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山东省11株肾综合征出血热病毒抗原分析及毒力测定
选择肾综合征出血热疫区抗原阳性鼠肺组织,现症病人外周静脉血及尿液,接种Vero-E6细胞,分离出11株出血热病毒.应用McAb对11株病毒进行抗原分析并测定毒力,报告如下.
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输血前血液筛查中新型 HBV 基因突变及抗原分析的研究
目的：分析研究输血前血液筛查中新型HBV基因突变及抗原特点，评价核酸检测技术（NAT）在输血前检查中的应用价值。方法：选取我血液中心采集的血液标本40421份，采血并进行ELISA、ALT、血型检测、NAT检查，ELISA采用双抗原夹心法检测抗原、抗体，NAT检查采用全自动生化检验，以病毒核酸提取试剂盒提取血清标本病毒DNA，进行PCR扩增、产物纯化，进行DNA测序、序列分析，对于ELISA （-），NAT（＋）献血者进行跟随随访，分析乙肝表面抗原变化情况。结果：ELISA筛查HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2中有1项为反应性标本占96.99%，NAT检查阳性率7.92×10-4（31/40421），10例HBV/HCV/HIV阴性，HBV DNA反应性占70.00%，21例HBV DNA反应性标本，病毒含量11~84IU/ml，平均（15.5±2.3） IU/ml；随访12个月以上，25例随访1~5个月，HBsAg抗原转为阳性1例、HBV NAT检查转为阴性3例，维持原样21例，乙肝窗口期3例、隐匿性感染12例，对血样进行乙肝“两对半”检查，其中HBsAg阳性1例、HBcAb阳性21例、HBsAb阳性13例、HBcAb单阳性6例，随访变为3、17、12、3例。结论：输血前血液筛查中新型HBV基因突变可能是致抗原阴性的重要原因，进行NAT检查有助于发现窗口期、隐匿性HBV感染。
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囊虫病免疫诊断的研究进展
囊虫的诊断除皮肌型患者可采取皮下结节检查确诊外,单纯脑型患者的诊断常根据临床症状、影像学诊断和免疫学检测的结果进行综合判断获得,当临床症状、影像学指标不典型及疾病早期时,诊断往往有一定的困难.免疫学诊断弥补了临床诊断及影像学诊断的不足,具有重要的临床价值.近年来国内外学者对囊虫病的免疫诊断进行了大量的研究工作.诊断试剂的不断更新,免疫检测手段的换代,使得该领域的研究不断推陈出新,在抗原分析与研究方面已日益扩展到了异种抗原、纯化抗原、基因重组抗原等领域;在检测技术上亦从简单的凝集试验涉及到了免疫标记、酶联免疫印渍、杂交瘤制备、DNA重组技术等领域.现将国内外有关研究近况综述如下.
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引起某禽类养殖场疫情的H3N2亚型流感病毒全基因组进化分析
目的 了解某禽类养殖场工人间的1起流感样病例暴发疫情的流行病学特点,确定疫情性质,分析流感病毒是否存在变异或基因重组,试阐述流感病毒来源.方法 采用个案调查等流行病学调查方法开展现场调查,采集所有流感样病例咽拭子标本进行核酸检测和病毒分离;对分离到的病毒进行全基因组测序,运用EditSeq和MEGA5.05软件进行序列比对和进化分析.结果 此次暴发疫情共报告流感样病例15例,罹患率为34.88％,核酸检测阳性率73.33％,分离到季节性A(H3N2)型流感病毒5株.进化分析显示分离到的H3N2流感病毒的8个基因片段均与2015-2016年流感疫苗株处于同一分支上,没有发生与禽或猪流感病毒的基因重组.5株流感病毒的血凝素(HA)有14个氨基酸位点发生了替换,其中8个位于抗原决定簇上;对神经氨酸酶基因和基质蛋白基因进行氨基酸推测分析显示,所有流感病毒均对神经氨酸酶抑制剂药物敏感,对M2离子通道抑制剂药物耐药.糖基化位点分析显示,NA新增两个糖基化位点NRT151-153、NAT245-247,其余基因未变.结论 此次暴发疫情为一起季节性A(H3N2)型流感病毒暴发,病毒发生了抗原漂移,未发现与禽流感、猪流感病毒基因重组的现象.
