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分枝杆菌快速鉴定分子技术研究进展
传统的分枝杆菌菌种鉴定方法步骤繁琐,操作费时,已不能满足目前临床诊治的需要.因此,各种分子鉴定方法不断涌现.应用于分枝杆菌的临床实验室诊断.包括DNA测序、多重聚合酶链式反应、聚合酶链式反应一限制性酶切片段长度多态性分析、核酸探针杂交、线性探针分析、基因芯片、焦磷酸测序等多种分析技术,这些技术都可快速鉴定菌种,且具有较高的敏感性和特异性.
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肝细胞癌病理切片中HBVs基因分析
①目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)S区在肝细胞癌(HCC)发病机制中的重要性.②方法根据HBs基因DNA序列设计引物,采用聚合酶链式反应(PCR)对14例病理确诊HCC病理切片中的DNA进行检测.③结果PCR显示,14例HCC病理切片中HBs基因阳性率为57.1%(8/14).④结论HBVs基因片段在HCC中广泛存在,并可能在HCC的发生和发展中起重要作用.
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定量PCR检测对侵袭性真菌感染肺组织标本病原真菌的诊断价值
目的:探讨应用定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)检测技术诊断侵袭性真菌感染(invasive fungal infection, IFI)肺组织标本病原真菌的临床意义. 方法:收集2010年6月至2016年6月手术切除且病理诊断为真菌感染的肺组织标本33例为研究对象,设计针对真菌的通用引物和针对隐球菌属和曲霉菌的特异性引物,采用PCR技术和双脱氧链终止法(Sanger法测序)检测石蜡包埋肺切除组织中的真菌. 结果:33份真菌感染的肺组织标本PCR检测结果均为阳性,与病理诊断相符,Sanger测序可以鉴定真菌到种别.PCR检测与Sanger测序敏感性差异无统计学意义(100%比91.67%,P>0.05),PCR检测与Sanger测序特异性差异无统计学意义(100%比100%,P>0.05);PCR检测种属鉴定率显著优于镜检(100%比81.82%,χ2=6.60,P=0.01),PCR检测与Sanger测序差异不具有统计学意义(100%比90.91%,χ2=3.14,P=0.08).结论:定量PCR检测用于诊断侵袭性真菌感染肺组织标本敏感性高、特异性好,具有一定参考意义.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌qacA基因的检测及分型
目的 对我院不同标本中分离的45株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methecillin resistant staphylocccus aureus,MRSA)相关耐消毒剂基因qacA进行检测和类型分析,为我院合理使用消毒剂,阻止多重耐药的MRSA再流行,减少院内感染提供依据.方法 收集分离自我院患者的MRSA 45株,采用聚合酶链式反应(PCR)对该45株MRSA耐消毒剂基因qacA进行检测并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行类型分析.结果 45株MRSA检出qacA基因18株,阳性率为40%,其中呼吸内科、烧伤科标本分离的MRSA中qacA基因检出率较高分别为13%、16%.我院携带qacA基因的MRSA 有A～E 5个型,主要流行株为A型和B型.结论 呼吸内科和烧伤科等科室的MRSA携带的qacA基因是导致胺类、胍类等临床常用消毒剂耐药的主要原因,流行菌株可在各病区之间传播,应引起重视.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 耐消毒剂基因 qacA基因 聚合酶链式反应 多重耐药 -
