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莪术醇联合5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨莪术醇(curcumol)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对大肠癌LoVo细胞增殖和凋亡作用的影响,以及药物处理后,LoVo细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)表达量的变化情况.方法:莪术醇(50 mg·L-1)单独或联合5-Fu(2 mg·L-1)作用大肠癌LoVo细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组药物对细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞术分析各组对细胞凋亡作用的影响,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中,增殖和凋亡相关蛋白PCNA,Bcl-2蛋白表达的变化情况.结果:与空白组比较,莪术醇,5-Fu单独给药以及联合用药,均可以有效抑制大肠癌LoVo细胞的增殖,促进细胞凋亡(P＜0.05),同时可以降低PCNA,Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05);与单独给药组比较,联合用药后,凋亡的促进作用更为明显(P＜0.05).与空白组比较,各药物组可以更有效的抑制PCNA,Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05).结论:莪术醇联合5-氟尿嘧啶能有效抑制人大肠癌LoVo细胞的增殖和凋亡,与单独用药组比较,联合用药可以使癌细胞的敏感性增强,极大程度的促进人大肠癌LoVo细胞凋亡,且这些机制可能与下调PCNA,Bcl-2蛋白表达有关.
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抑制促肝再生磷酸酶-3对大肠癌细胞迁移能力的影响
目的:观察促肝再生磷酸酶-3(phosphatase ofregeneration liver-3,PRL-3)抑制剂原钒酸钠(sodium orthovanadate,SoV)对大肠癌细胞株Colo-320迁移能力的影响.方法:应用Western blot方法检测PRL-3在7株大肠癌细胞中的表达,筛选表达强的1株做下一步抑制实验.选择PRL-3拮抗剂SoV,通过细胞划痕实验观察其在0.5 μmol/L浓度下对癌细胞运动能力的影响,高倍倒置显微镜下计算细胞迁移距离.细胞爬片原位杂交观察SoV对PRL-3 mRNA的表达.结果:PRL-3表达强的结肠癌细胞株为Colo-320.细胞划痕实验显示,SoV作用48 h细胞仅迁移相当于4-7个细胞的距离,400×倍镜下精确测量20个细胞在0-48 h迁移距离,计算对照组细胞迁移速度为39.12±10.11μm/h,SoV为12.84±6.78 μm/h,差异非常显著(P<0.00001).SoV作用细胞48 h后原位杂交结果未见PRL-3 mRNA阳性表达.结论:SoV能显著抑制Colo-320细胞迁移能力,其机制可能与抑制PRL-3酶活性以及基因转录有关.
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用HPLC法测定5-Fu在大肠癌细胞中的吸收特性
目的：建立大肠癌细胞中提取和测定5-Fu含量的HPLC方法，并观察药物浓度、时间及给药次数与大肠癌细胞内5-Fu含量的关系。方法：用0．1％氢氧化钠裂解大肠癌细胞后用乙醚-异丙醇(8：2)提取细胞内5-Fu，HPLC法测定大肠癌细胞内5-Fu含量。分析条件：Spherisorb C18柱，流动相：0．05 mol／L磷酸盐缓冲液，紫外检测波长：265 nm。结果：5-Fu进样量在0．000526μg～0．420 8μg之间呈良好线性关系，线性方程为Y=3154159X-408．89，r=0．999 7；5-Fu的小检测限为5．26 ng；5-Fu不同加入量的的平均回收率分别为82．15％和87．50％；重复性试验RSD=6．72％。结论：用HPLC法测定大肠癌细胞中5-Fu含量的方法是可行的；大肠癌细胞对5-Fu的摄取可能存在“饱和现象”，当给药浓度达到一定量(5μg／mL)时，癌细胞中5-Fu含量高。
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人参皂苷对胃肠肿瘤敏感性测定的实验研究
目的:研究人参皂苷对胃癌细胞、大肠癌细胞的作用.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法测定胃癌38例、大肠癌40例癌细胞对人参皂苷及8种常用化疗药物的敏感性.结果:人参皂苷对大肠癌敏感,对胃癌不敏感,其作用明显低于5-氟脲嘧啶、丝裂霉素、平阳霉素、噻替派、足叶乙苷.结论:人参皂苷可用于配合其它化疗药辅助治疗肠癌及胃癌.
