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B7-1/B7-H1相对比例变化对Hsp70-肽复合物抗肿瘤免疫效应的影响
目的:探讨Hsp70-肽复合物对B7-1/B7-H1相对比例的影响及真核表达可溶性PD-1(sPD-1)对Hsp70-肽复合物抗肿瘤作用的影响.方法:通过RT-PCR和半定量PCR技术检测Hsp70-肽复合物体外刺激和体内免疫对小鼠脾细胞正调控共刺激分子B7-1和抑制性共刺激分子B7-H1及其受体PD-1表达的影响;体内转染表达sPD-1后,观察Hsp70-肽复合物免疫小鼠的肿瘤生长以及脾淋巴细胞毒性的变化.结果:基因表达检测表明,Hsp70-肽复合物体外刺激的小鼠脾细胞B7-1 mRNA和B7-H1 mRNA的水平随时间而变化,B7-1/B7-H1比值随刺激时间而增高;Hsp70-肽复合物体内免疫小鼠后期脾细胞B7-1表达下降,B7-H1及其受体PD-1表达上调,B7-1/B7-H1比值逆转;体内表达sPD-1可显著增强和延长Nspp70-肽复合物的抑瘤效果;体内表达sPD-1可提高Hsp70-肽复合物免疫的荷瘤小鼠脾细胞的杀伤率.结论:Hsp70-肽复合物的刺激引起共刺激分子B7-1和B7-H1表达的变化,B7-1/B7-H1的比例与激活效应相关,sPD-1通过阻抑B7-H1/PD-1途径、上调B7-1/B7-H1比例,可增强免疫应答,提高Hsp70-肽复合物特异性免疫治疗肿瘤的效应.
关键词： 共刺激分子 PD-1 B7-H1 B7-1 Hsp70-肽复合物 -
肝癌HSP70-肽复合物抗肿瘤研究
目的 研究肝癌HSP70-肽复合物激活的T淋巴细胞的抗肿瘤作用,探讨其用于临床治疗的可行性.方法 取肝癌手术标本,用凝胶梯度洗脱法从手术切取肝癌组织中提取HSP70-肽复合物,并激活T淋巴细胞,观察激活T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤率.结果 未经肝癌HSP70-肽复合物激活的T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤率明显低于HSP70-肽复合物激活T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤率(P＜0.01).结论 肝癌组织中或细胞中提取的HSP70-肽复合物作用于T淋巴细胞在体外对肝癌细胞能产生高效而特异的杀伤作用,在肿瘤免疫中起重要作用.
关键词： 肝癌 Hsp70-肽复合物 抗肿瘤 -
胃癌Hsp70-肽复合物致敏树突状细胞抗肿瘤作用的研究
目的探讨胃癌Hsp70-肽复合物致敏树突状细胞(DC)抗肿瘤作用.方法采用GM-CSF,IL-4刺激,培养胃癌患者外周血单个核细胞,增殖产生大量DC,用离子交换层析法从临床胃癌组织中提取Hsp70-肽复合物,并行western-bolt鉴定,Hsp70-肽复合物修饰DC,通过细胞因子检测试剂盒对修饰DC上清液进行检测,用DC激活混合T淋巴细胞,观察其对胃癌细胞的杀伤作用.用未被Hsp70-肽复合物修饰DC作对照.结果 Hsp70-肽复合物-DC分泌IL-12、TNF-α、IL-1β含量分别为(305.02±20.70)pg/ml 、(480.61±32.52)pg/ml和(519.60±39.12)pg/ml,而未被Hsp70修饰DC分泌IL-12、 TNF-α、IL-1β的含量分别为(3.81±0.84 )pg/ml、(3.50±0.21)pg/ml、(50.11±2.86)pg/ml,两者比较,有显著性差异(P＜0.01).Hsp70修饰DC激活的T淋巴细胞后对胃癌细胞的杀伤率为(93.54±8.26)%明显高于对照组的(6.20±0.38)%(P＜0.01).结论胃癌Hsp70-肽复合物致敏DC并激活T淋巴细胞后对胃癌细胞具有很强的杀伤作用.
关键词： 胃癌 Hsp70-肽复合物 树突状细胞 抗肿瘤 -
可溶性PD-1协同HSP70-肽复合物抑制荷瘤小鼠肝癌的研究
目的: 研究基因转染和表达的可溶性PD-1(soluble programmed death-1, sPD-1)对HSP70-肽疫苗抗肿瘤效果的影响及协同机制.方法: 以HSP70-肽疫苗免疫BALB/c小鼠后, 用半定量RT-PCR技术检测和分析HSP70-肽疫苗对小鼠脾细胞上PD-1及其配体基因表达的影响.体内转染表达sPD-1, 用MTT比色法检测HSP70-肽疫苗免疫小鼠对肿瘤生长的抑制作用以及脾淋巴细胞的细胞毒活性.结果: 单独的sPD-1就有抗肿瘤效应.HSP70-肽疫苗不仅能预先在动物体内诱导肿瘤特异性的CTL, 而且可使脾细胞上抑制性共刺激受体PD-1及其配体的表达显著升高.用sPD-1与HSP70-肽疫苗联合治疗荷瘤小鼠, 能提高脾CTL的杀伤效率并延长HSP70-肽疫苗的免疫效果.结论: sPD-1可通过阻断PD-1与其配体的结合作用, 及减弱PD-1的负反馈抑制作用, 而增强HSP70-肽疫苗的抗肿瘤效应.
关键词： 共刺激分子 PD-1 B7-H1 Hsp70-肽复合物 -
负载不同形式肝癌抗原的树突状细胞抑瘤功能的比较
目的: 探讨不同形式的肝癌抗原修饰的树突状细胞(DC)的抑瘤功能.方法: 分别用肝癌H22冻融抗原、 H22小分子抗原肽和Hsp70-H22抗原肽复合物修饰DC; 用MTT比色法分析DC 激活的CTL对H22细胞的杀伤能力, 并用RT-PCR法测定脾脏T细胞中IFN-γ mRNA的表达水平; 用不同修饰的DC免疫小鼠, 观察其对H22肝癌的生长抑制作用.结果: 单独的H22肝癌抗原肽修饰的DC不能激活CTL. Hsp70-H22肽复合物修饰的DC激活CTL的能力强于H22肝癌冻融抗原修饰的DC, 对H22细胞的杀伤率分别为47.3%和18.3%.各组T细胞中IFN-γ表达水平的变化与杀伤率的变化相一致.用H22肝癌冻融抗原和Hsp70-H22肽复合物修饰的DC免疫小鼠后, 均可抑制H22细胞生长, 但后者的抑制作用更强, 成瘤率仅40%.其他各组的成瘤率均为100%.结论: Hsp70-H22肽复合物是一种DC的强致敏物, 可通过激活CTL、诱导CD4+ T细胞分化成Th1型细胞而参与肝癌的免疫排斥.
关键词： 树突状细胞 Hsp70-肽复合物 IFN-γ 肝癌
