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大黄(庶虫)虫丸对基因转染慢性粒细胞白血病K562细胞趋化因子受体4表达的影响
目的 探讨大黄(庶虫)虫丸治疗慢性粒细胞白血病的可能作用机理.方法 将CXCR4基因定向克隆到含有双启动子的真核表达载体pBudCE4.1,经转染入K562细胞,筛选获得能稳定高表达人CXCR4蛋白的K562/CXCR4细胞.16只裸鼠随机分为空白组和大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组,每组4只.大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组分别给予大黄(庶虫)虫丸270、135、70 mg/ml灌胃,每次3ml,空白组给予生理盐水3 ml灌胃,均每天1次,连续给药3天,第3天每隔2h给药1次,连续给药3次,末次给药1h后,心脏采血,分离血清,制备大黄(庶虫)虫丸含药血清.应用MTT法检测不同浓度大黄(庶虫)虫丸含药血清对K562/CXCR4细胞增殖的影响,TUNEL法检测其对K562/CXCR4细胞凋亡的影响,Western blotting法检测各组细胞CXCR4表达的变化.结果 与空白组比较,大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组细胞在24、48、72、96h时吸光度A490均明显降低(P＜0.01);大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组作用时间越长、药物浓度越高,细胞的抑制率越高.空白组细胞凋亡率为0.28％,大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组细胞凋亡率分别为60.79％、28.91％和10.14％.大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组细胞中CXCR4表达较空白组明显降低,并且随剂量增大CXCR4表达降低.结论 大黄(庶虫)虫丸可能通过抑制K562/CXCR4细胞增殖,诱导其凋亡,并影响CXCR4的表达,进而干预慢性粒细胞白血病的发生发展过程.
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MiR-139-5 p通过靶向CXCR4/PI3 K/Akt信号通路增强鼻咽癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性
目的 探讨miR-139-5p对鼻咽癌顺铂(DDP)耐药细胞DDP敏感性的影响及其相关作用机制.方法 培养鼻咽癌DDP耐药细胞株HNE1/DDP,分为miR-139-5p组、阴性对照组、DDP组和空白对照组,miR-139-5p组转染miR-139-5p类似物,阴性对照组转染阴性对照序列,DDP组和空白对照组不做转染处理.转染后miR-139-5p组、阴性对照组和DDP组均加入20μmol/L DDP,空白对照组加入培养基,溴化吡啶(PI)单染后流式细胞术检测各组HNE1/DDP细胞凋亡率.采用Western blot检测HNE1/DDP细胞miR-139-5p组、阴性对照组和空白对照组磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化(p)-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt及趋化因子受体4(CXCR4)蛋白的相对表达水平.采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-139-5p组、阴性对照组和空白对照组CXCR4 mRNA的表达水平.结果 空白对照组、DDP组、阴性对照组和miR-139-5p组HNE1/DDP细胞凋亡率分别是6.26％ ±1.19％、22.43％ ±3.88％、23.87％ ±3.21％和40.87％ ±4.04％,DDP组、阴性对照组和miR-139-5p组细胞凋亡率均高于空白对照组,miR-139-5p组细胞凋亡率高于DDP组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.05).Western blot检测显示,miR-139-5p组p-Akt、p-PI3K、PI3K及CXCR4蛋白的相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.01).实时荧光定量PCR检测结果显示,miR-139-5p组中HNE1/DDP细胞CXCR4的mRNA相对表达水平低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P值均<0.01).结论 转染miR-139-5p可提高鼻咽癌耐药细胞株HNE1/DDP对DDP的敏感性,其作用机制可能与抑制CXCR4的表达进而调控其下游PI3K/Akt信号通路的活化有关.
