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丹参酮ⅡA通过诱导C/EBPβ表达促进人源NB4和MR2细胞系分化
目的 探索在丹参酮ⅡA(TanⅡA)诱导NB4和MR2细胞分化过程中C/EBPβ(CAAT/enhancer-binding proteinβ)的表达.方法 用TanⅡA干预NB4和MR2细胞120 h,通过形态学和膜表面标志检测NB4和MR2细胞的分化情况明确TanⅡA对NB4和MR2细胞的分化效应;0,0.1,1和10 mg/L TanⅡA干预NB4和MR2细胞,通过RT-PCR及Western blot测定C/EBPβRNA和蛋白水平表达的变化确定C/EBP3与TanⅡA浓度的关系;通过膜表面标志检测NB4和MR2细胞的分化情况明确TanⅡA浓度与NB4和MR2细胞分化间的关系.结果 TanⅡA能诱导NB4和MR2细胞分化(P＜0.05);TanⅡA能从RNA和蛋白水平诱导C/EBPβ表达升高并与浓度成正相关(P＜0.05);TanⅡA能通过非剂量依赖的模式诱导NB4和MR2细胞分化,其引起大分化效果的浓度为1 mg/L.结论 TanⅡA能有效促进NB4和MR2细胞分化;TanⅡA通过上调C/EBPβ的表达发挥分化效应;TanⅡA强作用浓度为1 mg/L.
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心肌肥厚对核转录因子C/EBPβ和心肌自噬的影响
背景 心肌肥厚初期心肌细胞自噬机制受到抑制,而核转录因子C/EBPβ和TFEB被认为参与自噬—溶酶体体系的调控.目的 探讨核转录因子C/EBPβ和TFEB在腹主动脉结扎型和甲状腺素功能亢进型肥厚心肌中的表达及心肌自噬与心肌肥厚的关系.方法 32只雄性SD大鼠被随机分配到甲状腺素注射(T3)组、生理盐水注射(对照)组、腹主动脉结扎(TAC)组和假手术组.分别采取腹主动脉缩窄法和甲状腺素腹腔注射法构建心肌肥厚早期模型.采用超声和称量评估心室肥厚程度,运用免疫荧光共聚焦显微镜成像技术和免疫印迹检测心肌自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白表达及LC3-Ⅰ转化LC3-Ⅱ程度,通过亚细胞结构技术分离细胞核—细胞质联合蛋白印迹检测核转录因子C/EBPβ和TFEB在细胞核的表达情况.结果 称量检测心体比显示,对照组心体比小于T3组(3.12±0.07比4.24±0.11,P＜0.01),假手术组心体比小于TAC组(3.20±0.16比4.69±0.20,P＜0.01)；心脏超声检测显示TAC组和T3组均出现心脏室壁增厚的形态学改变；免疫荧光技术显示TAC组和T3组均出现LC3标记荧光减弱；免疫印迹检测提示,相对于对照组,T3组细胞核C/EBPβ表达下调,而LC3-Ⅰ转化LC3-Ⅱ减少(均P＜0.05)；相对于假手术组,TAC组细胞核C/EBPβ表达下调,LC3-Ⅰ转化LC3-Ⅱ也减少(均P＜0.05).结论 心肌肥厚初期自噬减少促进心肌重构,而核转录因子C/EBPβ下调可能参与其中.
