全氟辛烷磺酸对大鼠海马神经细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨全氟辛烷磺酸(Perfluorooctanesulfonate,PFOS)低剂量长期经口染毒对大鼠海马细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.

铅对小鼠学习记忆及脑海马细胞内钙库释放的影响

目的探讨铅对小鼠学习记忆和海马细胞内钙库Ca2+释放的影响.方法用水迷宫实验测定小鼠的空间学习记忆能力;采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞,用IP3敏感钙库和IP3非敏感钙库的特异性拮抗剂肝素和普鲁卡因刺激海马细胞,以弗拉吐(Fura-2)作Ca2+荧光探针测定铅对海马细胞[Ca2+]i的影响.结果在水迷宫实验中,结果表明慢性铅暴露可明显损伤仔鼠的空间定位航行能力,损伤程度与饮用铅的浓度成正相关.与对照组比较,25μmol·L-1铅可致分离的小鼠海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i显著性增高(P＜0.05);而30μg·ml-1的三磷酸肌醇(IP3)敏感钙库特异性拮抗剂Heparin和0.1mg·ml-1的非IP3敏感钙库的特异性拮抗剂procaine可拮抗铅引起的海马细胞[Ca2+]i增高.结论慢性铅暴露可致小鼠空间学习记忆能力下降;高水平的铅可促进小鼠海马细胞内IP3敏感和非IP3敏感的两种内质网钙库释放,致海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i升高.

小檗碱对DHF大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度的影响

目的:观察小檗碱(Ber)对舒张性心力衰竭(diastole heart failure,DHF)大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度[Ca2+]的影响.方法:Wistar大鼠腹主动脉缩窄法建立DHF模型;术后4周,模型大鼠随机分为DHF模型组,Ber高、中、低剂量组(63,42,21 mg·kg-1·d-1)4组(n=10),另有假手术组10只.连续给药4周后,应用十六导生理记录仪测定血流动力学指标;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)扫描用F1uo-3AM负载好的心肌细胞内的荧光强度(FI)来表示[Ca2+]i.结果:模型组与假手术组比,左心室收缩压(LVSP)、左室内压大上升速率(+dp/dtmax)无显著变化,左心室舒张末期内压(LVEDP)显著升高(P＜0.01),左室内压大下降速率(-dp/dtmax)显著降低(P＜0.01),左室松弛时间常数(T)数值显著延长(P＜0.01);心肌细胞内[Ca2+];明显增高(P＜0.05).与模型组比较,Ber高剂量组比中剂量组低剂量组更显著降低LVEDP,显著升高-dp/dtmax(P＜0.01),显著缩短T(P＜0.01),显著降低心肌细胞内[Ca2+];(P＜0.01).结论:Ber高剂量组可以明显改善DHF大鼠血流动力学和降低心肌细胞内[Ca2+]i.

羊栖菜多糖诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的:揭示羊栖菜多糖(SFPS)的抗肿瘤作用机制.方法:采用流式细胞仪观察羊栖菜多糖对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响.采用Fluo-3/AM探针标记,激光共聚焦技术观测细胞内[Ca2+]i.结果:羊栖菜多糖可阻滞SGC-7901人胃癌细胞由G0/G1期进入S期,升高细胞凋亡指数(APO%).可使SGC-7901细胞内[Ca2+]i先升高然后下降,给CaCl2后,[Ca2+]i又升高.结论:羊栖菜多糖通过升高肿瘤细胞内[Ca2+]i启动肿瘤细胞凋亡机制而达到抗肿瘤的作用,[Ca2+]i升高时Ca2+来源于细胞内钙库释放.

泻火解毒、消瘀除痰法对脑出血大鼠钙及细胞间黏附分子-1的影响

目的 探讨泻火解毒、消瘀除痰法对脑出血(ICH)大鼠钙([Ca2+]i)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的作用及可能机制.方法 将成年SD大鼠随机分为6组:正常对照组、手术对照组、模型对照组、脑清汤(NQT)大、小剂量组、清开灵注射液(QKL)对照组.胶原酶注入右侧尾壳核ICH造模,荧光示踪法检测对ICH大鼠脑细胞[Ca2+]i的影响,免疫组织细胞化学技术观察在ICH不同时段对ICAM-1表达的影响.结果 NQT大、小剂量组及QKL对照组能显著拮抗脑细胞[Ca2+]i升高(P＜0.01),显著抑制ICAM-1表达,并使其表达持续时间缩短.结论 NQT可阻止钙超载的发生,精密调节细胞因子网络、阻滞细胞因子和炎症介质释放而抗炎,从而保护神经元.