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LDH法检测新城疫病毒野生株与疫苗株对大肠癌的体外杀伤作用
目的 比较新分离的新城疫病毒野生株(NDV7793、NDVD817)与疫苗株La sota对大肠癌的体外杀伤作用.方法 3株病毒作用于大肠癌细胞株LS174T和LOVO,用乳酸脱氢酶微量释放法测定病毒的杀瘤活性并通过测定培养上清液的血凝效价来检测病毒的增殖能力.结果 3株新城疫病毒均可杀伤大肠癌细胞并可在其复制增殖,对正常大肠细胞无明显细胞毒性.而对正常大肠组织细胞未见明显影响(P＜0.05);野生株对癌细胞的杀伤作用较强,72 h后对LOVO细胞株的杀伤效应＞90%;LOVO大肠癌细胞对NDV敏感性强于LS174T大肠癌细胞.结论 3株NDV对大肠癌细胞均有选择性杀伤作用,野生株病毒的抑瘤效应强于疫苗株,对正常大肠组织无细胞毒性.
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S-腺苷甲硫氨酸抑制大肠癌细胞生长的实验研究
目的:探讨S-_腺苷甲硫氨酸(SAM)对人大肠癌细胞生长的抑制作用及抑癌机制.方法:用SAM对大肠癌细胞系HT-29进行处理,使其癌基因c-myc和H-ras启动子区域甲基化.用噻唑蓝(MTT)法检测肿瘤细胞生长状态;甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)(MSP)法检测c-myc和H-ras启动子区域甲基化状态;细胞免疫荧光染色检测C-MYC和H-RAS蛋白的表达情况.结果:大肠癌细胞系HT-29经SAM处理后,癌基因c-myc和H-ras启动子区域重新出现甲基化.经SAM处理的大肠癌细胞组与对照组相比,细胞生长受到明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05);C-MYC和H-RAS蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P < 0.05),结论:SAM能使HT-29中癌基因c-myc和H-ras启动子区域重新甲基化,降低C-MYC和H-RAS蛋白的表达水平,且有效抑制了肿瘤细胞的生长,从而为肿瘤治疗提供了新的靶点.
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大肠癌细胞和外周血淋巴细胞对化疗药物的体外敏感性
目的:探讨大肠癌细胞及外周血淋巴细胞对化疗药物体外敏感性的及二者的相关性.方法:用MTT法检测40份大肠癌标本及外周血淋巴细胞对氟尿嘧啶(5-FU)、奥沙利铂(L-OHP)、伊立替康(CPT)单药、两药及三药(全量或半量)应用的敏感性.结果:单药有效的药物依次为伊立替康、奥沙利铂和氟尿嘧啶,敏感率分别为35.0%、27.5%和20.0%;三药联合应用的抑制效果显著优于两药联合(P＜ 0.05),三药全量及半量联合应用效果差异无显著性(P＞ 0.05);癌细胞及外周血淋巴细胞对3种化疗药物的敏感性有很好的相关性(r=0.969).结论:MTT可用于为大肠癌患者选择合适的化疗药物,由氟尿嘧啶、奥沙利铂及伊立替康的联合应用具有高效协同抑制大肠癌细胞的作用.
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大肠癌细胞及其上清液体外培养泡球蚴的实验研究
[目的]利用大肠癌细胞(Caco-2)及其培养上述细胞的上清液,在体外对泡球蚴进行培养,建立稳定的体外培养模型,观察泡球蚴的在体外的生长、发育过程.[方法]培养大肠癌细胞(Caco-2),留取细胞上清液.取泡球蚴组织,分别与大肠癌细胞及其细胞培养上清的DMEM完全培养基于37℃5％ CO2培养箱中培养38 d.实验期间对囊泡进行计数,观察囊泡生长情况,记录囊泡大、小直径,绘制生长曲线.培养结束后,取培养囊泡囊液进行蛋白定量.[结果]泡球蚴与大肠癌细胞及其上清液中均能共同生长,呈出芽生殖方式,囊泡直径0.5～5.0mm;囊液蛋白含量分别为:大肠癌细胞,3.2mg/ml；大肠癌细胞上清液,1.2mg/ml.泡球蚴在体外培养初期呈较快速性生长(1～ 15 d)；生长中期可见一平台期(15 ～ 26 d);后期表现为逐渐减少.[结论]多房棘球蚴体外生长因素不依赖培养细胞本身,利用大肠癌细胞上清液建立多房棘球蚴体外培养模型具有一定的可行性,由于大肠癌细胞(Caco-2)与其培养细胞的上清液所含成分可能不同,可能引起囊泡内囊液的蛋白定量有所差异.
