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二氯化钴所致缺氧对HepG2细胞增殖抑制和凋亡的影响
目的探讨二氯化钴（CoCl2）所致缺氧对HepG2细胞增殖抑制和凋亡的影响以及可能机制。方法采用CoCl2模拟低氧环境处理细胞，Western Blotting法测定胞质蛋白Caspase-3蛋白的表达；噻唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖情况；AnnexinV-FITC/PI双标记染色，流式细胞术检测不同CoCl2浓度作用使缺氧肿瘤细胞的凋亡情况。结果低氧处理后胞质Caspase-3的活性增加，表达呈现浓度依赖性；细胞增殖抑制作用表现出浓度依赖性抑制作用；流式细胞仪检测结果显示，正常对照组以及50、100、200、300、500μmol/L CoCl2模拟低氧组的细胞生长抑制率分别为（0.42±0.21）％、（1.22±0.41）％、（7.61±0.66）％、（13.31±0.97）％、（20.41±0.78）％和（28.56±0.96）％。结论 Caspase-3在肝癌发生发展过程中扮演重要的角色，在低氧情况下对HepG2细胞生长和分化具有调控作用。CoCl2可能通过上调Caspase-3的表达，从而对肝癌细胞发挥抑制细胞增殖和诱导凋亡的作用。
关键词： HepG2细胞 二氯化钴 缺氧 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
低氧刺激对乳腺癌MCF-7细胞增殖影响及其机制的探讨
目的:探讨模拟低氧环境对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及低氧诱导因子(HIF-1α)、基质衍生因子-1(SDF-1)和趋化因子受体4 (CXCR4)表达的影响.方法:常规复苏、传代培养MCF-7细胞,待细胞对数期生长后分别用50、100、150和200 μmol/L CoCl2处理细胞,并于12、24和48 h收集细胞进行以下指标检测.MTT比色法检测细胞增殖抑制率；RT-PCR检测HIF-1α、SDF-1和CXCR4的mRNA表达；蛋白质印迹法检测HIF-1α和CXCR4在蛋白水平的表达；免疫荧光法测定150 μmol/L CoCl2经不同时间处理后MCF-7细胞中SDF-1的表达.结果:低氧模拟微环境中,应用CoCl2处理MCF-7细胞后有较明显抑制作用,实验中以CoCl2(50、100、150和200 μmol/L)处理MCF-7细胞24 h后抑制率分别为(54.62±0.07)％、(65.21±0.03)％、(80.15±0.01)％和(94.51±0.01)％；以CoCl2 150 μmol/L浓度处理细胞12、24和48 h后,抑制率分别为(70.83±0.03)％、(80.15±0.01)％和(89.27±0.03)％；RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,HIF-1α、SDF-1和CXCR4的mRNA的表达及HIF-1α和CXCR4蛋白的表达与低氧时间和CoCl2浓度有关,以低氧处理细胞24 h及CoCl2浓度150μmol/L时明显；免疫荧光结果表明CoCl2 150 μmol/L时MCF-7细胞SDF-1蛋白的表达随时间延长有增加.结论:CoCl2模拟低氧后,细胞生长受抑制呈时间和浓度依赖性；CoCl2浓度在50～150 μmol/L时,HIF-1α、SDF-1和CXCR4在mRNA和蛋白水平表达上调并呈现时间和浓度依赖性.
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缺氧对COX-2在胰腺癌PC-3细胞株中表达的影响
目的检测环氧合酶-2(COX-2)在胰腺癌细胞株中的表达,并通过二氯化钴(CoCl2)诱发细胞生存的缺氧环境,探讨缺氧对胰腺癌PC-3细胞株COX-2表达的影响.方法采用免疫组织化学检测COX-2在PC-3细胞株中的表达,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观测CoCl2与PC-3细胞COX-2表达间的量-效和时-效关系.结果胰腺癌PC-3细胞株中存在COX-2的表达,CoCl2可上调细胞中COX-2的表达,并且与COX-2表达间表现出一定剂量和时间范围内的依赖性关系.结论胰腺癌PC-3细胞株中存在着COX-2的表达,缺氧可诱导COX-2在细胞中的表达.
