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肾衰合剂对急性肾衰竭大鼠肾脏超微结构的影响及作用机理研究
目的观察中药复方"肾衰合剂"对ARF大鼠的防治作用,并揭示该方药的作用机理.方法除正常对照组外,予肌注甘油造模,同时分正常组、模型组、西药维拉帕米组、中药肾衰合剂4组灌胃.观察造模24h大鼠各项指标的变化.结果肾衰合剂及维拉帕米均能显著改善ARF大鼠的肾功能,一定程度上保护初发期ATN时肾小管上皮细胞超微结构;同时SSM显著降低血清TNF-α浓度,其作用明显优于维拉帕米.结论肾衰合剂通过拮抗肾小管上皮细胞钙超载、抑制炎症介质释放达到减轻肾组织病变、防治ATN的功效.
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钙信号在周期性牵张诱导逼尿肌细胞高表达Cx43中作用的实验研究
目的探讨钙信号在周期性牵张诱导膀胱逼尿肌细胞高表达连接蛋白43(Connexin43,Cx43)中的作用.方法运用牵张膀胱逼尿肌细胞体外模型,给逼尿肌细胞周期性20%牵张持续6 h,采用RT-PCR测定受EGTA孵浴的逼尿肌细胞Cx43 mRNA表达改变;采用激光共聚焦法,测定不同钙通道拮抗剂作用条件下,细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的改变.结果牵张前30 min培养基中加入5 mmol/L EGTA,可以显著抑制牵张诱导的Cx43 mRNA高表达;机械牵张可以显著增加[Ca2+]i;5 mmol/L EGTA可以完全抑制牵张诱导的[Ca2+]i增加;GdCl3、硝苯地平、兰尼碱与毒胡萝卜素可分别抑制61.95%、29.98%、87.98%由牵张诱导的[Ca2+]i增加.结论牵张诱导Ca2+内流及通过Ca2+内流诱导的钙触发钙释放(calcium-induced Ca2+ release,CICR),在牵张诱导的逼尿肌细胞Cx43高表达反应中可能起着重要的作用.
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细胞内Ca2+在HMG-CoA还原酶抑制剂抑制MCF-7细胞增殖中的作用
目的探讨HMG-CoA还原酶抑制剂洛伐他汀(LOV)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖功能和细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)变化的影响.方法 4、8、16 μmol/L LOV处理MCF-7细胞1～3 d后, MTT比色法检测细胞增殖功能,流式细胞仪测定细胞周期相的分布及凋亡率,激光共聚焦显微技术观察细胞[Ca2+]i变化以及RT-PCR方法分析LOV对MCF-7细胞质膜钙泵PMCA1 mRNA表达的影响.结果 LOV对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,并使细胞的生长阻滞于G0/G1期,该作用存在一定的剂量和时间关系,但其诱导MCF-7细胞凋亡的作用不明显;同时LOV可持续升高MCF-7细胞[Ca2+]i,但对MCF-7细胞质膜钙泵PMCA1 mRNA表达无明显影响.结论 LOV导致的[Ca2+]i持续升高可能与LOV影响MCF-7质膜PMCA1功能有关;[Ca2+]i 的升高及相关信号通路的变化可能参与了LOV对MCF-7细胞增殖抑制作用的调控.
关键词： HMG-CoA还原酶抑制剂 lovastatin 乳腺癌 胆固醇 [Ca2+]i 钙泵 细胞周期 -
脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i的影响
目的:观察脑心通胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态游离Ca2+浓度 ([Ca2+]i) 的影响,初步探讨脑心通胶囊治疗血管性痴呆的机制.方法:采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)制作血管性痴呆动物模型;使用胰蛋白酶消化法制备海马组织单细胞悬液,Fura-2/AM负载分离的神经细胞,双波长荧光法测定海马神经细胞内静息态[Ca2+]i.结果:模型组大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i为437.42±32.14nmol/L,显著高于假手术组189.83±18.57 nmol/L(P<0.05);脑心通组和喜德镇组大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i为252.61±20.15 nmol/L、237.34±19.83 nmol/L,较模型组显著降低(P<0.05).结论: 脑心通胶囊可降低血管性痴呆模型大鼠海马神经细胞静息态[Ca2+]i,这可能是脑心通胶囊治疗血管性痴呆的作用机制之一.
