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大蒜辣素对大鼠心肌梗死后纤维化的影响及与TGFβ/Smads信号通路的关系
大蒜辣素是国际公认的大蒜活性物质,具有心血管保护作用.该实验主要观察大蒜辣素对大鼠心肌梗死后纤维化的影响,并探讨其作用与TGFβ/Smads信号通路的关系.实验采用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法制备大鼠心肌梗死模型,术后24 h开始腹腔注射给药,给药21 d后处死动物,取心脏组织做Masson染色观察心肌组织纤维化情况,免疫组织化学方法观察心肌组织Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白表达情况及TGFβ1,Smad3和Smad7蛋白表达情况.结果显示模型组大鼠心肌纤维化明显,Ⅰ,Ⅲ型胶原表达量增加,大蒜辣素各剂量组均可减轻心肌纤维化程度,减少Ⅰ,Ⅲ型胶原表达,表明大蒜辣素可抑制心肌梗死后心肌纤维化的进展.同时大蒜辣素还可下调心肌TGfβ1和Smad3蛋白表达,上调Smad7蛋白表达.该研究揭示了大蒜辣素具有抗心肌梗死后纤维化作用,其机制部分与调节TGFβ/Smads信号通路有关.
关键词： 大蒜辣素 心肌纤维化 心肌梗死 TGFβ/Smads信号通路 -
竹节参总皂苷通过调节TGF-β1/Smad3通路改善衰老大鼠心肌纤维化的作用研究
研究竹节参总皂苷(saponins extracted from Panax japonicas,SPJ)对衰老大鼠心肌纤维化的改善作用及作用机制.将18月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、SPJ低剂量组、SPJ高剂量组,每组10只;衰老模型组,SPJ低、高剂量组分别灌胃给予等量的生理盐水,SPJ 10,60 mg·kg-1 ·d-1,每周6次,持续灌胃6个月至24月龄;另取10只6月龄大鼠作为青年对照组.处死动物后,采用HE染色观察各组大鼠心肌形态;Masoon染色观察各组大鼠胶原沉积的变化;RT-PCR法检测各组大鼠心脏组织中胶原相关蛋白COL1α2,COL3α1,肌成纤维细胞标记物α-SMA和基质金属蛋白酶MMP9,MMP2的mRNA表达水平;Western blot法检测各组大鼠心脏组织中TGF-β1,p-Smad3,IL-1β,TNF-α的蛋白表达.SPJ能有效改善衰老大鼠心肌纤维紊乱程度,减少炎性细胞浸润,降低衰老大鼠胶原蛋白沉积;能明显下调衰老心脏组织中COL1α2,COL3α1,α-SMA和MMP9,MMP2的mRNA表达水平;同时,能有效抑制衰老心脏中TGF-β1,p-Smad3,TNF-α,IL-1β蛋白的表达量.SPJ能有效改善衰老大鼠心肌纤维化程度,其作用机制与抑制衰老心脏中TGF-β1,p-Smad3蛋白表达,降低心肌炎症反应有关.
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血脂康对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响
心肌纤维化是导致心室顺应性和收缩功能下降而发生泵衰竭的一个重要因素,心肌纤维化主要是因为心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)的活化、增殖及其所分泌的胶原增多与沉积所致.血脂康是从特制的中药红曲中经提炼精制而成的血脂调节剂,被称为中国人的"天然他汀".现有文献证明,血脂康具有诸多调脂以外的作用,如抗氧化、减轻血管炎症、抑制血管平滑肌增殖、稳定动脉粥样斑块、改善血管内皮功能、减轻左室质量[1]等,被广泛应用于心脑血管疾病的治疗中.