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桃红四物汤含药血清对离体细胞影响研究概况
血清药理学方法能在细胞水平揭示桃红四物汤含药血清对离体的骨细胞(骨髓间充质干细胞、巨噬细胞、成骨-破骨细胞)、血管内皮细胞、平滑肌细胞、肝星状细胞、角质形成细胞、大肠癌细胞等有不同程度影响.探索桃红四物汤有效成分对人体各细胞的干预作用及机制,对解释桃红四物汤治疗相关疾病具有重要深远的意义,也是有待解决的重要课题.
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五味子乙素调控PI3K/Akt信号通路介导大肠癌细胞SW116凋亡
目的 观察五味子乙素对大肠癌细胞SW116凋亡及PI3 K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响.方法 SW116细胞培养后共分为4组,分别为空白对照组、五味子乙素不同浓度(10、20、40 μg/mL)组,对各组细胞进行相应的干预.采用CCK8法检测五味子乙素对SW116细胞株的增殖抑制作用,流式细胞术检测五味子乙素对SW116细胞凋亡的影响,免疫印迹技术分析五味子乙素处理的SW116细胞中凋亡蛋白及PI3 K/Akt的表达水平.结果 CCK8实验结果显示,五味子乙素能明显抑制SW116细胞株的增殖;流式细胞仪检测表明,五味子乙素可以诱导SW1 16细胞株的凋亡;Western blot结果显示,五味子乙素可以诱导促凋亡蛋白Bax的表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2,还可明显抑制PI3K、p-Akt蛋白的表达.结论 五味子乙素可以抑制大肠癌细胞增殖,其诱导肿瘤细胞的凋亡作用可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路活化来实现的.
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肝细胞生长因子和MAPK途径在大肠癌细胞体外侵袭中的作用
目的:探讨肝细胞生长因子/离散因子(HGF/SF)在大肠癌细胞体外侵袭中的作用.方法:用细胞迁移系统分析HGF、PD98059和SB203580处理的大肠癌细胞Caco-2和Colo320体外迁移能力;用逆转录聚合酶链反应检测Caco-2细胞中MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-1、TIMP-2的mRNA表达.结果:HGF对Colo320细胞迁移无影响.细胞培养48 h后,Caco-2细胞迁移数HGF组和PD98059组与对照组比较、HGF组和PD98059组比较,差异显著[对照组(104.40±4.77)/ml,HGF/SF组(126.80±5.40)/ml,PD98059组(82.80±4.15)/ml,P＜0.01].HGF组MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2都有表达,MMP-2高表达;PD98059组TIM-1和TIMP-2高表达.结论:HGF促使Caco-2细胞迁移.HGF/SF上调Caco-2细胞中MMP-2和MMP-9的表达,使肿瘤细胞破坏周围基底膜能力增强而容易形成转移.HGF对某些大肠癌细胞发挥促进侵袭、促进转移的作用,MAPK途径在HGF/SF诱导的大肠癌细胞Caco-2中发挥生物学效应.