SHIP2在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的：研究SHIP2在非小细胞肺癌中的表达，探讨其表达与非小细胞肺癌预后之间的关系。方法应用qPCR和免疫组织化学方法（ IHC）分析SHIP2在非小细胞肺癌中的表达。使用Kaplan-Meier统计方法和Cox比例风险回归模型来进行生存分析，评估100例非小细胞肺癌患者的预后。结果 SHIP2在非小细胞肺癌的表达明显高于非肿瘤组织（ P ＜0觋．05）。 SHIP2的表达与淋巴结转移（ P ＝0．042），TNM阶段（ P ＝0．036），5年生存率（ P ＝0．046）有关。 Kaplan-Meier统计方法和时序检验分析进一步表明SHIP2高表达、吸烟、晚期肿瘤和预后不良显著相关。结论 SHIP2表达和非小细胞肺癌的恶性表型相关，可以作为非小细胞肺癌独立预后因素和重要致癌基因。
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常用分子生物学技术在食品病原微生物检测中的应用
食品微生物检测对于保障食品安全起着及其重要的作用。传统的微生物检测方法虽然有效，但存在检测成本高、速度慢、效率低等问题，难以满足现代社会快速检测的要求。随着细菌基因组学和分子生物学技术的飞速发展，诞生了许多分子生物学技术，它们因准确度和灵敏度高、特异性强、操作简便、检测周期短、效率高等优点，越来越被广泛应用。
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血红蛋白电泳对于β地中海贫血的筛查价值
目的：对β地中海贫血(β thalassemia，βTM)患者的血红蛋白电泳结果进行分析，探讨血红蛋白电泳对于βTM患者的临床意义。方法：分析149例β地中海贫血患者的血红蛋白电泳结果红细胞平均体积(mean corpuscular volume，MCV)、血红蛋白A2(hemoglobin A2,HbA2)、胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin ,HbF)。结果：149例疑为βTM的患者经过血红蛋白电泳后，阳性患者为78例，阴性患者为71例；经过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测，阳性为45例，阴性为104例；血红蛋白电泳这种检测方法的灵敏度为95.96%、特异度为66.35%、阳性预测值为55.13%以及阴性预测值为97.18%。结论：血红蛋白电泳这种检测方法对于βTM的筛查有较高的诊断灵敏度，可以满足临床上面对于βTM的筛查需求。
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孕妇血浆胎儿DNA定量分析在产前性别诊断中的应用
目的探索一种早期、快速、非创伤性的围生期胎儿性别的诊断方法.方法应用即时定量TagMan探针DNA扩增技术,检测61例妊娠8～39周的正常孕妇游离在血浆内的无细胞胎儿DNA的SRY基因,并有针对性的对部分孕妇检测妊娠过程中及产后母体血浆中代表母体与胎儿DNA总和的β-珠蛋白基因和代表胎儿DNA的SRY基因的变化关系.结果妊娠第8周可在母体外周血浆中检测出胎儿游离DNA,其数量随妊娠时间增加而增高;30例孕妇血浆中游离DNA检则SRY基因阳性,经证实均为男性胎儿,31例SRY基因阴性,经证实均为女性胎儿,符合率为100%,分娩6个月后,SRY基因基本从母体血浆中消失.结论即时定量TagMan探针DNA扩增技术,检测游离在孕妇血浆内的无细胞胎儿DNA,能早期鉴别胎儿性别,为早期诊断某些选择性遗传性疾病开拓了一条新的途径.
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尿素酶基因在枸橼酸杆菌中的表达
目的:研究尿素酶基因在枸橼酸杆菌中的表达情况.方法:通过PCR检测枸橼酸杆菌中是否存在尿素酶基因,而后运用尿素酶诊断试剂对其是否表达进行分析.结果:39株实验枸橼酸杆菌的尿素酶基因均为阳性,只有5株菌株尿素酶表达为阳性.结论:尿素酶基因阳性的枸橼酸杆菌不一定都能表达尿素酶.
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从人血凝块中提取基因组DNA
目的 从人血凝块中提取基因组DNA.方法 室温自然解冻,机械磨碎,高盐、高EDTA提取液处理,消化液消化,酚氯仿抽提.结果 用改良酚氯仿法从人血凝块中成功提取基因组DNA,提取的DNA浓度为:(32±10)mg/L,且光吸收比值A260/A280＞1.8.结论 用改良法提取的基因组DNA的总量较高,提取效率高,PCR扩增效果好,可很好的用于血凝块基因组DNA的提取.