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新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠心肌纤维化的影响及机制研究
目的 探讨益气健脾通络中药复方新风胶囊对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制.方法 60只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(12只)和模型组(48只),除正常对照(NC)组外,每只大鼠右足跖皮内注射弗氏完全佐剂(CFA)0.1 mL致炎,制备AA大鼠模型.致炎后第19天将AA模型大鼠组随机分为4组:新风胶囊(XFC)组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多甙片(TPT)组和模型对照(MC)组,并分组给药30天后处死,采用透射电镜观察各组大鼠心肌组织超微结构;反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)法及Western blot法测定各组大鼠心肌组织基质金属蛋白酶(MMP9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)mRNA及蛋白表达水平.结果 (1)电镜观察结果显示,AA大鼠心肌细胞间胶原纤维增生明显,呈现心肌纤维化趋势.MTX、TPT、XFC组均能有效改善心肌超微结构变化,而3组间比较,XFC组大鼠心肌细胞形态完整,细胞核清晰,细胞间仅有少量胶原纤维,明显好于其他两组.(2)与NC组比较,MC组大鼠心肌组织MMP9 mRNA及蛋白表达水平均明显上调,而TIMP1 mRNA和蛋白表达水平明显下调(P＜0.01);与MC组比较,XFC组MMP9 mRNA及蛋白表达水平均下降,TIMP1 mRNA及蛋白表达水平明显上升,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论 益气健脾通络中药复方新风胶囊可以有效抑制AA大鼠心肌纤维化,其机制可能与降低心肌组织MMP9 mRNA及蛋白表达,提高心肌组织TIMP1 mRNA及蛋白表达水平,调节MMP9/TIMP1平衡,改善心肌细胞外基质代谢有关.
关键词： 新风胶囊 佐剂性关节炎 心肌纤维化 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶组织抑制因子 -
芪参益气滴丸抑制大鼠心肌梗死后心肌纤维化及对TGF-β1/Smads通路表达的影响
目的 观察芪参益气滴丸对大鼠心肌梗死(简称心梗)后心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)的影响,并基于TGF-β1/Smads通路表达探讨其作用机制.方法 结扎雄性Wistar大鼠左冠状动脉前降支制作心梗模型,模型成功后随机分为模型组,芪参益气滴丸常规剂量组(QSYQ-N),芪参益气滴丸高剂量组(QSYQ-H),卡托普利组,另设假手术组,每组10只.干预4周后对大鼠心脏行HE和Masson染色,并计算心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF).采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测心脏组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2、Smad7 mRNA和蛋白表达情况.结果 HE染色显示模型组室壁可见大面积结缔组织形成,室壁明显变薄,心肌细胞明显水肿及大量炎细胞浸润.各治疗组可见室壁结缔组织面积减少,细胞水肿及炎细胞减轻.Masson 染色显示造模后各组大鼠出现心肌纤维化.与模型组比较,各治疗组CVF均明显降低(P＜0.01).与假手术组比较,模型组TGF-β1、Smad2 mRNA及蛋白表达均明显增加,Smad7明显下降(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,QSYQ-H、卡托普利组TGF-β1、Smad2 mRNA及蛋白表达下调,Smad7表达上调(P ＜0.05,P＜0.01).结论 芪参益气滴丸可以抑制大鼠心梗后心肌纤维化,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smads通路相关因子的基因与蛋白表达有关.
关键词： 芪参益气滴丸 心肌纤维化 TGF-β1/Smads通路 大鼠 -
四逆汤对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化Smad2和Smad7的影响
目的 观察四逆汤对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化Smad2和Smad7的影响.方法 Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和四逆汤组.模型组及四逆汤组给予注射异丙肾上腺素,对照组注射生理盐水.四逆汤组给予四逆汤灌胃,对照组和模型组均给予生理盐水灌胃.4周后,各组行Masson染色和电镜分析;通过免疫组化方法检测心肌Smad 2和Smad 7蛋白在心肌的表达;RT-PCR法检测Smad 2和Smad 7mRNA表达.结果 masson染色示模型组心肌胶原纤维IOD值为9303,而四逆汤组为2459,对照组为4224,提示模型组心肌纤维化较四逆汤和对照组明显;模型组心肌Smad 2蛋白IOD值为20275,mRNAI OD值为0.919;而四逆汤组Smad 2蛋白IOD值为9949,mRNAI OD值为0.561,提示模型组Smad 2表达明显高于四逆汤组(P＜0.05);模型组心肌Smad 7蛋白IOD值为25667,mRNAI OD值为0.222,而四逆汤组Smad 2蛋白IOD值为93147,mRNAI OD值为0.412,提示模型组Smad 7表达明显低于四逆汤组(P＜0.05).结论 四逆汤可以有效抑制异丙肾上腺素所致的大鼠心肌纤维化,其机制可能与下调Smad 2表达和上调Smad 7表达有关.