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二氯化钴对缺血再灌注损伤保护作用的研究进展
缺血再灌注损伤是导致临床移植后脏器失活的重要原因之一.因此,如何减轻缺血再灌注损伤在移植外科有着极其重要的意义.
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HIF-1α对人卵巢癌细胞生物学行为的影响
背景与目的:HIF-1α是一个在缺氧状态下重要的转录调节因子,控制调节各种由缺氧引起的相关基因表达,参与肿瘤的恶化、浸润和转移,在肿瘤领域已成为研究热点.本文主要研究CoCl2模拟化学缺氧复氧中HIF-1α的表达,及其对人卵巢癌HO-8910PM细胞株生物学行为的影响.方法:在培养基中加入和去除CoCl2模拟化学缺氧和缺氧复氧,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CoCl2与HIF-1α的mRNA转录的量-效和时-效关系;通过MTT、Boyden小室、细胞黏附试验分别检测细胞生长、侵袭力和黏附力.结果:人卵巢癌HO-8910PM细胞株中存在HIF-1α的mRNA转录;在CoCl2 模拟缺氧的时-效关系实验中,150μmol/L CoCl2刺激细胞8h、16h、24h时HIF-1α mRNA转录呈递增(分别为2.11±0.03、2.52±0.05、2.78±0.11)(P＜0.05),24h达高峰,48h明显下降.同时,在量-效关系实验中,100 μmol/L、150 μmol/L刺激细胞16h时HIF-1α mRNA转录呈递增(分别为1.54±0.03、2.07±0.13)(P＜0.05);MTT发现CoCl2诱导的缺氧对细胞生长起抑制作用;Boyden小室检测细胞侵袭力实验发现缺氧16h复氧24h后细胞的侵袭力增加(穿越细胞膜的细胞数86±9,较对照组53±10增加)(P＜0.05);细胞黏附实验发现缺氧16h复氧24h后细胞的黏附力增加(P＞0.05).结论:CoCl2能诱导HO8910-PM细胞HIF-1α的过度转录,而且存在一定的时-效关系;经缺氧后复氧,肿瘤细胞的侵袭力和黏附力增加,且肿瘤细胞的侵袭力增加统计学差异显著.
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二氯化钴对腺病毒基因表达的影响
目的:研究二氯化钴(CoCl2)对缺氧反应元件调控E1AE1B表达的条件复制型腺病毒载体(Ad-5HRE-E1AE1B-RFP)和缺乏缺氧反应元件的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-EGFP)在肿瘤细胞内表达和复制的影响. 方法:肿瘤细胞经不同浓度的CoCl2 处理后,Western 印迹法检测缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;倒置荧光显微镜、FCM法及空斑形成实验等观察经CoCl2处理后,感染条件复制型腺病毒和(或)复制缺陷型腺病毒的肿瘤细胞中外源基因的表达水平和病毒复制情况;小动物成像仪观察缺氧调控的条件复制型腺病毒在肿瘤内提高复制缺陷型腺病毒表达的效率. 结果:适当浓度的CoCl2 (0.4和0.08 μg/mL) 能使胃癌细胞株(SGC7901)中HIF-1α蛋白稳定表达并积聚,可较好地模拟缺氧状态;在0.4 μg/mL CoCl2作用下,Ad-5HRE-E1AE1B-RFP对肿瘤细胞的感染效率明显提高,表现为外源基因RFP阳性表达的百分率和荧光强度均明显提高,但空斑形成实验显示Ad-5HRE-E1AE1B-RFP并没有复制.0.4 μg/mL CoCl2也能提高其他非缺氧调控的复制缺陷型腺病毒如Ad-EGFP、Ad-Luc的感染效率和表达水平; Ad-5HRE-E1AE1B-RFP与复制缺陷型腺病毒Ad-Luc联合注射裸鼠肿瘤能显著提高Ad-Luc的表达.结论:CoCl2 能明显提高腺病毒的基因表达水平,其作用机制不仅与CoCl2诱导缺氧有关,也可能与影响基因转录有关.