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干扰CXCR4抑制急性单核细胞白血病细胞株SHI-1黏附、侵袭及成瘤能力
目的:研究干扰人趋化因子受体4 (CXCR4)基因表达对白血病细胞株SHI-1细胞体外增殖、黏附、侵袭能力及裸鼠皮下成瘤能力的影响.方法:通过构建干扰CXCR4表达的慢病毒载体,重组病毒颗粒感染SHI-1细胞,干扰SHI-1细胞CXCR4表达,定量PCR检测CXCR4、MMP-2和MMP-9表达;流式细胞术检测SHI-1细胞膜表面CXCR4蛋白表达;MTT法检测细胞体外增殖能力;将SHI-1等与骨髓基质细胞共培养,检测SHI-1细胞黏附能力及跨Matrigel基质胶迁移能力;将白血病细胞SHI-1接种于裸鼠皮下并观察其在裸鼠皮下生长情况.结果:干扰CXCR4表达的慢病毒颗粒感染SHI-1细胞后,SHI-1/CXCR4i细胞的CXCR4 mRNA表达较感染阴性对照病毒的SHI-1/NC细胞下调76％,SHI-1/CXCR4i细胞膜表面CXCR4表达明显下调;SHI-1/CXCR4i细胞MMP-2、MMP-9表达分别也分别下降63％和62％;SHI-1/CXCR4i细胞体外增殖能力无显著改变,但其黏附能力及跨Matrigel基质胶迁移能力明显下降;SHI-1/CXCR4i细胞不能在裸鼠皮下形成肿瘤,而SHI-1及SHI-1/NC细胞均能在裸鼠皮下形成肿瘤,且肿瘤体积无显著差异.结论:干扰CXCR4表达可使SHI-1的黏附、移行能力显著下降,并能完全抑制SHI-1在裸鼠皮下形成肿瘤,CXCR4可作为白血病治疗的一个靶点.
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鸟苷酸环化酶C基因沉默对人胃癌裸鼠皮下种植瘤的影响
目的:探讨鸟苷酸环化酶C(GC-C)基因沉默对人胃癌裸鼠皮下种植瘤的影响及其机制.方法:将SGC-7901细胞(SGC-7901组)、空质粒转染的细胞(PRNA组)、GC-C基因稳定沉默的细胞(GC-C-shRNA组)悬液先在裸鼠皮下接种成瘤,再取瘤组织块分别接种到裸鼠皮下,建立3种胃癌裸鼠皮下种植瘤模型.观察裸鼠一般情况、肿瘤的成瘤率、生长速度,描绘肿瘤的生长曲线,计算肿瘤的抑瘤率；采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR),Western blot和免疫组织化学法检测GC-C和趋化因子受体4(CXCR4)在各组移植瘤组织中的表达.结果:与SGC-7901组和PRNA组比较,GC-C-shRNA组裸鼠移植瘤生长速度明显减慢、体积明显变小(抑制率分别为33.7％、33.2％),肿瘤异型性、坏死程度明显降低,差异具有统计学意义(均P＜0.05),且移植瘤组织中GC-C和CXCR4 mRNA和蛋白均明显下调(GC-C mRNA:7.47±1.70 vs 11.18±0.60,11.28±0.85; GC-C蛋白:0.52±0.15 vs 1.04±0.19,1.03±0.24; CXCR4蛋白:0.67±0.13 vs 1.02±0.21,1.03±0.23,均P＜0.05).结论:GC-C基因稳定沉默在体内能保持稳定,且能抑制裸鼠移植瘤生长,该过程可能与CXCR4下调有关.
关键词： 鸟苷酸环化酶C基因沉默 裸鼠 胃癌 皮下种植瘤 趋化因子受体4 -
高糖对循环纤维细胞增殖和趋化因子受体4、结缔组织生长因子表达影响的研究
目的 探讨高糖对循环纤维细胞增殖和趋化因子受体4(CXCR4)、结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响. 方法 选取2016年6月至2017年6月于浙江医院心内科住院的15例T2DM患者(T2DM组),以及同期体检健康的15名血糖正常者(NGT组).密度梯度离心法获取两组外周血单个核细胞,经培养、鉴定后分别用含不同浓度葡萄糖DMEM培养基(5.5、25、30 mmol/L葡萄糖和5.5 mmol/L葡萄糖+30 mmol/L甘露醇)干预不同时间(24、48、72 h),采用细胞计数试剂(CCK-8)测定细胞增殖能力,Western blot检测CXCR4和CTGF的表达情况(48 h).另收集两组外周血各5 ml,采用流式细胞术测定外周血循环纤维细胞含量. 结果 经14 d培养,循环纤维细胞光镜下呈典型梭形.激光共聚焦显微镜显示细胞CD45(绿色)和胶原蛋白工(COL-Ⅰ)(红色)表达明显,且T2DM组梭形细胞较NGT组增多.CCK-8检测显示葡萄糖对循环纤维细胞的增殖能力呈明显的浓度依赖性,以30 mmol/L干预48 h显著(P＜0.01).Western blot显示,干预48 h后,葡萄糖呈浓度依赖性刺激循环纤维细胞CXCR4和CTGF的表达(P＜0.01).流式细胞术检测显示,T2DM组外周血单个核细胞中的CD45+ COL-Ⅰ+双染阳性的循环纤维细胞含量高于NGT组[(1.93±1.01) vs (0.52±0.35),P＜0.01]. 结论 T2DM患者外周血中CD45+ COL-Ⅰ+循环纤维细胞含量明显升高.体外高浓度葡萄糖可刺激循环纤维细胞的增殖能力,促进CXCR4和CTGF分泌,提示循环纤维细胞可能参与糖尿病器官纤维化的病理生理过程.
