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B7-1、B7-2单抗对狼疮肾炎小鼠模型的免疫干预及机制研究
目的 探讨B7-1、B7-2单克隆抗体分别通过阻断或削弱B7/CD28协同刺激分子信号通路对SLE小鼠模型的免疫干预效应以及可能的分子机制.方法 C57BL/J6×BALB/c杂交F1代小鼠,取60只雌性F1代小鼠分成4组:正常对照组,模型组,B7-1干预组,B7-2干预组.B7-1干预组在淋巴细胞注射完后的第1、3、5、8、15、30、60天,通过尾静脉分别注射B7-1单抗(克隆4E5),每只小鼠注射抗体量为8 mg/kg,B7-2干预组在相同时间给予B7-2单抗(克隆1D1),模型组相同时间给予等剂量的小鼠Ig同型对照.分析自身抗体、尿蛋白、免疫复合物和肾脏组织改变情况等指标.结果 模型组小鼠第2周就能检测到dsDNA的表达,4周能检测到ANA的表达.B7-1干预组、B7-2干预组能检测到dsDNA和ANA的时间晚于模型组,而且抗体滴度都低于模型组.第12周,模型组小鼠均出现蛋白尿.B7-1干预组和B7-2干预组分别有50％、40％的小鼠出现蛋白尿,蛋白量低于模型组.模型组小鼠肾脏组织HE染色可见肾小球组织病理病变明显,结构紊乱,免疫荧光染色显示肾小球部位可见颗粒状或线性的荧光.电子显微镜扫描可见肾小球脏层上皮细胞和基底膜之间存在大量电子致密物,基底膜节段性增厚.B7-1干预组、B7-2干预组肾小球病理改变较轻,肾小球部位可见少量荧光,肾小球脏层上皮细胞和基底膜之间可见少量电子致密物,基底膜厚度也没有明显增厚.结论 B7-1、B7-2单抗干预都能阻断或削弱B7/CD28共刺激信号通路,减少自身抗体的生成,从而能减轻免疫复合物对狼疮小鼠肾功能的损伤.B7-2单抗能更特异性地减少自身抗体的产生,因此对SLE小鼠肾炎的发生发展有更好的延缓作用.提示阻断协同刺激分子的方法有望为SLE等自身免疫性疾病提供高效低毒的生物疗法.
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4株鼠抗人B7-1分子单抗的制备及其生物学活性的鉴定
目的:制备鼠抗人B7-1分子(mAb)单抗及研究其生物学活性.方法:以人多发性骨髓瘤细胞转人B7-1基因细胞株XG7-B7为免疫原,采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备鼠抗人B7-1分子单抗;以Western blot及间接免疫荧光标记法鉴定其特异性和亲和力;采用3H-TdR掺入实验和Annexin-V染色分析测定该单抗的生物学功能.结果:获得了4株持续分泌抗人B7-1分子的特异性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为1F11、3H8、6H2和7B10,其分泌的单抗类别分属于小鼠IgG1和IgM;4株单抗均具有良好的特异性和亲和力;1F11、3H8和6H2能部分阻断B7-1分子基因转导细胞介导的共刺激信号,从而抑制T细胞的增殖效应(抑制率21%～52%);且能诱导天然表达B7-1分子的人B系淋巴瘤细胞Raji的凋亡.结论:成功研制4株功能性抗人B7-1分子抗体,这些抗体在抗异体组织器官移植排斥反应及在B系淋巴瘤的治疗中具有潜在的应用价值.
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鼠抗人B7-1分子功能性单克隆抗体的制备及生物学特性
目的:制备鼠抗人B7-1分子的功能性单克隆抗体,研究其对高表达相应配基分子细胞的生物学效应.方法:用两株转人B7-1基因细胞株XG7-B7和L-B7分别作为免疫原及检测细胞株,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体.以快速定性试纸分析法鉴定单抗所属的小鼠IgG亚类,采用竞争抑制及间接免疫荧光法分析单抗的特异性和亲和力,以高表达B7-1分子的恶性淋巴瘤细胞Raji和Daudi为靶细胞,分析单抗对其生长的影响.以人多发性骨髓瘤细胞转入B7-1基因细胞株XG1-B7为刺激细胞,以人外周血单个核细胞(PBLs)为反应细胞,用MTT法分析单抗的中和活性.结果:成功地获得了1株鼠抗人B7-1的功能性单克隆抗体(克隆4E5) , 属于小鼠IgG1亚类,经流式细胞仪分析,4E5与PBLs、体外人工诱导的树突状细胞(DCs)、Ra ji和Daudi的阳性结合率分别为10.2%、95.1%、92.7%及89.2%;能完全阻断标准抗人B7 -1单抗与相应抗原的结合.同时还发现,单抗4E5能显著地抑制恶性淋巴瘤细胞Raji和Daud i的生长繁殖,并能阻断B7分子介导的协同刺激信号的传导.结论:单克隆抗体4E5是一株抗人B7-1分子的功能性单抗,具有重要的研究和应用价值.
