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蜂毒素抑制博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的机制研究
目的:观察蜂毒素对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的干预作用.方法:70只SPF级C57BL/6小鼠被随机分为正常组10只和模型组、地塞米松组、蜂毒素低剂量组、蜂毒素中剂量组、蜂毒素高剂量组各12只.除正常组外,均采用气管穿刺注入博莱霉素(BLM)制备肺纤维化小鼠模型.从术后第1天开始,地塞米松组按3 mg/kg的剂量腹腔注射,蜂毒素低、中、高剂量组分别给予5μg/(kg·d)、10μg/(kg·d)、20μg/(kg·d),对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续2周.分别于第7、第14天处死动物,收集小鼠外周血样本,通过ELISA方法检测血清转化生长因子(TGF-β1)、胶原蛋白I(CollagenI)、胶原蛋白III(CollagenIII)、基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的水平.取肺组织进行苏木精-伊红(HE)分析,Masson染色和羟脯氨酸(HYP)评估以观察组织病理学变化和胶原沉积.采用实时荧光定量(Real-ime PCR)法和蛋白兔疫印迹法(Western blot)观察各组大鼠肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3等蛋白和基因的表达变化.结果:与对照组比较,模型组大鼠肺纤维化明显,HYP、TGF-β1、CollagenI、CollagenI的含量升高(P<0.05),肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白和基因表达升高(P<0.05);与模型组比较,蜂毒素中高剂量组血清HYP、TGF-β1、CollagenI、CollagenI的含量下降(P<0.05),肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白和基因表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:蜂毒素可以减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的程度,其机制可能与抑制TGF-β1/Smads通路有关.
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基于TGF-β1/Smads和ERK通路cross-talk研究新风胶囊改善佐剂性关节炎大鼠肺功能的机制
目的:基于TGF-β1/Smads和ERK通路cross-talk研究新风胶囊改善佐剂性关节炎(AA)大鼠肺功能的作用机制.方法:采用弗氏完全佐剂复制AA大鼠模型,致炎后第19天开始给药,将大鼠随机均分为正常对照组、模型对照组、甲氨喋呤组、雷公藤多苷片组和新风胶囊组,给药30d后,观察各组大鼠足趾肿胀度(E)、关节炎指数(AI)、肺功能、肺炎系数、肺组织病理形态学、细胞因子[转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)]及肺组织TGF-β 1/Smads和ERK通路各基因与蛋白的变化.结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠E,AI,肺系数,Szapiel积分,血清TGF-β1、CTGF,肺组织TGF-β1、TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达升高(P＜0.01,P＜0.05),Smad7、FGF表达降低(P＜0.01,P＜0.05);与模型对照组比较,各治疗组大鼠E、AI降低(P＜0.01,P＜0.05),新风胶囊组FEV1、FEF50、FEF75、MMF、PEF、肺系数、Szapiel积分、血清TGF-β1、CTGF、肺组织TGF-β1、TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad2/3、p-Smad2/3、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Smad7蛋白表达、FGF升高(P＜0.01,P＜0.05);与甲氨蝶呤组比较,新风胶囊组FEF50、FEF75、MMF、Smad7蛋白表达明显升高(P＜0.05),CTGF、肺组织TGF-β1、TβR Ⅰ、Smad2/3、p-ERK1/2表达量降低(P＜0.05);与雷公藤多苷片组比较,新风胶囊组肺功能参数FEF75、MMF明显升高(P＜0.05);血清TGF-β 1、肺组织p-Smad2/3、ERK1/2降低(P＜0.05).Spearman分析显示,AA大鼠肺组织TGF-β1/Smads和ERK通路之间存在相关性且肺功能参数与这两个通路也存在相关性.结论:新风胶囊能通过调节TGF-β1/Smads和ERK通路cross-talk,从而改善关节症状和肺功能.