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CXCR4、VEGF—C、CK19和EMA在宫颈癌病灶和淋巴结中的表达及意义
目的 探讨趋化因子受体4(CXCR4)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、上皮膜抗原(EMA)和细胞内角蛋白19(CK19)在宫颈癌原位灶及淋巴结组织中的表达,并探讨各因子之间的关系.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(Real Time PCR),对40例宫颈癌患者的原位病灶组织中的CXCR4基因进行定量检测.用免疫组化方法 (SP法)和HE染色法检测40例宫颈癌患者的原位灶组织中及淋巴结组织中的VEGF-C、CK19和EMA表达.结果 宫颈癌原位灶表达CXCR4和VEGF-C,淋巴结高表达CK19和EMA.CK19与VEGF-C间呈正相关(r=0.489,P=0.014),CXCR4与VEGF-C呈正相关(r=0.521,P=0.000),用逻辑回归的方法 分析EMA与VEGF-C间无明显相关性(P=0.272).结论 CXCR4、VEGF-C及CK19、EMA的表达可能与宫颈癌的发生发展有关.
关键词： 宫颈癌 趋化因子受体4 血管内皮生长因子-C 细胞角蛋白19 上皮膜抗原 -
环磷酰胺和吡柔比星对横纹肌肉瘤RD细胞株CXCR4表达的影响
目的：观察敏感剂量下环磷酰胺（CTX）和吡柔比星（THP）对体外培养人横纹肌肉瘤RD细胞株CXCR4基因表达的影响。方法体外培养RD细胞株；MTT试验明确CTX和THP对RD细胞的效应剂量；细胞划痕实验检测RD细胞的迁移能力；RT- PCR及Western blot法检测RD细胞CXCR4表达。结果（1）敏感剂量下CTX（30 mmol/L）和THP（1000 ng/mL）均可抑制RD细胞的迁移（P＜0.05），两药联合应用对细胞迁移抑制作用增强，较对照组差异有非常显著性（P＜0.01）；（2）各药物处理组（CTX，THP，CTX＋THP）药物作用于RD细胞24 h后CXCR4蛋白的表达较对照组减少，其差异均有显著性（P＜0.05）；其中CTX＋THP组较CTX组CXCR4蛋白表达减少更明显（P＜0.05），但与THP组比较，差异无显著性（P＞0.05）；（3）同样条件下，各药物处理组（CTX，THP，CTX＋THP）与对照组比较，RD细胞CXCR4 mRNA 的表达均减少，差异均有显著性（P＜0.05）；CTX＋THP组较CTX组CXCR4 mRNA表达减少明显（P＜0.05），但较THP组差异无显著性（P＞0.05）。结论化疗药物CTX和THP均能抑制人横纹肌肉瘤RD细胞的增殖；敏感剂量下的两种药物均能抑制RD细胞的迁移及下调RD细胞CXCR4的表达，提示两种化疗药物发挥作用的机制可能涉及到CXCR4基因。
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低氧刺激对乳腺癌MCF-7细胞增殖影响及其机制的探讨
目的:探讨模拟低氧环境对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及低氧诱导因子(HIF-1α)、基质衍生因子-1(SDF-1)和趋化因子受体4 (CXCR4)表达的影响.方法:常规复苏、传代培养MCF-7细胞,待细胞对数期生长后分别用50、100、150和200 μmol/L CoCl2处理细胞,并于12、24和48 h收集细胞进行以下指标检测.MTT比色法检测细胞增殖抑制率；RT-PCR检测HIF-1α、SDF-1和CXCR4的mRNA表达；蛋白质印迹法检测HIF-1α和CXCR4在蛋白水平的表达；免疫荧光法测定150 μmol/L CoCl2经不同时间处理后MCF-7细胞中SDF-1的表达.