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硫酸酯化防风多糖通过CCL3影响乳腺癌细胞MCF-7对巨噬细胞的募集和驯化作用
目的 探讨经超声提取的防风多糖(USPS)进行硫酸酯化修饰后对人乳腺癌MCF-7细胞体外增殖的抑制作用以及对肿瘤相关巨噬细胞募集和驯化的影响.方法 ①采用氯磺酸-吡啶法对USPS进行硫酸酯化修饰得到硫酸酯化USPS(S-USPS).②采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定USPS和S-USPS在不同给药浓度下对MCF-7细胞生长的抑制作用.③体外诱导生成THP-1来源的巨噬细胞,采用TIranswell法检测S-USPS作用上清对巨噬细胞募集的影响.④采用qRT-PCR和ELISA法检测S-USPS对MCF-7细胞趋化因子表达和分泌的影响.⑤采用qRT-PCR法检测S-USPS、CCL3对巨噬细胞促炎和抗炎因子表达的影响.结果 ①与USPS相比,S-USPS体外可明显抑制MCF-7细胞的增殖活性(P＜0.05),且抑制率呈剂量和时间依赖性.②S-USPS可显著促进MF-7细胞趋化因子3(CCL3)的转录和分泌.③与空白对照和MCF-7细胞上清组相比,S-USPS可上调巨噬细胞白介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达,同时下调转化生长因子β(TGF-β)、IL-10 mRNA的表达(P＜0.05).④向MCF-7条件培养基中加入CCL3中和抗体,可显著逆转S-USPS对IL-1β、TNF-α表达的促进作用(P＜0.05).结论 硫酸酯化防风多糖可通过作用于CCIL3促使MCF-7细胞对巨噬细胞的募集作用,并驯化巨噬细胞向M1型分化.
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多发性骨髓瘤骨病患者成骨细胞培养及CCL3对成骨细胞作用的研究
目的 建立多发性骨髓瘤(MM)患者成骨细胞体外培养体系,检测成骨细胞膜CCL3受体(CCR1)表达,研究CCL3对MM患者成骨细胞(OB)的作用.方法 采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞(BMMNC),应用地塞米松、β-甘油磷酸钠及维生素C诱导并纯化获得MM患者成骨细胞,以碱性磷酸酶染色及Von Kossa's钙染色鉴定成骨细胞,用流式细胞术(FCM)测定培养后成骨细胞纯度.采用FCM分别检测成骨细胞膜CCR1的表达水平,并在培养体系中加入CCL3干预后比较成骨细胞数量、形态及钙质沉积的变化.结果 经联合诱导培养获得的细胞形态不规则,有较多突起,碱性磷酸酶染色及Von Kossa's钙染色均为阳性,提示培养获得的细胞为成骨细胞,经FCM测定纯度均在90％以上.MM患者成骨细胞膜CCR1的表达水平为(74.48±7.31)％,高于正常对照组[(48.35±8.81)％](P＜0.05).加入CCL3干预后,MM患者成骨细胞形态及数量变化不显著,Von Kossa's钙染示钙结节明显减少.结论 采用骨髓来源的单个核细胞可用于体外培养MM患者成骨细胞.MM患者成骨细胞膜高表达CCR1,CCL3可抑制成骨细胞功能.提示CCL3可能在MM骨病成骨受抑机制中发挥一定作用.