关键词： 佐剂性关节炎 TGF-β1/Smads通路 ERK通路 肺功能 新风胶囊 -
芪参益气滴丸抑制大鼠心肌梗死后心肌纤维化及对TGF-β1/Smads通路表达的影响
目的 观察芪参益气滴丸对大鼠心肌梗死(简称心梗)后心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)的影响,并基于TGF-β1/Smads通路表达探讨其作用机制.方法 结扎雄性Wistar大鼠左冠状动脉前降支制作心梗模型,模型成功后随机分为模型组,芪参益气滴丸常规剂量组(QSYQ-N),芪参益气滴丸高剂量组(QSYQ-H),卡托普利组,另设假手术组,每组10只.干预4周后对大鼠心脏行HE和Masson染色,并计算心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF).采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测心脏组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2、Smad7 mRNA和蛋白表达情况.结果 HE染色显示模型组室壁可见大面积结缔组织形成,室壁明显变薄,心肌细胞明显水肿及大量炎细胞浸润.各治疗组可见室壁结缔组织面积减少,细胞水肿及炎细胞减轻.Masson 染色显示造模后各组大鼠出现心肌纤维化.与模型组比较,各治疗组CVF均明显降低(P＜0.01).与假手术组比较,模型组TGF-β1、Smad2 mRNA及蛋白表达均明显增加,Smad7明显下降(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,QSYQ-H、卡托普利组TGF-β1、Smad2 mRNA及蛋白表达下调,Smad7表达上调(P ＜0.05,P＜0.01).结论 芪参益气滴丸可以抑制大鼠心梗后心肌纤维化,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smads通路相关因子的基因与蛋白表达有关.
关键词： 芪参益气滴丸 心肌纤维化 TGF-β1/Smads通路 大鼠 -
莪术二酮对增生性瘢痕成纤维细胞的作用及机制探讨
目的 探讨莪术二酮调节增生性瘢痕成纤维细胞增殖、转化、胶原分泌的作用及机制.方法 采用人源增生性瘢痕成纤维(HSF)细胞进行培养,加入不同浓度的莪术二酮进行干预.MTT法检测细胞增殖抑制率,ELISA法检测细胞上清中Ⅰ型胶原蛋白(COL-I)、Ⅲ型胶原蛋白(COL-Ⅲ)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及基质金属蛋白酶1(MMP-1)水平,免疫组化法分析细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,Western blotting法检测细胞内PI3K/Akt/mTOR通路及转化生长因子β1 (TGF-β1) /Smads通路相关分子表达情况.结果 莪术二酮可有效抑制HSF细胞增殖;与对照组比较,不同浓度莪术二酮可明显减少细胞TIMP-1、COL-I及COL-Ⅲ的分泌(P＜0.05、0.01),促进MMP-1合成(P＜0.05、0.01),同时莪术二酮能明显抑制PI3K、Akt、mTOR、Smad3的磷酸化及TGF-β1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达(P＜0.05、0.01),且呈浓度依赖性.结论 莪术二酮可通过下调PI3K/Akt/mTOR及TGF-β 1/Smads信号传导通路,同时抑制HSF细胞增殖、转化,减少胶原分泌,促进胶原酶解,继而有效改善增生性瘢痕的发生与发展.
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新风胶囊对佐剂关节炎大鼠肺功能及Treg、Foxp3、TGF-β1/Smads的作用
目的:观察新风胶囊(XFC)对佐剂关节炎(AA)大鼠肺功能、调节T细胞(Treg)及肺组织Foxp3、TGF-β1、Smad3、Smad7的影响.方法:采用弗氏完全佐剂复制AA大鼠模型,致炎后第19天开始给药,将大鼠随机均分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷片(TPT)组和XFC组,给药30 d后,观察各组大鼠足趾肿胀度(E)、关节炎指数(AI)、肺功能、Treg、肺组织病理形态学及肺组织Foxp3、TGF-β1、Smad3、Smad7变化.结果:与NC组相比,MC组大鼠E、AI、肺泡炎积分、TGF-β1及Smad3蛋白表达明显升高(P＜0.05或P＜0.01)；25％肺活量的大呼气流量(FEF25)、50％肺活量的大呼气流量(FEF50)、75％肺活量的大呼气流量(FEF75)、大呼气中期流量(MMF)、用力大呼气流量(PEF)、CD4+ CD25+ Treg及Foxp3、Smad7蛋白表达显著降低(P ＜0.05或P＜0.01).与MC组相比,XFC组大鼠E、AI、TGF-β1及Smad3表达降低,FEF50、FEF75、MMF、PEF、Treg及Foxp3、Smad7表达升高(P＜0.05或P＜0.01).与XFC组相比,MTX组、TPT组大鼠体质量、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、Treg降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:AA大鼠存在关节炎症症状和肺功能降低,XFC能明显抑制AA大鼠足跖肿胀度,降低关节炎症反应,改善肺功能,机制可能是通过上调Foxp3、Treg,下调TGF-β1表达,调节TGF-β1/Smads信号通路传导,改善关节症状和肺功能.