结果:低氧模拟微环境中,应用CoCl2处理MCF-7细胞后有较明显抑制作用,实验中以CoCl2(50、100、150和200 μmol/L)处理MCF-7细胞24 h后抑制率分别为(54.62±0.07)％、(65.21±0.03)％、(80.15±0.01)％和(94.51±0.01)％；以CoCl2 150 μmol/L浓度处理细胞12、24和48 h后,抑制率分别为(70.83±0.03)％、(80.15±0.01)％和(89.27±0.03)％；RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,HIF-1α、SDF-1和CXCR4的mRNA的表达及HIF-1α和CXCR4蛋白的表达与低氧时间和CoCl2浓度有关,以低氧处理细胞24 h及CoCl2浓度150μmol/L时明显；免疫荧光结果表明CoCl2 150 μmol/L时MCF-7细胞SDF-1蛋白的表达随时间延长有增加.结论:CoCl2模拟低氧后,细胞生长受抑制呈时间和浓度依赖性；CoCl2浓度在50～150 μmol/L时,HIF-1α、SDF-1和CXCR4在mRNA和蛋白水平表达上调并呈现时间和浓度依赖性.
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靶向CXCR4特异性造影剂在骨肉瘤成像中的应用
目的:对骨肉瘤中趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的表达进行非损伤性评价,探讨CXCR4特异性造影剂在骨肉瘤成像及早期诊断中的作用.方法:采用化学合成的方法得到了带有CXCR4特异性造影剂的1条肽段,通过近红外染料标记,进行骨肉瘤细胞SOSP-9607的体外结合试验;皮下接种裸鼠,构建骨肉瘤的异体移植模型,7d后对裸鼠进行体内光学成像,并用免疫组织化学法检测发光团组织中CXCR4的表达.结果:体外细胞结合试验证明合成的近红外造影剂能够很好的与人的骨肉瘤细胞SOSP-9607相结合.近红外光学成像表明,靶向CXCR4的特异性造影剂可用于小动物骨肉瘤的早期和晚期显影.免疫组化染色显示,发光团组织中CXCR4表达呈阳性.结论:趋化因子受体CXCR4靶标特异性分子造影剂,可用于早期和晚期骨肉瘤的显影,对骨肉瘤的诊断及其预后意义重大.
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趋化因子受体4和间质细胞衍生因子1α与鼻咽癌器官特异性转移的相关性研究
目的 研究趋化因子受体4(CXCR4)在鼻咽癌细胞中的表达,间质细胞衍牛因子1α(SDF-1α)在鼻咽癌远处靶器官中的表达,探讨CXCR4和(或)SDF-1α在鼻咽癌器官特异性转移中的作用.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法分析30例鼻咽癌、15例正常鼻咽组织中CXCR4 mRNA和蛋白的表达及其同临床病理学因素之间的相关性,应用免疫组织化学法分析鼻咽癌患者的正常颈部淋巴结(包括颈深上和颈深下淋巴结)、骨髓、肺、肝脏和肾脏、结肠(各5例)中SDF-1α蛋白的表达.结果 RT-PCR检测结果显示,鼻咽癌组织中CXCR4 mRNA相对表达强度(0.71±0.22)显著高于正常鼻咽组织(0.14±0.07;F=27.94,P<0.05);免疫组织化学检测结果显示,鼻咽癌组织中CXCR4蛋白的表达(1.58±0.59)显著高于正常鼻咽组织(0.51±0.22;F=17.75,P<0.05).鼻咽癌组织中CXCR4 mRNA和蛋白的表达与临床分期、淋巴结转移、细胞分化程度显著相关(均P<0.05).SDF-1α蛋白在鼻咽癌患者的颈深上淋巴结、骨髓、肺、肝脏中表达较高(2.35±0.67),而在颈深下淋巴结、肾脏和结肠中表达较弱(0.68±0.23),差异有统计学意义(t=10.13,P<0.01).结论 CXCR4的表达与鼻咽癌的转移密切相关,CXCR4和(或)SDF-1α在鼻咽癌器官特异性转移中可能发挥重要作用.