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RNAi靶向沉默c-FLIP(L)基因对大肠癌细胞凋亡的影响
目的 应用RNAi技术将c-FLIP(L)对应的SiRNA片段对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响,明确RNAi靶向沉默c-FLIP基因在TRAIL介导的凋亡途径中的作用.方法 与c-FLIP(L)对应的SiRNA片段转染入细胞,半定量RT-PCR法判断干扰前后FLIPmRNA水平的变化,Western blot分析FLIP蛋白水平变化,比较分析干扰前后细胞对介导的凋亡敏感性的改变及转染前后TRAIL诱导的细胞凋亡的情况.结果 c-FLIP(L)可以减低SW480中FLIPmRNA和蛋白水平(P＜0.01),转染FLIP-siRNA后,TRAIL对大肠癌胞株SW480的遏制作用显著加强(P＜0.05),TRAIL介导凋亡明显增高(P＜0.05).结论 RNAi靶向沉默c-FLIP(L)并能提高SW480对TRAIL灵敏度并诱使SW480凋亡.
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全反式维甲酸对大肠癌细胞间隙连接蛋白Cx32与Cx43表达及增殖和迁移能力的影响
目的:检测全反式维甲酸(ATRA)对大肠癌细胞Caco-2及SW480增殖、迁移及间隙连接蛋白Cx32与Cx43胞膜表达的影响,分析其对大肠癌效应作用机制.方法:取对数生长期大肠癌细胞分为ATRA处理组及阴性对照组,以1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA处理Caco-2及SW480细胞,应用MTT法测定其生长抑制率；以1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA处理SW480细胞,应用划痕法测定其迁移率,流式细胞术测定Cx32及Cx43胞膜阳性率.结果:与阴性对照组比较,ATRA处理组Caco-2及SW480细胞经1×10-4 mol· L-1 ATRA作用24、48及72 h后,生长抑制率明显提高(P＜0.01)；ATRA处理组SW480细胞经1×10-5 mol· L-1 ATRA作用24和48 h后,平均迁移率明显低于阴性对照组(P＜0.05).ATRA处理组SW480细胞经1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA作用24和48 h后,胞膜Cx32及Cx43表达阳性率明显高于阴性对照组(P＜0.05).结论:ATRA可增加大肠癌细胞Cx43及Cx32膜表达,并抑制其增殖及迁移能力,其效应机制可能涉及间隙连接蛋白的胞内蛋白相互作用及细胞间通讯联系功能改变.
关键词： 大肠癌细胞 全反式维甲酸 间隙连接蛋白Cx32 间隙连接蛋白Cx43 -
Fu/LV方案术前化疗对大肠癌细胞凋亡、增殖的影响
目的 探讨大肠癌进行Fu/LV方案术前化疗后,其癌细胞增殖、凋亡方面发生的改变,为大肠癌的术前化疗提供理论依据.方法 本文将34例大肠癌患者随机分为术前Fu/LV方案化疗组和未化疗对照组,而后应用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡;免疫组化法测定肿瘤增殖及Fas/FasL表达的改变情况.结果 术前化疗组原位凋亡指数、增殖指数和Fas表达率平均值分别为11.83±4.76%,37.67±8.44%,3.25±1.87%,与对照组相比,统计学差别有显著意义(P《0.05).结论 Fu/LV方案术前化疗可抑制大肠癌细抱增殖及诱导癌细胞调亡,其抗肿瘤作用与Fas介导的细胞凋亡信号转导通路有关.
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大肠癌肝转移的治疗体会
大肠癌细胞多循门静脉系统转移至肝脏.对有孤立性肝转移者,可在原发癌根治切除的同时,行相应的肝叶切除或楔形切除.但如肝内转移灶超过2叶或多发转移,往往使癌灶不能清除.
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白英诱导大肠癌HT29细胞凋亡作用及其机制研究
目的:探讨白英水提取液对人大肠癌HT29细胞增殖的影响并探讨其诱导凋亡作用机制.方法:采用MTT法检测白英水提取液对人大肠癌HT29细胞的增殖抑制作用,普通光学显微镜及电镜观察细胞形态学变化,Annexin-V/PI双染法流式细胞术分析细胞早期凋亡率的变化.结果:白英水提取液可显著抑制人大肠癌HT29细胞增殖,且呈一定的剂量和时阀依赖性;光镜下见细胞体积缩小,细胞增殖减慢;电镜下见细胞染色质明显浓缩,核聚集等典型的凋亡特征;流式细胞术证实细胞凋亡率明显升高.结论:白英水提取液对人大肠癌HT29细胞的增殖具有明显的抑制作用,其机制与诱导细胞凋亡相关.
