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门静脉高压症患者脾切除后外周血B7-1/CD28表达的变化
目的 探讨B7-1/CD28对门静脉高压症(portal hypertension,PHT)患者免疫功能的影响和作用.方法 采用流式细胞分析技术对30例门静脉高压症患者进行研究,检测门静脉高压症患者行脾切除前后外周血淋巴细胞中以及脾脏中B7-1/CD28的表达情况,分析其与患者淋巴细胞亚群以及免疲功能的关系.时患者外周血B7-1/CD28和淋巴细胞进行检测.利用免疫组化方法检测B7-1/CD28在脾脏中的表达,与10例外伤性脾破裂行脾切除之脾脏组织进行比较.结果 门静脉高压症患者外周血中淋巴细胞亚群和B7-1/CD28表达较低,脾切除后短期内升高.其脾脏中表达的B7-1/CD28较正常人群高.结论 门静脉高压症患者全脾切除后外周血B71/CD28通路被激活,患者免疫功能得到部分恢复.
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参术胶囊对脾虚胃癌小鼠T细胞活化信号的影响
参术胶囊处方来源于<证治准绳>中治疗脾气虚证之"参术膏".实验研究表明参术胶囊能明显改善瘤细胞的异型性,并能通过调控与代谢、离子通道和运输蛋白等相关基因来发挥治疗脾虚胃癌转移鼠[1-2].机体的免疫功能状态与脾虚胃癌的发生密切相关.因此,本研究以诱发性脾虚胃癌小鼠为模型,观察参术胶囊对脾虚胃癌小鼠T细胞活化信号的影响,进一步明确参术胶囊抗肿瘤作用的分子机制和作用靶点.
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共刺激分子B7-1介导Th1/Th2免疫应答对日本血吸虫虫卵肉芽肿病变的影响
目的观察B7-1激发型mAb的体内注射对日本血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫偏移的影响及对虫卵肉芽肿病变的调节作用,探讨干预共刺激信号调控Th1/Th2免疫偏移控制血吸虫虫卵肉芽肿病变的新途径.方法小鼠感染日本血吸虫尾蚴后4w给予腹腔内注射B7-1激发型mAb,于6、8wk摘眼球取血收集血清,用ELISA双抗体夹心法测定血清中抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平;同时取脾淋巴细胞培养72h,同法测定培养上清中细胞因子IFN-γ和IL-4的表达水平;并且检测感染小鼠虫卵肉芽肿体积. 结果 B7-1激发型mAb 能显著下调感染小鼠血清IgG水平,并能显著上调IFN-γ的表达水平,下调IL-4的表达水平,同时能使虫卵肉芽肿体积显著减小.反映Th1/Th2免疫偏移的IgG1/IgG2a有下降趋势.结论 B7-1激发型mAb能调节Th1/Th2免疫应答,诱导免疫反应向Th1方向偏移,从而为控制日本血吸虫虫卵肉芽肿病变的免疫治疗新途径提供了实验依据.
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混合皮肤移植中自体角朊细胞转染B7-1后诱导抑制功能的改变
目的分析混合皮肤移植中自体角朊细胞转染B7-1基因后功能的改变,并探讨传统共刺激分子和MHCⅡ类分子等在自体角朊细胞诱导的局部免疫耐受中的作用.方法利用建立的MELC体外模拟系统,对自体角朊细胞进行B7-1基因的转染,观察转染前后自体角朊细胞诱导抑制能力的变化,同时通过抗CTLA-4单抗及HLAⅡ类分子的封闭实验,观察这些分子在自体皮岛抑制效应中的作用.结果自体角朊细胞转染B7-1基因后,诱导局部免疫抑制的能力消失,如果加入抗B7-1单抗阻断B7-1的作用后,其诱导抑制的能力又恢复;抗CTLA-4单抗不能阻断自体角朊细胞在实验体系中的抑制作用;用单抗所作的封闭实验结果表明,抗HLA-DR单抗封闭组对自体角朊细胞对MELR抑制诱导的影响小(P＞0.05),抗DQ单抗则可以对MELR的抑制得到大幅度的回复,而抗DP单抗也可以使体系中cpm值有一定的回升.结论混合皮肤移植中,自体角朊细胞之所以可以诱导局部免疫耐受,是通过B7-1以外的其他共刺激信号激活Th2亚群、进而遏制Th1亚群来诱发抑制的,而且这种抑制与CTLA-4的负向调节无关,并具MHC限制性.
