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金黄色葡萄球菌肠毒素D产毒基因的序列分析
目的构建金黄色葡萄球菌肠素D(SED)毒力蛋白基因重组表达质粒.方法根据SED已知序列,设计合成一对引物,用PCR方法从金黄色葡萄球菌毒力质粒上扩增出基因片段,克隆到原核表达质粒PET32中,转化大肠埃希菌JM109感受态细胞,经酶切和PCR鉴定,然后进行测序.结果PCR扩增产物大小为317 bp;重组质粒经双酶切和PCR鉴定表明已正确重组;测序结果与己知序列基本吻合.结论国内首次克隆了金黄色葡萄球菌肠毒素D产毒基因,为下一步研究发病机制奠定基础.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及肠毒素的检测
目的评价乳胶结合实验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法并检测MRSA的肠毒素.方法收集130株金黄色葡萄球菌临床分离株,通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),应用乳胶结合试验和基因扩增分别检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)和MecA基因;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肠毒素.结果65株MecA基因扩增阳性菌株中的62株PBP2a检测阳性,63株MSSA中,MecA基因扩增及PBP2a检测全部为阴性.MRSA产肠毒素为67株.MSSA肠毒素为19株.结论乳胶结合试验是一种简便、快速、准确检测MRSA的方法,实验室应重视金黄色葡萄球菌肠毒素的检测.
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烧伤脓毒症患者金黄色葡萄球菌B型肠毒素检测
目的 建立一种敏感、快速的酶联免疫测定方法,用于定量检测烧伤脓毒症患者金黄色葡萄球菌B型肠毒素的含量.方法 采用生物索-链霉素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法,以兔抗葡萄球菌肠毒素B(SEB)多克隆抗体做为包被抗体,以生物素标记的抗SEB单克隆抗体作为第2抗体进行测定.结果 在0.078～10.000μg/L的浓度范围内,SEB标准品浓度与吸光度值线性关系良好,相关系数为r=0.9876;重度烧伤患者血清中SEB水平明显高于对照组及轻度烧伤组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 双抗体夹心ELISA法检测SEB,灵敏性达0.078 μg/L,可用于临床烧伤患者血清中的SEB监测.
关键词： 金黄色葡萄球菌 肠毒素 酶联免疫吸附试验(ELISA) 烧伤脓毒症 -
212例腹泻标本弧菌的分离与鉴定
弧菌科细菌是夏秋季节肠道传染病的主要病原菌之一,其共同特点是在体内大量繁殖的同时,产生肠毒素或类毒素,造成患者呕吐、腹泻、脱水、酸中毒甚至死亡.因此,其病原学检查,对诊断和治疗均有重要意义[1].在2001～2002年夏秋季节对212例腹泻患者标本进行了弧菌科细菌的分离鉴定.结果报告如下.
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一起金黄色葡萄球菌引起食物中毒病原学检测
金黄色葡萄球菌因其产肠毒素菌株污染食品能引发急性食物中毒而广受关注,是引起肠道疾病和危害食品安全的常见病原菌[1].金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcus enterotoxin,SE)是一组有高度生物学活性的蛋白质,是一组超级抗原( superantigen,SAg)[2],金黄色葡萄球菌通常在富含蛋白质和水的食物中大量繁殖并产生大量的肠毒素,人食入含有肠毒素的食品而中毒.2009年7月,沈阳市和平区某冷面店发生一起食源性中毒事件,经流行病学调查和实验室检测确定为是由金黄色葡萄球菌肠毒素引起,现将病原学结果分析报告如下.
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霍乱弧菌致病因子及调控基因研究进展
霍乱的发病机制复杂,霍乱弧菌到达小肠粘膜后,首先要定居于小肠粘膜并产生肠毒素,进而破坏小肠上皮细胞对离子的转运,引起腹泻.尽管霍乱毒素(cho1era toxin,CT)是霍乱弧菌致腹泻的主要致病因子,但霍乱弧菌在其致病过程中还依赖于其它一些毒力因子的协同作用[1,2].现对霍乱弧菌致病因子及调控基因研究进展综述如下.
