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促酰化蛋白通过PLC信号途径调控脂滴相关蛋白TIP47的表达
有显著的下调作用;(3)U73122和ASP处理后脂肪细胞中TIP47mRNA和蛋白表达水平较仅ASP处理的脂肪细胞有显著降低,而较仅U73122处理的脂肪细胞有明显增高.结论 PLC信号途径参与ASP调节TIP47表达的信号转导,从分子水平深化了对ASP成脂作用的认识,为肥胖症的认识及防治开拓新的思路.
关键词： 促酰化蛋白 U73122 TIP47 313-L1脂肪细胞 肥胖症 -
U73122和SQ22536对豚鼠视网膜色素上皮细胞分泌bFGF的影响
目的:观察磷脂酶C抑制剂U73122和腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536对豚鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞分泌碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响.方法:培养原代豚鼠RPE细胞,传2代后用于实验.用含U73122及SQ22536浓度均为l×10-5mol/L的两种培养液培养RPE细胞,设含有单纯溶质的培养液作为对照.分别于实验2、4、6、8、16、24、48h收集培养液,ELISA法检测bFGF的含量.结果:ELISA结果显示:加入1×10-5mol/ L U73122后,实验组bFGF的分泌量与对照组相比在2、4、6、8、16h减少(P＜0.05),24、48h变化无统计意义(P＞0.05);而SQ22536组与对照组相比RPE细胞bFGF的分泌量在各时间点均有减少(P＜0.05).结论:U73122和SQ22536对RPE细胞bFGF的分泌均有抑制作用.提示RPE细胞内可能是通过磷脂酶C信号途径和腺苷酸环化酶信号途径共同调控bFGF的分泌.
关键词： 视网膜色素上皮细胞 碱性成纤维细胞生长因子 U73122 SQ22536 豚鼠 -
阻断磷脂酶C-γ1信号通路对卵巢癌细胞凋亡的影响
目的 观察阻断磷脂酶C(PLC)-γ1信号通路对卵巢癌细胞凋亡的影响.方法 用化学阻断剂U73122处理卵巢癌细胞,光镜观察细胞形态学改变,MTT法评价细胞生长抑制水平,流式细胞仪分析细胞周期变化及细胞凋亡率.结果 磷脂酶C信号通路被阻断后,卵巢癌细胞出现明显的细胞凋亡形态学改变,细胞存活率显著下降,流式细胞仪检测到凋亡细胞,与浓度及时间呈一定关系.结论 阻断磷脂酶C-γ1能启动卵巢癌细胞的凋亡.
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足细胞损伤的诱导途径：血管紧张素Ⅱ-足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6信号通路
背景：瞬时受体电位阳离子通道蛋白6是足细胞上一种新发现的阳离子通道蛋白，是组成裂隙隔膜重要蛋白之一，其表达变化与糖尿病肾病蛋白尿密切相关。目的：观察高糖刺激对足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6表达的影响，探讨糖尿病肾病发生发展的可能机制。方法：以永生化小鼠足细胞(MPC5)作为实验对象，将其设为：正常糖组(D-葡萄糖5.6 mmol/L)；渗透压对照组(D-葡萄糖5.6 mmol/L+甘露醇25 mmol/L)；高糖组(D-葡萄糖30 mmol/L)；缬沙坦组(D-葡萄糖30 mmol/L+10-5结果与结论：与正常糖组相比，高糖组足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、血管紧张素Ⅱ蛋白及 mRNA水平明显升高(P<0.01)，nephrin mRNA及蛋白水平明显降低(P<0.01)；与高糖组相比，缬沙坦组瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、血管紧张素Ⅱ的表达显著降低(P<0.05，P<0.01)；高糖+U73122组瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、血管紧张素Ⅱ表达较高糖组明显下降(P<0.05，P<0.01)；渗透压对照组与正常糖组之间各因子差异无显著性意义(P>0.05)。结果说明高糖可能通过血管紧张素Ⅱ-瞬时受体电位阳离子通道蛋白6反馈信号通路损伤足细胞，同时也为血管紧张素受体拮抗剂通过此通路保护足细胞而治疗糖尿病肾病的提供了一新的理论基础。 mol/L缬沙坦)；高糖+U73122组(D-葡萄糖30 mmol/L+10μmol/L磷脂酶抑制剂U73122)。各组细胞干预时间为48 h。采用荧光定量PCR和western-blot方法检测各组足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、nephrin、血管紧张素ⅡmRNA和蛋白的表达。
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磷脂酶C抑制剂U73122对COPD大鼠肺组织内MMP-9,MMP-12表达影响的实验研究
目的:探讨磷脂酶C抑制剂U73122对COPD大鼠肺组织内MMP-9,MMP-12表达的影响.方法:通过烟熏及气管内注入脂多糖(LPS)建立COPD大鼠模型,从第1d起通过尾静脉注射磷脂酶C(PLC)抑制剂U73122(以U73343为阴性对照),持续28天.第28d,观察各组大鼠肺组织病理变化,western blot法检测肺组织中MMP-9、MMP-12表达水平.结果:模型组和干预组大鼠MMP-9、MMP-12蛋白表达高于对照组(P＜0.05),干预组低于模型组(P＜0.05).干预组肺组织形态学改变较模型组改善(P＜0.05).结论:U73122通过抑制磷脂酶C(PLC)信号途径减少了COPD中MMP9、MMP12的表达,减轻肺组织结构破坏.
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M3 受体激动剂对慢性心衰大鼠心肌ICa-L及[Ca2+]i的影响
目的 研究M3 受体激动剂胆碱( choline)对慢性心力衰竭( CHF)大鼠心肌的保护作用及可能的机制. 方法CHF大鼠Ⅱ型胶原酶消化分离单个心肌细胞,全细胞膜片钳技术记录L-型钙电流( ICa-L )变化;激光扫描共聚焦技术观测细胞内钙([Ca2+]i)变化. 结果 膜片钳实验结果显示,与CHF组比较,choline组ICa-L电流密度明显增高( n=6,P<0. 01);预敷U73122后加入choline,与choline组比较, ICa-L电流密度明显下降(n=6,P<0. 01). 共聚焦实验结果显示,与CHF组比较,choline组[ Ca2+] i 明显升高( n=80,P<0. 01);与 choline 组比较,U73122 与 choline 共同孵育组[Ca2+]i 升高幅度不明显(n=80, P<0. 01). 预先给予4-DAMP可部分逆转choline升高ICa-L及[ Ca2+] i 的作用. 结论 M3 受体对CHF大鼠的心肌保护作用可能是通过Gq/11-PLC途径开放L-型钙通道,促进Ca2+内流,使[ Ca2+] i 增加.
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PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用
目的 探讨磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路对H2O2诱导的PC12细胞凋亡作用的影响.方法 利用PLC-γ1特异性抑制剂U73122(10 pμmol/L)预处理PC12细胞,阻断50 μmol/LH2O2诱导的PLC-γ1信号通路,Hoechst/P1双染观察细胞形态改变,MTT评估细胞活力,流式细胞仪分析凋亡和坏死细胞比例,DNA电泳验证细胞凋亡状态的改变.结果 H2O2对PC12细胞活力的影响呈时效和量效关系.PLC-γ1信号通路阻断后,PC12细胞出现了凋亡形态学改变,细胞活力明显降低.流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达35.7%,DNA电泳呈现明显的梯形条带.结论 PLC-γ1信号通路在50 μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡中发挥重要的保护作用.