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表达小鼠B7-1基因的重组逆转录病毒载体构建及真核表达
目的:构建表达小鼠B7-1基因的重组逆转录病毒载体并在真核细胞中检测其蛋白表达.方法:PCR法获基因,定向克隆连接到逆转录病毒载体上,得到重组逆转录病毒载体,酶切法鉴定,真核细胞中检测蛋白表达.结果:酶切所得片段与所需相符,在真核细胞中检测到蛋白表达.结论:成功构建重组的逆转录病毒载体,为今后研究奠定了基础.
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妊娠期高血压疾病患者外周血共刺激分子B7-1和B7-2的研究
目的:研究妊娠期高血压疾病患者外周血单核细胞共刺激分子B7-1和B7-2的表达水平,探讨B7-1、B7-2在发病中的作用.方法:实验组为妊娠期高血压疾病患者60例(包括20例重度子痫前期患者,20例轻度子痫前期患者,20例妊娠期高血压患者);对照组为同期正常妊娠妇女20例,正常未孕妇女20例.分别采集、分离两组研究对象外周血单核细胞,用流式细胞术检测各组外周血单核细胞B7-1、B7-2的表达率.结果:(1)妊娠期高血压疾病患者B7-1表达率为9.49±2.66,显著高于正常妊娠组和正常未孕组(P＜0.05);(2)妊娠期高血压疾病患者B7-2表达率为20.00±4.93,显著低于正常妊娠组(P＜0.05);(3)重度子痫前期患者B7-1表达率为10.67±2.57,轻度子痫前期患者为10.14±2.31,显著高于妊娠期高血压患者(P＜0.05).结论:妊娠期高血压疾病患者外周血单核细胞共刺激分子B7-1、B7-2异常表达在其发病中有重要作用,可能是妊娠期高血压疾病发生的重要原因.
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人B7-1 cDNA的克隆及鉴定
目的:克隆人B7-1全长cDNA以构建相应腺病毒表达载体.方法:根据B7-1基因序列设计并合成可扩增B7-1 cDNA的特异性引物,用RT-PCR法从骨髓细胞总RNA中扩增B7-1 cDNA,并克隆至pGEM-T载体中,经酶切鉴定后再行序列分析.结果:逆转录多聚酶链反应扩增产物长度与预期的889 bp一致;用M13正、反向引物行序列测定,证实克隆出的序列与GenBank的B7-1 cDNA序列完全一致;人B7-1全长cDNA被成功地插入到质粒pGEM-T中.结论:克隆人B7-1全长cDNA为构建相应腺病毒表达载体及应用B7-1行肿瘤免疫基因治疗提供了可能性.
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小鼠B7-1和B7-2基因转染EL4细胞瘤苗抗肿瘤免疫作用的比较研究
目的:比较小鼠免疫共刺激信号B7-1和B7-2转化小鼠淋巴瘤细胞株EL4后,转化细胞介导的抗肿瘤免疫作用.方法:构建逆转录病毒表达载体pIXSN-mB7-1和pLXSN-mB7-2,转染野生型EL4细胞,获得高表达B7-1和B7-2分子的EL4/mB7-1和EL4/mB7-2细胞,并制备成瘤苗;分别应用LDH释放法、MTT法以及ELISA法检测比较两种瘤苗激活的T细胞的杀伤活性、细胞增殖和IL-2的分泌情况.结果:①EL4/mB7-1和EL4/mB7-2瘤苗刺激小鼠脾脏T淋巴细胞分泌IL-2的量明显超过野生型EL-4细胞(P＜0.01);②24h,EL4/mB7-1瘤苗刺激小鼠脾脏T淋巴细胞分泌的IL-2的量超过EL4/mB7-2瘤苗(P＜0.05);48 h,EL4/mB7-2瘤苗刺激小鼠脾脏T淋巴细胞分泌IL-2的量超过EL4/mB7-1瘤苗(P＜0.05);③EL4/mB7-1瘤苗和EL4/mB7-2瘤苗刺激小鼠T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的活性明显增强.EL4/mB7-2瘤苗刺激小鼠T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的活性与EL4/mB7-1瘤苗相当(P＞0.05).结论:mB7-1和mB7-2分子可活化T细胞分泌IL-2,两者刺激T细胞产生IL-2的高峰时间不同.mB7-2刺激T细胞产生CTL的杀伤活性与mB7-1无明显差别.
