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补阳还五汤加味预防动脉粥样硬化形成机制
目的:探究补阳还五汤加味对动脉粥样硬化(AS)形成的预防及机制研究.方法:将30只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠(ApoE-/-小鼠)随机分为ApoE-/-小鼠组、模型组、补阳还五汤加味组和辛伐他汀组,另以正常雄性C57BL/6J小鼠设组.模型组、补阳还五汤加味组和辛伐他汀组采用高脂饮食造模.第4周后,补阳还五汤加味组和辛伐他汀组分别灌以补阳还五汤20 g·kg-1+水蛭粉0.46 g·kg-1,辛伐他汀3 mg·kg-1.第9周后,检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)值,取动物主动脉根部经苏木素-伊红(HE)常规染色后观察组织形态变化并测量纤维帽厚度和内-中膜厚度、检测主动脉p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞外信号调节激酶5(ERK5)蛋白表达变化.结果:血脂水平,与C57BL/6J小鼠正常组比较,ApoE-/-小鼠组和模型组TC,TG,LDL-C均升高且HDL-C均降低(P＜0.01);与模型组比较,补阳还五汤加味组与辛伐他汀组均能降低ApoE-/-小鼠TC,TG,LDL-C水平,同时升高HDL-C(P ＜0.05,P＜0.01).HE染色,C57BL/6J小鼠正常组主动脉管壁无斑块形成,ApoE-/-小鼠组管壁有极少斑块形成,内-中膜略有增厚.模型组斑块形成明显,内-中膜明显增厚.补阳还五汤加味组与辛伐他汀组较模型组斑块减少,内-中膜厚度减少.蛋白表达,与C57BL/6J小鼠正常组比较,模型组主动脉组织中p38MAPK的蛋白表达量增多(P＜0.01),ERK5的蛋白表达量减少(P＜0.01);与模型组比较,补阳还五汤加味组和辛伐他汀组均能降低p38MAPK蛋白的表达量(P＜0.01),增加组织中ERK5蛋白的表达(P＜0.01).结论:补阳还五汤加味与辛伐他汀均有预防AS的作用.补阳还五汤加味预防AS发生的机制可能与干预MAPK信号通路中的p38MAPK,ERK5途径有关.
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银杏苦内酯B对重症急性胰腺炎大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶活性的影响
目的 观察银杏苦内酯B(BN52021)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)活性的影响.方法 Wistar雄性大鼠随机分为阴性对照组(NC组)、SAP模型组(SAP组)、BN52021治疗组(BN组),每组按术后不同时相点(1、2、3、6、12、24 h)分为6小组,用Western blotting法分别检测胰腺组织p38 MAPK表达与激活情况,同时对胰腺组织进行病理学观察和测定血清淀粉酶活性的变化.结果 血清淀粉酶和病理学结果显示SAP造模成功,BN52021能降低SAP大鼠的血清淀粉酶活性,病理学评分在3、6、12 h较SAP组显著降低(P＜0.05);NC组在各时相点均只检测到少量磷酸化的p38 MAPK,SAP组和BN组在各时相点均较NC组显著升高(P＜0.05),BN组在6、12、24 h较SAP组显著降低(P＜0.05).结论 BN52021可部分抑制SAP大鼠胰腺组织p38 MAPK的活化,从而发挥其治疗作用.
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p38MAPK、NF-κB与氧化应激在肝纤维化中作用
目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核因子-κBp50(NF-κBp50)在肝纤维化发生发展中作用.方法 选取SD大鼠30只,随机分为对照组、肝纤维化4、8周组,每组各10只；肝纤维化组按0.3 mL/100g皮下注射40％ CCl4,隔3d注射1次,造模时间分别为4和8周；于相应时间点处死大鼠并收集肝组织,观察肝组织病理学改变；采用比色法检测肝组织中丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量；采用免疫组化及western blot检测肝组织中p38MAPK、NF-κBp50蛋白表达变化.结果 与对照组比较,肝纤维化4周组大鼠肝组织中p38MAPK(7.9 ±2.3)、NF-κBp50(16.3±8.1)、MDA[(1.8±0.9)nmol/mgprot]及肝纤维化8周组大鼠肝组织中p38MAPK(11.5 ±6.8)、NF-κBp50(24.6±13.5)和MDA[(2.9±1.3) nmol/mgprot]的含量均升高(P＜0.05)；与对照组比较,肝纤维化4、8周组大鼠肝组织中SOD酶活性[(40.6±5.8)、(34.4±3.1)μ/mgprot]均降低(P＜0.01).结论 p38MAPK、NF-κBp50及氧化应激可能在肝纤维化的发生发展过程中发挥重要作用.
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血管生成素-1,2经p38丝裂原活化蛋白激酶调节失血性休克血管低反应性
目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)调节失血性休克大鼠血管反应性双相变化中的作用.方法 观察失血性休克后不同时间点肠系膜上动脉(SMA)中p38MAPK蛋白表达和磷酸化变化,p38MAPK抑制剂对Ang-1和Ang-2调节缺氧早期和晚期血管反应性作用的影响,以及给予Ang-1、Ang-2和Tie-1抑制剂后缺氧血管内皮细胞(VEC)和血管平滑肌细胞(VSMC)混合细胞中p38MAPK蛋白表达和磷酸化变化.结果 失血性休克后p38MAPK磷酸化水平显著增高;p38MAPK抑制剂可显著改善缺氧4 h血管低反应性并拮抗Ang-2进一步降低缺氧4 h血管低反应性的作用;Ang-1和Tie-2抑制剂可显著抑制缺氧4 h的p38MAPK磷酸化增高(P<0.01).结论 p38MAPK参与了Ang-1和Ang-2对休克晚期血管低反应性的调节,但不是休克早期血管高反应性的主要调节分子.