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小鼠B7-1基因RNAi慢病毒载体的构建及其沉默效应研究
目的：构建介导小鼠B7-1基因RNAi的慢病毒载体，研究其对L929细胞表面B7-1分子表达的沉默效应。方法：从小鼠B7-1基因编码区选择3段RNA干扰靶序列，制备转录双发夹RNA的前体DNA，并克隆至慢病毒穿梭质粒，构建B7-1的RNAi慢病毒穿梭载体，测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T细胞产生慢病毒，经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T细胞GFP表达水平确定病毒滴度，流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1基因RNAi慢病毒稳定感染的L929细胞，流式细胞术分析细胞中GFP及B7-1分子表达的状况；将感染细胞与分离的小鼠脾脏T细胞混合培养，分析B7-1稳定沉默细胞刺激T细胞增殖的能力。结果：成功了构建小鼠B7-1基因RNA干扰的重组慢病毒载体；获得了滴度达（3～5）×108 TU／ml的浓缩重组慢病毒，重组慢病毒可有效感染L929细胞介导GFP表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929细胞，该细胞表面B7-1分子表达受到抑制，刺激T细胞增殖的能力显著下降（P＜0.05）。结论：构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1分子的RNAi慢病毒载体，该载体可稳定沉默L929细胞表面B7-1分子表达，抑制B7-1／CD28信号诱导的T细胞增殖效应。
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B7-1/B7-H1相对比例变化对Hsp70-肽复合物抗肿瘤免疫效应的影响
目的:探讨Hsp70-肽复合物对B7-1/B7-H1相对比例的影响及真核表达可溶性PD-1(sPD-1)对Hsp70-肽复合物抗肿瘤作用的影响.方法:通过RT-PCR和半定量PCR技术检测Hsp70-肽复合物体外刺激和体内免疫对小鼠脾细胞正调控共刺激分子B7-1和抑制性共刺激分子B7-H1及其受体PD-1表达的影响;体内转染表达sPD-1后,观察Hsp70-肽复合物免疫小鼠的肿瘤生长以及脾淋巴细胞毒性的变化.结果:基因表达检测表明,Hsp70-肽复合物体外刺激的小鼠脾细胞B7-1 mRNA和B7-H1 mRNA的水平随时间而变化,B7-1/B7-H1比值随刺激时间而增高;Hsp70-肽复合物体内免疫小鼠后期脾细胞B7-1表达下降,B7-H1及其受体PD-1表达上调,B7-1/B7-H1比值逆转;体内表达sPD-1可显著增强和延长Nspp70-肽复合物的抑瘤效果;体内表达sPD-1可提高Hsp70-肽复合物免疫的荷瘤小鼠脾细胞的杀伤率.结论:Hsp70-肽复合物的刺激引起共刺激分子B7-1和B7-H1表达的变化,B7-1/B7-H1的比例与激活效应相关,sPD-1通过阻抑B7-H1/PD-1途径、上调B7-1/B7-H1比例,可增强免疫应答,提高Hsp70-肽复合物特异性免疫治疗肿瘤的效应.