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大蒜素通过部分阻抑TGF-β1介导的Smads信号改善压力超负荷大鼠心肌反应性纤维化
目的 研究大蒜素是否通过TGFβ-Smads信号通路改善压力超负荷大鼠心肌纤维化.方法 40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、大蒜素组和川芎嗪组,每组10只.以腹主动脉缩窄方法制备压力超负荷心肌肥厚大鼠模型.造模后3天,大蒜素组和川芎嗪组分别给予大蒜素注射液5.0 mg/kg、盐酸川芎嗪注射液20 mg/kg腹腔注射,假手术组和模型组给予生理盐水腹腔注射.给药4周后,天狼猩红染色观察心肌胶原变化,计算心肌胶原容积分数(myocardial collagen volume fraction,CVF)和血管周围胶原面积(perivascular collagen area,PVCA);ELISA法检测血清转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平；免疫组化法观察心肌组织TGF-β1蛋白表达；实时荧光定量PCR检测心肌Smad2和Smad7 mRNA表达量的变化；荧光素酶报告基因检测进一步验证大蒜素对TGF-β信号传导系统的影响.结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌CVF、PVCA、血清TGF-β1水平及心肌组织TGF-β1蛋白表达均明显增加(P＜0.05,P＜0.01)；与模型组比较,大蒜素组和川芎嗪组PVCA、血清TGF-β1水平及心肌组织TGF-β1蛋白表达均明显减少(P＜0.05,P＜0.01).模型组Smad2mRNA表达上调而Smad7 mRNA表达下调,大蒜素组和川芎嗪组Smad2 mRNA表达明显下调(P＜0.05),川芎嗪组Smad7 mRNA表达明显上调(P＞0.05).在2 ng/mLTGF-β1干预下,1-2μg/mL大蒜素可以明显抑制相应TGF-β1的荧光素酶活性(P＜0.05).结论 大蒜素通过部分阻抑TGFβ1介导的Smad信号减轻压力超负荷大鼠的心肌反应性纤维化.
关键词： 大蒜素 压力超负荷 心肌纤维化 TGFβ-Smads信号通路 -
中西医结合防治心肌纤维化的研究进展
心肌纤维化是冠心病、心肌梗死、高血压、心肌病等多种常见心脏疾病向终末期心脏病发展的一个必然过程,阻止或逆转纤维化是延缓心力衰竭、减少心律失常发生的重要手段.中医学可将心肌间质纤维化归属于"心痹"范畴.文章就心肌纤维化的发生、调控、中西医结合辨治、单味中药及成分的研究作一综述.
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麝香保心丸减轻自发性高血压大鼠心肌纤维化的研究
目的探讨麝香保心丸对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的作用及其可能的机制.方法将12周龄SHR大鼠分为麝香保心丸治疗组、苯那普利阳性药物对照组及高血压模型对照组,研究麝香保心丸对治疗12周后的SHR大鼠收缩压(SBP)、左室重量(LVM)、左室重量指数(LVMI)、左室心肌胶原含量及细胞外基质纤连蛋白(fibronectin, FN)、层粘连蛋白(laminin, LN)、心脏成纤维细胞(cardiac fibroblast, cFb)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.结果麝香保心丸对SHR无明显降压作用,但与苯那普利一样可降低LVM、LVMI、心肌胶原含量(P＜0.05).麝香保心丸可明显降低心肌LN、FN含量、心脏成纤维细胞数目和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达(P＜0.05).结论麝香保心丸具有独立降压以外的防治SHR心肌纤维化作用,其机制可能与减少心肌TGF-β1表达和心脏成纤维细胞数目,减少心肌胶原合成及细胞外基质沉积等因素有关.