狼疮定颗粒对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞凋亡及其[Ca2+]i的影响

目的 观察狼疮定颗粒对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞(PBLC)凋亡及其[Ca2+]i的影响.方法 55例女性SLE患者随机分成中西药组(28例)和西药组(27例).西药组口服强的松为主治疗,中西药组在西药基础上加狼疮定颗粒治疗.两组连续治疗3个月,比较两组治疗前后PBLC在体外培养不同时间的凋亡率,以及[Ca2+]i水平变化.结果 SLE患者PBLC的0时相凋亡率明显降低,但随体外培养时间延长而增加速率变大,SLE患者PBLC的[Ca2+]i下降;中西药组能明显改善SLE患者PBLC凋亡的异常,升高[Ca2+]i水平,且与西药组比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论 狼疮定颗粒在调整SLE淋巴细胞凋亡异常方面与西药强的松有很好的协同作用,其作用机制可能与其能促进SLE患者PBLC胞外钙内流作用有关.

流体切应力对中性粒细胞内Ca2+的影响

流体切应力是中性粒细胞的重要功能环境,但以往的研究很少涉及力学作用对中性粒细胞的影响.我们利用旋转粘度仪提供的流体切应力作用于分离的中性粒细胞,采用Fura-2/AM与细胞内游离Ca2+结合,检测其荧光强度,研究不同力学条件下细胞内游离Ca2+浓度的变化情况;另外,分别以f-MLP和TNF两种刺激因子作用中性粒细胞,使之激活,与此同时考察流体力学作用对中性粒细胞激活程度的影响.结果显示:定常剪切流,切变率由低变高时,中性粒细胞内的游离Ca2+水平先是显著下降,切变率达到一定程度后,[Ca2+]i逐渐回升,并且会超过静止时的水平;两种刺激因子在静态下激活中性粒细胞均可使游离Ca2+大幅度上升,同时给予定常流作用,在较低切变率作用下,这一上升被明显抑制,当切变率升高到一定程度后,[Ca2+]i回复到静态激活水平甚至更高.正弦振荡剪切作用于中性粒细胞,[Ca2+]i随大切变率增大而升高,当激活剂和剪切流同时作用时,[Ca2+]i随大切变率升高而下降,逐渐接近大切变率相同时的单纯振荡切应力作用的水平.由此我们认为:体内不同血流环境将影响中性粒细胞的[Ca2+]i,在不同循环部位的血管血流中,流体切应力对中性粒细胞的[Ca2+]i有着不同的调节作用.

地塞米松诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中［Ca2+］i的变化

目的研究地塞米松诱导凋亡小鼠腹腔巨噬细胞［Ca2+］i的变化及其对凋亡的影响以及信使分子对凋亡和［Ca2+］i变化的影响。方法激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记术。结果 1.凋亡巨噬细胞内fluo-3荧光强度逐渐增强。胞内钙库受体抑制剂，尤其是Ca2+内流阻断剂抑制细胞内fluo-3荧光强度变化，同时使细胞凋亡率降低； 2. staurosporine和DcAMP显著降低巨噬细胞凋亡率并明显抑制fluo-3荧光强度改变。genistein和亚甲蓝稍降低巨噬细胞凋亡率，并降低fluo-3荧光强度升高幅度。结论 1.胞外Ca2+内流和内源性Ca2+释放，主要是胞外Ca2+内流使［Ca2+］i逐渐升高并促进巨噬细胞凋亡； 2. PKC促进［Ca2+］i升高和巨噬细胞凋亡。cAMP抑制［Ca2+］i升高和巨噬细胞凋亡。cGMP、TPK降低［Ca2+］i升高幅度并稍抑制巨噬细胞凋亡。结果提示，［Ca2+］i是信使分子调控巨噬细胞凋亡的主要靶点。

鞘氨醇调节人胰腺癌细胞株JF305生长和钙代谢

目的:观察鞘氨醇对人胰腺癌细胞株JF305的增殖作用;观察鞘氨醇对人胰腺细胞株JF305内Ca2+浓度的影响,探讨鞘氨醇的细胞信使作用.方法:细胞培养后,分别加入不同浓度的鞘氨醇,应用四甲基偶氮唑盐MTT比色法来观察细胞增殖程度;应用Fura-2/AM荧光比色测定[Ca2+]i结果:鞘氨醇促进人胰腺癌细胞株JF305的生长,促进JF305内Ca2+的生成,3 min内达峰值,并在0.5μmol/L～2.0 μmol/L时呈剂量依赖性.结论:鞘氨醇能促进人胰腺癌细胞株JF305增殖;鞘氨醇的信使作用是通过刺激Ca2+转运的和Ca2+的释放.