关键词： 共刺激分子 PD-1 B7-H1 B7-1 Hsp70-肽复合物 -
胃癌患者HLA-I、B7-1、β2 m的表达
目的探讨HLA-I、β2m、B7-1分子在肿瘤发生、发展中的作用.方法流式细胞技术检测胃肿瘤细胞和外周血淋巴细胞HLA-I、β2m、B7-1分子的表达;放射免疫技术(RIA)检测血清中β2m的含量.结果①胃癌细胞表面HLA-I分子表达明显降低.②胃癌细胞表面B7-1分子表达明显降低或缺如.③β2m在肿瘤细胞上的表达明显增高;作相关分析发现,β2m与HLA-I的表达呈负相关关系(r=-0.470,P＜0.05).④在外周血淋巴细胞上各指标的表达情况,HLA-I表达丰富,胃癌患者与正常人之间无显著性差异;B7-1的表达微弱,胃癌患者的表达低于正常人;β2m的表达丰富,胃癌患者的表达高于正常人;⑤血清中β2m的含量,胃癌患者高于正常人,血清中β2m的含量与外周血淋巴细胞β2m表达有正相关关系(r=0.546,P＜0.05).结论肿瘤细胞低表达HLA-I和B7分子是肿瘤发生、发展的重要机制;β2m在肿瘤的诊断、治疗和预后判断有一定价值.
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川芎嗪和地塞米松对类风湿关节炎患者免疫细胞膜分子表达的研究
目的 探讨川芎嗪和地塞米松对活动期类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC) B7-1和B7-2 mRNA表达的影响,为临床使用川芎嗪治疗RA提供理论依据.方法 取活动期RA患者PBMC培养,分别以川芎嗪、地塞米松和川芎嗪+地塞米松进行处理,以PBS对照,采用半定量逆转录PCR的方法,检测PBMC B7-1和B7-2 mRNA表达.结果 与对照组相比,川芎嗪组和地塞米松组均能明显抑制B7-2 mRNA表达(P＜0.05),而川芎嗪+地塞米松组对B7-2 mRNA表达的抑制更加明显(P＜0.01).各组对B7-1 mRNA表达均无显著影响(P＞0.05).结论 川芎嗪能下调活动期患者PBMC B7-2 mRNA表达,合并使用地塞米松能更好地抑制B7-2 mRNA表达.
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X射线对小鼠腹腔巨噬细胞表达B7-1和B7-2的影响
目的:观察X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞表达B7-1和B7-2的影响。方法:采用免疫组织化学法（ABC法）。结果:小鼠腹腔巨噬细胞表达B7-2达到高峰的时间早于B7-1，而且B7-2表达幅度也高于B7 -1。剂量-效应关系的研究表明, B7-1 和B7-2的表达均在0.07 5 Gy剂量点出现峰值，而在较大剂量照射时也出现一个峰值。但在不同分度分析结果中发现 ，低剂量X射线照射组的高密度细胞百分数比较大剂量组多。结论: B7分子的表达上调可能是参与低剂量电离辐射免疫增强效应的重要因素。
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转染B7-1基因的人胰腺癌细胞生物学活性的研究
目的探讨B7-1基因导入人胰腺癌SW1990细胞后肿瘤细胞生物学特性的变化.方法采用RT-PCR及FACS检测B7-1基因的表达.MTT法检测病毒转化细胞体外增殖能力.以肿瘤细胞淋巴细胞混合培养检测淋巴细胞的增殖反应.结果转染后的SW1990细胞表达B7-1阳性,野生型SW1990、SW1990/pLXSN细胞与SW1990/B7-1细胞的形态、体外生长特性及MHC Ⅰ类分子表达水平均无差异.SW1990/B7-1细胞增强PBL体外增殖能力及细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌.结论表达B7-1分子的胰腺癌细胞免疫原性增加.
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B7-1mAb对B系淋巴瘤Raji细胞的生长抑制和凋亡诱导作用
为了研究B7-1分子功能性mAb(6H2)对表达B7-1分子的B系淋巴瘤Baii细胞的生物效应.分别运用免疫荧光标记和流式细胞仪技术(FACS)、台盼蓝拒染试验、MTT试验和RT-PCB半定量分析,分析6H2对Raji细胞的生长抑制和凋亡诱导作用.结果显示,6H2能抑制天然表达B7-1分子的人B系淋巴瘤Raii细胞的生长,产生细胞周期G2/M的阻滞,上调细胞表面CDl8和CD95(Fas)的表达,且能使Raji细胞中Bax的相对转录表达显著增加,从而诱导Raji细胞的凋亡.6H2为功能性抗人B7-1分子特异性mAb,具有抑制Raii细胞生长和凋亡诱导作用,在B系淋巴瘤研究和生物治疗中具有应用价值.