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二氯化钴(CoCl2)诱发缺氧对胰腺癌PC-3细胞系核因子-κB表达的影响
目的观察二氯化钴(CoCl2)诱发缺氧对胰腺癌PC-3细胞系核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法采用免疫组织化学方法检测NF-κB在PC-3细胞系中的表达,并通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观测CoCl2与NF-κB表达间的量-效和时-效关系.结果胰腺癌PC-3细胞系中存在NF-κB的表达,CoCl2可上调细胞中NF-κB的表达,并且其和NF-κB表达间体现出一定剂量和时间范围内的依赖性关系.结论胰腺癌PC-3细胞系中存在着NF-κB的表达,通过CoCl2诱导缺氧可以上调NF-κB在细胞中的表达.
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二氯化钴诱导唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞自噬的实验研究
目的:研究二氯化钴(CoCl2)对唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖和自噬的影响.方法:应用MTT法对ACC-M细胞进行细胞活力测验,以检测CoCl2对细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察自噬体形成;双免疫荧光标记、实时定量PCR(RT-PCR)及Western蛋白免疫印迹检测自噬相关基因HIF-1o/BNIP3通路相关基因、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)及Beclin 1的表达.采用SPSS15.0软件包对数据进行双尾t检验.结果:CoCl2可降低ACC-M细胞的活性,同时诱导自噬体的形成;透射电镜下,实验组细胞内可见自噬体样的双层膜结构;RT-PCR及Western蛋白免疫印迹检测显示,CoCl2可使HIF-1α/BNIP3信号通路和自噬相关蛋白的表达显著提高.结论:CoCl2可模拟低氧环境,从而诱导ACC-M细胞产生自噬,HIF-1 α/BNIP3信号通路在这一过程中扮演着重要角色.
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二氯化钴浓度对急性早幼粒白血病细胞系NB4增殖的影响
目的 观察体外低氧环境对人急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4的细胞增殖及低氧诱导因子(HIF-1α)基因表达水平的影响.方法 体外培养NB4细胞,分别用0、50、100、200、400、800μmol/L二氯化钴(CoCl2)处理24、48、72 h,收集细胞观察CoCl2对NB4细胞增殖的影响,CCK-8法检测细胞增殖率;RT-PCR检测HIF-1α基因的表达水平.结果 CCK-8法结果表明,CoCl2终浓度为0、50、100、200 μmol/L时的吸光度(A)值依次升高,400、800 μmol/L的A值依次降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05);RT-PCR结果显示,CoO2终浓度在50、100、200、400、800 μmol/L时的HIF-1α表达水平差异均有统计学意义(P均＜0.05);显微镜下可观察到低浓度CoCl2促进细胞增殖,高浓度CoCl2致使细胞增殖受抑制.结论 低浓度的CoCl2可以促进NB4细胞增殖,HIF-lα基因可能参与该过程.
关键词： 低氧诱导因子 NB4细胞 急性早幼粒细胞白血病 二氯化钴 -
淫羊藿苷对氯化钴诱导PC12细胞损伤的保护作用
目的:观察淫羊藿苷(Icariin,ICA)对二氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞缺氧损伤的作用,并初步探讨其作用机制.方法:利用CoCl2作用于PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型;采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;Hoechst33258和Annexin-V/PI染色检测细胞凋亡;利用荧光探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内的活性氧(ROS)水平.结果:CoCl2处理组PC12细胞存活率显著下降,凋亡率和ROS明显增加,而采用2.5 ～ 40μM淫羊藿苷预处理30min,呈浓度依赖性抑制CoCl2(300μM)诱导损伤引起的PC12细胞存活率的降低,凋亡率以及ROS的升高.结论:淫羊藿苷对缺氧诱导的神经细胞损伤有保护作用,其机制可能与其减少ROS的生成有关.