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抵抗素刺激软骨细胞趋化因子CCL3及CCL4基因表达及机制
背景：既往研究表明抵抗素可刺激软骨细胞产生大量趋化因子，在炎症性关节病变中具重要作用，但具体作用机制未明。
目的：进一步探讨抵抗素刺激软骨细胞趋化因子CCL3及CCL4基因表达上调的机制。
方法：培养人源性软骨细胞，T/C-28a2细胞及ATDC5细胞，采用qPCR检测抵抗素刺激趋化因子基因的作用，C/EBPβ表达，核因子κB亚型及软骨特异性miRNAs。给予核因子κB抑制剂(IKK-NBD)和C/EBPβ抑制剂(SB303580)，对C/EBPβ及核因子κB的共同调节作用进行检测。在给予抵抗素刺激或无抵抗素刺激时分别进行亚细胞结构定位检测。
结果与结论：①抵抗素可非依赖性上调趋化因子基因表达。②软骨细胞对抵抗素刺激应答具有非严格细胞特异性，通过C/EBPβ抑制剂、核因子κB及一些软骨细胞特异性miRNAs，可对趋化因子基因表达进行联合调控。③一过性核因子κB活性增高可增强C/EBPβ活性，且两个转录因子对趋化因子基因CCL3及CCL4的作用均为非依赖性。 -
CC趋化因子受体5在滤泡状甲状腺癌中的表达
目的:研究CC趋化因子受体5(CCR5)在滤泡状甲状腺癌中的表达,并检测血清中CCR5配体的含量,为进一步探讨CCR5在滤泡状甲状腺癌演进和转移中的作用奠定基础.方法:采用免疫组化方法检测15例滤泡状甲状腺癌患者以及17例甲状腺腺瘤患者,12例癌旁甲状腺组织中CCR5的表达情况, 同时应用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清中CCL3、CCL4、CCL5的浓度.结果:滤泡状甲状腺癌组织中,CCR5表达阳性率(11/15)明显高于甲状腺腺瘤和正常甲状腺组织(P＜0.01).滤泡状甲状腺癌患者血清中CCL3、CCL5的浓度显著高于对照组(P＜0.05).结论:滤泡状甲状腺癌组织中存在着CCR5高表达,且外周血CCL3,CCL5浓度明显升高,提示CCR5可能在滤泡状甲状腺癌发病进程中发挥着重要的作用.
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CCL3和 CCL4基因多态性与肺结核易感性的关系
目的：探讨趋化因子CCL3基因位点2021C/T和CCL4基因位点5725A/C的多态性与肺结核（ TB）易感性的关系。方法选择78例TB患者（结核组）和97例体检健康者（对照组），应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）对两组CCL3-2021C/T和CCL4-5725A/C多态性进行基因分型。结果结核组CCL3-2021C/T的CC、CT、TT基因型频率分别为2．5％、15．4％、82．1％，对照组分别为0、18．6％、81．4％，P均＞0．05；结核组C等位基因频率为10．2％、T等位基因频率为89．8％，对照组分别为9．3％、90．7％，P均＞0．05。结核组CCL4-5725A/C的AA、AC、CC基因型频率分别为7．7％、30．8％、61．5％，对照组分别为5．2％、27．8％、67．0％，P均＞0．05；结核组A等位基因频率为23．1％、C等位基因频率为76．9％，对照组分别为19．1％、80．9％，P均＞0．05。结论 CCL3-2021C/T和CCL4-5725A/C多态性与TB易感性不相关。
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丹酚酸B、C组分配伍对肾纤维化炎症细胞趋化因子CCL2、CCL3的影响
目的 研究丹酚酸B、C组分配伍对肾间质纤维化大鼠肾组织炎症细胞趋化因子CCL2、CCL3的作用及机制.方法 50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、丹酚酸B组、丹酚酸C组、丹酚酸B和C按1:1配伍组(简称丹酚酸B+C组).除正常组外,其余各组均给予单侧输尿管结扎术(UUO)建立肾间质纤维化模型.各治疗组即给予相应药物灌胃治疗.第14天处死大鼠,光镜观察肾组织病理、胶原沉积,全自动生化分析仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN),WesternBlot法检测肾组织单核细胞趋化蛋白-1 (CCL2)和巨噬细胞炎症蛋白-3α(CCL3)蛋白表达.结果 与模型组比较,各治疗组HE、Masson评分均显著降低,丹酚酸C组血清Cr水平降低明显,各治疗组CCL2、CCL3相对表达显著降低.结论 丹酚酸B、C组分配伍可抑制肾组织CCL2和CCL3蛋白表达,从而改善UUO大鼠肾功能及肾脏病理,并对其肾脏起到一定的保护作用.
