理后,细胞活力由(45.12±3.15)％,分别上升为(51.88±4.24)％、(65.14±8.19)％、(57.66±5.58)％、(53.61±4.57)％；西红花酸(1 μmol/L、5μmol/L)预处理组减少了线粒体膜电位(MMP)的下降,有效清除活性氧(ROS),激活磷酸化ERK1/2.结论 上述实验表明西红花酸能对抗H2O2诱导的氧化应激损伤,表明西红花酸有抗氧化作用.
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多光谱单细胞凝胶电泳图像分析系统及其应用
设计了一套多光谱单细胞凝胶电泳(SCGE)图像分析系统,利用该系统能简便、快捷、准确地同时获得单细胞彗星图像包括彗星、彗星尾、彗星头参数的多个彗星分析指标.并使用该系统测量了H2O2致淋巴细胞DNA损伤的作用,实验证明,该系统可较好的满足SCCE图像的分析要求.
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人参皂甙Rd减轻H2O2介导的小胶质细胞氧化应激损伤
目的 探讨人参皂甙Rd能否对抗H2O2刺激小胶质细胞引起的氧化应激损伤及对小胶质细胞生物功能的影响. 方法 实验分为空白对照组、人参皂甙Rd组、H2O2组、人参皂甙Rd10 μmol/L+H2O2组、人参皂甙Rd 20μmol/L+H2O2组.空白对照组为小鼠小胶质细胞系N9细胞在CO2孵箱孵育24 h;人参皂甙Rd组应用20 μmol/L人参皂甙Rd处理N9细胞24 h;H2O2组应用700 μmol/L H2O2处理N9细胞24 h;人参皂甙Rd 10 μmol/L+H2O2组、人参皂甙Rd 20 μmol/L+H2O2组分别应用10 μmol/L、20 μmol/L人参皂甙Rd预处理N9细胞24 h,然后加入700 μmol/L H2O2作用24 h.处理结束后,应用MTT法检测各组细胞活力,应用2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,应用四甲基罗丹明乙酯(TMRE)检测线粒体膜电位(MMP),应用Western blotting检测脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达水平. 结果 与空白对照组、人参皂甙Rd组相比,H2O2组细胞存活率明显下降,ROS水平明显升高,MMP水平明显降低,差异均有统计学意义(P＜0 05);与空白对照组相比,人参皂甙Rd组BDNF蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与H2O2组相比,人参皂甙Rd 10μmol/L+ H2O2组、人参皂甙Rd 20μmol/L+ H2O2组细胞存活率明显升高,ROS水平明显下降,MMP水平明显增高,BDNF蛋白表达水平增高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 人参皂甙Rd能够对抗H2O2介导的小胶质细胞氧化应激损伤,且能促进小胶质细胞分泌BDNF,对小胶质细胞有显著的保护作用.
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依达拉奉对H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用
目的 研究依达拉奉对H2O2诱导HepG2细胞损伤的保护作用.方法 以400μmol·L-1的H2O2诱导HepG2细胞氧化应激损伤,MTT法测定细胞存活率,ELLSA法测定细胞中丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平的变化.结果 依达拉奉可降低H2O2引起的细胞凋亡和细胞内MDA表达水平,升高GSH-PX和T-SOD表达水平.结论 依达拉奉对H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激损伤有保护作用.
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没食子酸丙酯对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响及其作用机制
目的 探讨没食子酸丙酯(propyl gallate,PG,赤芍801)对H2O2诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧化损伤的影响及其作用机制.方法 将SH-SY5Y细胞均分为对照组、H2O2模型组、PG1组、PG2组和PG3组,对照组常规加入DMEM/F12培养液培养;H2O2模型组加入H2O2 200tμmol·L-1; PG1组加入PG 20 μmol·L-1+H2O2 200 μmol· L-1; PG2组加入PG 40 μmol·L-1+H2O2 200 μmol· L-1; PG3组加入PG 80 μmol·L-1+H2O2 200μmol· L-1.比较5组SH-SY5Y细胞的增殖活性,细胞培养物上清中8-OHdG,细胞内ROS、LDH释放量,Hoechst 33258染色结果、细胞周期变化情况及Caspase-3酶活性.结果 H2O2模型组细胞存活率显著低于对照组,细胞培养物上清中8-OHdG水平显著高于对照组,ROS水平显著高于对照组,LDH释放量显著高于对照组,具有非常显著性差异(P＜ 0.01); PG1组、PG2组和PG3组细胞存活率均显著高于H2O2模型组,细胞培养物上清中8-OHdG水平均显著低于H2O2模型组,ROS水平均显著低于H2O2模型组,LDH释放量均显著低于H2O2模型组,差异具有统计学意义(P＜ 0.05); PG可显著改善SH-SY5Y细胞凋亡情况,且具有剂量依赖关系;H2O2模型组G0/G1期百分率显著高于对照组,S期、G2/M期和PI均显著低于对照组,差异具有统计学意义(P＜ 0.05); PG2组、PG3组G0/G1期百分率显著低于H2O2模型组,S期、G2/M期和PI均显著高于H2O2模型组,差异具有统计学意义(P＜ 0.05); H2O2模型组Caspase-3酶活性显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);PG2组和PG3组Caspase-3酶活性显著低于H2O2模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PG在一定剂量范围内对H2O2诱导的SH-SYSY神经细胞损伤具有明显的保护作用,其保护效应可能与清除ROS,减轻DNA氧化损伤,抑制线粒体通路介导的细胞凋亡有关.