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溺死大鼠肺组织水通道蛋白5 mRNA的表达
目的 观察溺死大鼠肺组织中水通道蛋白5 mRNA(AQP-5 mRNA)的变化.方法 建立大鼠溺死模型,提取实验组及对照组肺组织的总RNA,反转录合成cDNA第一条链,以cDNA作为模板,通过特异性上下游引物实时荧光定量聚合酶链反应(Real Time PCR)检测cDNA的拷贝数,选取管家基因核糖体蛋白L32为参比基因,对扩增结果进行相对定量分析.结果 溺死大鼠肺组织中AQP-5 mRNA表达量较对照组显著下降且差异具有统计学意义.结论 AQP-5基因在大鼠淡水溺死时表达下调有阳性意义,实时荧光定量检测溺死肺组织中AQP-5 mRNA敏感而准确,可望用于法医学鉴定生前溺死和死后抛尸入水.
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PCR技术在乙型肝炎血清学检测中的应用
临床诊断HBV感染的方法有多种,目前主要采用酶联免疫法(ELISA)或放射免疫法检测血清HBV标志物.而聚合酶链式反应(PCR)由于其可选择地将病毒基因的某个片段进行以指数积累方式扩增,HBV-DNA的敏感水平可得到极大的提高,只要标本中含有3个分子的HBV-DNA即可检出,从而极大的提高了HBV的检出率.我院从2001年开展PCR检测乙型肝炎,现将48例患者的检测结果报道如下.
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检测结核分枝杆菌的五种方法的比较
目的:对临床常用的5种检测结核分枝杆菌的方法进行比较.方法:用抗酸染色法、荧光染色法、分离培养法、PCR(聚合酶链式反应)法和结核抗体法检测93例确诊结核病人,并进行相关统计学分析.结果:5种方法检测93例确诊结核病人的阳性数分别为29、35、41、70、60.结论:抗酸染色法阳性率低而PCR 法阳性率高.
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陕西汉族人群细胞连接蛋白Cx37基因多态性分布
目的 探讨心血管疾病相关的细胞连接蛋白37(Connexin37,Cx37)基因C1019T多态性在陕西汉族人群的分布.方法 采用聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对116例无血缘关系的健康陕西汉族人的染色体进行检测,分析基因型频率、等位基因频率分布,并与其他种族进行比较.结果 Cx37基因C1019T等位基因频率为:C=68.5%,T=31.5%;基因型频率为:C/C=63.8%,C/T=30.2%,G/G=6.0%;其中男性等位基因频率为:C=76.1%,T=23.9%;基因型频率为:C/C=59.2%,C/T=33.8%,G/G=7.0%;陕西汉族人Cx37基因C1019T基因型频率和等位基因频率在男女之间差异无统计学意义,与瑞典人群相比差异有统计学意义(P＜0.05),而与日本、我国台湾人群相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 陕西汉族人Cx37基因C1019T基因型频率及等位基因频率与东方人种无差异,而有别于西方人种.
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精神分裂症患者中单胺氧化酶A和B多态性位点的连锁不平衡研究
目的为研究单胺氧化酶与精神分裂症的关系.方法采用聚合酶链式反应,对140例无血缘关系的高加索男性精神分裂症患者和91例对照者的两个X连锁的微卫星序列即单胺氧化酶A位点中的(AC)n重复序列和单胺氧化酶B位点的(TG)n等位基因进行了研究.结果基因分布频率在病人组和对照组中未发现差异.但(AC)18(TG)23单倍体增多与精神分裂症有关,相对危险度是4.05(95%CI 1.15～14.26),精确概率P=0.011,连锁不平衡系数在精神分裂症组是0.019;在对照组是-0.046.结论单胺氧化酶A和B多态性位点的连锁不平衡与精神分裂症有关.