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骨髓培养伤寒沙门菌3例报告
伤寒沙门菌具有很强的侵袭力、内毒素和肠毒素,严重感染的患者表现为持续高热、腹泻、肝脾肿大、皮疹和全身中毒症状.伤寒沙门菌感染引起的菌血症、败血症及肠热症等,在超过一定期限及临床用药治疗后血培养和粪便培养反复呈阴性结果,这时可通过对患者进行骨髓穿刺采样做增菌培养,有可能获得病原菌,以指导临床诊断并对症治疗.
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安徽不同地区奶站牛奶中金黄色葡萄球菌及其肠毒素污染状况评估
目的 评定安徽地区各奶站牛奶中金黄色葡萄球菌以及肠毒素的污染情况.方法 通过从安徽省不同地区30所奶站采集乳样,进行乳源性金黄色葡萄球菌的分离与生化鉴定,并采用PCR技术对分离出的菌株进行金黄色葡萄球菌肠毒素血清型鉴定.结果 安徽省30个奶站中有4个地区奶站的牛奶中污染金黄色葡萄球菌;从污染牛奶中共分离出5株金黄色葡萄球菌,检出率为16.7％.经鉴定,所分离出的金黄色葡萄球菌中2株为肠毒素A型,1株为肠毒素C型,2株为同时产肠毒素A和肠毒素C.结论 安徽省不同地区奶站中的牛奶污染的金黄色葡萄球菌产肠毒素类型以肠毒素A为主.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其肠毒素的检测和耐药性分析
目的评价乳胶结合试验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及其肠毒素(SE),并进行耐药性分析.方法收集130株金黄色葡萄球菌临床分离株,通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),用反向间接血凝试验(RPHA)检测金黄色葡萄球菌肠毒素.结果67株MR-SA产肠毒素,19株MSSA产肠毒素,MRSA产肠毒素率为100%,MSSA产肠毒素率为30%.结论实验室应重视金黄色葡萄球菌肠毒素的检测.
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PCR技术检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因
目的:金黄色葡萄球菌B型肠毒素是污染食品引起食物中毒的主要原因之一,针对进出口食品卫生监测的需要,研究一种简便、快速、准确的实验方法.方法:利用聚合酶链反应技术(PCR)采用特异的模板探针引物进行杂交,后通过电泳技术与阳性对照进行比对,来判断阴阳性结果.结果:本方法检出率高,每克样品中有4个金黄色葡萄球菌即可检出,24小时即可报告结果.结论:PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因快速、准确,检测周期短,既可提高检出率,又可节省检测时间.
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一起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒的检验分析
目的 明确一起食物中毒事件的发生原因并提出相应的预防控制措施.方法 进行流行病学调查,采集剩余食品和涂抹进行检验分析,了解分离株的致病性和药物敏感性.结果 经过二次增菌,在剩余食品中检出血浆凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌,可以产生B型肠毒素,对苯唑西林、盘尼西林、四环素耐药.结论 该起食物中毒是由金黄色葡萄球菌引起的,食品加工环节、食品的保存环境、加工人员的健康状况都会影响食品的安全.
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2009-2011年通州区食源性金黄色葡萄球菌的生物学及流行病学特征
目的 对北京市通州区2009-2011年食品中分离到的32株金黄色葡萄球菌(Staphlococcus aureus)进行研究,建立相关资料的数据库.方法 对32株食源性金葡菌进行耐热核酸酶检测、肠毒素检测、药敏检测和PFGE分型,并进行同源性比较.结果 32株食源性金葡菌中26株耐热核酸酶试验为阳性,有29株菌可以产生不同型别的肠毒素,以SEE型为主,占产肠毒素金葡菌的83％；有27株菌对检测的抗生素有耐药性,占金葡菌总数的84％；PFGE图谱分为17个带型.结论 在通州区食品中检出的金葡菌既具有致病性也具有耐药性.在不同的年份,既存在着拥有同源关系金葡菌的重复流行,也会有新的金葡菌株出现.本研究建立了通州区食源性金葡菌的生化性状和分子图谱数据,为今后预防和控制由金葡菌引起的是食源性疾患的发生奠定了基础.