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C/EBPs和内质网应激相关分子在高三酰甘油血症性急性胰腺炎大鼠胰腺中的表达
目的 探讨C/EBPα、C/EBPβ和内质网应激相关分子(IRE1α和sXBP1)在高三酰甘油血症(HTG)相关性急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺中的表达变化.方法 96只SD大鼠按数字表法随机分为对照组、HTG组(高脂饮食2周)、AP组、HTG+ AP组,每组24只.采用腹腔注射雨蛙肽方法制备AP模型,造模后3、6、9、24 h分批处死大鼠.观察胰腺病理变化并予评分,检测血清TG、总胆固醇(TC)及血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平,实时PCR法检测胰腺组织IRE1α、sXBP1、C/EBPα、C/EBPβ mRNA表达,蛋白质印迹法检测胰腺组织IRE1α、sXBP1、NF-κB、C/EBPα和C/EBPp蛋白表达,免疫组化法检测胰腺组织C/EBPα和C/EBPβ蛋白表达.结果 高脂饮食2周后,HTG组、HTG+ AP组大鼠血清TG和TC均较对照组明显升高,差异有统计学意义(P值均＜0.05).HTG+ AP组胰腺病理变化较AP组更严重,以9h点表现为显著(P＜0.05).与AP组比较,HTG+ AP组血浆IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显升高,9h点差异有统计学意义(P值分别为0.011、0.034、0.027).AP组和HTG+ AP组胰腺组织IRE1α、sXBP1、C/EBPα、C/EBPβ mRNA表达均于3h点开始升高,分别于24、9、6、6h点达峰值.与AP组比较,HTG +AP组IRE1α、sXBP1、C/EBPα、C/EBPp mRNA表达明显更高,其中IRE1α、sXBP1 mRNA 3、6、9、24h点,C/EBPα mRNA 6、9、24h点,C/EBPp mRNA 6、9h点差异均有统计学意义(P值均＜0.05).AP组和HTG+ AP组胰腺组织IRE1α、sXBP1、NF-κB蛋白表达均于3h点开始上调,9h点达高水平,HTG+ AP组较AP组上调更显著;HTG+ AP组6、9h点C/EBPα、C/EBPβ蛋白高表达,AP组则无表达.结论 C/EBPα、C/EBPp、IRE1α、sXBP1基因参与HTG相关性AP的发病,内质网应激通路IRE1α/sXBP1和C/EBPα、C/EBPβ可能共同介导HTG性AP的胰腺病理损伤和炎症过程.
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加兰他敏对APP／PS1转基因小鼠海马区星形胶质细活化及C／EBPβ表达的影响
目的：研究加兰他敏对APP／PS1转基因小鼠海马区星形胶质细胞活化、C／EBPβ表达及行为学的影响。方法选取10月龄雄性A PP／PS1转基因小鼠20只，随机分为模型对照组（10只）和治疗组（10只），同月龄、同背景的C57BL／6野生型雄性小鼠10只作为正常对照组。治疗组皮下注射加兰他敏溶液5 mg／kg ，2次／d ，连续治疗8周，正常对照组和模型对照组给予皮下注射等量生理盐水。应用Morris水迷宫实验于干预治疗8周后开始测定各组小鼠空间学习记忆能力，连续7 d ，采用免疫组织化学、免疫荧光及Western‐blot方法观察各组小鼠海马区星形胶质细胞活化及C／EB Pβ表达水平。结果与正常对照组相比，模型对照组和治疗组小鼠Morris检测第5、6天平均逃避潜伏期延长，穿越平台次数减少（P＜0.05，P ＜0.05），而治疗组其逃避潜伏期较模型对照组缩短（P ＜0.05），穿越平台次数增多（P＜0.05）；同时治疗组小鼠星形胶质细胞活化被明显抑制，胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的阳性表达面积〔（5.003±0.823）％〕及C／EBPβ的表达量（87.711±14.622）较模型对照组〔（7.116±1.040）％，119.920±16.901〕明显减少（P＜0.05，P＜0.05）。结论加兰他敏改善APP／PS1转基因AD小鼠的学习记忆能力可能与其抑制星形胶质细胞的活化及C／EBPβ的表达有关。
关键词： 加兰他敏 APP/PS1转基因小鼠 星形胶质细胞 胶质纤维酸性蛋白 C/EBPβ -
C/EBPβ在预防心源性运动猝死中的潜在作用
长期规律适宜强度的运动可引起运动性心肌肥厚,并伴随着心脏功能的增强,目前认为是对心脏起保护作用的适应性变化[1,2].然而,近些年来,随着民众运动热情的高涨,体育赛事的增多,除了专业运动员,业余马拉松选手运动性猝死也时有发生,引起社会各界的广泛关注[3-5].其中,肥厚性心肌病是年轻运动员发生心源性猝死的主要原因,筛查病理性心肌肥厚是减少运动性猝死的重要途径[6-8].由于运动性和病理性心肌肥厚的诸多形态学指标相似,并存在两者可能重合的形态学改变,从现有的技术上进行区别鉴定尚有一定难度[9].从分子生物学角度深入了解运动性和病理性心肌肥厚的发生机制,对于两者的鉴别诊断有重要意义.目前,心肌肥厚相关的信号通路和转录因子研究多集中在病理学方面,而生理性心肌肥厚分子机制相关研究较少.