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B7-1、GPI及其拼接在肿瘤免疫治疗中的应用进展
在肿瘤免疫过程中, T细胞是一类能够识别及杀伤肿瘤细胞的细胞,其作用发挥的前提是抗原递呈细胞(APC)将抗原呈递给T细胞.这一过程需要两个信号参与,一是由TCR/CD3复合物同MHC Ⅱ类分子相互作用,提供免疫应答中肿瘤相关的特异信号;另一个是共刺激信号,是由共刺激分子与其受体相结合,介导T细胞有效活化,并调节T细胞增殖反应.
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人B7-1转基因肝癌瘤苗的制备
目的:制备人B7-1(hB7-1)转基因肝癌瘤苗.方法:用逆转录病毒转移系统将hB7-1基因导入人肝癌细胞株HepG2,并用RT-PCR、PCR-Southern杂交法检测转染空载体 pLXSN的HepG2/neo细胞和转染重组质粒pLXSN/hB7-1的HepG2/hB7-l细胞中hB7-1 mRNA表达;间接免疫荧光法检测HepG2细胞、HepG2/neo细胞、HepG2/hB7-1细胞形态,计算当日细胞绝对数,绘制生长曲线.结果:所建立的肝癌瘤苗(HepG2/hB7-1)细胞可高效表达hB7-1分子.基因转染对HepG2细胞的生长形态及生长曲线无明显影响.结论:逆转录病毒基因转移系统是使肝癌细胞高效表达hB7-1分子的有效途径.
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重组腺病毒介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因在肝癌细胞中的表达
目的观察腺病毒载体对肝癌细胞的转染效率及其介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因在肝癌细胞中的表达.方法不同MOI的Ad-GFP感染肝癌细胞,48h后计算感染效率;BB -102以50MOI感染肝癌细胞,48h后免疫组化法及western blot检测p53表达,ELISA检测GM-CSF的含量,FACS测定B7-1的表达.结果 MOI为50pfu/细胞时对肝癌细胞的转染效率达80%以上,目的基因均可在肝癌细胞中高效表达.结论腺病毒载体对肝癌细胞具有较高的转染效率,目的基因均可在肝癌细胞中高效表达,为进一步研究BB -102在肝癌治疗中的应用奠定了基础.
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B7-1、B7-2在牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的T淋巴细胞反应中的作用
目的：研究B7?1、B7?2分子对牙龈卟啉单胞菌（ Porphyromonas gingivalis，P． g）脂多糖诱导的T淋巴细胞反应的影响。方法：分别从基因敲除小鼠（ B7?1 KO组、B7?2 KO组、B7?1／2 KO组）和野生小鼠（ WT组）骨髓培养获得原代树突状细胞（ dendritic cell，DCs）并经P． g脂多糖刺激后，与T细胞混合培养。 CCK8试剂盒评价T细胞增殖，ELISA检测培养液中IFN?γ、IL?4及IL?17的水平，荧光定量PCR检测T细胞IFN?γ、IL?4、IL?17、GATA?3、T?bet及RORγt的转录水平。结果：CCK8检测显示各组T细胞增殖水平无差异。 ELISA及荧光定量PCR显示与WT组比较，B7?1 KO组IFN?γ降低，IL?4升高，IL?17无变化，T?bet降低，GATA?3升高，RORγt无变化；B7?2 KO组IFN?γ升高，IL?4降低，IL?17降低，T?bet升高，GATA?3降低，RORγt降低；B7?1／2 KO组各因子变化趋势介于B7?1 KO组和B7?2 KO组之间。结论：B7?1及B7?2分子对P． g脂多糖刺激的T细胞增殖无明显影响。但B7?1分子可促进T细胞向Th1型分化，抑制Th2型分化，与Th17型分化相关性不大；而B7?2分子抑制T细胞向Th1型分化，促进Th2型及Th17型分化。
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B7-1转基因细胞株的表达和检测
目的 构建B7-1基因真核表达载体并导入CAK-1肾癌细胞表达,为进一步研究基因的功能做材料准备.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,以正常肝脏组织cDNA为模板,扩增B7-1基因全长读码框架,并构建到真核表达载体pCDNA3.1中,将其导入CAK-1肾细胞瘤细胞,对转染后的细胞进行RT-PCR和Western blot分析.结果 克隆测序结果证实,B7-1读码框架被成功插入真核表达载体pCDNA3.1的相应位点,与pCDNA3空载体转染对照细胞相比,pCDNA3-B-7载体转染的CAK-1细胞中B-7基因mRNA平和蛋白水平均有明显升高.结论 B7-1转基因细胞株的成功构建和检测,为深入研究B7-1蛋白的生物学功能奠定了材料基础.
