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硫酸酯化防风多糖通过CCL3影响乳腺癌细胞MCF-7对巨噬细胞的募集和驯化作用
目的 探讨经超声提取的防风多糖(USPS)进行硫酸酯化修饰后对人乳腺癌MCF-7细胞体外增殖的抑制作用以及对肿瘤相关巨噬细胞募集和驯化的影响.方法 ①采用氯磺酸-吡啶法对USPS进行硫酸酯化修饰得到硫酸酯化USPS(S-USPS).②采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定USPS和S-USPS在不同给药浓度下对MCF-7细胞生长的抑制作用.③体外诱导生成THP-1来源的巨噬细胞,采用TIranswell法检测S-USPS作用上清对巨噬细胞募集的影响.④采用qRT-PCR和ELISA法检测S-USPS对MCF-7细胞趋化因子表达和分泌的影响.⑤采用qRT-PCR法检测S-USPS、CCL3对巨噬细胞促炎和抗炎因子表达的影响.结果 ①与USPS相比,S-USPS体外可明显抑制MCF-7细胞的增殖活性(P＜0.05),且抑制率呈剂量和时间依赖性.②S-USPS可显著促进MF-7细胞趋化因子3(CCL3)的转录和分泌.③与空白对照和MCF-7细胞上清组相比,S-USPS可上调巨噬细胞白介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达,同时下调转化生长因子β(TGF-β)、IL-10 mRNA的表达(P＜0.05).④向MCF-7条件培养基中加入CCL3中和抗体,可显著逆转S-USPS对IL-1β、TNF-α表达的促进作用(P＜0.05).结论 硫酸酯化防风多糖可通过作用于CCIL3促使MCF-7细胞对巨噬细胞的募集作用,并驯化巨噬细胞向M1型分化.
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防风多糖增强巨噬细胞抗肿瘤作用的实验研究
观察了防风多糖体内对S180移植瘤生长的影响,以及对S180瘤细胞免疫小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)吞噬活性的影响;同时,将S180瘤免疫小鼠腹腔Mφ再与S180瘤细胞混合后接种给小鼠,观察防风多糖对该Mφ直接抗肿瘤活性的影响.进一步用硅胶体内阻断Mφ功能,观察对防风多糖体内抗肿瘤效果的影响.结果表明,防风多糖体内应用能明显抑制S180实体瘤的生长(抑瘤率为52.92%),提高S180瘤免疫小鼠腹腔Mφ的吞噬活性(P＜0.01),并能提高S180瘤免疫小鼠腹腔Mφ与S180瘤细胞混合接种时的抗肿瘤活性(P＜0.01);但是,用硅胶阻断Mφ机能后,防风多糖的抗肿瘤作用大大下降,抑瘤率由52.92%降到11.82%,表明防风多糖的抗肿瘤作用与Mφ密切相关.
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防风多糖JBO-6体内对小鼠免疫功能的影响及抗肿瘤作用
中药多糖作为免疫增强剂其主要优点是无毒副作用,效果确切.本研究从中药防风多糖中筛选出有效多糖部位JBO-6(以下简称JBO-6),并进行了体内对小鼠免疫功能影响及抗肿瘤的实验研究.