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黄芪甲甙对慢性心肌炎心肌纤维化的影响
目的 探讨中药黄芪的活性成分黄芪甲甙对慢性心肌炎心肌纤维化的影响及其相关机制.方法 80只Balb/c小鼠随机分为3组,分别为空白对照组(对照组,20只)、慢性心肌炎组(模型组,30只)和黄芪甲甙干预心肌炎组(干预组,30只).模型组和干预组小鼠每月1次腹腔接种柯萨奇病毒B3(CVB3),对照组腹腔注射等量病毒培养液.对照组和模型组小鼠每日以饮用水喂养,干预组小鼠以加有羧甲基纤维素钠助溶的黄芪甲甙饮用水(浓度300 mg/L)喂养.3个月后处死所有存活小鼠,小鼠心脏组织经苦味酸天狼星红染色后以自动图像分析系统计算胶原容积积分(CVF),以Western blot方法检测各组小鼠心脏组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)及其组织抑制物(TIMP-1)、MMP-13和MMP-14的表达情况.结果 黄芪甲甙干预后,与模型组比较,小鼠死亡率降低(53.3%、23.3%,χ2=4.23,P＜0.05)、心脏CVF明显下降[模型组为(17.4±1.2)%、干预组为(8.6±0.9)%,χ2=5.38,P＜0.05];与对照组比较,TGF-β1、MMP-1和TIMP-1表达减少而MMP-13和MMP-14的表达增多.结论 黄芪甲甙可以降低慢性心肌炎小鼠死亡率、减轻其心肌纤维化,其抗纤维化作用是通过抑制TGF-β1、促进MMP-13和MMP-14在心脏中的表达而实现.
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真武汤对心力衰竭模型大鼠心室重构及心肌细胞凋亡、纤维化的影响
目的 探讨真武汤治疗心力衰竭的可能作用机制.方法 将50只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及真武汤低、中、高剂量组,每组10只.除假手术组外其余各组采用结扎腹主动脉方法建立心力衰竭模型.真武汤低、中、高剂量组分别给予真武汤6、12、18 g/(kg·d)灌胃,假手术组、模型组分别给予蒸馏水3 ml灌胃,每天1次,连续给药28天.给药后各组大鼠行高频超声心动图检查,测定左心室舒张末期内径(LVIDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短指数(FS).TUNEL法检测并计算各组大鼠心肌细胞凋亡指数;ELISA法检测各组大鼠心肌组织Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)表达;Real-time PCR检测各组大鼠心肌组织骨膜蛋白、转化生长因子β1(TGF-β1)、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)mRNA表达;Western blot法检测各组大鼠心肌组织骨膜蛋白、TGF-β1、GRP78、CHOP蛋白表达. 结果 与模型组比较,真武汤高、中、低剂量组心脏超声各项指标、心肌纤维化程度均明显改善,心肌凋亡细胞显著减少,Col Ⅰ、ColⅢ表达,骨膜蛋白、TGF-β1、GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达均明显降低,且真武汤高剂量组改善为明显(P＜0.05).结论 真武汤可改善心力衰竭大鼠心室重构,减少心肌细胞凋亡和心肌纤维化,可能是其治疗心力衰竭的机制之一.