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二氯化钴所致缺氧对A549细胞增殖抑制和凋亡的影响
目的:探讨CoCl2作用不同时间所致缺氧对体外培养的人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡和缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)的影响.方法:对肺腺癌细胞A549分别进行常氧和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTT法检测CoCl2作用不同时间所致缺氧对A549细胞增殖的影响;半定量RT-PCR法测定缺氧不同时间HIF-1α mRNA表达水平的变化.Annexin V-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测CoCl2作用不同时间缺氧肿瘤细胞凋亡情况.结果:CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间依赖性抑制作用.常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1α mRNA的表达,随着CoCl2作用时间的延长,HIF-1α mRNA水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、CoCl2作用4、12、24、48 h组细胞凋亡率分别为(0.60±0.10)%、(1.10±0.10)%、(8.63±0.75)%、(12.80±0.85)%和(19.33±0.80)%.结论:CoCl2对A549细胞具有上调HIF-1α mRNA表达作用,可抑制细胞的增殖和一定的凋亡诱导作用,这些说明HIF-1α可能在肺癌的发展中扮演着重要的作用.
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二氯化钴化学缺氧对人脐静脉内皮细胞增殖和血红素氧合酶表达的影响及其临床意义
目的:研究二氯化钴(CoCl2)诱发化学缺氧对培养的人脐静脉内皮细胞血红素氧合酶表达及增殖的影响.方法:采用MTT和流式细胞术检测人脐静脉内皮细胞的增殖,酶联免疫吸收法测定培养上清液中的碳氧血红蛋白(COHb),并通过RT-PCR观测CoCl2与血红素氧合酶表达间的量-效和时-效关系.结果:CoCl2可诱导人脐静脉内皮细胞中血红素氧合酶-1的表达,促进内源性一氧化碳(CO)的产生,与血红素氧合酶表达间有一定的剂量和时间依赖性.结论:CoCl2诱导慢性缺氧促进人脐静脉内皮细胞增殖并上调血红素氧合酶-1和内源性CO,HO/CO系统是保护内皮损伤的分子学基础,可能在妊娠期高血压疾病发病中起重要作用.
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缺氧及小干扰RNA转染对人RPE细胞增生及血小板源性生长因子-BB表达的影响
背景 增生性玻璃体视网膜病变(PVR)为视网膜表面发生无血管、纤维细胞性增生膜,其发生和发展的具体机制尚未完全阐明.人视网膜色素上皮(hRPE)及血小板源性生长因子(PDGF)在PVR发展中的作用是近几年研究的热点. 目的 探讨缺氧对体外培养hRPE细胞PDGF-BB表达及增生的影响. 方法 hRPE细胞在6孔板中培养,实验组用10、15、20、30、40 μmol/L CoCl2模拟体外培养hRPE细胞的缺氧环境,对照组用未加CoCl2的培养液培养hRPE细胞,采用逆转录PCR(RT-PCR)与ELISA法检测PDGF-BB mRNA和蛋白的表达,采用MTT法检测hRPE细胞增生率.依据转染siRNA的不同将细胞分为PDGF-BB siRNA1组、PDGF-BB siRNA2组、PDGF-BB siRNA3组(为针对PDGF-BB的3条不同的siRNA,其中有一条为有效siRNA)、β-actin siRNA组、无关siRNA组和只加Lip2000的空白对照组.