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阿糖胞苷增强白血病细胞B7分子表达及促进双功能抗体对靶细胞的杀伤
目的:研究阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对白血病细胞共刺激分子B7表达的影响,以及联合双功能抗体anti-CD3/anti-Pgp介导T细胞对耐药白血病细胞的杀伤作用.方法:应用流式细胞术检测白血病细胞株K562和多药耐药白血病细胞株K562/A02细胞经Ara-C刺激不同时间后B7-1、B7-2分子的表达,RT-PCR方法检测B7-1mRNA、B7-2 mRNA的表达,MTT法检测经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞对T淋巴细胞增殖的影响.CytoTox 96非放射性细胞毒性分析检测Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp微型双功能抗体对人外周血淋巴细胞杀伤K562和K562/A02靶细胞的影响.结果:经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较对照组明显升高;MTT结果显示,经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞能促进T淋巴细胞增殖;Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体在0.39∶1～25∶1效靶比范围内,随着效靶比的升高,介导T淋巴细胞对K562和K562/A02细胞的杀伤率随之提高,对高表达Pgp的耐药K562/A02细胞尤为明显.结论:Ara-C可上调白血病细胞B7分子的表达,从而增强anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体介导的T细胞对靶细胞的体外杀伤作用.
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逆转录病毒载体介导大鼠乳腺癌细胞共表达MIP-1α和B7-1
目的:建立共表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的大鼠乳腺癌细胞株,并进行体外活性检测.方法:应用含不同选择标记的重组逆转录病毒载体,经1 mg/ml G418和2 μg/ml puromycin双药物筛选后获得MIP-1α+B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株.RT-PCR、免疫组化检测mMIP-1α的表达,RT-PCR、流式细胞术检测mB7-1的表达;将共表达MIP-1α和B7-1的肿瘤细胞与大鼠脾淋巴细胞混合培养后,MTT法检测淋巴细胞的增殖指数、琼脂糖打孔法检测共表达MIP-1α和B7-1肿瘤细胞对单个核细胞的趋化活性.结果:经脂质体转染包装细胞产生的重组逆转录病毒上清病毒滴度达4.6×107CFU/L.细胞生长曲线显示,重组逆转录病毒感染对乳腺癌细胞增殖无明显影响.重组逆转录病毒感染的大鼠乳腺癌细胞株SHZ-88/mMIP-1α+mB7-1有B7-1和MIP-1α mRNA及蛋白的表达.淋巴细胞增殖指数PI值SHZ-88/PLXSN组为(0.76±0.25),SHZ-88/mMIP-1α+mB7-1组为(1.95±0.31),后者体外刺激淋巴细胞增殖能力增强(P＜0.01),SHZ-88/pBabe puro组的趋化指数为(0.99±0.19),mMIP-1α+mB7-1组的为(3.88±0.33),后者显著增强了趋化活性.结论:通过逆转录病毒载体介导建立MIP-1α和B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株具有招引单个核细胞,并将其激活的体外生物学活性.
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B7-1基因转染骨肉瘤细胞诱导抗骨肉瘤主动免疫的实验研究
目的:探讨B7-1基因转染骨肉瘤细胞能否诱导抗骨肉瘤主动免疫作用.方法:利用脂质体将B7-1真核表达载体pcDNA3-B7-1和空载体pcDNA3分别导入骨肉瘤细胞株LM8中,G418筛选出阳性克隆(分别命名为LM8/B7-1和LM8/pcDNA3),通过RT-PCR、Western blot和流式细胞仪检测B7-1基因与蛋白的表达;通过软琼脂克隆形成实验观察转基因细胞株LM8/B7-1的体外增殖能力;用LM8、LM8/B7-1和LM8/pcDNA3分别经腹腔免疫小鼠,得到腹腔浸润淋巴细胞和致敏脾细胞,MTT法检测其体外杀伤活力;将LM8、LM8/B7-1和LM8/pcDNA3细胞分别接种到C3H雄性小鼠前腋下,观察其致瘤能力;观察LM8/B7-1致敏的小鼠对骨肉瘤细胞LM8是否具有免疫保护作用.结果:B7-1基因在转基因细胞LM8/B7-1中能得到高表达;LM8/B7-1体外增殖能力与LM8和LM8/pcDNA3无明显差异(P＞0.05);LM8/B7-1诱导的CTL的杀伤活力显著高于LM8和LM8/pcDNA3诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活力,LM8/B7-1诱导的CTL对LM8/B7-1的杀伤活力也明显高于对LM8和LM8/pcDNA3的杀伤活力(P＜0.05);LM8/B7-1致瘤能力较LM8和LM8/pcDNA3细胞明显下降(P＜0.01);LM8/B7-1致敏的小鼠对骨肉瘤细胞LM8具有免疫保护作用.结论:B7-1基因转染骨肉瘤细胞能诱导抗骨肉瘤主动免疫作用,为利用B7-1基因进行骨肉瘤免疫基因治疗提供了实验依据.