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芪丹利心丸对心肌梗死大鼠左心室心肌组织miR-133a/TGF-β1/CTGF信号通路的影响
目的 探讨芪丹利心丸防治心肌梗死后心肌纤维化的可能作用机制. 方法 采用左冠状动脉结扎术建立心肌梗死大鼠模型,随机分为模型组、卡托普利组和芪丹利心丸组,另设假手术组只穿线不结扎,每组10只.术后第2天,芪丹利心丸组给予芪丹利心丸2.43 g/(kg·d)灌胃,卡托普利组给予卡托普利片2.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予去离子水10 ml/(kg·d)灌胃.4周后检测各组心脏血流动力学指标[包括心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压大上升速率(+ dp/dt max)、左心室内压大下降速率(-dp/dt max)],称取左心室重量(LVM)并计算左心室质量指数(LVMI),HE染色进行病理学观察,Masson染色计算胶原容积分数(CVF),检测左心室心肌组织miR-133a、转化生长因子β1 (TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF) mRNA及TGF-β1、CTGF蛋白表达情况.结果 与假手术组比较,模型组LVSP、+dp/dt max,-dp/dt max下降,LVEDP升高,LVMI、CVF增大,miR-133a下调,TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达增多(P＜0.01).与模型组比较,芪丹利心丸组LVSP、+ dp/dt max,-dp/dt max上升,LVEDP降低,LVMI、CVF减小,miR-133a上调,TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达减少(P＜0.05或P＜0.01).HE染色显示,模型组见梗死边缘区残存的心肌纤维混乱、部分断裂,肌间隙增宽明显,而卡托普利组和芪丹利心丸组心肌梗死边缘区心肌纤维走形相对规整,多数胞膜基本完整.结论 芪丹利心丸可防治心肌梗死大鼠心肌纤维化,其机制可能与miR-133 a/TGF-β1/CTGF信号通路有关.
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扶正化瘀胶囊对心肌梗死后心肌纤维化大鼠细胞外基质代谢的影响
目的 探讨扶正化瘀胶囊治疗心肌梗死后心肌纤维化的可能作用机制.方法 24只大鼠随机分为模型组、扶正化瘀组、卡托普利组、假手术组,每组6只.除假手术组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎术制备大鼠心肌梗死模型.造模后扶正化瘀组给予扶正化瘀胶囊0.4g/(kg.d)灌胃,卡托普利组给予卡托普利2.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组均给予等体积的去离子水灌胃,各组均每日1次,连续8周.采用天狼星红染色检测心肌胶原分数(CVF),免疫组化、实时荧光定量PCR法分别检测I型胶原、基质金属蛋白酶2 (MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂2 (TIMP-2)蛋白及mRNA表达. 结果 与假手术组比较,模型组大鼠CVF、MMP-2/TIMP-2及I型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白及mRNA表达均升高(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,扶正化瘀胶囊组、卡托普利组CVF、MMP-2/TIMP-2及I型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白及mRNA表达降低(P＜0.05或P＜0.01).与卡托普利组比较,扶正化瘀组CVF、TIMP-1蛋白表达升高,TIMP-1 mRNA表达降低(P＜0.05或P＜0.01). 结论 扶正化瘀胶囊能改善大鼠心肌梗死后心肌纤维化,其机制可能与调控MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2蛋白和mRNA表达及MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1有关.
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新血府逐瘀软胶囊对高血压病患者心肌纤维化相关因子的影响
目的:观察新血府逐瘀软胶囊对高血压病患者心肌纤维化的影响.方法:将60例高血压病合并心肌纤维化患者随机分为西药组和中药组各30例,西药组给予血管紧张素转化酶抑制剂类降压药治疗,中药组在西药组基础上加用新血府逐瘀软胶囊,两组共治疗12周,分别于治疗前后测定血氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、一氧化氮(NO)、Ⅰ型前胶原羧基端肽(P ICP)、Ⅱ型胶原(PC Ⅱ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)浓度及血浆内皮素(ET)水平.结果:两组患者治疗后ox-LDL、ET,P ⅠCP、PC Ⅱ及TGF-β1水平下降,NO水平明显升高,与治疗前比较差异均有统计学意义(P＜0.01);治疗后中药组ox-LDL、ET、P Ⅰ CP、PCⅡ、TGF-β1及NO水平与西药组比较亦均有统计学意义(P＜0.01).结论:新血府逐瘀软胶囊能调整血脂、改善内皮功能,降低心肌胶原含量,有效抑制血管平滑肌细胞增殖以逆转心肌纤维化.