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抵抗素刺激软骨细胞趋化因子CCL3及CCL4基因表达及机制
背景：既往研究表明抵抗素可刺激软骨细胞产生大量趋化因子，在炎症性关节病变中具重要作用，但具体作用机制未明。
目的：进一步探讨抵抗素刺激软骨细胞趋化因子CCL3及CCL4基因表达上调的机制。
方法：培养人源性软骨细胞，T/C-28a2细胞及ATDC5细胞，采用qPCR检测抵抗素刺激趋化因子基因的作用，C/EBPβ表达，核因子κB亚型及软骨特异性miRNAs。给予核因子κB抑制剂(IKK-NBD)和C/EBPβ抑制剂(SB303580)，对C/EBPβ及核因子κB的共同调节作用进行检测。在给予抵抗素刺激或无抵抗素刺激时分别进行亚细胞结构定位检测。
结果与结论：①抵抗素可非依赖性上调趋化因子基因表达。②软骨细胞对抵抗素刺激应答具有非严格细胞特异性，通过C/EBPβ抑制剂、核因子κB及一些软骨细胞特异性miRNAs，可对趋化因子基因表达进行联合调控。③一过性核因子κB活性增高可增强C/EBPβ活性，且两个转录因子对趋化因子基因CCL3及CCL4的作用均为非依赖性。 -
转录因子C/EBPβ的功能与调控
CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding proteins,CLEBPβ)是转录因子C/EBPs家族的重要成员,其C端具有高度保守的DNA结合域和二聚化功能域.它主要通过对靶细胞基因转录的调节,参与细胞增殖与分化、肿瘤发生与凋亡、细胞周期调控等重要生命活动;其功能受到蛋白酶降解、磷酸化、蛋白质相互作用等多种途径的调控.本文综述有关C/EBPβ的生物学功能及其调控机理近年来的一些研究进展.
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炎症转录因子C/EBPβ在间质细胞分化中作用与机制
免疫炎症性转录因子C/EBPβ在多种细胞的分化过程中起着重要作用.如在间充质细胞中,决定着间充质干细胞(MSCs)的分化方向,诱导脂肪细胞的分化,调节成骨细胞和软骨细胞分化.了解C/EBPβ及其不同亚型的在不同的间充质细胞中的作用,尤其是在成纤维细胞、脂肪细胞、软骨细胞和成骨细胞分化过程中的调控机制很有必要,随着间充质干细胞被再生医学重视,转录因子C/EBPβ有望成为未来研究的热点.
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转录因子C/EBPβ的结构和功能概述
C/EBPβ基因编码的是一个亮氨酸拉链(basic luecine zipper,bZIP)转录因子,属于C/EBPs(CCAAT enhancer binding proteins)家族,主要通过对靶基因的调节发挥作用.目前研究表明,C/EBPβ参与细胞分化、肿瘤发生、炎症反应、能量代谢等多种重要的生命活动,其功能受到磷酸化、乙酰化、蛋白质相互作用等多种途径的调控.该文就近年来有关转录因子C/EBPβ的结构特征及生物学功能的一些研究进展作一综述.
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异常自噬在急性胰腺炎中的作用机制研究进展
急性胰腺炎(AP)作为临床上的重急症之一,是胰腺的一种潜在致命性疾病,其发病机制尚未明确.目前研究多认为胰腺的异常自噬作用参与了胰酶的提前活化过程,从而导致AP发生,研究胰腺自噬作用的机制有利于提供治疗AP的相关思路.近研究表明,CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)作为一种重要的转录因子,其基因的表达参与了自噬的调控.此文就异常自噬在AP中的相关作用及C/EBP』3调控自噬的相关机制展开综述.