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IL-12协同B7-1诱导机体抗肿瘤免疫的实验研究
目的研究白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)协同共刺激分子B7-1,联合诱导机体抗肿瘤免疫对大鼠卵巢上皮癌的治疗作用并探讨其机理.方法用携带有小鼠IL-12和B7-1的逆转录病毒表达载体感染大鼠卵巢癌细胞株NuTu-19,建立高表达细胞株NuTu-19/IL-12、NuTu-19/B7-1及双基因共表达细胞株NuTu-19/IL-12-B7-1,并以转染空载体pLXSN的细胞NuTu-19/Neo为对照.用经丝裂霉素C处理的各种基因修饰的肿瘤细胞免疫动物,观察卵巢癌腹腔转移模型动物生存期,及其诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)杀伤活性的作用.结果经各种基因修饰的肿瘤细胞免疫后,大鼠脾淋巴细胞增殖能力有不同程度的提高,CTL杀伤同源肿瘤细胞的活性明显增强,IL-12和B7-1基因联合修饰的肿瘤细胞免疫动物对模型动物生存期的延长具有显著意义(P＜0.05).结论IL-12和B7-1基因联合修饰的肿瘤细胞可以刺激机体CTL增殖、成熟,增强CTL对肿瘤细胞的识别和杀伤活性等,两者联合具有明显的协同效应.联合免疫基因治疗作为一种新的卵巢癌治疗方法,值得深入研究.
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人B7-1基因的cDNA克隆及其重组腺病毒载体制备
目的：构建并制备含人B7-1基因的重组腺病毒（Ad-B7-1）载体, 为后续的肿瘤基因治疗研究提供实验基础。方法：应用逆转录-套式PCR方法从人骨髓细胞中克隆B7-1的cDNA后,将其克隆至小片段腺病毒载体pCI′中， 后者与pHBG10在293细胞内重组包装产生腺病毒，感染SGC7901细胞。结果：成功克隆了人B7-1的cDNA并构建Ad-B7-1载体，且经过酶切鉴定和测序验证。感染Ad-B7-1的细胞经PCR鉴定，表明B7-1基因已整合入细胞基因组。结论：本实验构建的腺病毒载体可有效地转B7-1基因进入肿瘤细胞，该结果为下一步应用于体内肿瘤基因治疗研究提供了实验基础。
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共刺激信号B7-1的缺失促进了胃癌生成及转移
目的:探索共刺激信号B7-1的表达缺失对胃癌生成及淋巴结转移的影响.方法:应用RT-PCR技术检测44例胃癌组织、癌旁组织标本中B7-1 mRNA的表达,分析其与胃癌病理学特征的关系.结果:所有癌旁胃组织都有B7-1基因的表达,而44例胃癌组织中只有8例有表达,癌旁正常胃组织与胃癌组织中B7-1基因表达率差异有显著性(χ2=9.14,P＜0.05).有淋巴结转移的35例胃癌组织中,1例有B7-1基因表达,无淋巴结转移的9例胃癌组织中有7例检测到B7-1 mRNA的表达,有淋巴结转移的胃癌组织中B7-1 mRNA的表达率显著降低(χ2=23.66,P＜0.05).结论:B7-1 mRNA表达缺失促进了胃癌生成及淋巴结转移.