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以心肌纤维化为病理基础的高血压病伴左心室肥厚与扩张型心肌病证候学研究
目的 探讨以心肌纤维化为病理基础的心系疾病——高血压病伴左心室肥厚和扩张型心肌病的证候类型及证候要素分布规律,为中医药防治心肌纤维化提供证候学依据.方法 检索中国学术期刊全文数据库(CNKI) 1985年1月至2014年12月的全部期刊,对符合标准的11篇高血压病伴左心室肥厚文献和8篇扩张型心肌病文献进行证候要素和证候类型的统计分析.结果 905例高血压病伴左心室肥厚患者涉及证候类型11种,阳亢、痰、火是主要的实性证候要素,阴虚、阳虚是主要的虚性证候要素;常见的证候类型为阴虚阳亢(31.16％)、阴阳两虚(19.01％)、肝火炽盛(18.90％).783例扩张型心肌病患者涉及证候类型19种,血瘀、水停是主要的实性证候要素,阳虚、气虚是主要的虚性证候要素;常见的证候类型为阳虚水泛(15.84％)、气阴两虚(11.37％)、气虚血瘀(10.98％). 结论 高血压病伴左心室肥厚以实证和虚实夹杂证为主,扩张型心肌病以虚证和虚实夹杂证为主;痰是二者共同的实性证候要素,阳虚、气虚、阴虚是二者共同的虚性证候要素.
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原发性高血压患者细胞外间质水平及其临床意义
检测血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层粘连蛋白(LN)和透明质酸(HA)的水平与研究其对高血压心肌纤维化患者的临床价值.高血压左心室肥大组35例、高血压不伴左心室肥大组30例及对照组40名,用超声心动图测定左心室重量指数(LVMI),用酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定血清PCⅢ、LN和HA.高血压左心室肥大组较高血压不伴左心室肥大组和对照组的血清PCⅢ、LN和HA含量明显增高(P＜0.01).结论是血清PCⅢ、LN和HA可以作为高血压左心室肥大患者心肌纤维化的观察指标.
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miR-30a在心肌梗死大鼠心肌纤维化中的作用机制及对心功能的影响
目的：探讨miR-30a在大鼠心肌梗死后对心肌纤维化的作用机制及对心功能的影响。方法构建携带大鼠miR-30a基因的载体，在HEK293细胞中包装病毒载体rAAV9-miR-30a及阴性对照rAAV9-miR-30a-NC，提取纯化后通过冠脉注射方法分别传导PBS缓冲液、rAAV9-miR-30-NC和rAAV9-miR-30a至大鼠心脏，再建立大鼠心肌梗死模型，分别设为PBS组、miR-30-NC组和miR-30a组，同时设立假手术组（sham组）。用心脏彩色多普勒超声检测心功能指标，包括短轴缩短率（FS）及左室射血分数（LVEF）；Masson染色观察心肌胶原容积分数（CVF）；免疫组化法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达；实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测心肌miR-30a及TGF-β1和CTGF mRNA表达；蛋白印迹法（Western blot）检测TGF-β1及CTGF蛋白的表达。结果 miR-30a组心功能较PBS组及miR-30-NC组显著改善（P＜0.05）。 miR-30a组的心肌CVF及Ⅰ、Ⅲ胶原表达水平、Ⅰ／Ⅲ型胶原比值较PBS组及miR-30-NC组显著降低（P＜0.01）；miR-30a组心肌TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平与PBS组及miR-30-NC组比较显著下降（P＜0.001）；CTGF mRNA及蛋白表达水平较PBS组及miR-30-NC组显著降低（P＜0.001）。结论 miR-30a过表达能下调心肌梗死后心肌TGF-β1、CTGF mRNA及蛋白水平，从而减少心肌胶原产生，抑制心肌纤维化，进而改善心功能。
