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解毒三根汤对结肠癌相关成纤维细胞VEGF、IL-6的影响及对Caspase信号通路的探讨
目的:探讨解毒三根汤(虎杖根、水杨梅根、藤梨根)对肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的血管内皮生长因子(VEGF)、白介素-6(IL-6)的影响以及对Caspase信号通路的探讨.方法:BALB/c小鼠皮下接种CT-26结肠癌细胞(1.2×106mL);随机分为3组:正常对照组、模型组、解毒三根汤组,ELISA检测3组CAFs上清液中VEGF、IL-6的表达量,实时荧光定量PCR检测各组CAFs中Caspase-3、Caspase-8的mRNA表达量.结果:24h及48h解毒三根汤组刺激的CAFs上清液中VEGF、IL-6的表达量较模型组显著降低(P＜0.01);解毒三根汤组Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达量较模型组明显上升(P＜0.01).结论:解毒三根汤降低CAFs上清液中VEGF、IL-6的表达量,提高CAFs中Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达量,可能是其抑制肿瘤细胞迁移侵袭的机制.
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黄芪多糖对骨髓间充质干细胞向肿瘤相关成纤维细胞分化中IL-6/STAT3、TNF-α/NF-KB通路的影响
目的 观察黄芪多糖(APS)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)向肿瘤相关成纤维细胞(TAFs)分化中对IL-6/STAT3、TNF-α/NF-κB通路的影响,探讨其可能的调控机制.方法 以白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)诱导BMSCs,建立向TAFs方向分化的炎性微环境模型;采用CCK-8法分别检测不同浓度IL-6/STAT3通路阻断剂AG490和TNF-α/NF-κB通路阻断剂BMS345541对BMSCs和诱导后BMSCs增殖能力的影响,Western blot检测阻断剂所对应的靶向蛋白JAK2和IKKB的表达.将BMSCs分为空白组、模型组、模型+AG490组、模型+BMS345541组、模型+APS组,检测各组TAFs标记分子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)和IL-6/STAT3、TNF-α/NF-κB通路关键蛋白STAT3、p65的表达.结果 与空白组比较,模型组BMSCs增殖水平明显增强(P＜0.05);10 μmol/L AG490和5 μmol/L BMS345541较模型组BMSCs抑制作用明显增强(P＜0.05).10 μmol/L AG490对应的靶蛋白JAK2较其他各组表达减弱,5 μmol/L BMS345541对应的靶蛋白IKKβ较其他各组表达减弱,故选为佳作用浓度.通路阻断剂干预结果表明,与空白组比较,模型组TAFs标记分子α-SMA、FAP和通路关键蛋白STAT3、p65表达均明显升高(P＜0.05);与模型组比较,各干预组TAFs标记分子α-SMA、FAP和通路蛋白STAT3、p65表达均明显下降(P＜0.05).结论 APS对IL-6、TNF-α诱导的BMSCs向TAFs方向分化有抑制作用,其机制可能与调控IL-6/STAT3、TNF-α/NF-κB通路有关.
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miR-210参与调控间充质干细胞向肿瘤相关成纤维细胞转化
目的 探讨miR-210是否在乳腺癌细胞诱导人脂肪来源间充质干细胞(hAD-MSCs)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)转化中发挥作用.方法 Transwell 小室将乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231分别与hAD-MSCs共培养, RT-qPCR检测不同时间点(0、3、6及9 d)收取乳腺癌细胞中miR-210的表达;RT-qPCR检测共培养后hAD-MSCs向CAFs转化及CAFs相关特征标志物平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)和腱生蛋白-c(tenascin-c)的基因表达,用West-ern blot检测α-SMA和成纤维细胞活化蛋白-α(FAPA)的蛋白表达;慢病毒分别向乳腺癌细胞传导miR-210抑制剂和miR-NC,然后与同比例的MSCs混合注射到裸鼠皮下,动态观察肿瘤的生长情况,4周后分离提取肿瘤组织中的CAFs,RT-qPCR和Western blot检测CAFs中α-SMA、FAPA 和波形蛋白(vimentin)的表达.结果 与hAD-MSCs共培养后,乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞中miR-210表达都持续上调(P<0.05).共培养条件下抑制肿瘤细胞表达miR-210可以抑制MSCs向CAFs转化(P<0.05).抑制肿瘤细胞miR-210的表达可以降低肿瘤生长(P<0.05).结论 miR-210作为一种重要的信息分子介导了肿瘤微环境中MSCs向CAFs转化.