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AMPK激活通过负性调控C/EBPβ抑制小鼠心脏成纤维细胞TGFβ1表达
腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)激活具有抗纤维化的作用,但其具体机制仍不十分清楚.本研究拟在心脏成纤维细胞中,明确AMPK激活对血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ,AngⅡ)引起的转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGFβ1)表达的作用及其具体机制.分离培养成年小鼠心脏成纤维细胞,酶联免疫吸附实验检测TGFβ1蛋白表达,免疫印迹实验检测AMPK活性和CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer-binding protein β,C/EBPβ)表达,双荧光素酶报告基因实验检测TGFβ1转录活性.结果显示,给予AMPK激活剂AICAR预处理可以抑制AngⅡ引起的TGFβ1产生增加,这一抑制作用可被AMPK抑制剂CompoundC逆转.生物信息学分析显示在小鼠Tgfb1启动子区存在C/EBPβ转录因子可能的结合位点.双荧光素酶报告基因实验表明,对于转染Tgfb1启动子区序列质粒的小鼠胚胎成纤维细胞,AngⅡ可以增加TGFβ1转录活性;但是对于转染缺失C/EBPβ结合位点的Tgfb1启动子区序列质粒的细胞,AngⅡ则不能增加其转录活性,提示C/EBPβ介导了AngⅡ引起的TGFβ1转录表达.进一步免疫印迹实验显示,AICAR可以抑制AngⅡ引起的C/EBPβ增加.上述结果表明,AMPK激活可以抑制AngⅡ引起的TGFβ1表达增加,其作用机制是通过抑制转录因子C/EBPβ表达,进而抑制TGFβ1表达.该研究结果提示了AMPK抗纤维化作用的一个新机制.
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EGCG 通过 ERK1／2信号通路对 BMMSCs 成脂分化能力的影响
目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对骨髓间充质干细胞（BMMSCs）增殖及成脂分化的影响并探讨其中潜在的分子机制及信号通路。方法采用 MTT 分析 EGCG 对 BMMSCs 增殖的影响。通过油红 O 染色分析 EGCG 对细胞成脂分化能力的影响。应用实时荧光定量 RT －PCR 分析 PPARγ、C ／EBPα及 C ／EBPβ等基因的表达变化。同时，运用 Western blot 验证 ERK1／2信号通路是否参与 EGCG 抑制 BMMSCs 成脂分化进程。结果低浓度 EGCG（1～10 mmol ／L）对 BMMSCs 细胞生长无明显作用，但高浓度 EGCG（20～40 mmol ／L）显著抑制细胞的增殖反应。通过抑制 PPARγ、C ／EBPα及 C ／EBPβ等关键转录因子的表达，EGCG 明显抑制 BMMSCs 的成脂分化能力。ERK1／2通路在 EGCG 抑制 BMMSCs 成脂分化进程中扮演重要角色。结论EGCG 通过 ERK1／2通路抑制 BMMSCs 的成脂分化能力。
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Ca2+和cGMP介导的信号转导对大鼠成骨肉瘤细胞株UMR-106 C/EBPβ表达的影响
目的:观察Ca2+和cGMP介导的信号转导对大鼠成骨肉瘤细胞株UMR-106的C/EBPβ表达的影响.方法:以Ca2+载体A23187、cGMP类似物CPT-cGMP及CaM阻断剂KN-62等药物作用UMR-106细胞株,用WesternBlotting方法检测C/EBPβ的表达.结果:A23187作用后,C/E肿βp35和C/EBPβp20的表达量在一定时间内随着作用时间的延长而增多;CaM-PK抑制剂KN-62可明显抑制A23187的这一作用;且CPT-cGMP可使A23187的这一效应增强.结论:Ca2+/CaM-PK和cGMP-PKG介导的信号转导能促进UMR-106细胞C/EBPβp35和C/EBPβp20的表达,并呈一定的协同作用.