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防风多糖对升麻素在Caco-2细胞模型中吸收、转化的影响
目的：研究防风多糖对升麻素在小肠中吸收和转化的影响。方法以Caco-2单层细胞模型模拟小肠黏膜吸收机制，通过测定Caco-2单层细胞模型顶侧端与底侧端升麻素含量的变化，分析防风多糖对升麻素小肠吸收的影响。采用高效液相色谱法检测在防风多糖作用下，升麻素和Caco-2细胞孵育2、4h后各色原酮含量，阐明在肠道环境中防风多糖对升麻素转化的影响。结果不同浓度的多糖对药物通过Caco-2单层细胞膜的量均无明显影响，各时间点升麻素的差别均无统计学意义。防风多糖、升麻素和Caco-2细胞共孵后，在培养体系和Caco-2细胞内，加入的多糖量对细胞内升麻素含量无明显影响（P＞0．05），随着多糖量的增加，升麻苷含量有升高趋势（P＜0．05），5-O-甲基维斯阿米醇苷含量明显升高（P＜0．01），且与多糖的加入量成正比，反应4 h后，培养体系中无多糖组的3种色原酮总量为10．3 nmol／L，多糖组的3种色原酮总量为75．6 nmol／L，说明多糖是升麻素转化的原因。结论防风多糖对升麻素的吸收无明显影响，但多糖能够促进升麻素向结构稳定的升麻苷转化，有效抑制色原酮类成分降解。
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硫酸酯化防风多糖的制备及其抗氧化作用研究
目的 对防风多糖(SPS)进行硫酸酯化修饰,并研究其抗氧化活性.方法 用三氧化硫-吡啶法对防风多糖进行硫酸酯化修饰得到硫酸酯化防风多糖(S-SPS),利用紫外、红外分析手段对S-SPS进行鉴定,通过气相色谱方法研究其单糖组成,并在体外化学模拟条件下,研究SPS和S-SPS的总还原能力以及对超氧阴离子(O2-)、羟基自由基(·OH)的清除作用.结果 SPS和S-SPS均由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳精组成,S-SPS的抗氧化活性明显好于SPS.结论 硫酸酯化可以改善防风多糖的水溶性,提高其抗氧化活性,是防风多糖分子修饰的一种好方法.
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正常小鼠巨噬细胞及外周血淋巴细胞亚群对防风多糖干预的反应
目的:有研究证明,防风多糖具有明显的体内抗肿瘤作用.实验拟进一步探讨防风多糖对正常小鼠巨噬细胞及外周血淋巴细胞亚群的影响.方法:实验于2006-8/11在河北北方学院实验中心完成.防风多糖提取方法:取已粉碎、真空干燥的一定量防风用85%乙醇回流提取1 h,挥干溶剂,加入适量三蒸水回流提取4 h,趁热滤过,滤渣加入三蒸水继续回流2 h,合并2次滤液,减压浓缩,4倍体积无水乙醇醇沉,静置过夜,沉淀分别用无水乙醇、丙酮、石油醚依次洗涤即得防风粗多糖.采用苯酚-硫酸法测多糖含量.昆明种健康小白鼠120只,雌雄不拘,体质量20～25 g,由本院动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.实验方法:将120只昆明种小白鼠按随机数字表法分为4组:空白对照组和防风多糖250,500,1 000 mg/kg剂量组,每组30只.每天给药1次,连续7 d.每组10只末次给药后1 h.取腹腔液制片瑞士染色,观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬情况.另10只剥取脾脏称重,计算脾指数,碘化丙啶综合染液染色.采用FACSAria流式细胞仪进行检测,ModFit软件进行细胞周期分析脾细胞增殖指数.剩余10只采用FACSAria流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群的比例.结果:120只小鼠均进入结果分析.①与对照组比较,中、高剂量组防风多糖均可提高小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数(P＜0.05～0.01).②各剂量组均可明显提高小鼠脾细胞的增殖指数,与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.01);各剂量组小鼠的脾指数虽高于对照组(P＜0.05),但组间无统计学意义(P＞0.05).⑨随着防风多糖浓度的增加,CD3+CD4+与CD3+CD8+比值增高(P＜0.05～0.01).与对照组比较,实验组CD19+的比例增高(P＜0.05～0.01),但变化无剂量依赖性.结论:防风多糖具有剂量依赖性的提高小鼠特异性免疫和细胞免疫功能,并促进小鼠脾淋巴细胞的增殖;对小鼠体液免疫功能的影响无剂量依赖性.
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防风多糖的提取分离与含量测定方法研究
目的 建立防风多糖提取、分离、纯化及其含量测定方法.方法 以水提醇沉法制取防风粗多糖,以三氟三氯乙烷法除蛋白,用D280阴离子交换树脂柱层析脱色,采用紫外分光光度法测定防风总多糖含量.结果 紫外光谱全波长扫描结果显示,防风多糖与葡萄糖标准品加入显色剂后大波长均为486 nm,且在260和280 nm处没有吸收峰.防风多糖平均回收率为98.54％,RSD为1.09％.防风中多糖含量为2.98％.结论 采用本实验提取方法可有效提取分离出纯化的防风多糖,利用紫外分光光度法测定防风结果准确,可作为防风总多糖含量测定的方法.