Propofol and remifentanil alter intracellular Ca2+ concentration ([Ca2+]i) in neural stem/progen-itor cells by activating γ-aminobutyric acid type A receptors and by reducing testosterone levels. However, whether this process affects neural stem/progenitor cell proliferation and differenti-ation remains unknown. In the present study, we applied propofol and remifentanil, alone or in combination, at low, moderate or high concentrations (1, 2–2.5 and 4–5 times the clinically effective blood drug concentration), to neural stem/progenitor cells from the hippocampi of newborn rat pups. Low concentrations of propofol, remifentanil or both had no noticeable effect on cell proliferation or differentiation; however, moderate and high concentrations of propofol and/or remifentanil markedly suppressed neural stem/progenitor cell proliferation and differen-tiation, and induced a decrease in [Ca2+]i during the initial stage of neural stem/progenitor cell differentiation. We therefore propose that propofol and remifentanil interfere with the prolifer-ation and differentiation of neural stem/progenitor cells by altering [Ca2+]i. Our ifndings suggest that propofol and/or remifentanil should be used with caution in pediatric anesthesia.

S波段高功率微波辐射对原代培养乳鼠心肌细胞的影响

目的 研究S波段高功率微波(HPM)辐射后乳鼠心肌细胞的损伤效应及其机制.方法 采用平均功率密度为5～30 mW/cm2的S波段HPM模拟源辐射原代培养的乳鼠心肌细胞,应用流式细胞术、原子力显微镜观察辐射后心肌细胞凋亡和坏死率、[Ca2+]i及细胞膜形态.结果 10～30 mW/cm1的S波段HPM辐射后6 h,心肌细胞凋亡和坏死率增加(P＜0.05或P＜0.01),且随辐射剂量增大,坏死细胞增多;30 mW/cm2HPM辐射后即刻[Ca2+]i升高(P＜0.01),细胞膜发生穿孔.结论 10～30 mW/cm2的S波段HPM辐射可造成心肌细胞凋亡和坏死,[Ca2+]i升高以及细胞膜穿孔,是S波段HPM辐射致心肌细胞损伤的重要机制.

胍丁胺对谷氨酸和高钾诱发海马神经元细胞内钙离子浓度升高的影响

目的 观察胍丁胺对原代培养的大鼠海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2+]I)的影响及其对谷氨酸和高钾诱发[Ca2+]I升高的影响,探讨胍丁胺对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和电压依赖性钙通道(VDCC)的作用.方法 原代培养的新生大鼠海马神经元,在细胞外液中加入1、10、100、1 000μmol·L-1胍丁胺,再用300μmol·L-1谷氨酸诱发NMDA受体通道的开放,或用50mmol·L-1 KCl诱发VDCC的开放,应用激光共聚焦扫描技术,动态观察胍丁胺对[Ca2+]I的影响.结果 1～1 000μmol·L-1胍丁胺对细胞内基础钙荧光强度无影响,1、10、100、1 000μmol·L-1胍丁胺使谷氨酸引起的[Ca2+]I升高大变化率由对照组的372%分别降至349%、327%、297%、233%.其中100、1 000μmol·L-1胍丁胺对谷氨酸引起的[Ca2+]I升高的抑制作用与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).仅1 000μmol·L-1胍丁胺能抑制KCl诱发的[Ca2+]I升高(P＜0.01),低剂量组对KCl诱发的[Ca2+]I的变化无影响.结论 胍丁胺可以阻断NMDA受体耦联钙离子通道而抑制钙离子的内流,高浓度时也抑制VDCC.

蚓激酶的心肌保护作用及机制

目的研究蚓激酶对心肌缺血的保护作用,并进一步探讨其可能机制.方法采用结扎大鼠左冠状动脉前降支制备急性心肌缺血模型,观察蚓激酶对心肌缺血的保护作用;应用全细胞膜片钳和激光扫描共聚焦技术,研究蚓激酶对L-型钙电流(ICa-L)和细胞内游离钙离子浓度的影响.结果蚓激酶80,40和20 mg·kg-1剂量组均可缩小心肌梗死面积.膜片钳研究结果表明,当刺激电压为+10 mV时,10和50 μmol·L-1蚓激酶使ICa-L降低共聚焦结果显示,在静息状态下,10 μmol·L-1蚓激酶对[Ca2+]i无明显影响;但10 μmol·L-1蚓激酶对60 mmol·L-1KCI诱导的[Ca2+]i升高却有明显抑制作用,并且在整个实验过程中(240 s)并未出现明显的峰值.结论蚓激酶对大鼠心肌缺血具有保护作用,其机制可能与抑制ICa-L及下调[Ca2+]i有关.