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黄芪总皂苷对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用
目的 研究黄芪总皂苷(ASTs)对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用及相关调控蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响.方法 (1)常规方法培养大鼠乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、模型组及黄芪总皂苷4个剂量组(20,40,80,100 mg·L-1),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察黄芪总皂苷不同浓度对H2O2损伤心肌细胞存活率的影响； (2)乳鼠心肌细胞培养后分为正常对照组、模型组、黄芪总皂苷(100 mg·L-1)预处理组,细胞免疫组化法和免疫印迹法(Western-blotting)分别检测Bcl-2、Bax、Hsp-70、Caspase-3的表达.结果 (1)各黄芪总皂苷各组与模型组比较,细胞存活率明显增高,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜ 0.01),且与黄芪总皂苷呈剂量依赖性；(2)与正常对照组比较,模型组Bcl-2、Hsp-70有少量表达,Bax、Caspase-3表达明显增多,黄芪总皂苷(100 mg·L-1)组与模型组比较,明显促进Bcl-2、Hsp-70的表达,降低Bax、Caspase-3的表达.结论 黄芪总皂苷对心肌细胞具有良好的抗氧化保护作用,且呈剂量依赖性,其作用机制可能是通过上调Bcl-2、Hsp-70及下调Bax、Caspase-3的表达来实现.
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化瘀祛痰方药及其拆方对H2O2诱导EA.hy926细胞凋亡的影响及机制研究
目的 探讨化瘀祛痰方药及其拆方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响及其机制.方法 40只SD大鼠随机分为5组,即全方组、补气组、化瘀组、祛痰组、空白血清对照组.各组大鼠分别以相应中药煎剂或生理盐水连续灌胃9d,末次灌胃给药2h后,腹主动脉采血,离心后分离血清.体外培养EA.hy926细胞,随机分为7组,即①正常对照组、②H2O2刺激组、③全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组、⑦空白血清对照组.其中②组加入终浓度为300 μmol·L-1 H2O2,③～⑦组用各组合药血清(浓度为10％)预处理24 h后加入终浓度为300 μmol·L-1 H2O2,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定.采用流式细胞术检测EA.hy926细胞凋亡；实时定量反转录—聚合酶链反应(Real-time PCR)定量分析bcl-2、bax、caspase-3 mRNA表达；比色法检测caspase-3活性；蛋白质免疫印记技术(Western-blot)检测bcl-2、bax蛋白表达.结果 与正常对照组相比,H2O2刺激后EA.hy926细胞凋亡率、bax、caspase-3表达显著增加,而bcl-2表达显著减少.全方组细胞凋亡率、bax、caspase-3水平较H2O2刺激组相比显著降低,而bcl-2水平显著升高,且全方组干预作用强于各拆方组.拆方各组中,化瘀组、祛痰组细胞凋亡率显著降低,化瘀组bax、caspase-3表达显著减少,而bcl-2表达显著增加.结论 化瘀祛痰方药全方及化瘀拆方可显著抑制内皮细胞凋亡,影响凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达,这可能是其抗AS的作用机制之一.
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三黄茵赤方含药血清对LO2细胞DNA氧化损伤的影响
目的 探讨三黄茵赤方含药血清对H2O2诱导LO2细胞DNA氧化损伤的保护作用.方法 采集三黄茵赤方含药血清,以LO2细胞株为研究对象,通过H2O2诱导LO2细胞DNA氧化损伤模型,实验分正常对照组、H2O2模型组、三黄茵赤方含药血清5％、10％、15％浓度组、维生素E组,采用倒置显微镜观察各组形态,CCK-8法测定细胞存活率,生化法检测细胞内SOD、CAT和GSH-PX活性,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,ELISA检测细胞内8-OHdG含量,彗星实验检测细胞DNA损伤情况.结果 与H2O2模型组比较,三黄茵赤方含药血清10％、15％浓度组、维生素E组均能提高细胞存活率(P＜0.05),增强细胞内SOD、CAT、GSH-PX活性(P＜0.05),改善细胞对ROS清除能力(P＜0.01),降低细胞内8-OHdG含量(P＜0.01),减低细胞拖尾率、尾长、尾矩及Olive尾矩(P＜0.05).结论 三黄茵赤方含药血清对H2O2诱导LO2细胞DNA氧化性损伤具有保护作用,以15％浓度含药血清组作用显著.
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PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用
目的 探讨磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路对H2O2诱导的PC12细胞凋亡作用的影响.方法 利用PLC-γ1特异性抑制剂U73122(10 pμmol/L)预处理PC12细胞,阻断50 μmol/LH2O2诱导的PLC-γ1信号通路,Hoechst/P1双染观察细胞形态改变,MTT评估细胞活力,流式细胞仪分析凋亡和坏死细胞比例,DNA电泳验证细胞凋亡状态的改变.结果 H2O2对PC12细胞活力的影响呈时效和量效关系.PLC-γ1信号通路阻断后,PC12细胞出现了凋亡形态学改变,细胞活力明显降低.流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达35.7%,DNA电泳呈现明显的梯形条带.结论 PLC-γ1信号通路在50 μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡中发挥重要的保护作用.
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活性氧促使L6成肌细胞的分化
目的探讨氧化应激对L6成肌细胞生长分化的影响.方法MTT法检测H2O2对L6细胞活力的影响;观察H2O2引起的细胞形态学变化,RT-PCR检测myogenin基因表达水平.结果在较短的处理时间内(1 h),低浓度的活性氧(50 μmol/LH2O2)有利于细胞的生长(P＜0.05);H2O2处理12 h后,50和150 μmol/L的H2O2能够诱导成肌细胞分化的标记分子-myogenin基因的表达,形态学研究结果表明H2O2能够诱导肌管的形成,促使成肌细胞的分化.结论活性氧可能是细胞内诱导细胞生长与分化的信号分子.