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脾虚大鼠胃壁细胞胞浆游离钙离子浓度及黄芪对其调节作用的研究
目的：检测脾虚模型大鼠胃壁细胞胞内［Ca2＋］i及黄芪对［Ca2＋］i的调节作用。方法：SD大鼠用大黄造成脾虚模型，并用黄芪注射液治疗4日，用Fura-2／AM荧光分光光度法检测壁细胞静息状态下和胃泌素刺激下［Ca2＋］i。结果：脾虚模型大鼠壁细胞静息状态下［Ca2＋］i明显低于正常大鼠，胃泌素刺激后［Ca2＋］i升高幅度亦明显低于正常组；脾虚黄芪治疗组大鼠静息状态下［Ca2＋］i有一定升高，胃泌素刺激下黄芪治疗组壁细胞［Ca2＋］i升高幅度明显高于模型组并与正常组比较无明显差异。结论：脾虚大鼠胃壁细胞静息状态下和胃泌素刺激下［Ca2＋］i明显低于正常大鼠，说明脾虚证时壁细胞功能处于一种低代谢状态，推测胞内钙库容量可能降低，而且壁细胞表面胃泌素受体数下调或/和功能下降，不能正常介导胞外信号。黄芪能够使低下的胞内代谢水平有一定程度恢复，胞内钙库容量有一定增大，并能使胃泌素受体数上调和/或功能加强，这可能是黄芪健脾益气作用的一个细胞水平的新机制。
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补中益气汤、党参、白术含药血清对离体脾虚大鼠壁细胞内[Ca2+]i的影响
目的:探讨脾虚大鼠的微观病理状态及补脾方药血清对其的调节作用.方法:采用血清药理学方法,以第三代荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞,用共聚焦显微镜观察大鼠单个壁细胞胃泌素刺激后[Ca2+]i的动态变化.结果:睥虚大鼠壁细胞胃泌素刺激后[Ca2+]i升高幅度明显高于正常大鼠,达峰时间也有缩短趋势;补脾方药血清治疗后各组中的各项指标介于两者之间.结论:壁细胞胞内[Ca2+]i的异常变化可能是脾虚证的微观病理机制之一,Ca2+的异常介导可能参与了脾虚证的病理形成;补脾方药血清可不同程度恢复和逆转睥虚状态下的微观病理变化.
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低渗作用对人成骨样细胞MG63功能的影响
目的 本试验通过研究低渗透压的静牵张作用对成骨样细胞MG63的增殖能力、碱性磷酸酶活性以及[Ca2+]i的影响,探讨该应力形式下成骨样细胞MG63的力学响应特征.方法 用不同渗透压的低渗透液,对成骨样细胞MG63分别进行2 h、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h持续牵张作用后,用MTT法检测细胞增殖情况,用ALP试剂盒检测ALP活性的变化,用钙试剂盒检测[Ca2+]i含量波动情况.结果 随着作用时间的延长,成骨样细胞MG63在277 mmol/L和240 mmol/L低渗透液的持续性膨胀作用下,其细胞增殖能力增强,[Ca2+]i、ALP活性缓慢增高;而细胞在163 mmol/L低渗液作用下,细胞增殖受到抑制,8 h时出现[Ca2+]i急剧升高,ALP活性明显高于其对照组.结论 低渗膨胀对MG63的增殖分化、ALP活性以及Ca2+-ATPase都有一定的影响作用,且Ca2+内流与ALP活性之间存在一定的相关性.
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FcγRⅡB1介导的信号传导异常与SLE患者B细胞的过度活化
目的: 观察系统性红斑狼疮(SLE)患者B细胞表面功能分子表达的特征及其功能状态, 评价以FcγRⅡB1(CD32)为代表的B细胞自身抑制调节机制在SLE发病中的作用.方法: 采用Ficoll密度梯度离心法分离出人外周血单个核细胞(PBMC), 并以免疫磁珠法(MACS)分离纯化B细胞.采用荧光分光光度法检测B细胞受不同激活物刺激后细胞内钙([Ca2+]i)的反应.用ELISA法检测B细胞与刺激物共同培养后所分泌IgG的量.采用流式细胞术及间接免疫荧光染色法, 检测B细胞膜表面CD32、 CD19及IgM的表达水平.结果: (1)以羊抗人μ链的F(ab′)2片段及完整IgG分别刺激SLE患者B细胞时, 其[Ca2+]i反应的比值显著低于类风湿性关节炎(RA)患者(P＜0.05)及正常人对照(P＜0.01).(2)分别用葡萄球菌A蛋白(SPA)单独刺激与SPA和羊抗人μ链的完整IgG抗体共同刺激SLE患者的B细胞所分泌的IgG的比值, 明显低于RA患者及正常人对照组(P＜0.05).(3)SLE患者与RA患者及正常对照组B细胞上CD19、 CD32及IgM的表达无统计学意义(P＞0.05).结论: SLE 患者B细胞上CD32抑制性信号传导的异常, 可能是导致B细胞过度活化的重要机制.