关键词： 趋化因子受体4 间质细胞衍生因子1α 鼻咽肿瘤 器官特异性转移 -
趋化因子受体4核阳性以及血管内皮生长因子C和细胞角蛋白19的表达水平与肝细胞癌淋巴结转移风险的关系
目的 探讨趋化因子受体4(CXCR4)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)和细胞角蛋白19(CK-19)蛋白在肝细胞癌(HCC)肿瘤组织中的表达,以及与淋巴结转移和患者预后的关系.方法 收集123例术后出现淋巴结转移和145例术后无淋巴结转移的HCC石蜡包埋组织,制备组织芯片;采用免疫组化半定量法检测CXCR4、VEGF-C和CK-19蛋白的表达水平,并分析3种蛋白的表达与HCC淋巴结转移和其他临床病理因素之间的关系.结果 T分期、细胞核CXCR4蛋白的表达、VEGF-C蛋白的表达和CK-19蛋白的表达是HCC发生淋巴结转移的独立因素.细胞核CXCR4蛋白、VEGF-C蛋白高表达和CK-19蛋白阳性能预测HCC的淋巴结转移.123例有淋巴结转移的HCC患者中,细胞核CXCR4蛋白高表达和低表达患者的中位生存时间分别为15.1和24.5个月;VEGF-C蛋白高表达和低表达患者的中位生存时间分别为15.1和31.1个月;CK-19蛋白阳性和阴性患者的中位生存时间分别为12.0和19.2个月.细胞核CXCR4蛋白、VEGF-C蛋白高表达和CK-19蛋白阳性患者的预后均明显差于相应的低表达组和阴性组(均P<0.05).有无门脉癌栓、T分期、细胞核CXCR4蛋白和VEGF-C蛋白的表达以及CK-19蛋白的表达是伴淋巴结转移的HCC患者的独立预后因素.结论 细胞核CXCR4蛋白、VEGF-C高表达和CK-19蛋白阳性与HCC淋巴结转移和预后差有关,并可作为HCC淋巴结转移的独立预后因素.
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人前列腺特异性抗原启动子调控的CXCR4-siRNA逆转录病毒载体的构建及其对前列腺癌细胞的生物学效应
目的 构建人前列腺特异性抗原(hPSA)启动子调控的趋化因子受体4(CXCR4)的RNA干扰逆转录病毒载体,并探讨其对激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞CXCR4基因表达的靶向抑制作用.方法 PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA(siRNA),转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGensil-1质粒,以hPSA启动子代替U6启动子,再将重组基因片段导入到逆转录病毒真核表达载体pLXSN中,进行限制性酶切鉴定.转染PA317包装细胞,收获病毒上清,分别转染前列腺癌细胞PC-3m、LNCaP和人乳腺癌细胞MCF7.采用RT-PCR、Western blot检测CXCR4基因表达.Transwell小室侵袭实验检测前列腺癌细胞体外侵袭能力的变化.结果 通过限制性酶切鉴定该重组质粒,成功构建了CXCR4的RNA干扰质粒pLXSN/EGFP-hPSA-siCXCR4.与空载体组比较,CXCR4-siRNA对LNCaP细胞CXCR4 mRNA和蛋白表达抑制显著,48 h抑制率分别为(81.53±10.22)%和(90.52±9.31)%;对PC-3m、MCF-7细胞CXCR4 mRNA和蛋白表达无抑制作用.Transwell侵袭实验结果显示,LNCaP细胞干扰组微膜下孔细胞数为(139.9±14.2)个,空载体组为(348.4±36.4)个,两组差异有统计学意义(P＜0.05);PC-3m、MCF-7细胞干扰组微膜下孔细胞数与空载体组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 该逆转录病毒系统中,hPSA启动子调控的下游RNA干扰序列特异性地抑制激素依赖前列腺肿瘤细胞的CXCR4基因表达,具有明显的靶向性.hPSA启动子调控的靶向CXCR4基因的RNA干扰技术在激素依赖性前列腺癌的基因治疗中具有一定价值.