转染4～6h后,除空白对照组外,其余各组加入对细胞PDGF-BB mRNA和蛋白及对hRPE细胞增生影响明显的15 μmol/L CoCl2模拟细胞缺氧环境24 h,检测PDGF-BB mRNA和蛋白及hRPE细胞增生率. 结果 未加CoCl2的对照组未检测出PDGF-BBmRNA和蛋白的表达,不同浓度CoCl2培养hRPE细胞PDGF-BB mRNA和蛋白的表达量不同,差异均有统计学意义(F=43.737,P＜0.01;F=54.612,P＜0.05),15μmol/L CoCl2组PDGF-BB的表达量多,与其他各组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).MTT检测结果显示,不同浓度CoCl2处理后PDGF-BB蛋白表达及hRPE细胞增生率明显不同,差异均有统计学意义(F=95.379,P＜0.01;F=63.375,P＜0.05),15 μmol/L CoCl2组hRPE细胞增生率明显高于其他浓度组,差异均有统计学意义(P＜0.05),PDGF-BB蛋白表达量与hRPE细胞增生率呈线性正相关(r=0.994,P＜0.05).各细胞转染组hRPE细胞中PDGF-BB mRNA及蛋白的表达整体比较,差异均有统计学意义(F=156.330、125.650,P＜0.01),且PDGF-BB siRNA2组PDGF-BB mRNA较其他各组明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.01).MTT检测结果显示,各细胞转染组PDGF-BB蛋白的表达及hRPE细胞增生率明显不同,差异均有统计学意义(F=73.131、98.564,P＜0.01),PDGF-BB siRNA2组PDGF-BB蛋白的表达及细胞增生率与其他各组比较明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05),PDGF-BB蛋白表达与hRPE细胞增生率呈线性正相关(r=0.996,P＜0.05).结论 缺氧能够促进PDGF-BB的表达,PDGF-BB的表达上调可显著促进hRPE细胞的增生.在转染靶向PDGF-BB siRNA后,PDGF-BB的表达受到抑制,可有效降低hRPE细胞的增生率.
关键词： 血小板源性生长因子-BB蛋白 人视网膜色素上皮 二氯化钴 增生 siRNA -
二氯化钴预处理对大鼠脑梗死体积及SDF-1α/CXCR4表达水平的影响
目的 观察二氯化钴预处理对大鼠脑梗死体积百分比、基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)/趋化因子受体4(CXCR4)表达的影响;探讨缺氧缺血环境中SDF-1α/CXCR4生物轴对脑的保护作用.方法 将168只成年雄性SD大鼠随机分为缺氧预处理组(n=84)、模型组(n=84).按缺血后再灌注时间不同分为再灌注6h、24h、3天、5天、7天、14天6个亚组.采用改良Longa方法制备局灶性脑缺血模型.观察缺氧缺血后脑组织病理学改变,通过氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察脑缺血后再灌注两组大鼠脑梗死体积百分比的变化;免疫组织化学法检测大鼠脑组织皮层区各个时间点SDF-1α及CXCR4的表达变化.结果 TTC染色显示,缺氧预处理组及模型组大鼠6h时即可见明显梗死灶,24h脑梗死体积趋于稳定.两组大鼠24 h、3天、5天、7天、14天5个时间点脑梗死体积百分比比较,差异无统计学意义(P＞0.05);缺氧预处理组各时间点脑梗死体积百分比均明显小于模型组(P＜0.05).免疫组织化学法结果显示,两组于脑缺血再灌注6h皮层区SDF-1α、CXCR4表达明显增加,7天表达至高峰,随后表达逐渐减少,14天仍有表达.缺氧预处理组各时间点皮层区SDF-1α、CXCR4的阳性细胞数均显著多于模型组(P＜0.05).结论 二氯化钴预处理能缩小脑梗死体积,其可能通过上调SDF-1α、CXCR4的表达水平,诱导脑缺氧耐受,促进间充质干细胞向缺血组织迁移,发挥脑保护作用.