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发酵虫草菌粉对DEN致大鼠肝损伤的保护作用及TGF-β1/Smads通路的影响
目的:探讨发酵虫草菌粉(fermented cordyceps sinensis powder,CS)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝损伤的保护作用及对TGF-β1/Smads通路的影响.方法:无特定病原体(SPF级)健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠48只,体质量(180±20)g,随机分为4组:对照组、模型组、CS治疗组与CS溶媒组,每组12只.模型组:灌胃给予10 mg/kg DEN每周5次共8周,构建慢性肝损伤模型;对照组:灌胃给予与模型组相同体积的生理盐水;CS治疗组:在建模4周后灌胃给予80 mg/kg CS每周5次共8周;CS溶媒组:灌胃给予与CS组相同体积的5％甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液.实验结束后,麻醉,脊椎脱臼法处死大鼠,收集血液,紫外分光光度法检测各组大鼠血清中AST、ALT以反映肝功能;H&E染色观察肝组织形态变化,Masson染色观察胶原沉积情况;改良Nycodenz法分离各组大鼠原代肝星状细胞(HSC),RT-qPCR检测肝组织与HSC中 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)-β1、Smad3、Smad7 mRNA的表达水平;Western blot检测肝组织Smad3与Smad7蛋白表达水平.结果:与对照组相比,模型组大鼠血清中AST、ALT含量显著升高,H&E染色结果显示肝脏组织形态显著改变,Masson染色结果显示胶原沉积增多;与模型组相比,CS治疗四周能显著降低肝损伤大鼠血清中升高的AST、ALT水平,改善其肝脏病理损伤程度,减少肝脏中胶原沉积.RT-qPCR结果显示,CS可减少肝损伤大鼠组织及HSC中α-SMA、TGF-β1 mRNA表达水平,增加Smad7 mRNA表达水平;CS溶媒组各项检测指标均与模型组无差异;此外,Western blot结果显示,CS可下调肝损伤大鼠肝组织Smad3蛋白的表达,上调Smad7.结论:CS可显著改善DEN诱导的大鼠肝损伤,该作用可能与CS上调Smad7,并抑制TGF-β1/Smads通路有关.
关键词： 发酵虫草菌粉 慢性肝损伤 TGF-β1/Smads通路 肝星状细胞 -
心钠素对大鼠肝星状细胞活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的影响
目的 探讨心钠素(ANP)对大鼠肝星状细胞(HSC T6)活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 待HSC T6细胞贴壁后,在细胞培养瓶中加入ANP 10μmol/L培养1h,采用免疫荧光法、利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Smad4和pSmad2/3蛋白细胞内转位.将HSC T6细胞分成空白未活化组、空白活化组、ANP1 μmoL/L组、ANP 10 μmol/L组,继续培养1h,分别提取细胞质蛋白及核蛋白,以Western blotting法检测Smad4蛋白表达水平变化.ANP作用24 h,收集细胞培养液,以ELISA法检测Ⅰ型胶原、MMP-13分泌量.结果 空白未活化组、ANP 10 μmol/L组Smad4、pSmad2/3在胞质内表达,空白活化组在核内表达；ANP1、10 μmol/L组细胞质内Smad4蛋白表达量较空白活化组增多(P均＜0.05),并随ANP浓度的增大表达增强(P＜0.05),而细胞核内Smad4蛋白表达量变化趋势与细胞质蛋白相反(P均＜0.05).ANP作用HSC T6 24 h后,细胞上清液中Ⅰ型胶原的分泌量较空白对照组减少(P＜0.05),MMP-13分泌量无明显变化.结论 ANP可在一定程度上阻断大鼠HSC T6细胞活化过程中TGF-β1/Smads信号通路的传导,减少了Ⅰ型胶原的分泌量,起到了抗肝纤维化的作用.