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大承气汤对脓毒症大鼠p38MAPK信号转导通路的影响
目的 观察大承气汤对脓毒症大鼠肝脏p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达水平的影响,进一步揭示大承气汤治疗脓毒症的机制.方法 将60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=20)、脓毒症组(n=20)、大承气汤组(n=20),应用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)复制脓毒症模型.假手术组开腹轻扰肠管后关腹,脓毒症组、大承气汤组均为脓毒症模型.大承气汤组在术前2 h和术后每4 h予以大承气汤灌胃.分别于术后2、6、12、24 h每组取5只大鼠,腹主动脉采血,用ELISA方法 检测大鼠血浆IL-6、TNF-α浓度,取肝组织进行免疫组化检测及观察p38MAPK表达.结果 与脓毒症组比较,大承气汤组大鼠肝脏p38MAPK表达水平受到抑制,炎症因子释放减少(P<0.05).结论 大承气汤对脓毒症大鼠的肝脏产生保护作用,可能是由于抑制大鼠肝脏p38MAPK表达来实现的.
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p38MAPK在百草枯中毒致大鼠急性肺损伤中的作用研究
目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在百草枯致大鼠急性肺损伤中作用的研究.方法 96只SD大鼠以数字随机法随机分为生理盐水组(NS)、PQ中毒组(PQ组)、抑制剂干预对照组(PQ+SB组)和抑制剂对照组(NS+SB组),每组各24只,通过比较肺组织的干湿比(W/D)、肺组织病理学变化、肺泡灌洗液中炎症因子IL-1β和TNF-α变化,用Westernblot检测各组大鼠肺组织中p38MAPK、p-p38MAPK的变化表达量,并用p38MAPK的特异性抑制剂SB203580干预,阻断p38MAPK磷酸化过程,进一步确定p38MAPK与肺组织炎症反应等的相关性.结果 PQ组p-p38MAPK表达量明显高于NS组,PQ+SB组较PQ组表达量有所下降,PQ+SB组肺W/D在1、3、5 d均低于PQ组(P<0.01),在7 d两组比较差异无统计学意义(P>0.05);PQ+SB组肺组织中TNF-α、IL-1β水平明显低于PQ组(P<0.01),肺组织病理学变化也较PQ组有所改善.结论 p38MAPK信号通路参与介导了百草枯致大鼠急性肺损伤的炎症反应过程,用p38MAPK抑制剂SB203580干预后可改善肺组织的炎症反应.
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熊果酸(UA)对大鼠活化型肝星状细胞(HSC)的NADPH氧化酶(NOX)亚基及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路活化的影响
目的 观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6)NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase/Akt,PI3K/Akt)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路及其对基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(metal matrix proteinase-1,MMP-1)蛋白表达的影响,并探讨其机制.方法 取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分成6组:空白对照组、瘦素组(100 ng/mL)、UA干预组(UA 50 μmol/L+瘦素)、NOX抑制剂DPI干预组(DPI 20 μmol/L+瘦素)、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB203580 10 μmol/L+瘦素)及PI3K抑制剂LY294002干预组(LY294002 10 μmol/L+瘦素).采用Western blot法分别检测NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1蛋白表达;信号通路PI3K、Akt、P38MAPK的活化及TIMP-1、MMP-1蛋白表达.结果 UA能显著抑制瘦素诱导的gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1蛋白表达(P均＜0.01),但UA对gp91phox、p67phox蛋白表达的抑制作用不及DPI和LY294002.UA能抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达及Akt、P38MAPK蛋白磷酸化(P均＜0.01),与DPI及LY294002作用的差异无统计学意义.UA能抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达,同时促进MMP-1蛋白表达(P均＜0.01).结论 UA能抑制瘦素诱导的大鼠HSC-T6细胞NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化;其下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与UA抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关.
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P38α对人血管内皮一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的影响
目的:研究P38α对人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的影响.方法:利用硝酸还原酶法检测不同浓度氯化钴作用下人脐静脉血管内皮细胞-12(HUVEC-12)上清中的一氧化氮(NO)的含量.以pRL-TK为内参照,将已经构建好的pGL2-eNOS-p质粒分别与pGL3-BASIC、pcDNA3、p38a、及p38a(AF)共转染HUVEC-12细胞,利用双荧光素酶报告基因技术检测eNOS基因启动子转录活性,并在共转染的基础上加氯化钴刺激,并检测eNOS基因启动子转录活性.结果:氯化钴刺激下HUVEC-12细胞培养上清的NO含量随氯化钴作用浓度增加而提高,成功建立化学缺氧模型;p38a在正常和缺氧条件下均明显降低eNOS基因启动子的活性,可被无活性诱变体p38a(AF)逆转.结论:P38et下调人血eNOS基因启动子转录活性.
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p38MAPK信号转导通路与组织损伤
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen.activated protein kinase,MAPK)是广泛表达的丝氨酸/酪氨酸激酶,在哺乳动物细胞多种信号转导通路中起蕈要作用.MAPK有4个主要亚族:ERK、p38MAPK、JNK和ERK5.p38信号通路是MAPK通路的一重要分支,它在炎症、细胞应激、凋亡、细胞周期和生长等多种生理和病理过程中起重要作用.本文就p38MAPK的分型、分布、信号通路的组成及其在法医损伤学领域中的应用现状做一综述,旨在进一步对组织损伤程度和伤后时间推断的法医病理学研究提供参考资料.