银杏叶提取物对低氧复氧、H2O2和谷氨酸损伤时谷氨酸引起的大鼠星形胶质细胞[Ca2+]i变化的影响

目的研究银杏叶提取物对低氧复氧、H2O2和L-谷氨酸损伤时谷氨酸升高大鼠星形胶质细胞[Ca2+]i的影响.方法钙荧光探针Fluo-3/AM标记胞浆内游离钙离子,激光扫描共聚焦显微镜测定[Ca2+]i的变化.结果在低氧复氧、H2O2以及高浓度的L-谷氨酸损伤后,外源性谷氨酸(27μmol·L-1)均不能引起培养乳大鼠星形胶质细胞正常的[Ca2+]i升高,反而使[Ca2+]i分别降低(3.3±1.6)%,(81±11)%和(81±7)%;损伤前预先给予GbE(10mg·L-1)不能明显改善星形胶质细胞的谷氨酸反应,但预先给予GbE(100mg·L-1)后,27μmol·L-1谷氨酸可使损伤的星形胶质细胞[Ca2+]i分别升高(135±98)%,(117±93)%和(89±36)%.结论低氧复氧、H2O2以及高浓度的L-谷氨酸均能损伤星形胶质细胞的谷氨酸反应,影响神经细胞与胶质细胞的双向交流.GbE能明显逆转不同损伤后谷氨酸诱导星形胶质细胞[Ca2+]i的异常变化,使星形胶质细胞在不同损伤时能维持正常功能,该作用可能与GbE的脑保护作用有关.

木豆素A对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

利用皮质酮诱导PC12细胞损伤模型,研究木豆素A对皮质酮诱导的PC12细胞的保护作用并探讨相应的保护途径.采用100 μmol·L-1皮质酮与PC12细胞作用48h,诱导PC12细胞损伤,然后与不同浓度的木豆素A孵育24 h.检测细胞存活率、LDH渗漏量、细胞内Ca2+浓度及caspase-3活性.结果显示,PC12细胞与皮质酮孵育48 h后细胞存活率明显降低,而LDH漏出量、细胞内Ca2+浓度及caspase-3活性均显著升高；木豆素A(4.0、8.0及16.0 μmol·L-1)具有改善作用,但量效关系不明显.研究表明,木豆素A对皮质酮诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其保护作用可能是通过降低Ca2+浓度及caspase-3活性来实现的.

红花黄色素B对Ang Ⅱ诱导内皮细胞线粒体损伤的保护作用

血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)作为血液与组织之间的屏障,参与多种生理和病理过程,其功能异常与动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等有紧密的联系[1-4].

针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca2+]i的影响

[目的]研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca2+浓度[Ca2+]i及醒脑开窍针刺对其影响,探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用.[方法]建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血(MCAO)模型,采用醒脑开窍针刺法治疗,采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CAI区锥体细胞[Ca2+]i在不同时间点的变化.[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca2+]i(以细胞内Ca2+相对荧光强度表示)在局灶性脑缺血 1h时升高,持续升高至缺血24h时(P＜0.05).假手术组与正常组相比,[Ca2+]i变化差异无统计学意义(p＞0.05).相应时间点非穴位针刺组与模型组[Ca+]i比较,无统计学意义(P＞0.05).在相应时间点,醒脑开窍针刺组[Ca2+]i低于模型组(P＜0.01).[结论]急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[Ca2+]i随缺血时间的延长而持续升高,提示细胞内钙超载；醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的[Ca2+],提示在缺血后针刺治疗效果越早越好,为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据.

芦荟大黄素对白细胞介素-2引起大鼠T细胞增殖和细胞内Ca2+浓度变化的影响

目的 研究芦荟大黄素对白细胞介素-2(IL-2)引起的T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对淋巴细胞增殖的作用和机制.方法 采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2+]i.结果 芦荟大黄素对IL-2引起的T细胞增殖有显著抑制作用,且抑制效果与剂量有关;IL-2引起[Ca2+]i升高,并持续维持高[Ca2+]i水平,引起[Ca2+]i升高的机制包括胞内Ca2+释放和胞外Ca2+内流;芦荟大黄素显著抑制IL-2引起的[Ca2+]i升高,作用途径包括抑制胞内Ca2+释放和胞外Ca2+内流.结论 芦荟大黄素对IL-2诱发的T细胞增殖有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞内[Ca2+]i升高相关.

灯盏花素对谷氨酸体外诱导大鼠皮质神经元损伤的保护作用

目的 探讨灯盏花素对谷氨酸(Glu)体外诱导原代培养大鼠皮质神经元损伤的作用及机制.方法 通过MTT法观察灯盏花素对Glu诱导神经元损伤的细胞存活率的影响,并结合超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)生化测试及细胞钙影像方法探讨相关作用机制.结果 灯盏花素呈质量浓度依赖性提高Glu诱导神经元损伤细胞的存活率,并拮抗由Glu诱导的[Ca2+];升高、MDA生成,提高SOD活性.结论 灯盏花素对Glu体外诱导大鼠皮质神经细胞损伤具有保护作用,可能与减轻胞内Ca2+超载、提高神经细胞抗氧化能力有关.