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承德地区莱姆病自然疫源性特征分析
目的了解承德地区莱姆病自然疫源地存在状况.方法于承德林区捕鼠、采蜱;巴伯-斯托纳-凯利培养基(BSK)分离蜱内病原体;PCR扩增蜱、鼠体内目的片段及序列测定;对林区居民及动物牛、羊进行血清抗体检测.结果全沟硬蜱为优势蜱种,从中PCR扩增出目的片段,基因序列同源性比较,提示此感染菌株与欧亚大陆常见的莱姆病螺旋体Borrelia afzelii种具有高度同源性.林区居民及动物牛、羊血清抗体检出阳性率较高,分别为13.3%,23.3%,30%.结论全沟硬蜱是承德地区的优势蜱种;并发现其感染有致病性莱姆病螺旋体Borrelia afzelii种.林区羊、牛为重要的贮存宿主.林区人群存在莱姆病螺旋体自然感染,可初步认定承德地区为莱姆病自然疫源地.
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网状分枝扩增方法检测志贺毒素2基因
目的建立一种快速、灵敏检测志贺样毒素2(STX2)的方法.方法用网状分枝扩增技术(RAM)和PCR检测合成的志贺样毒素2基因和临床分离的菌株,确定该方法的灵敏度和特异性.结果RAM少能检测10个志贺样毒素2的DNA分子,与PCR具有同样灵敏度.用PCR和RAM检测临床标本和食品中分离的33株大肠埃希菌,其中26株stx2基因为阳性,2种方法检测结果一致.结论RAM与PCR方法相同的灵敏度和特异性,但操作简便,并且是在等温条件下扩增核酸,成本较低,适合检测食品和临床标本中大肠埃希菌志贺样毒素2.
关键词： 网状分枝扩增技术 大肠埃希菌志贺样毒素2 聚合酶链式反应 -
5种食源致病菌16SrRNA基因单链构象多态性分析
目的对5种常见食物中毒致病菌16SrRNA基因单链构象多态性(Sngle-strand-conformation polymor-phism,SSCP)进行分析,探讨该技术在食物中毒致病菌快速鉴别诊断中的可能作用.方法5种常见食源性致病菌标准株增菌后,提取DNA,通过特异引物对菌株的16SrRNA序列的可变区进行扩增,扩增产物进行SSCP分析.结果各菌株均分离出两条或以上特异性条带,条带间距离及相对位置差异明显,并有良好的重复性.该方法的灵敏度可达10～15个鼠伤寒沙门菌细胞.结论5种常见食物中毒致病菌16SrRNA基因单链构象多态性具有种属特异性,PCR-SSCP分析法有助于快速、准确的从基因水平上对食物中毒致病菌进行分析检测.
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幽门螺杆菌感染与消化系疾病的相关性研究
自1983年Warren与Maeshall成功地分离培养出幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)以来,Hp以其很高的人群检出率及与慢性胃炎和消化性溃疡的高度相关性而引起国内外学者的高度重视.本研究应用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术对健康人、消化系疾病患者及其它疾病患者3个人群胃液中Hp DNA进行检测,以探讨Hp感染与消化系疾病的关系.
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聚合酶链式反应鉴定转基因大豆和玉米
随着转基因作物品种日益增多和全球种植面积不断扩大,转基因食品已成为全球食品消费市场的重要组成部分[1].转基因食品的安全性尤其是食用安全性,也日益引起人们的关切[2,3].因此,欧盟、日本、中国等国家和地区先后制订了转基因食品标识管理政策,要求标识食品中转基因成分的性质及含量,以保障消费者的知情权和选择权[4～6].转基因大豆和玉米在目前商品化生产的转基因食品中占据主导地位,其中主要为转基因抗除草剂大豆和抗虫玉米[1].因此,本文建立了鉴定转基因抗除草剂大豆Roun Up ReadyTM Soybean和转基因抗虫玉米Bt 176 Maximazer、Mon 810 Yield Gard的特异PCR检测方法,为转基因食品的管理提供检测手段.