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肿瘤相关成纤维细胞在血液系统恶性肿瘤中的潜在价值
肿瘤相关成纤维细胞(CAF)是肿瘤微环境的主要成分之一,对肿瘤的发生、发展、浸润及转移具有极其重要的作用,在多种实体肿瘤中其甚至可决定肿瘤细胞的命运.鉴于CAF在推动肿瘤进展方面的关键作用,因而CAF近已经成为多种肿瘤的治疗靶点,但在血液系统肿瘤中CAF相关研究尚少.新近研究发现,急性髓系白血病(AML)、多发性骨髓瘤(MM)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)等多种血液恶性肿瘤的耐药、复发及骨髓增殖性肿瘤(MPN)骨髓纤维化的发生、发展与CAF密切相关,靶向CAF可有效提高化疗药物对肿瘤细胞的杀伤效应,进而提高疗效,因而有望成为血液系统肿瘤治疗的新靶点.本文总结了近年来肿瘤相关成纤维细胞在血液系统恶性肿瘤中的研究进展.
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胆囊癌淋巴转移的研究现状与展望
淋巴转移是胆囊癌(gallbladder cancer,GBC)常见的转移方式,也是GBC预后的重要影响因素之一.因此明确GBC淋巴引流的途径,对发生转移的淋巴结进行准确分站,探讨手术清扫范围,寻找相应淋巴转移指标显得尤为重要;同时淋巴示踪剂的使用极大方便了术中淋巴结清扫;积极探索GBC淋巴转移的分子机制将可能提供新的GBC治疗靶点.本文就近年来GBC的淋巴转移途径、分站、相应评估指标、示踪剂和淋巴转移的发生机制等方面的进展进行简要总结.
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内皮间充质转化的研究进展
内皮间充质转化(EndMT)即内皮细胞在促成纤维刺激下可获得成纤维细胞样表型.EndMT不仅参与人体心脏正常发育,还参与诸多疾病的发生发展.本文就近年来EndMT发生机制及其相关疾病研究进展作一综述,以期为临床相关疾病治疗提供新靶点.
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肿瘤相关成纤维细胞:抗肿瘤治疗的新靶点
肿瘤相关成纤维细胞(tumor-asscciated fibroblast,TAF)是肿瘤-宿主界面微环境中主要的宿主细胞,具有促进肿瘤细胞生长、侵袭及免疫抑制的作用.鉴于TAF基因组稳定且占肿瘤成分的比例较大,故有望成为抗肿瘤治疗的新靶点.
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肿瘤相关成纤维细胞在肿瘤发生、发展中的作用
肿瘤主要由肿瘤细胞和肿瘤间质组成.其中肿瘤间质主要包括免疫细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞和细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)[1￣6].与正常组织不同,肿瘤间质常具有炎症细胞数目增多、成纤维细胞活化及ECM成分改变等特点.肿瘤间质内活化的成纤维细胞被称为肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAF).CAF在肿瘤的发生、发展方面起重要促进作用[7￣10].现就CAF的来源及其在肿瘤发生、发展中调控机制进行综述.
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肿瘤相关成纤维细胞的代谢重编程与肿瘤进展的关系
肿瘤的生长并不完全由肿瘤细胞本身决定,肿瘤相关成纤维细胞(CAF)是肿瘤微环境的主要组成部分,在肿瘤的代谢、生长、转移、免疫逃逸和化疗耐药等方面具有重要作用.CAF的代谢重编程使其更倾向于有氧糖酵解,被称为"温伯格效应".目前认为,CAF的代谢重编程调控机制可能与致癌基因c-myc、缺氧诱导因子1α和腺苷一磷酸(AMP)活化的蛋白激酶有关.代谢重编程的CAF可通过多种途径促进肿瘤的生长、发展:肿瘤微环境中的CAF可以通过分泌大量的细胞因子、趋化因子和促血管生成因子间接或直接调节肿瘤免疫;通过调节肿瘤间质液压、酸化肿瘤微环境,以及分泌可溶性因子促进肿瘤耐药;肿瘤组织中的CAF可募集抑制性免疫细胞,在肿瘤局部形成抑制性免疫微环境,促进上皮-间充质转化,激活肿瘤细胞增殖的信号通路从而促进肿瘤生长、耐药,形成恶性循环.阻断肿瘤、CAF和免疫微环境间的相互作用,可能成为未来肿瘤治疗的靶点.