关键词： 心钠素 星状细胞 肝 TGF-β1/Smads通路 大鼠 -
高盐饮食诱导Wistar大鼠颈动脉重塑的机制及替米沙坦的干预
目的 探讨高盐饮食对Wistar大鼠颈动脉重塑的影响及替米沙坦的干预作用.方法 Wistar大鼠60只随机分为对照组(0.5％ NaCl颗粒饲料)、高盐组(8％ NaCl颗粒饲料)和干预组(8％ NaCl颗粒饲料+替米沙坦).实验结束后,根据尾动脉血压将高盐组分为高盐高血压组和高盐血压正常组.采用HE染色、Masson染色及免疫组织化学染色检测颈动脉中膜形态结构变化及颈动脉中膜α-平滑肌肌动蛋白(α-actin)、增殖细胞核抗原(PC-NA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1)、血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2)、转化生长因子β1(TGF-β1)、p-Smad2/3、Smad7的表达水平.放射免疫法测定颈动脉醛固酮(ALD)含量.结果 高盐高血压组和高盐血压正常组颈动脉中膜厚度(MT)、颈动脉中膜厚度与腔径比(MT/LD)、颈动脉中膜平滑肌细胞增殖指数(PI)、胶原纤维面积百分比、TGF-β1和p-Smad2/3表达均增高(P＜0.05),干预组上述指标均降低(P＜0.05),Smad7在高盐高血压组、高盐血压正常组颈动脉表达减少,在干预组颈动脉表达增加(P＜0.05).高盐高血压组、高盐血压正常组和干预组颈动脉中膜AngⅡ表达均较对照组增多(P＜0.05),此三组之间无明显差异(P＞0.05).高盐高血压组和高盐血压正常组颈动脉中膜AT1表达较对照组增多,干预组颈动脉中膜AT1表达减少(P＜0.05),高盐高血压组与高盐血压正常组相比无明显差异(P＞0.05).干预组颈动脉中膜AT2表达较对照组、高盐高血压组、高盐血压正常组增多(P＜0.05),对照组、高盐高血压组和高盐血压正常组之间无明显差异(P＞0.05).高盐高血压组颈动脉中膜醛固酮含量高于对照组、高盐血压正常组和干预组(P ＜0.05或P＜0.01).结论 8％ NaCl盐饮食可诱导Wistar大鼠颈动脉重塑,其机制可能与局部RAS和TGF-β1/Smads通路中多个组分的表达异常有关,替米沙坦能抑制高盐诱导的颈动脉重构.
关键词： 高血压 颈动脉重塑 替米沙坦 TGF-β1/Smads通路 -
加味茵陈四逆汤对肝纤维化小鼠TGF-β1/Smads通路的影响
目的:探讨加味茵陈四逆汤预防肝纤维化过程中对TGF-β1/Smads通路的影响.方法:将48只雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(0.1 g/kg)阳性对照组及加味茵陈四逆汤高(41.6 g/kg)、中(20.8 g/kg)、低(10.4g/kg)剂量组,每组8只.除正常对照组外,其余各组采用腹腔注射30％ CCl4复制肝纤维化模型,造模同时给予相应药物,正常对照组与模型组给予等体积蒸馏水.给药14 d后,比较小鼠体质量和肝脏组织病理学改变;试剂盒检测血清ALT、AST水平;采用RT-qPCR检测肝组织TGF-β1、TβR Ⅰ、Smad3 mRNA表达.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低,血清ALT、AST水平显著升高,肝组织呈明显的纤维化改变,肝组织TGF-β1、TβR Ⅰ、Smad3 mRNA表达显著升高.加味茵陈四逆汤能不同程度提高模型小鼠体质量,降低血清ALT、AST水平,改善肝组织病理学改变,并降低肝组织TβR Ⅰ、Smad3 mRNA表达.结论:加味茵陈四逆汤能预防CCl4诱导的肝纤维化,其作用机制可能与下调肝脏组织TβR Ⅰ、Smad3 mRNA的表达,从而阻滞TGF-β1/Smads通路转导有关.
关键词： 加味茵陈四逆汤 肝纤维化 TGF-β1/Smads通路 预防 -
TGF-β1/Smads通路在哮喘大鼠气道重塑模型中的动态变化
目的 探讨TGF-β1/Smads通路在哮喘大鼠气道重塑模型中的动态变化,及其在哮喘发病中的可能机制.方法 以卵蛋白雾化复制哮喘模型,在激发哮喘2、4、8周后处死,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1、α-SMA的mRNA表达水平,用免疫组织化学染色法检测支气管肺组织TGF-β1、α-SMA、Smad3、smad4、smad7的蛋白表达,同时用图像分析法测量大鼠气道形态学参数.结果 大鼠哮喘激发后2周开始出现气道平滑肌增厚,并随着激发时间的延长逐渐增厚.同时,哮喘大鼠支气管肺组织TGF-β1、α-SMA、Smad3、Smad4的蛋白表达以及TGF-β1、α-SMA的mRNA表达水平逐渐升高,而Smad7的蛋白表达逐渐下降,呈现一定的动态变化.结论 哮喘气道重塑的改变是一个动态的过程,TGF-β1/Smads通路在哮喘大鼠气道重塑模型中呈现动态变化过程,其中TGF-β1、α-SMA、Smad3、Smad4与气道重塑呈正相关,而Smad7则与气道重塑呈负相关.
关键词： TGF-β1/Smads通路 哮喘 大鼠 气道重塑