关键词： Ca2+/CaM-PK cGMP/PKG 信号转导 C/EBPβ -
C/EBPβ在矽肺形成中表达的探讨
目的 探讨C/EBPa(CCAAT-enhancer binding protein-beta)在矽肺形成中的表达及其意义.方法 运用免疫组化方法检测C/EBpa在24只矽肺模型小鼠和16只正常小鼠肺组织中不同阶段的表达,对C/EBPa阳性细胞进行分析.结果 造模10 d明显可见C/EBPa的核移位,C/EBPβ在矽肺小鼠肺组织中表达较正常肺脏组织明显增强,差异有统计学意义,且造模1～30 d的大鼠和30 d后的大鼠中C/EBPβ表达的程度明显不同.结论 C/EBPa在矽肺大鼠肺脏组织内的多种炎性细胞中明显表达,且早期在一定时问范围内随着时间延长,其表达增加,能客观反映免疫或炎症早期进展程度,提示C/EBPβ在早期矽肺结节发生和进展中可能发挥重要作用.
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寻常型银屑病患者皮损中C/EBPβ表达水平的研究
目的 比较寻常型银屑病患者皮损组织及正常对照者组织中C/EBPβ表达差异,并分析其与银屑病患者PASI评分的相关性,探讨其参与银屑病的发病机制.方法 采用免疫组化染色法、实时荧光定量PCR技术检测(22例)寻常型银屑病和(15 例)正常对照组组织中 C/EBPβ 蛋白及mRNA的表达差异及分布,采用Pearson相关性分析评估C/EBPβ蛋白表达水平及与患者PASI评分相关性.结果 免疫组化染色显示银屑病中C/EBPβ蛋白广泛表达于表皮各层细胞胞核,以棘层上部及颗粒层为主;正常对照组则可见C/EBPβ蛋白丰富表达于表皮各层细胞胞核. C/EBPβ蛋白及mRNA表达量明显低于正常对照组( P<0.05). Pearson相关性分析显示CEBPβ蛋白表达量与患者PASI评分呈负相关性(r= -3.11,P<0.005).结论 寻常型银屑病患者皮损中C/EBPβ表达水平的降低可能参与寻常型银屑病的发病.
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C／EBPβ在星型胶质细胞中对TGF-β／Smad3通路的调控及分子机制研究
目的：探讨C/EBPβ在星型胶质细胞中对TGF-β/Smad3通路的调控及分子机制。方法采用实时荧光定量PCR和Western印迹的方法分别测定上调星形胶质细胞中C/EBPβ和Smad3的表达对TGF-β及Smad3的影响。并通过上调和沉默细胞中C/EBPβ的表达测定其对细胞增殖及凋亡的影响。结果上调星形胶质细胞中C/EBPβ的表达显著增强了TGF-β及Smad3的表达水平，而上调Smad3的表达则降低了TGF-β的表达；上调星形胶质细胞中C/EBPβ的表达与对照组相比，细胞增殖率提高[（73．26±4．57）％ VS （138．29±3．36）％]，凋亡率降低[（24．69±2．06）％VS （6．32±1．63）％]；沉默细胞中C/EBPβ的表达与对照组相比，细胞增殖率降低[（73．26±4．57）％VS （97．54±3．72）％]，凋亡率升高[（24．69±2．06）％VS （14．76±1．43）％]，差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论 C/EBPβ可通过诱导TGF-β的表达而激活星型胶质细胞中的TGF-β/Smad3信号转导通路，并促进星形胶质细胞增殖。
关键词： C/EBPβ TGF-β/Smad3通路 星型胶质细胞 交通性脑积水 -
透明质酸诱导单核细胞转录因子C/EBPβ的表达活化
目的 应用透明质酸(HA)刺激人外周血单核细胞,探讨转录因子C/EBPβ在单核/巨噬细胞活化中的作用.方法 分离正常人外周血单核细胞,加入透明质酸诱导单核细胞的活化,RT-PCR检测C/EBPβ mRNA的表达水平,采用Western blot检测C/EBPβ的蛋白表达水平.结果 单核细胞在未受到刺激时,转录因子C/EBPβ有本底的表达,在透明质酸刺激单核细胞18 h以后,C/EBPβ的mRNA和蛋白表达水平显著上调,而且其表达水平与巨噬细胞的活化状态呈正相关.结论 转录因子C/EBPβ在透明质酸诱导的单核细胞的活化中可能有重要的作用.