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肿瘤相关成纤维细胞对肿瘤微环境及肿瘤免疫代谢影响的研究进展
肿瘤相关成纤维细胞(CAF)是构成肿瘤微环境(TME)的主要组成部分.与静息的成纤维细胞不同, CAF代谢旺盛,且分泌大量的蛋白组,包括细胞因子、趋化因子和各种蛋白酶等.CAF可由原发灶定居的成纤维细胞激活转化而成,也可从外周招募而来.在肿瘤演进的各个时期,CAF发挥着重要的调节作用.CAF可以直接影响肿瘤细胞,也可以作用于非肿瘤成分,从而调节肿瘤的进展.针对CAF的治疗,或许有望成为新的肿瘤靶向治疗方法.本文从CAF的起源和特点,以及对TME和免疫代谢的研究进展作一综述.
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乳腺癌间质成纤维细胞体内外研究现状及展望
目的:总结间质成纤维细胞与乳腺癌发生发展的研究现状,探讨间质成纤维细胞在乳腺癌发生、生长和转移中的作用及对治疗的影响.方法:应用Medline、PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“乳腺癌、间质、肿瘤相关成纤维细胞、肿瘤微环境”为中文关键词,“breast cancer、stromal、carcinoma-associated fibroblasts、tumor microenvironment”等为英文关键词,检索1994-2011年的相关文献,共检索到英文文献258条,中文文献56条.纳入标准:1)乳腺癌间质成纤维细胞的形态和特性;2)分离和培养的方法;3)功能的研究;4)对乳腺癌的发生、生长、转移,以及治疗的影响.结果:乳腺癌间质成纤维细胞通过细胞与细胞间的相互接触,在各种趋化因子和(或)细胞因子的作用下,通过不同的信号通路促进上皮细胞恶性转化,在乳腺癌的发生、生长及转移中起着重要的作用,但具体的机制尚不明确.结论:乳腺癌间质成纤维细胞通过细胞间的相互作用,促进细胞的恶性转化,并通过分泌各种的细胞因子使得乳腺癌细胞的增殖、转移和侵袭能力大大加强,促进了乳腺癌的发展.它对于乳腺癌的内分泌治疗和化疗疗效有着重要的影响,可能是乳腺癌治疗的新靶点.
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宫颈癌相关成纤维细胞的分离与鉴定
目的 宫颈癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)在宫颈癌的进展中起着重要作用,原代成纤维细胞培养与体内微环境更为接近.本研究旨在分离纯化并鉴定CAF,初步探讨CAF的生物学特性.方法 选择郑州大学第一附属医院妇科2015-01-04-03-27收治的患者6例.用胶原酶消化法分离宫颈正常成纤维细胞(normal fibroblast,NF)和CAF;显微镜下观察细胞形态;用CCK-8法绘制生长曲线;ELISA法检测细胞上清中人转化生长因子β1(transforminggrowth factor betal 1,TGF-β1)的分泌水平;免疫荧光法及蛋白质印迹法检测细胞标志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和成纤维细胞活化蛋白α(fibroblast activation protein α,FAPα).结果 CAF大小、形状不一,密度接触抑制消失;NF大小、形状一致,存在密度接触抑制.CAF的生长速度快于NF,z=-2.160,P=0.031.CAF中TGF-β1的浓度为(449.93±19.99) ng/L,而NF中为(209.50±16.25) ng/L,二者差异有统计学意义,z=-2.611,P=0.008.CAF高表达α-SMA和FAPα,而NF不表达α-SMA和FAPα,两者均表达Vimentin.结论 成功分离纯化并鉴定CAF.CAF具有平滑肌和成纤维细胞双重特性,其增殖能力及细胞活性均强于NF.