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青海湖周边家禽相关环境标本中 H5 N1亚型禽流感病毒特征分析
目的：了解我国青海湖周边家禽中分离到的高致病性H5 N1亚型禽流感病毒的抗原性和基因特性。方法将青海湖周边野鸟和家禽的环境标本采集处理后，接种SPF鸡胚分离病毒，将红细胞凝集阳性的标本通过real-time RT-PCR进行型别鉴定和亚型分析。将H5N1检测阳性的标本选取部分进行二代序列分析和抗原性分析。结果2013年1-9月间采集的家禽相关环境标本中共分离到19株高致病性H5 N1亚型禽流感病毒，集中在1-3月。对7株病毒进行了全基因组序列分析和抗原性分析显示，血凝素基因进化树显示其中除A／Environment／Qinghai／XN02032／2013属于clade7.2分支病毒以外，其余6株属于clade2.3.2.1c分支。神经氨酸酶基因也显示该毒株与其他6株分属于两个不同的分支；抗原分析显示该毒株与所有参考血清低反应，另外6株病毒是A／Barn swallow／Hong Kong／D10-1161／2010的类似株。结论青海湖周边地区在2013年1-3月环境相关标本中检测到高致病性H5N1亚型禽流感病毒，属于clade2.3.2.1和clade7.2分支病毒。这种高致病性H5N1亚型禽流感病毒多个分支共同流行的趋势提示加强这一地区野鸟和家禽相关环境病原体监测的重要性。
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人甲3型流感病毒基质蛋白及其诱导抗体在临床检测中的应用
目的 探讨抗重组人甲3型流感病毒基质蛋白(M1)抗体在临床检测中应用的可行性.方法 在生物信息学分析的基础上,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人甲3型流感病毒感染细胞中获得目的基因,构建pET-28c(+)/IFV.M1P2重组质粒并在BL21 DE3中诱导表达;重组蛋白经亲和层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体.采用间接免疫荧光法检测重组蛋白抗体与病毒感染细胞和临床标本的反应性,并与流感病毒凝血抑制试验结果比较分析,确定重组蛋白抗体的灵敏度和特异性.结果 间接免疫荧光法检测抗M1P2重组蛋白抗体与人甲3型、甲1型流感病毒反应的抗体滴度可达1∶1200和1∶1000,与乙型流感病毒及其他呼吸道常见病毒无特异性反应.同样方法检测262例上呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本,阳性18例(6.87%),凝血抑制试验阳性24例(9.16%).与凝血抑制试验相比,间接免疫荧光法检测敏感性为62.5%,特异性为98.7%.结论重组M1P2蛋白具有较强的免疫原性,可模拟天然病毒蛋白诱导产生较强的抗人甲3型流感病毒抗体,该抗体具有较高的反应特异性和一定的灵敏度.
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肺炎衣原体的诊断和治疗
肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae Cpn)是1989年定名的新种.首株Cpn是于1965年从台湾省一名儿童的眼部用鸡胚分离出来的;1983年又从西雅图一名患咽喉炎的大学生咽部分离出一株,分别命名为TW-183和AR-39.因其一些生物学性状类似于鹦鹉热衣原体,所以当时归于鹦鹉热衣原体种中TWAR组,后经深入研究,根据其独特的超微结构及基因和特异性抗原分析,于1989年定为衣原体属中一个新种.Cpn主要引起人的非典型性肺炎,同时还可致支气管炎、咽炎、鼻窦炎、中耳炎、虹膜炎、肝炎、心肌炎、心内膜炎、脑膜炎、结节性红斑等疾病,也是艾滋病、白血病等继发感染的重要病原菌之一.另外,流行病学和病原学研究认为,Cpn感染与心血管疾病相关,已引起各国学者的高度重视.
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1991～2000年广东省流感监测结果分析
目的了解流感流行和流感病毒毒株表面抗原性变异情况.方法用9～11 d龄鸡胚和(或)麦克丁氏犬肾(MDCK)细胞分离流感病毒,病毒鉴定用常量红细胞凝集抑制法(HI);鸡血清流感抗体检测采用微量半加敏红细胞凝集抑制法(HI).结果1991～2000年全省未发生流感大流行.期间从人群中共分离流感病毒1 008株,以A(H3N2)亚型流感病毒(62.3%)、B型流感病毒(26.6%)为主.从人群中分离出10株H9N2亚型禽流感病毒.从鸡群中分离到H9N2亚型禽流感病毒98株.A(H3N2)亚型病毒的抗原性不断发生漂移.结论除1993、1995年未分离到A(H1N1)亚型流感病毒外.其它8年均分离到A(H1N1)、A(H3N2)、B型流感病毒.1998、1999年还同时分离到H9N2亚型禽流感病毒.并证实了A(H3N2)亚型病毒表面抗原的易变性;鸡群中有多个A亚型流感病毒同时存在,必须做好流感监测.