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CXCR4抑制剂对大鼠肺型氧中毒肺损伤的干预作用
目的：研究趋化因子受体4（chemokine receptor 4，CXCR4）特异性拮抗剂AMD3100在大鼠肺型氧中毒（ pulmonary oxygen intoxication）肺组织损伤中的干预作用。方法40只雄性SD大鼠随机分为常压空气PBS组、常压空气抑制剂组、纯氧暴露PBS组及纯氧暴露抑制剂组，每组10只。纯氧暴露PBS组及纯氧暴露抑制剂组利用0．23 MPa纯氧加压暴露，出舱后通过HE染色切片观察大鼠肺组织病理改变，ELISA法测定炎症因子TNF-α及IL-1β含量变化，应用Western印迹方法研究大鼠肺组织caspase-3含量变化。结果纯氧暴露抑制剂组大鼠肺组织淤血、水肿、出血与纯氧暴露PBS组相比程度较轻。纯氧暴露抑制剂组TNF-α、IL-1β及活化的caspase-3含量均低于纯氧暴露PBS组。结论应用AMD3100阻断CXCR4来减轻肺型氧中毒肺损伤是有效的。
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T140体外阻断SDF-1/CXCR4信号通路对人关节软骨细胞分泌MMP-3、MMP-9和MMP-13水平的影响
目的:探讨T140体外阻断基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor 1,SDF-1)/趋化因子受体4 (chemokine receptor 4,CXCR4)信号通路对人关节软骨细胞分泌基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMP)-3、MMP-9、MMP-13水平的影响,明确T140的作用机制.方法:取144块膝关节置换OA患者软骨(OA软骨组)和144块创伤性截肢患者正常软骨(正常软骨组)组织,Mankin评分均为0或1,加入SDF-1 (100 ng/ml).每组再分为A、B、C三个亚组,分别加入浓度为1000 nmol/L的T140、MAB310和SDF-1,分别于体外培养2、4天后,采用ELISA法测定培养液MMP-3、MMP-9、MMP-13含量,采用RT-PCR检测软骨组织MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA表达.结果:相同软骨组在相同时间点,A组MMP-3、MMP-9、MMP-13含量及mRNA表达均显著低于B组和C组(P＜0.05).相同时间点,OA软骨组同一亚组MMP-3、MMP-9、MMP-13含量及mRNA表达均显著高于正常软骨组(P＜0.05).结论:SDF-1通过SDF-1/CXCR4信号通路诱导人关节软骨MMP-3、MMP-9、MMP-13表达和释放;T140阻断SDF-1/CXCR4信号通路,降低软骨细胞MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA表达及分泌量.
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AMD3100体内干预SDF-1/CXCR4信号通路对关节软骨组织退变的影响
目的:探讨趋化因子受体4 (chemokine receptor 4,CXCR4)特异性拮抗剂AMD3100体内干预SDF-1/CXCR4信号通路对关节软骨组织退变的影响.方法:取6月龄雄性Hartley豚鼠36只随机分成3组,每组12只.A组(实验组):每只背部皮下植入Alzet微量泵,内含PBS液稀释过的AMD3100,每天以180μg/ml的浓度泵入;B组(实验对照组):每只皮下植入Alzet微量泵,内含PBS液;C组(空白对照组):不做任何处理.常规饲养至12周后处死Hartley豚鼠,取下双膝关节软骨,对膝关节软骨组织块行HE、番红染色,采用Mankin组织学评分,免疫组化检测软骨组织中IL-1、TNF-α的表达. 结果:HE及番红染色结果:实验组比实验对照组和空白对照组的软骨退变程度轻,实验组Mankin组织学评分结果低,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化检测结果:实验组较实验对照组和空白对照组的IL-1、TNF-α表达量低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:AMD31 00可体内干预SDF-1/CXCR4信号通路,阻断SDF-1与软骨组织表面的CXCR4受体结合,减轻软骨组织的退变.