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调控肿瘤相关成纤维细胞miRNAs的研究进展
实体肿瘤是高度复杂的组织,由癌细胞和间质内各种不同的细胞和细胞外基质(ECM)组成.肿瘤相关成纤维细胞(tumor-associated fibroblasts,TAFs)通常简称为肌成纤维细胞,从固有成纤维细胞转变而来,成为肿瘤间质重要的成分之一,TAFs可通过多种细胞因子与肿瘤细胞相互作用,从而在肿瘤发生、增殖、浸润、转移、肿瘤血管生成、上皮-间质转化、肿瘤干细胞以及治疗耐受等复杂过程中起重要作用.一、TAFs与肿瘤的关系近年来,国内外许多研究发现,肿瘤微环境可调控肿瘤的发生、增殖及转移等多种生物学行为.其中肿瘤微环境中的成纤维细胞,即肿瘤相关成纤维细胞(TAFs),被认为在肿瘤-间质相互作用以及包括乳腺癌在内的众多恶性肿瘤的发生[1]、增殖[2]、转移[3]、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)[4]、血管生成[5]、肿瘤干细胞[6]以及治疗耐受[7]等复杂过程中发挥着重要作用.
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肿瘤相关成纤维细胞通过分泌基质细胞衍生因子1调节肺癌A549细胞的化疗耐药性
目的 探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAF)是否通过分泌基质细胞衍生因子1(SDF-1)调节肺癌A549细胞的化疗耐药性.方法 采用原代细胞分离方法获得肺癌患者的 CAF,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测A549细胞的增殖能力和对化疗药物的耐药性,荧光定量PCR检测Bcl-xL mRNA水平,Western blot检测Bcl-xL蛋白水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CAF分泌SDF-1的情况.结果 CAF可以促进肺癌A549细胞的增殖,而正常纤维细胞对A549细胞增殖的影响不明显.培养72 h后,A549+CAF上清组和A549+NF上清组的吸光度(A)值分别为0.814±0.006和0.753±0.006,差异有统计学意义(P<0.05).荧光定量PCR检测结果显示,A549组、A549+NF上清组和A549+CAF上清组的Bcl-xL mRNA表达水平分别为1.00±0.11、1.10±0.09和3.50±0.30,A549+CAF上清组与A549+NF上清组比较,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot检测显示,A549组、A549+NF上清组和A549+CAF上清组的Bcl-xL 蛋白表达水平分别为1.00±0.08、1.10±0.12和3.10±0.25,A549+CAF上清组与A549+NF上清组比较,差异有统计学意义(P<0.05).ELISA检测显示,A549+NF上清组和A549+CAF上清组中SDF-1含量分别为3.23±0.02和9.53±0.10,差异有统计学意义(P<0.05).MTT检测显示,A549组、A549+AMD3100组、A549+NF上清组、A549+NF上清+AMD3100组、A549+CAF上清组和A549+CAF上清+AMD3100组的A值分别为0.43±0.03、0.25±0.02、0.48±0.03、0.31±0.03、0.72±0.06和0.45±0.03,A549+CAF上清和A549+NF上清组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CAF通过分泌SDF-1激活肺癌A549细胞中的趋化因子受体4(CXCR4),提高Bcl-xL的表达,增强肺癌A549细胞对顺铂的化疗耐药性,这为 CAF作为肺癌潜在的治疗靶点提供了实验依据.
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转化生长因子β1诱导骨髓来源间充质干细胞向肿瘤相关成纤维细胞分化
目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)在骨髓来源间充质干细胞(MSCs)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)分化中的作用.方法 将MSCs与肿瘤细胞条件培养基(TCM)或含TGF-β1培养基共培养后,采用逆转录定量PCR(qRT-PCR)、Western blot和免疫荧光等方法检测MSCs向CAFs分化的情况.结果 qRT-PCR检测显示,TGF-β1组中成纤维细胞活化蛋白(FAP)、肌动蛋白A(ACTA)、小窝蛋白(CAV)、细胞因子配体5(CCL5)、C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)、成纤维细胞表面蛋白1(FSP1)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)和波形蛋白(vimentin) mRNA的相对表达水平分别为9.92±2.16、7.76±1.28、3.04±0.95、3.28±2.16、2.13±0.71、1.41±0.66、2.25±0.86和1.38±0.56,TCM组中FAP、ACTA、CAV、CCL5、CXCR4、FSP1、SDF-1和vimentin mRNA的相对表达水平分别为7.52± 1.76、5.02± 1.18、1.98± 1.19、1.82±1.19、2.95±0.86、1.44±0.67、2.08±0.74和1.47±0.55,表明MSCs可以表达CAFs表型.TGF-β1信号通路抑制剂SB-431542可以抑制MSCs向CAFs转化.免疫荧光和Westernblot检测结果均显示,MSCs在TGF-β1和TCM作用下可表达CAFs表型.结论 TGF-β1通过上调磷酸化Smad3表达,诱导局部MSCs向CAFs分化,从而进一步促进肿瘤的生长.