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金黄色葡萄球菌分泌超抗原在动物体内外免疫作用机制的研究进展
目的 介绍金黄色葡萄球菌分泌的超抗原在动物体内外与免疫系统的作用关系.方法 以国内外大量文献资料为依据,对金黄色葡萄球菌分泌的中毒性休克综合征毒素1(TSST-1)、肠毒素A、肠毒素B三种超抗原刺激机体免疫反应的情况作出归纳和总结.结果 金黄色葡萄球菌分泌的超抗原通过与体内的免疫系统成分作用,刺激细胞因子过度释放,构成细胞因子网络而诱发疾病.结论 对金黄色葡萄球菌分泌的超抗原的研究有助于揭示其诱发疾病的病因以及确定正确的治疗和预防方案.
关键词： 金黄色葡萄球菌 超抗原 中毒性休克综合征毒素1 肠毒素 细胞因子 -
生活小百科
◎吃剩的饭菜应先加热至100摄氏度,待冷却后再放入冰箱,以杀灭饭菜里的细菌.健康人口腔中带有20多种微生物,中国人习惯用筷子吃饭,用筷子夹菜时会把口腔中的细菌(如葡萄球菌等)带到饭菜中.在冰箱冷藏室2～8摄氏度的条件下,葡萄球菌繁殖虽然很慢,但时间长了就会积少成多.葡萄球菌能产生一种肠毒素,它能抵抗高温.因此,如果不先煮沸食物再放入冰箱,即使把剩饭剩菜加热后再吃,人体也会因为摄入肠毒素而发生腹泻.◎一些爱关女士总担心每一餐的热量问题,生怕哪顿饭的热量又超标了.其实,每一餐的热量多一点或者少一点,都不是什么大问题;因为重要的是整体的平衡.比如,早餐吃了含糖或含油脂较多的糕点,午餐就吃清淡一些,多补充些蔬菜;若早餐吃的分量多了,到了中午还不觉得饿,午餐就少吃一点.
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全自动荧光酶标仪测定金黄色葡萄球菌肠毒素的研究
目的 了解荧光酶联免疫分析仪检测金黄色葡萄球菌肠毒素的效果.方法 采用酶联荧光免疫分析仪和常规方法同时对从45份样品中检出的金黄色葡萄球菌进行肠毒素的检测,比较两种方法的检出率.结果 酶联荧光免疫法金黄色葡萄球菌肠毒素检出率为69.0%,常规法的检出率为44.8%,根据统计学分析,两种方法的检测结果差异有统计学意义(t=3.04,P<0.01).结论 酶联荧光免疫法检出率明显高于常规法,并显示出及时、快速、简单、准确的效果.
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钙调神经磷酸酶对金黄色葡萄球菌肠毒素C2超抗原活性的作用
目的 探讨钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)对金黄色葡萄球菌肠毒素C2(staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)发挥超抗原活性的作用.方法 以终浓度为0.5、1、2、3和4μg/ml的重组野生型rSEC2及其增强型突变体蛋白mSEC2(T20L/G22E/H118A/H122A)刺激SD大鼠脾淋巴细胞,MTT法检测大鼠脾淋巴细胞增殖水平;检测终浓度为1 μg/ml的rSEC2和mSEC2在诱导大鼠脾淋巴细胞增殖过程中CaN活性的变化、终浓度为0.1、0.5、1、2和3μg/ml的CaN特异性抑制剂环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)对该过程的影响,以及CaN3个亚基CaN Aα、CaN Aβ、CaN B在mRNA水平上的变化.结果 在低浓度rSEC2和mSEC2刺激下,大鼠脾淋巴细胞增殖指数(proliferation index,PI)与给药浓度成正比,高浓度刺激下,可明显抑制大鼠脾淋巴细胞的增殖,1μg/ml浓度增殖效果好;CsA对大鼠脾淋巴细胞增殖具有较强的抑制作用,呈明显的剂量依赖性,当CsA浓度为0.5～1 μg/ml时,rSEC2和mSEC2的刺激作用即被完全抑制;CaN的活性及其相关亚基(CaN Aβ和CaN B)mRNA水平与其超抗原的刺激增殖活性具有明显相关性.结论 CaN对SEC2发挥超抗原活性具有重要作用,为提高SEC2的临床应用价值及规避毒副作用奠定了理论基础.