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一起乙型流感暴发疫情调查
流感是目前人类尚不能有效控制的世界性传染病,给个人和社会带来的经济损失位于各类传染病之首[1].流感暴发疫情在特殊人群中引起的危害不容忽视.2012年11月14-27日,北京市昌平区第二中学发生一起乙型流感暴发疫情,现将结果报告如下.
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出血热病毒引导Vero-E6细胞产生CPE的观察
肾综合征出血热(HFRS)分为4个血清型,目前国内已证实存在Hantaan型(HTN)、Seoul(SEO)两个血清型.根据单克隆抗体的抗原分析认为,出血热病毒有复杂的抗原决定簇,毒株间存在明显的抗原差异.选择肾综合征出血热疫区IFAT阳性褐家鼠肺组织、HFRS病人外周静脉血及尿液,接种小白鼠乳鼠脑,分离出11株HFRS病毒.应用Vero-E6细胞建立细胞融合试验,HFRS病毒特异性地使感染细胞产生典型规律病变(CPE).
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白塞氏病相关抗原的重组表达及抗原性初步分析
目的:探讨Kinectin的抗原性,为下一步研究Kinectin在白塞氏病中的意义奠定基础.方法:从人Hep2细胞抽提RNA,利用RT-PCR扩增能覆盖Kinectin全长的3个片段,其位置分别相当于氨基酸22～510(kin-5),503～994(kin-M)和920～1 346(kin-3).将扩增的PCR片段克隆到pET42-a(+)载体中,诱导表达的融合蛋白用白塞氏病病人血清进行Western blot分析.结果:构建的3个表达Kinectin部分片段载体(pET/kin-5、pET/kin-M和pET/Kin-3)具有正确的阅读框架,DNA测序符合率为99%,能在大肠杆菌中表达相应的肽段.8份阳性血清中,用Western blot分析发现,6份血清与kin-M反应,5份血清与kin-3反应,只有一份血清与kin-5有反应.结论:成功地构建表达覆盖Kinectin全长的3个载体,并初步发现Kinectin的抗原性可能主要位于其中间段和羧基端.
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基因组学、蛋白质组学、抗原组学与疫苗的发展
疫苗免疫是机体抵御微生物和寄生虫感染的有效措施,然而还有许多病原体缺乏有效的疫苗,疫苗研究任重而道远.随着许多病原体基因组测序的完成,利用基因组学筛选疫苗抗原显示了强大的优势.同时由于近年来比较基因组学、蛋白质组学、抗原组学等的发展,病原体毒力相关蛋白、分泌性蛋白和膜表面结合蛋白基因可以被分离出来,从而可以更加准确地分析候选抗原,极大地提高了疫苗抗原分析的效率.总之,利用基因组和蛋白质组进行疫苗抗原筛选是疫苗研究的革命,将极大地推动疫苗的研究和开发.
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猪囊尾蚴病免疫诊断研究与进展
猪带绦虫病和猪囊尾蚴病呈世界性分布,在我国有29个省、市、自治区流行,其中东北、华北、中原及西北、西南地区为主要流行区[1].人体患猪囊尾蚴病是由于食入猪带绦虫卵所致,而猪带绦虫病则是因患者生食或食入未熟的猪肉中猪绦虫的幼虫囊尾蚴所致.猪囊尾蚴病对人类健康危害极大[2],该病的诊断除病原学、流行病学、影像学诊断外,免疫学检测是主要的检查方法.近年来国内外学者对猪囊尾蚴病的免疫诊断进行了大量的研究,包括抗原分析,检测物的研究,检测技术上亦从简单的凝集试验发展到免疫标记、酶联免疫印渍、单克隆抗体制备、DNA重组技术等领域.现将国内外有关免疫诊断方面的研究近况综述如下.
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广东省1991-2004年乙型流感监测结果分析
[目的] 分析1991-2004年广东省乙型流感病毒抗原变异和流行情况. [方法] 用9～11日龄鸡胚和(或)MDCK细胞分离流感病毒,病毒鉴定用常量红细胞凝集抑制法(HI);人血清流感抗体检测用微量半加敏红细胞凝集抑制法.[结果] 广东省一直有乙型流感流行,并从人群中分离到流感病毒2 916株,乙型流感病毒占23.3%.乙型流感病毒两大谱系交替为优势株,除1994、1997及2002年以Victoria系为主外,其余各年以Yamagata系为主.乙型流感病毒抗原性不断发生漂移,历年一般人群血清乙型流感抗体检测阳性率在 28.3%～73.9%.[结论] 1991-2004年广东省乙型流感病毒存在差异较大的两个谱系,病毒谱系的轮换和抗原漂移导致乙型流感不断流行.