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肿瘤相关成纤维细胞对口腔鳞癌细胞生长和迁移的影响
目的：研究肿瘤相关成纤维细胞( cancer associated fibroblasts, CAFs)对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响,初步探讨CAFs在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法采用原代培养的方法,培养口腔鳞癌相关成纤维细胞,光学显微镜观察其形态,免疫组化和免疫印迹实验进行鉴定,CCK-8法检测细胞的增殖能力。 transwell迁移实验检测CAFs诱导口腔鳞癌细胞迁移的能力；萤火虫荧光素酶报告系统检测CAFs对肿瘤细胞增殖能力的影响；平板克隆形成实验评价 CAFs对肿瘤细胞克隆形成能力的影响。结果成功分离培养出口腔鳞癌来源的 CAFs。CAFs能促进口腔鳞细胞的迁移、增殖和克隆形成等生物学行为。结论 CAFs能显著影响口腔鳞癌的增殖和迁移,表明其在口腔鳞癌的发生发展中发挥着一定的作用。
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肿瘤相关成纤维细胞研究进展
人类肿瘤的90%来源于上皮组织,上皮细胞需要在生长信号的不断作用下避免分化和凋亡,获得无限复制的潜能,并依靠新生血管生成、获得侵袭、转移能力才能终形成肿瘤.
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肿瘤相关成纤维细胞的代谢重编程及其在肿瘤发生、发展中的作用
肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAFs)是肿瘤基质细胞的主要成分,占到肿瘤组织总细胞数目的一半左右.CAFs主要由肿瘤周围静止成纤维细胞经诱导活化而来,与正常成纤维细胞相比,CAFs表现出明显不同的生物学特性,其代谢亦发生了重编程.CAFs能够通过直接与肿瘤细胞接触或者分泌多种细胞因子或代谢中间产物,在肿瘤的恶性增殖、转移、免疫耐受及治疗抵抗等方面均发挥重要的调控作用.近年来,CAFs已经逐渐成为肿瘤研究领域的热点,并有望成为肿瘤治疗的一个潜在靶点.本文将对有关CAFs的代谢重编程以及在肿瘤的发生、发展中的作用的研究进展做一综述.
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肿瘤相关成纤维细胞促肿瘤转移和放射抵抗的相关研究进展
肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)作为肿瘤微环境中的主要细胞类型,其生物学特性具有来源、表型和功能异质性,通过产生和分泌各种趋化因子和促进上皮间充质转化,从而促肿瘤生成、增殖、侵袭和转移.CAFs可介导肿瘤干细胞支持肿瘤产生及增殖,促使肿瘤细胞放疗抵抗.CAFs还可通过旁分泌外泌体,增强肿瘤的生长和能诱导放疗抵抗.大分割放疗应用于CAFs,可诱导CAFs表达衰老表型发生变化,促肿瘤能力下降,为临床肿瘤的放疗带来新契机.
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肿瘤微环境与肿瘤血管新生
肿瘤微环境是肿瘤细胞、内皮细胞、细胞外基质、免疫细胞、成纤维细胞等共同构成的肿瘤的局部病理环境,肿瘤血管形成与肿瘤微环境密切相关.研究显示,肿瘤微环境诱导内皮细胞基因表达朝向有利于血管形成的方向发展,血管形成相关因子的主要储存于胞外基质,肿瘤相关的成纤维细胞分泌细胞因子使大量内皮细胞募集于肿瘤等;免疫细胞也是血管形成相关的趋化因子,生长因子和蛋白酶的的重要来源.肿瘤血管是肿瘤营养输送及肿瘤细胞的逃逸通道,肿瘤微环境可调节肿瘤血管的生成,影响肿瘤的生长和迁移.