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靶向乙酰肝素酶siRNA对大肠癌细胞恶性生物学行为的影响
目的 研究化学合成的siRNA干扰乙酰肝素酶对大肠SW620癌细胞生物学行为及其可能的机制.方法 实验组选取对数期生长的SW620癌细胞转染靶向乙酰肝素酶siRNA,对照组用非特异性的siRNA处理对数期生长的SW620癌细胞.应用RT-PCR检测乙酰肝素酶基因表达,并利用免疫组化检测乙酰肝素酶蛋白表达情况,侵袭实验检测细胞侵袭力.结果 实验组的对数期生长的SW620癌细胞的乙酰肝素酶基因和蛋白含量显著低于对照组,而实验组细胞的侵袭能力也显著低于对照组.对照组的侵袭细胞数显著多于实验组.结论 化学合成的siRNA能够降低大肠癌细胞恶性生物学行为,可作为一种新的基因治疗方法用于大肠癌的临床治疗.
关键词： 乙酰肝素酶siRNA 大肠癌细胞 生物学行为 -
双糖链蛋白聚糖对大肠癌细胞生长作用研究
目的 研究Biglycan对大肠癌细胞HT-29和SW480侵袭、凋亡等生长作用影响.方法 采用Transwell方法检测Biglycan对大肠癌细胞HT-29和SW480的侵袭能力影响;AV/PI染色检测细胞凋亡情况;Western blot法检测加药处理前后细胞内Rb、pRb和Ras表达变化.结果 100 nmol/L Biglycan和50 nmol/L Biglycan可抑制大肠癌细胞HT-29和SW480侵袭转移,同时可诱导HT-29、SW480细胞发生凋亡;经Biglycan处理后,细胞内Rb总蛋白无显著性变化,pRb和Ras出现下调趋势.结论 Biglycan可抑制大肠癌细胞HT-29和SW480侵袭转移、诱导细胞凋亡,下调pRb和Ras的表达、调控细胞周期从而抑制细胞生长为其可能的作用机制.
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人γ-干扰素基因导入人大肠癌细胞中的方法及鉴定
目的:为将人γ -干扰素(huIFN-γ) 基因尽快用于临床基因治疗,寻求基因导入的有效方法.方法:利用阳离子脂质体Lipofectamine将huIFN-γ基因导入人大肠癌细胞株,利用PCR、RT-PCR对该基因的整合和表达进行鉴定,并对细胞培养上清中γ-干扰素的活性进行了检测.结果: 该基因已经有效地进入细胞内并实现了表达.结论:利用脂质体可以有效地将huIFN-γ基因导入肿瘤细胞内,基因表达的持续时间可以满足肿瘤基因治疗的需要.不同细胞株其上清中huIFN-γ的分泌量不同.
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三氧化二砷诱导大肠癌SW620细胞凋亡以及抑制其克隆性增生的实验研究
目的 探讨三氧化二砷(As2O3)诱导大肠癌细胞凋亡并抑制其克隆性增生的机制.方法 不同浓度的As2O3(0、1、2、4、8 μmol/L)作用于人的大肠癌细胞SW620,显微镜下观察细胞形态学和结构的变化;RT-PCR检测各组SW620细胞中胚胎干细胞关键蛋白(Oct4)、早幼粒细胞白血病蛋白(PML)的表达;免疫细胞化学SP法检测各组CD133的表达以及软琼脂克隆实验检测各组细胞的克隆形成率.结果 随着As2O3浓度增加:①各药物组中贴壁细胞数量逐渐减少,凋亡形态差别明显;②Oct4 mRNA的表达逐渐减少,而PML mRNA的表达逐渐增加; ③各组的CD133阳性表达逐渐减少; ④克隆形成能力逐渐减弱; ⑤相关分析显示CD133与Oct4具有正相关性.差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 As2O3对促进大肠癌细胞凋亡以及抑制其克隆性增生的作用与大肠癌干细胞有关,其机制可能为下调Oct4和上调PML的表达,以及对CD133的抑制作用.