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流感伤寒群钩端螺旋体各型参考菌株的抗原分析及待检菌株的检定
目的对流感伤寒群钩体各型参考菌株进行抗原分析比较, 及对 3株待检菌株进行检定.方法采用血清学和染色体DNA脉冲场凝胶电泳图谱分析.结果表明流感伤寒群钩体各型参考菌株之间存在不同的抗原因子和不同的DNA片段.结论此次实验证明我们选择的代表菌株是正确的;对 3株待检菌株与流感伤寒群钩体各型参考菌株进行了抗原因子分析比较,表明三株待检菌株应属临海型钩体;同时我们发现临海型钩体参考菌株经过长时间的传代可造成某些抗原因子的丢失.
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地方株肾综合征出血热病毒生物学特性研究
肾综合征出血热(HFRS)分为4个血清型,目前国内已证实存在Hantaan型(HTN),Seoul(SEO)2个血清型.根据单克隆抗体的抗原分析认为,出血热病毒有复杂的抗原决定簇,毒株间存在明显的抗原差异.我们选择肾综合征出血热疫区抗原阳性鼠肺组织,现症病人外周静脉血及尿液,分离出11株出血热病毒.用McAb对其抗原性进行分析,同时测定毒株毒力.
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白细胞分化抗原分析在白血病分型诊断中的应用
1976年,法、美、英(French-American-british,FAB)七位血液学专家,在总结前人对白血病分型的基础上,正式提出并发表以白细胞起源新理论和临床化疗效果,及光学显微镜细胞形态学(morphology,M)为基础结合细胞化学反应的FAB分型方案[1],由于其具有简便实用等优点,很快被各国广泛采用,随着以免表型为基础的免疫学(immunology,I),以细胞染色体为基础的细胞遗传学(cytogenetics,C),以及以白血病分子生物学(mole-cular biology,M)的发展和应用,形成了以形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学(MICM)联合应用的一种新的白血病分类方法[2].
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宁波市2002～2004年流行性感冒的检测与HA1序列分析
目的:为了解近年来宁波市流行性感冒的流行情况以及病毒抗原性的变异情况.方法:采用MDCK细胞培养和鸡胚培养法分离流感病毒,交叉血凝抑制法进行抗原分析,对甲3型流感病毒的HA1血凝素基因作了核苷酸序列测定.结果:2002年～2004年共分离到流感病毒330株,其中甲3型324株(98.2%)、甲1型1株(0.3%)、乙型5株(1.5%).甲3型毒株2002年与2003年及2004年的抗原比分别为1.9和2.45,核苷酸序列测定结果2002年～2004年HA1区约以5个氨基酸改变的速度变异.结论:3年来宁波市一直以甲3型流感为主要流行株,甲1型及乙型流感则以散发存在.甲3型流感病毒虽说没有发生重大变异,但其抗原性每年都有一定的漂移.
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一起由H3N2流感病毒引起的局部流感暴发的病原学研究
目的 对一起流感局部暴发的病原体进行分离并鉴定,研究其变异情况,为流感的预防和控制提供依据.方法 用MDCK细胞对病人的咽拭标本进行分离培养,并对分离到的流感病毒HAl基因核苷酸序列进行测定及抗原分析.还检测了患者的血清抗体水平.结果 在22份病人的咽拭标本中,分离到3株H3N2亚型流感病毒,患者恢复期血清抗体水平较急性期抗体水平升高4倍.将其中1株的HAl基因测序,与国际代表株进行比较,并与国际代表株进行交叉血抑试验,表明分离到的流感病毒发生抗原漂移.结论 这种变异具有流行病学意义,造成甲3亚型流感病毒在湛江地区的局部暴发.
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禽类流感病毒实验室分析
流行性感冒(流感)是第一个实行全球性监测的病毒性急性呼吸道传染病,由于流感病毒抗原的易变性,目前尚无法完全加以控制.它不仅严重危害人类的身心健康,甚至可以夺走人的生命.自1997年香港报告H5N1禽流感可感染人后,更证实禽在流感大流行株的起源作用.为此,1998～2000年广东省设立8个流感监测市对禽(鸡)进行流感监测,分离鉴定禽类流感与人流感病毒,并进行H9N2禽流感病毒的抗原分析.现将研究结果报告如下.