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STAT3在肝细胞增殖过程中对C/ebpβ表达的影响
目的 探讨STAT3在IL-6刺激肝细胞增殖过程中对C/ebpβ表达变化的影响.方法 用含15 ng/ml的IL-6培养基培养大鼠正常肝细胞BRL-3A,运用CCK试剂盒检测该细胞在IL-6刺激后不同时间里的增殖情况,Westemblot技术检测STAT3、P-STAT3、C/ebpβ的蛋白表达变化情况;利用siRNA瞬时转染技术抑制STAT3在BRL-3A细胞中的表达并观察IL-6刺激肝细胞增殖过程中C/ebpβ的表达变化.结果 IL-6能有效的刺激肝细胞增殖,在增殖早期STAT3 、P-STAT3、C/ebpβ表达均明显上调;在肝细胞增殖过程中沉默STAT3后C/ebpβ表达下调.结论 在IL-6肝细胞增殖过程中STAT3对C/ebpβ起正向调控作用.
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C/EBPβ在人正常肝细胞和肝癌细胞系中的差异表达及其与内质网应激相关细胞死亡的关系
目的 观察转录因子C/EBPβ在人永生化正常肝细胞和肝癌细胞系中的表达差异性,探讨其与肝癌细胞内质网应激介导的细胞死亡的相关性.方法 培养人永生化正常肝细胞系HHL5、HL7702和肝癌SMMC7721、Bel7402、HepG2、Hep3B细胞系;Hep3B细胞用衣霉素诱导内质网应激细胞模型;倒置光学显微镜下观察细胞形态;MTT法检测细胞生长抑制率;Hoechst 33258染色后荧光显微镜下检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blotting技术分别检测mRNA和蛋白的表达水平.结果 C/EBPβ的mRNA和蛋白亚型C/EBPβ-1在4种人肝癌细胞系和永生化正常肝细胞系中均有表达,但C/EBPβ-3仅在人永生化正常肝细胞系中表达,在肝癌细胞系中不表达;衣霉素能够上调人肝癌Hep3B细胞C/EBPβ的mRNA和蛋白表达水平,明显上调C/EBPβ-3的表达水平;衣霉素能够诱导人肝癌Hep3B细胞内质网应激介导的细胞死亡,表现为细胞凋亡和类凋亡两种方式.结论C/EBPβ的蛋白亚型C/EBPβ-3在人永生化正常肝细胞中表达而在肝癌细胞中不表达;C/EBPβ参与内质网应激介导的人肝癌细胞死亡.
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盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞凋亡及其对IL-1β,TNF及C/EBPβ水平的影响
目的 观察盐酸青藤碱对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响,及其IL-1β、TNF-α及C/EBPβ水平的变化,探讨防治肝癌作用的可能机制.方法 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,经不同浓度盐酸青藤碱作用后,采用MTT法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双标结合流式细胞术检测细胞的凋亡;ELISA法检测培养液中IL-1β、TNF-α的水平;Western blot技术检测盐酸青藤碱作用于人肝癌细胞后C/EBPβ的表达水平.结果 盐酸青藤碱对人肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖性,不同浓度组之间差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度(0、0.5、1和2 mmol/L)的盐酸青藤碱处理肝癌细胞48 h后,各组中凋亡细胞率分别为(8.31±0.81)%、(12.62±1.13)%;(27.43±0.97)%;(51.74±0.85)%,实验组与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);同时发现,与阴性对照组比较,盐酸青藤碱作用组SMMC-7721细胞上清液中IL-1β,TNF-α水平均明显下降,而C/EBPβ的表达水平显著增加(P<0.05).结论 盐酸青藤碱可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖,促进其凋亡,此作用可能与其抑制转录因子C/EBPβ,炎症因子如TNF-α、IL-1β的表达,进而通过破坏肿瘤微环境作用有关.