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活性氧不参与二氯化钴诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖
目的 探讨活性氧是否参与二氯化钴诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)过度增殖.方法 用化学性缺氧模拟剂二氯化钴处理HPASMC,建立缺氧性肺动脉高压血管重塑的细胞模型 用外源性活性氧供体过氧化氢处理HPASMC,观察活性氧对细胞增殖的影响；活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HPASMC,观察其对二氯化钴或过氧化氢诱导的细胞增殖的改善作用；应用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖,Western blot检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达,双氯荧光素染色和荧光照相术检测细胞内活性氧的含量.结果 在25 ～ 50μmol/L浓度范围内,二氯化钴处理24 h可诱导HPASMC增殖,50 μmol/L二氯化钴处理24 h可使细胞内HIF-1α的水平明显增加；与二氯化钴的作用类似,过氧化氢在12 ～ 25μmol/L浓度范围内处理24 h也可引起细胞增殖,但不改变HIF-1α的水平；在二氯化钴或过氧化氢处理前,用不同浓度的NAC预处理,在1 500 μmol/L浓度时,NAC预处理可明显抑制过氧化氢诱导的HPASMC过度增殖(P＜0.05),而对二氯化钴诱导的细胞增殖则无明显影响(P＞0.05)；另外,50 μmol/L二氯化钴处理6～24 h对细胞内活性氧的含量无明显影响(P＞0.05).结论 化学性缺氧可诱导HPASMC过度增殖,其机制可能不依赖于活性氧.
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CoCl2缺氧诱导SW480细胞化疗耐药及其机制
目的:研究不同程度的CoCl2化学缺氧条件下SW480细胞的生长情况及对氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)的敏感性,以及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)和诱导型血红素氧化酶(heme oxygenase-1,HO-1)基因在缺氧条件下的表达,以探讨缺氧条件下导致肿瘤细胞耐药的机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法测定不同CoCl2浓度下SW480细胞的生长情况及化疗药物FU对SW480细胞的生长抑制作用;采用逆转录聚合酶链反应检测HIF-1α和HO-1 mRNA 在缺氧条件下的表达.结果:MTT结果显示,随着CoCl2浓度增加,SW480细胞的增殖速度减慢, FU对SW480的杀伤作用降低.RT-PCR 结果显示, CoCl2化学缺氧处理使HIF-1α和HO-1 mRNA表达上调,并呈较好的剂量和时间依赖性关系.结论:CoCl2诱导的体外缺氧可以减缓SW480细胞的生长速度,并降低SW480细胞对FU的敏感性,其机制可能与HIF-1α及HO-1的表达上调有关.
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硫化氢对化学性缺氧诱导PC12细胞凋亡的影响
[目的]探讨硫化氢(H_2S)对抗二氯化钴(CoCl_2)诱导PC12细胞凋亡的作用及其初步机制.[方法]应用化学性缺氧模拟剂CoCl_2在PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型;以硫氢化钠(NaHS)作为H_2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色检测细胞凋亡的形态学变化;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位(MMP);2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧(ROS)水平.[结果] COCl_2引起PC12细胞的存活率显著降低及凋亡率明显增加,同时引起PC12细胞的MMP明显降低及ROS生成显著增加.在600μmol/L CoCl_2处理PC12细胞前,应用100～400 μmol/L NaHS预处理30 min,呈浓度依赖性地阻断CoCl_2引起PC12细胞的存活率降低;200 μmol/L、400 μmol/L NaHS预处理能显著地降低600 μmol/L CoCl_2引起PC12细胞的凋亡率增加并阻断CoCl_2引起的MMP降低及ROS升高.[结论]H_2S具有神经细胞保护作用,能明显地对抗CoCl_2诱导的PC12细胞凋亡,此作用可能与其减少ROS生成,提高MMP有关.