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B7-1基因转染抑制胃癌生长和转移的实验研究
目的:研究B7-1基因转染胃癌细胞对人胃癌生长和转移的影响.方法:将重组质粒B7-1pcDNA3.1(+)和空载体pcDNA3.1(+)分别转染SGC-7901细胞(简称S),用G418筛选分别建立稳定转染细胞株SGC-7901/B7-1pcDNA3.1(+)(简称S-B)和SGC-7901/pcDNA3.1(+)(简称S-P).RT-PCR和流式细胞术分别从mRNA和蛋白水平检测B7-1基因表达,检测细胞周期分布,计算细胞增殖指数.分离人外周血单个核细胞(PBMC),分别与S-B、S-P、S共培养,检测PBMC黏附力和杀伤力,检测胃癌细胞凋亡情况.将S-B、S-P、S分别接种于BALB/c裸鼠胃大弯侧,观察B7-1基因转染对胃癌生长及淋巴转移的影响.结果:S-B高表达B7-1基因,S-P和S不表达B7-1基因.S-B、S-P、S增殖指数无显著差异.S-B与PBMC黏附力和杀伤力均明显高于S-P和S,而S-P与s无显著差异.种植S-B小鼠成瘤率和转移率均低于S-P和S,HE染色见淋巴细胞广泛浸润于S-B种植形成肿瘤组织及转移淋巴结.结论:B7-1基因提高胃癌细胞免疫原性抑制胃癌生长和淋巴转移.
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γ射线诱导人肝癌细胞表达B7-1共刺激分子的研究
目的研究电离辐射与肿瘤细胞B7-1分子表达之间的关系,探讨肿瘤细胞辐照后免疫原性增强的机制.方法采用间接免疫荧光-流式细胞仪分析技术,研究在用不同剂量γ射线照射SMMC-772肝癌细胞后、培养不同时间内SMMC-7 72细胞B7-1共刺激分子的表达水平.并用3H-TdR释放法测定照射和未照射肿瘤细胞与淋巴细胞共反应后的细胞毒活性.结果未照射和经10、20、30Gy照射的人肝癌细胞不表达B7-1分子.经40、50、60Gy剂量照射后,SMMC-772肝癌细胞表达B7-1分子 ,高达66.8±1.3%,与对照组比有非常显著性差异(P＜0.01).表达时间的高峰在照射后培养72h时,低在照射后培养24h时(P＜0.05).细胞毒活性测定结果表明, 表达B7-1分子的SMMC-72肝癌细胞与淋巴细胞共反应后,细胞毒活性明显高于未照射组(P ＜0.01).结论γ射线可诱导肝癌细胞表达B7-1分子,从而增强肿瘤细胞的免疫性.
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抗B7-1功能性单克隆抗体对B淋巴瘤细胞生长的抑制作用
目的分析抗B7-1功能性单克隆抗体对表达B7分子的人恶性淋巴瘤细胞株Raji和Daudi细胞体外生长的抑制作用及其可能机制.方法采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析肿瘤细胞的B7-1分子表达;以不同浓度抗B7-1功能性单克隆抗体,加入体外培养细胞中,经细胞计数和MTT法,观察单克隆抗体对肿瘤细胞体外生长的作用.结果 Raji和Daudi细胞均表达B7-1分子,表达阳性百分率分别为 92.7%和89.2%;抗B7-1单克隆抗体浓度在5μg/ml时就对这两种细胞株有显著的抑制作用, 并随浓度增高而增强.结论抗B7-1单克隆抗体对高表达B7-1分子的人恶性淋巴瘤细胞体外生长有明显的抑制作用,这种抑制作用是通过诱导肿瘤细胞的凋亡所致 .
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B7-1与GM-CSF双顺反子慢病毒转染骨髓基质细胞的研究
目的 研究B7-1和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)双基因共表达慢病毒载体是否可介导目的 基因在人骨髓基质细胞(MSCs)有效表达.方法 采用改良的磷酸钙沉淀法将包装质粒、包膜蛋白质粒和含目的 基因的转移质粒共转染293T包装细胞,收集的病毒上清感染密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养的MSCs,用荧光显微镜和流式细胞术(FCM)分析转导细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达,PT-PCR分析目的 基因在转导细胞的表达.结果 密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养第三代的MSCs, CD90表达阳性率达到93.62%,包装好的慢病毒颗粒可成功感染293T包装细胞和MSCs,用荧光显微镜和FCM均可检测到转染细胞中GFP表达,阳性率分别为77.66%和43.97%,RT-PCR方法可扩增出转染细胞表达B7-1和GM-CSF基因片段.结论 B7-1和GM-CSF双基因共表达慢病毒载体可高效转移目的 基因至骨髓基质细胞并获得有效表达.
关键词： B7-1 粒-巨噬细胞集落刺激因子 慢病毒