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人产肠毒素大肠杆菌基因工程疫苗的研究进展
产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起腹泻的主要致病菌之一,在世界范围内,每年可导致数亿人发生腹泻,尤其是发展中国家的婴幼儿和儿童.目前,世界各国通过构建新型的ETEC基因工程疫苗预防ETEC引起的腹泻.将ETEC的肠毒索基因和菌毛蛋白基因转化至无毒的受体菌中,构建出基因工程疫苗,免疫人体后可有效预防ETEC引起的腹泻.本文就ETEC的致病机理及国内外ETEC基因工程疫苗的新研究进展作一综述.
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金黄葡萄球菌肠毒素C2对小鼠移植瘤的抑制作用
目的 采用小鼠移植瘤模型,对金黄葡萄球菌肠毒素C2的抗肿瘤作用进行研究,以进一步揭示超抗原在肿瘤治疗方面的意义.方法 从金葡菌发酵液中提纯SEC2蛋白,并经SDS-PAGE及测序分析；构建小鼠S180肉瘤和Lewis肺癌移植瘤模型,分别腹腔注射高、中、低剂量(800、400、200 ng/kg)的SEC2,连续给药10 d,同时以环磷酰胺为阳性对照,生理盐水为阴性对照.于给药后第11天处死小鼠,将肿瘤组织分离并称重,比较SEC2对S180肉瘤及Lewis肺癌移植瘤的抑瘤效果.结果 在相对分子质量约30 000处可见目的条带,与理论值相符,N-未端氨基酸测序与文献报道一致；SEC2对两种移植瘤均产生较明显抑制作用,高、中、低剂量SEC2对S180肉瘤的抑瘤率分别达到50.60％、31.81％和19.38％,对Lewis肺癌的抑瘤率分别达到55.62％、45.70％和37.78％.结论 从动物水平上确认了SEC2的抑瘤效果,为进一步开展超抗原抗肿瘤研究奠定了基础.
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北京市某职业学校一起食源性疾病暴发的调查
目的 查明某学校一次食源性疾病暴发事件的原因和可疑危害因素,提出控制措施.方法 利用流行病学曲线确定可疑餐次,对可疑餐次及可疑食物进行病例对照研究,分析不同餐次和食物与发病的关联性,并采集可疑食物和病例标本进行实验室检测.结果 符合病例定义者为27例,主要症状以腹泻、腹痛、腹胀为主,个别病例伴有恶心、呕吐等.食用炖鹅腿是发病的危险因素(OR=16.6,95％ CI:3.92～77.73,x2 =21.59,P＜0.01).从鹅腿标本中检测出产气荚膜梭菌106 cfu/g;病例肛拭子4件标本中检出产气荚膜梭菌,肠毒素基因阳性.结论 此次事件可能为加工食品存在交叉污染而引起的食源性疾病暴发事件,致病因子可能是产气荚膜梭菌产生肠毒素.建议加强对学校实习基地餐饮业监督管理,提高食品安全意识,避免和杜绝食源性疾病等食品安全事件的发生.
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085免疫接种新方法:透皮免疫接种
透皮免疫接种(Transcumeous ImmunizationTCI)是一种新的免疫接种方法,即用免疫佐剂和疫苗直接透过皮肤表面诱导免疫应答.细菌产物如肠毒素(Enterotoxin LT)和霍乱毒素(Cholera Toxin CT)是良好的免疫佐剂和抗原.LT和CT通常用法是口服或鼻吸入途径以增强疫苗的粘膜免疫应答.动物经TCI法CT或LT接种后,可诱导全身免疫应答,血清中出现高滴度的IgG和IgA抗体,产生再次抗体免疫应答,诱导CD4+T细胞和CTLs的特异免疫反应.经TGI法免疫后甚至出现IE抗体,其机制不清.但是,TCI所诱导的局部的粘膜免疫反应和系统的全身免疫反应有可能全面提高疫苗的效力.