关键词： SLE B细胞 [Ca2+]i FcγRⅡB1(CD32) -
肺纤维化大鼠肺微血管内皮细胞[Ca2+]i变化及其机制探讨
目的:研究肺纤维化(PF)大鼠肺微血管内皮细胞内的Ca2+变化,探讨其在PF中的作用机制.方法:SD大鼠20只,随机分为PF组和对照组,每组10只动物,按5 mg/kg体质量分别气管滴注博莱霉素及等量生理盐水,取外周肺组织原代培养肺微血管内皮细胞,利用激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内[Ca2+]i及中电导钙激活钾通道蛋白1(IKca1)表达,计算机图像分析免疫细胞化学法IKca1的表达.结果:激光扫描共聚焦显微镜检测PMVECs内[Ca2+]i:PF组为(166.56±24.17)明显高于对照组(95.79±13.51),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).间接免疫荧光法检测IKca1表达:PF组为(679.29±206.98)明显低于对照组(958.75±188.84),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01);免疫细胞化学检测IKca1表达:PF组(169.08±14.81)明显低于对照组(189.78±13.73),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:PF时,肺微血管内皮细胞[Ca2+]i过载,其发生机制可能与IKca活性异常有关.
关键词： 肺纤维化 肺微血管内皮细胞 [Ca2+]i 中电导钙激活钾通道蛋白1 -
H2O2诱导SD大鼠视网膜细胞凋亡过程中细胞内钙离子浓度的变化
目的 观察H2O2诱导原代培养SD大鼠视网膜细胞凋亡过程中细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化及其来源.方法 取1～3 d内新生SD大鼠视网膜进行原代细胞培养,以100 μmol/L H2O2作用0、2、4、8、12、24h,采用MTT法进行细胞活力检测,应用Hoechst 33342染色法进行细胞凋亡检测,以Fluo-3 AM为细胞内Ca2+探针并利用荧光激活细胞分类技术(FACS)进行[Ca2+]i检测,确定H2 O2诱导细胞损伤及凋亡过程中[Ca2+]i的变化;应用细胞外Ca2+螯合剂EGTA初步检测H2 O2诱导的[Ca2+]i变化是否源于细胞外Ca2+内流.结果 100 μmol/L H2O2可诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡,且凋亡数目呈时间依赖性递增;100 μmol/L H2O2作用2～24 h均可显著降低细胞活力,而[Ca2+]i的升高出现在H2 O2作用2h且维持至12h,然后逐渐下降,至24 h恢复至正常水平;0.5～5mmol/L EGTA可显著削弱由100 μmol/L H2O2作用2h导致的[Ca2+]i增加.结论 在H2O2诱导原代培养的SD大鼠视网膜细胞发生凋亡过程中,[Ca2+]i的升高发生在凋亡的早期阶段,而非细胞凋亡全过程中;H2O2的损伤作用所导致的[Ca2+]i升高部分来源于细胞外Ca2+的内流.
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金钠多对缺氧所致内皮细胞内钙离子浓度和线粒体膜电位改变保护作用的研究
目的:观察缺氧对血管内皮细胞[Ca2+]i和线粒体膜电位的变化及金钠多的保护作用. 方法:血管内皮细胞分为6组,用激光共聚焦显微镜测量各组细胞内[Ca2+]i和线粒体膜电位. 结果:①单纯缺氧组同对照组比较细胞内[Ca2+]i明显升高(P＜0.01)、线粒体膜电位明显降低(P＜0.01);②缺氧加金钠多组同单纯缺氧组比较[Ca2+]i显著降低(P＜0.01)、线粒体膜电位显著升高(P＜0.01). 结论:缺氧可导致血管内皮细胞[Ca2+]i升高、线粒体膜电位降低;金钠多对缺氧所致的[Ca2+]i和线粒体膜电位的损伤具有保护作用.
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丹参对血管内皮细胞活力的双向调节作用
利用人脐静脉内皮细胞离体增殖实验模型发现,在丹参浓度较低时,具有显著促进血管内皮细胞活力的作用,丹参的这种作用伴随有细胞内有游离钙离子浓度,[Ca2+]i的降低; 但不伴随有细胞内pH的变化.当丹参浓度超过10mg/ml后,导致细胞活力的显著降低.通过分析认为,这种细胞活力的升高主要体现细胞增殖上调,而细胞活力的下降主要反映凋亡增加.丹参可能通过不同信号途径上调内皮细胞的增殖,其中包括血管内皮细胞特有的细胞周期相关信号通路,如VEGF分泌和VEGFR2基因的表达上调导致细胞增殖的信号转导通路;另一方面,丹参通过多种信号途径增加细胞凋亡.因此,丹参对于血管内皮细胞的活力具有双向调节作用.