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防风多糖XC-2的组成及摩尔比测定
采用薄层层析和气相层析法,测定出防风多糖XC-2的单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸,摩尔比为1.05:7.01:0.16:0.79:10.00:4.69.
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防风多糖对骨质疏松大鼠的作用及机制研究
目的 探讨防风多糖对切除卵巢后骨质疏松大鼠模型的作用及机制.方法 切除大鼠双侧卵巢的方法建立骨质疏松模型,给予防风多糖(100、200 mg/kg)治疗,检测大鼠骨密度及骨钙素、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6水平.结果 防风多糖组大鼠骨质密度高于模型组,血清中肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6水平低于模型组,并且高剂量作用更为显著.结论 防风多糖能够提高切除卵巢后骨质疏松大鼠骨密度,其可能通过调节肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6水平而发挥作用.
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防风多糖诱导人白血病K562细胞凋亡的研究
目的:探讨防风多糖对体外培养人白血病K562细胞有无调亡诱导作用.方法:MTT法检测防风多糖对K562细胞的增殖抑制作用;荧光显微镜观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;流式细胞术采用Annexin-V/PI双染实验检测细胞凋亡.结果:MTT法检测显示防风多糖对K562细胞具有显著生长抑制作用;荧光显微镜下观察发现防风多糖作用的K562细胞中出现核固缩、凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳呈现DNA梯形条带即(DNA ladder);流式细胞仪分析结果显示细胞凋亡百分率随防风多糖浓度增加而增加.结论:防风多糖对体外培养人白血病K562细胞具有增殖抑制及凋亡作用.
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防风多糖对过敏性鼻炎大鼠免疫因子的影响
目的: 通过免疫因子水平变化考察防风多糖对卵蛋白致大鼠过敏性鼻炎(AR)模型的治疗作用及其作用机制.方法: 采用卵清蛋白(OVA) 0.3 mg,Al(OH)330 mg及生理盐水1 ml混合后腹腔注射,进行初次免疫,第15天开始给予4%OVA 200μg滴鼻加强免疫,每天1次,复制AR动物模型.SD大鼠50只随机分为正常组、模型组、阳性组(鼻炎康片组,400 mg·kg-1)、防风多糖高、中、低剂量组(600,300,150 mg·kg-1)等6组.灌胃给药14 d后,各组大鼠采用腹主动脉取血并分离血清,放免法检测血清免疫因子和炎症因子的含量变化.结果: 阳性组和防风多糖剂量组均可不同程度抑制AR导致的喷嚏、搔鼻、流清涕等典型症状,并能减轻相关炎症反应症状.药物干预治疗后,阳性组和防风多糖各剂量组均可下调白介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)、白介素-5(IL-5)等细胞免疫因子的表达,提升白介素-12(IL-12)、干扰素-γ(INF-γ)的表达水平,同时抑制炎症因子血清免疫球蛋白E(IgE)、组胺(HA)、白三烯C4(LTC4)、前列腺素D2(PGD2)的生成及释放,各剂量组与模型组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);防风多糖高、中、低三个剂量组量效关系不明显,高剂量组优于中、低剂量组.结论: 防风多糖对AR有治疗作用,可下调AR大鼠血清中IL-4、IL-5水平,上调IFN-γ、IL-12水平,调节Th1/Th2淋巴细胞亚群平衡和机体免疫应答,减轻鼻黏膜充血炎症;其减轻OVA致AR过程中免疫因子的生成和释放可能是其治疗AR的重要机制.
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防风多糖对巨噬细胞分泌细胞因子的影响
目的:观察防风多糖对体外培养的巨噬细胞分泌细胞因子的影响,探索防风多糖活化巨噬细胞的部分机制.方法:常规提取防风多糖组分,体外与小鼠腹腔巨噬细胞共同培养,ELISA法检培养液中肿瘤坏死因子α(TNF -α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL -8)等细胞因子(CK)的影响.结果:防风多糖组分在一定浓度下能明显促进小鼠腹腔Mφ释放IL -l和IL -8,其效应具有浓度差异性(P＜0.05或P＜0.01).结论:防风多糖能明显增加体外培养的巨噬细胞释放IL-1和IL-8,提示中药防风调节免疫功能的药理作用可能与其多糖组分刺激巨噬细胞释放细胞因子有关.