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用射线照射的B7-1转基因细胞进行肿瘤疫苗的研究
目的 探讨用放射的B7-1转基因细胞进行肿瘤疫苗疗法的效果.方法 将重组人B7-1基因真核表达载导入CAK-1肾细胞瘤细胞,利用转基因细胞治疗观察其抗肿瘤效果.结果 转基因细胞的肿瘤原性较CAK-1/Wt、CAK-1/pCDNA3组明显降低(P<0.001).同时免疫原性明显增强,以60Co照射的CAK-1/B7-1细胞免疫后,小鼠体内诱发了抗CAK-1/Wt的系统性、保护性免疫.用60Co灭活的转基因细胞作为瘤苗进行实验性治疗,能够延长小鼠的生存时间,减慢肿瘤的生长速度,CAK-1/B7-1的应用提高了肿瘤治疗效果(P<0.01).结论 放射的转基因细胞及其表达的B7细胞因子可以有效地激发机体的抗肿瘤免疫应答,B7-1表达肿瘤细胞应用可以成为一种很有前景的肿瘤疫苗.
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CD1D基因与B7-1基因共转染胰腺癌细胞及其抗癌作用的实验研究
目的 观察共转染小鼠B7-1和CD1D 基因对小鼠胰腺癌细胞的免疫应答.方法 将表达B7-1和CD1D 基因的逆转录病毒载体导入包装细胞系,然后转染入胰腺癌细胞.用PCR和Western方法鉴定细胞表达;用B7-1和CD1D 阳性的细胞在体内诱导抗肿瘤免疫反应.结果 B7-1和CD1D 阳性的细胞在同基因小鼠体内能诱导抗肿瘤免疫反应并抑制肿瘤生长.结论 B7-1基因和CD1D 基因共转染肿瘤细胞,能抑制肿瘤生长,可能为肿瘤的基因治疗开辟一条新途径.
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移植肾组织中共刺激分子B7-1及相关蛋白的表达研究
目的研究尸体移植肾组织中共刺激分子B7-1及HLA-DR的表达规律,探讨阻断共刺激途径诱导免疫耐受在预防和治疗肾移植术后排斥反应中的应用.方法应用免疫组化ABC法检测56例尸体移植肾及5例正常供肾组织中B7-1及其相关蛋白的表达情况.结果急性排斥组移植肾组织中B7-1及HLA-DR强烈表达,并伴有大量CD+4及CD+8 T细胞的浸润,与其余各组比较具有显著性差异(P＜0.01).结论在发生移植排斥反应时,肾小管上皮细胞等作为抗原提呈细胞,主动表达B7-1,为T淋巴细胞的活化提供了协同刺激信号;通过阻断共刺激途径诱导移植免疫耐受,为寻找新型免疫抑制剂提供了理论基础.
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从CD28/B7-1探讨雷公藤多甙治疗多发性肌炎的机制
目的通过CD28/B7-1激活T细胞这一途径探讨雷公藤多甙治疗多发性肌炎的分子免疫学机制.方法应用免疫荧光流式细胞计检测PM患者外周血CD4+和CD8+T细胞上CD28/B7-1分子蛋白的表达;RT-PCR法检测CD28/B7-1mRNA的表达.结果PM患者外周血CD4+和CD8+T细胞明显升高,且以CD8+T为主,分子蛋白及mRNA表达增加;经TWP干预后,CD4+和CD8+T细胞数减少CD28/B7-1,CD28/B7-1表达受抑制.结论PM表现为以CD86+T细胞介导的细胞毒作用为主的细胞免疫反应异常,CD28/B7-1与PM的发病密切相关.TWP可能通过抑制CD28/B7-1的表达发挥其治疗效应.