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CXCR4及NDRG1蛋白在前列腺癌中的表达及其与侵袭转移的相关性分析
目的 探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)及N-myc下游调节基因1(N-myc downstream regulated gene 1,NDRG1)在前列腺癌组织及细胞系中的表达情况,明确其与前列腺癌恶性程度及转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测CXCR4蛋白在前列腺癌(46例)、良性前列腺增生(15例)及正常前列腺组织(10例)中的表达,分析其与前列腺癌病理分级及转移的关系.免疫印迹(Westem blotting)法检测不同前列腺癌细胞系中CXCR4及磷酸化NDRGl (pNDRG1)表达差异.结果 免疫组织化学检测发现CXCR4蛋白在前列腺癌组织(30例)中过度表达,表达率为65.2％,其表达水平与前列腺癌病理分级及Gleason评分无显著相关性(P =0.081),而CXCR4蛋白表达与肿瘤转移密切相关,前列腺癌转移患者表达率明显高于无转移患者,差异有统计学意义(P=0.002).Western blotting法检测在正常前列腺上皮细胞和不同前列腺癌细胞系中CXCR4及NDRG1蛋白表达不同,高转移潜能的去势抵抗前列腺癌细胞(PC3和DU145)中CXCR4表达较高,而作为转移抑制因子的pNDRG1表达则明显降低.结论 趋化因子受体CXCR4及转移抑制因子NDRG1可能参与调控前列腺癌的进展和转移,对前列腺癌的临床诊断和治疗有重要价值.
关键词： 前列腺癌 趋化因子受体4 N-myc下游调节基因1 转移 -
CXCR4异质性与人肺癌细胞侵袭转移能力的影响
目的 探讨趋化因子受体CXCR4异质性在人肺癌(Human Lung Cancer,简称HLC)转移机制中的作用.方法 以免疫组织化学方法检测HLC组织中CXCR4蛋白表达水的表达;通过原代培养HLC细胞,进行流式细胞仪分选出CXCR4+ HLC细胞和CXCR4-HLC细胞两个亚群.利用Transwell小室法,检测两个亚群细胞的体外侵袭力;检侧CXCL12和CXCR4的拮抗剂AMD 3100对CXCR4+ HLC细胞和CXCR4-HLC细胞体外侵袭能力的影响.结果 免疫组化检查提示肺癌组织中CXCR4阳性表达51例,阳性表达率为60.7％;经流式细胞仪检查CXCR4阳性表达率为89.4％;Transwell侵袭实验结果显示,CXCR4+ HLC细胞穿过基底膜的细胞数为(34.07±7.05)个,CXCR4-HLC细胞仅为(17.60±4.01)个.CXCR4+ HLC细胞体外侵袭能力明显强于CXCR4-HLC细胞(P＜0.05,差异有统计学意义);CXCR4+ HLC细胞株+CXCL12(30 ng/ml)穿过基底膜的细胞数为(67.60±3.87)个,显著低于CXCR4+ HLC细胞株+CXCL12 100 ng/ml组,其穿膜细胞数为(106.1±24.2)个(P＜0.05,差异有统计学意义);CXCL12(100 ng/ml)+ AMD3100组仅为(24.53±5.50).AMD3100组与另两组比较有统计学意义(P＜0.05).结论 人肺癌组织中CXCR4表达存在异质性;趋化因子CXCL12可促进CXCR4表达阳性的肺癌细胞侵袭活性,而CXCR4的抑制剂AMD3100能抑制这种侵袭活性.