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尾加压素Ⅱ促进大鼠心肌胶原蛋白表达及乳鼠心肌成纤维细胞的增殖
目的 探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠心肌纤维化的影响.方法 腹主动脉缩窄术建立慢性压力超负荷大鼠心力衰竭模型,大鼠分为假手术组、造模4、8和12周组.利用Western blot分析心肌组织中UⅡ、G蛋白偶联受体(GPR14)、胶原Ⅰ(col-Ⅰ)、Ⅲ(col-Ⅲ)及蛋白激酶A(PKA)的表达.体外培养乳鼠成纤维细胞,分为对照组、UⅡ处理组、UⅡ+KT5720处理组及UⅡ+SB-611812组.镜下观察及CKK-8法检测细胞增殖.结果 模型组大鼠心肌组织中UⅡ、GPR14、eol-Ⅰ、col-Ⅲ蛋白及PKA的表达显著增加,且呈时间依赖性.UⅡ促进乳鼠成纤维细胞(CFs)的增殖(P＜0.05),而KT5720、SB-61 1812可抑制UⅡ对乳鼠成纤维细胞的促增殖作用.结论 UⅡ及其受体系统促进大鼠心肌纤维化的发生发展.
关键词： 尾加压素Ⅱ(UⅡ) 心肌纤维化 信号传导 蛋白激酶A(PKA) -
法舒地尔抑制氧化应激反应减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化
目的 探讨RhoA/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用.方法 高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型.实验分为对照(NC)组,糖尿病(DM)组和法舒地尔干预(DF)组(每天腹腔注射10 mg/kg,分两次注射).24周末,应用HE染色观察大鼠心脏组织形态;电子显微镜观察心肌的超微结构;Masson染色观察心肌胶原沉积情况;羟脯氨酸(HYP)检测心肌胶原含量;测定超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;免疫组化法检测一氧化氮合酶(eNOS)表达;Western blot法检测心肌中磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(MYPT1)表达,代表ROCK活性.结果 糖尿病组大鼠较对照组大鼠心肌组织ROCK活性明显增强(P＜0.01),MDA含量增高(P＜0.01),SOD活力降低(P＜0.01),eNOS表达明显下调(P＜0.01),心肌胶原明显增多(P＜0.01).法舒地尔干预组大鼠较糖尿病组心肌组织ROCK活性显著降低(P＜0.01),MDA含量降低(P＜0.05),SOD活力增加(P＜0.01),eNOS表达上调(P＜0.05),心肌胶原明显减少(P＜0.01).结论 ROCK抑制剂法舒地尔抑制心肌组织氧化应激反应并上调eNOS表达,有效地减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化.
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SHR心脏肥厚对心肌胶原及血管紧张素Ⅱ含量的变化
采用病理学及放射免疫方法检测16、24和32周龄自发性高血压大鼠(SHR)心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)、心脏肥厚指标及血浆和组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,并以同龄Wister大鼠作对照,以探讨SHR心脏肥厚进展阶段心肌纤维化、心脏重构、血浆和组织血管紧张素Ⅱ浓度及其相互关系.结果显示各组SHR收缩压明显增高、心脏肥厚指标心脏重量(HW)、左室重量(LVW)、左室重量指数(LVW/BW)显著增加,血浆、心肌组织AngⅡ浓度明显增高;24、32周龄SHR的CVF和PVCA显著增加;SHR心肌组织AngⅡ浓度与CVF呈显著正相关.结果表明心肌纤维化可能参与SHR代偿性心脏肥厚阶段心脏重构病理过程,组织AngⅡ可能是导致SHR代偿性心脏肥厚阶段心肌纤维化的重要机制之一.