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B7-1在血管紧张素Ⅱ诱导足细胞骨架重排中的作用及其机制探讨
目的 观察共刺激分子B7-1对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠足细胞骨架重排的影响,探讨B7-1在足细胞病变中的作用以及可能的分子机制.方法 体外培养条件永生性小鼠足细胞(MPC),分组如下:正常对照组、AngⅡ刺激组、CTLA-4(B7-1封闭剂)干预组和CTLA-4干预+AngⅡ刺激组.转染B7-1 RNA干扰片段(siRNA)至分化成熟的足细胞,再予10-6 mmol/L AngⅡ刺激12h,观察沉默B7-1基因对AngⅡ刺激下足细胞骨架改变的影响.用流式细胞术检测足细胞B7-1表达;Western印迹法检测足细胞B7-1、nephrin、p-nephrin分子的表达;异硫氰酸荧光素(FITC)-鬼笔环肽荧光染色法观察足细胞骨架蛋白F-actin表达.结果 流式细胞术和Western印迹结果显示,正常对照组足细胞B7-1无表达,AngⅡ刺激组足细胞B7-1表达明显增加,且随AngⅡ刺激浓度增加和时间延长B7-1表达增加(均P＜0.05).与正常对照组比较,AngⅡ刺激组足细胞nephrin和p-nephrin表达量明显下调(均P＜0.05).FITC-鬼笔环肽荧光染色结果显示,与AngⅡ刺激组比较,CTLA-4干预+AngⅡ刺激组细胞骨架重排改善,F-actin重组评分(mCFS)明显降低(P＜0.05),提示封闭B7-1可改善AngⅡ对足细胞细胞骨架的破坏;与AngⅡ刺激组比较,转染B7-1 siRNA+AngⅡ刺激组细胞骨架重排改善,F-actin mCFS亦明显降低(P＜0.05),提示转染B7-1 siRNA亦可改善AngⅡ对足细胞细胞骨架的破坏.结论 B7-1参与足细胞骨架重排过程,在足细胞损伤中起重要作用.
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共刺激分子4-1BBL和B7-1在人脑胶质瘤细胞中的表达
背景与目的:4-1BBL和B7-1为诱导和维持T细胞活化提供了重要的共刺激信号,目前被认为是提高抗肿瘤免疫的治疗靶点.本研究探讨4-BBL和B7-1在7株胶质瘤细胞系表面的表达情况.方法:用流式细胞仪检测7株胶质瘤细胞株表面的共刺激分子4-1BBL和B7-1的表达,同时用MTT法分析胶质瘤细胞系对抗癌药物长春新碱(VCR)敏感性,并分析4-1BBL的表达与耐药性的相关性.结果:发现在所检测的胶质瘤细胞表面有不同程度的表达4-1BBL,但均不表达B7-1.其中T98G和MGR1细胞表面的4-1BBL表达＞30%,对VCR不敏感,UW28、SKMG1、MGR2、SF767、SKMG4细胞表面的4-1BBL表达＜10%,对VCR敏感.结论:本研究所检测的胶质瘤细胞均不表达共刺激分子B7-1,但有不同程度的表达4-1BBL,并且4-1BBL高表达的胶质瘤细胞对长春新碱敏感性差.
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小鼠B7-1转基因肿瘤疫苗的制备及其评估
目的:评估导入B7-1基因的肿瘤细胞能否作为肿瘤疫苗治疗膀胱肿瘤.方法:采用脂质体Lipofectamin 2000(Lip 2000)将B7-1基因导入鼠膀胱肿瘤(MBT-2)细胞.细胞表面分子的表达经免疫荧光染色而测得.采用混合淋巴细胞培养MTT法,观察MBT-2-B7-1细胞刺激脾淋巴细胞增殖情况.通过动物实验测定该细胞的肿瘤形成能力.结果:当Lip 2000与DNA的比值不低于4:1时能有效地转染MBT-2膀胱肿瘤细胞.转染了B7-1基因的肿瘤细胞能有效地刺激脾淋巴细胞的增殖,并在体内明显延迟了肿瘤的发生;肿瘤的生长也明显受到抑制.结论:B7-1转基因肿瘤细胞可能是制备良好膀胱肿瘤疫苗的细胞.