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以趋化因子受体4为靶点的恶性肿瘤靶向特异性磁共振对比剂的构建及体外成像
目的 构建以趋化因子受体4 (C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4) 为靶点的磁共振靶向对比剂并通过体外恶性肿瘤细胞的靶向磁共振成像探讨磁共振信号变化与肿瘤细胞CXCR4 表达量的相关性.方法 用细胞免疫荧光法和流式细胞计数法分别观察和测定3 种恶性肿瘤细胞株(胰腺癌PANC-1、乳腺癌MCF-7 和肺癌A549) 的CXCR4 表达,并验证新型多肽Pep12 与3 种恶性肿瘤细胞表面的CXCR4 特异性结合的能力.化学合成超顺磁性纳米氧化铁颗粒(ultrasmallparamagnetic iron oxide nanoparticle,USPIO-Np),并与Pep12 实现共轭联接.动态光散射法测定Pep12-USPIO 的水和直径;用MTS 细胞增殖与毒性检测试剂盒测定其细胞毒性;磁共振成像检测不同浓度Pep12-USPIO 溶液的T2/T2*信号变化.普鲁士蓝染色验证Pep12-USPIO 与3 种肿瘤细胞的特异性结合,磁共振成像验证Pep12-USPIO 所致磁共振信号变化与3 种肿瘤细胞CXCR4 表达量的相关性.结果 3 种恶性肿瘤细胞株均有不同水平的CXCR4 表达,流式细胞计数的CXCR4阳性细胞百分比分别为PANC-1:18.7%;A549:2.9%;MCF-7:1.7%.多肽Pep12 与3 种恶性肿瘤细胞均能特异性结合,并且结合量与CXCR4 表达量呈正相关性(r ＝0.999,P ＝0.027).自行合成的Pep12-USPIO 在室温下长时间保持稳定的胶体状态,水和直径为(86.60 ±1.48) nm.Pep12-USPIO 细胞毒性较低,铁浓度低于25 μg/ml 时,ΔR2 值和ΔR2*值与铁浓度呈现良好的线性正比关系(△R2:R2 ＝0.996;△R2*:R2 ＝0.977).普鲁士蓝染色证实Pep12-USPIO 能够与3种恶性肿瘤细胞实现靶向结合,磁共振成像证实Pep12-USPIO 能够造成肿瘤细胞悬液磁共振T2/T2*值降低(P ＜0.01),并且ΔR2/ΔR2*值与肿瘤细胞CXCR4 表达水平呈显著的正相关(ΔR2:r ＝0.997,P ＝0.050;ΔR2*:r ＝1.000,P ＝0.019).结论 Pep12-USPIO 物理性质稳定,细胞毒性较低,能够与不同恶性肿瘤细胞株上的CXCR4 特异性结合并实现磁共振T2/T2*信号的减低,并且磁共振信号的变化与细胞株CXCR4 的表达量呈正相关.
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CXCR4和MMP-9在胃癌组织中表达及其意义
目的 探讨趋化因子受体4(CXCR4)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在胃癌中的表达和临床意义.方法 应用S-P免疫组织化学方法检测CXCR4和MMP-9在76例胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达水平,并分析其与胃癌临床病理因素之间的相关性.结果 CXCR4在癌旁正常胃组织中无阳性表达,在胃癌组织中的阳性表达率为55.26％；CXCR4在伴有淋巴结转移与无淋巴结转移的胃癌组织中阳性表达率分别为73.91％和36.37％,差异有统计学意义(P=0.000)；CXCR4在伴有腹膜转移的胃癌组织中阳性表达表达率为100％,显著高于无腹膜转移组(39.28％,P=0.000),且同肿瘤的分化程度及浸润深度关系密切(P分别为0.000、0.001).MMP-9在胃癌组织中阳性表达率(67.11％)明显高于癌旁正常胃组织(15.79％)(P＜0.000)；MMP-9的在胃癌中的阳性表达与肿瘤组织分化程度、浸润深度、伴淋巴结转移及腹膜转移有关(P分别为0.002、0.013、0.002、0.000).CXCR4与MMP-9的阳性表达呈正相关(r=0.406,P=0.000).结论 CXCR4和MMP-9表达强度与胃癌的恶性程度密切相关.
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CXCR4/CXCL12介导乳腺癌转移的相关机制及治疗进展
趋化因子受体(CXCR)及其配体在调控乳腺癌转移过程中发挥着重要作用,其中CXCR4表达受多种基因表达的调控.当前针对CXCR4靶点的治疗方式多种多样,包括基因水平上的、能够结合CXCR4的重要的功能位点以及能够阻断下游信号的小分子拮抗剂(肽类拮抗剂、天然提纯物质)等.这些靶向治疗在体外及动物模型中均取得了一定的成果,而对CXCR4/CXCL12的调节能够改善CXCR4靶向治疗效果,为以CXCR4为靶点的抗肿瘤治疗提供了新的思路.