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Nec-1 对模拟缺氧条件下骨骼肌细胞损伤修复的作用研究
目的 探讨Necrostatin-1 (Nec-1 )在二氯化钴(CoCl2)诱导缺氧的条件下对骨骼肌细胞损伤修复的保护作用.方法 采用小鼠骨骼肌C2C12 成肌细胞为体外模型,CoCl2诱导缺氧,Nec-1为缺氧保护剂.将培养分化72 h 后的细胞分为4组,分别加入等量培养基(Control 组)、200 μM CoCl2(CoCl2组)、150 μMNec-1(Nec-1 组)、200 μMCoCl2+150 μMNec-1(CoCl2+Nec-1 组),于光镜下观察不同处理组细胞的肌管形态,采用蛋白免疫印迹技术检测肌细胞生成素(Myog)、肌细胞增强因子2A(MEF2A)蛋白表达的变化,统计细胞周期S期比例,划痕实验观察细胞的损伤修复能力.结果 CoCl2可诱导肌细胞形态异常,减少肌管分化,与Control组比较,CoCl2组Myog、MEF2A蛋白表达量降低(P均 ＜0. 01 ),同时,S 期细胞比例下降(P＜0. 01 ),划痕面积修复能力下降(P均 ＜0. 01).加入Nec-1 干预后,细胞形态恢复,肌管分化增多,与CoCl2组比较,CoCl2+Nec-1 组Myog、MEF2A蛋白表达量及S期细胞比例上调(P均＜0. 05 ),细胞划痕面积恢复(P＜0. 05 ).结论 CoCl2模拟缺氧可抑制肌细胞增殖、分化功能,导致肌细胞损伤修复能力下降.Nec-1 可增强缺氧条件下肌细胞的增殖和分化能力,对肌细胞的损伤修复有保护作用,可能通过抑制程序性坏死来促进肌细胞的损伤修复.
关键词： 二氯化钴 缺氧 C2C12 necrostatin-1 损伤修复 -
2种人卵巢癌细胞乏氧耐药模型的比较研究
目的:采用二氯化钴(cobaltous chloride,CoCl2)化学诱导法构建人卵巢癌细胞株A2780和SKOV3的乏氧耐药模型,并比较二者耐药特性.方法:(1)体外培养的A2780和SKOV3细胞分别加入不同浓度CoCl2培养液作用12、24、48、72 h,采用MTT法检测其增殖活性及对紫杉醇的耐药倍数;(2)采用150 μmol/L CoGl2培养液作用24 h构建乏氧环境,RT-PCR检测常氧和乏氧条件下乏氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF) 1α mRNA的表达情况.结果:2种细胞的增殖抑制率与CoCl2呈剂量-时间依赖关系(A2780组:F=1 165.416,P=0.000;SKOV3组:F=2 802.394,P=0.000).随着CoCl2浓度的增加,A2780和SKOV3细胞对紫杉醇的耐药倍数增加(F=7 842.711,P=0.000);在相同CoCl2浓度作用下,SKOV3细胞对紫杉醇的耐药倍数明显高于A2780(50 μmol/L组:t=-48.287,P=0.000;100 μmol/L组:t=-263.205,P=0.000;150μmol/L组:t=-143.305,P=0.000).150 μmol/LCoCl2作用24h,2种细胞耐药倍数分别为(9.84±0.11)和(21.08±0.08),并出现稳定的HIF-1α mRNA表达,其中SKOV3细胞HIF-1α mRNA的表达增加量明显高于A2780细胞(t=-5.573,P=0.000).结论:CoCl2化学诱导法可成功建立卵巢癌细胞乏氧耐药模型,其耐药倍数与细胞类型有关.在相同条件下,SKOV3细胞株乏氧耐药模型较A2780更易建立,是乏氧耐药逆转研究较为理想的细胞株.
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二氯化钴在体外细胞缺氧研究中的应用
二氯化钴常用于体外诱导细胞缺氧,在细胞增殖、分化及应激反应研究中得到广泛应用.牙髓炎症状态时存在低氧环境,有关二氯化钴的应用研究为体外诱导牙髓细胞缺氧提供了可借鉴的思路和方法.
