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半枝莲总黄酮通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导肿瘤细胞自噬的体内实验研究
该研究拟从体内角度研究半枝莲总黄酮(TF-SB)的抗肿瘤作用,并探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的影响及其对PI3K/AKT/mTOR通路的调控作用,为TF-SB的抗肿瘤作用提供实验依据.实验以黑色素瘤荷瘤小鼠模型为研究对象,分为空白对照组、雷帕霉素组(Rap,1.5 mg·kg-1)、TF-SB高、中、低剂量组(200,100,50mg·kg-1),每天给药1次,连续用药11d,通过测量肿瘤的体积及抑瘤率,来观察TF-SB对黑色素瘤生长的抑制效果;通过TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,来进一步验证TF-SB的抗肿瘤活性;通过Western blot法检测LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ的蛋白表达,计算LC3-Ⅱ对LC3-Ⅰ的相对表达量,探讨TF-SB对肿瘤细胞自噬的诱导作用;通过检测PI3 K/AKT/mTOR通路标志蛋白的磷酸化水平,研究TF-SB诱导细胞自噬的分子机制.结果表明,TF-SB可有效抑制荷瘤小鼠体内黑色素瘤的生长,减小肿瘤体积、提高抑瘤率,并且可以显著增加肿瘤细胞凋亡指数,增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,抑制p-PI3K,p-AKT及p-mTOR的蛋白表达水平,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001).由此可见,半枝莲总黄酮具有抑制体内黑色素瘤生长的作用,其机制可能与通过抑制PI3 K/AKT/mTOR通路,诱导肿瘤细胞自噬及凋亡有关.
关键词： 半枝莲总黄酮 PI3K/AKT/mTOR通路 自噬 细胞凋亡 -
基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨补肾抗衰片介导自噬调控动脉粥样硬化的机制
目的 观察补肾抗衰片对动脉粥样硬化(AS)和巨噬细胞自噬的影响并探讨其分子机制.方法 采用单纯高脂饮食喂养法建立AS兔模型.于4周末,24只兔随机分为对照组、模型组、补肾抗衰片[1 g/(kg·d)]组及阿托伐他汀[5 mg/(kg·d)]组,每组6只,干预8周.检测血清TC、TG、LDL-C和HDL-C的水平;油红O染色观察动脉粥样硬化斑块形成情况,HE染色观察血管内膜病理变化,计算内膜增生面积与中膜面积的比值;检测LC3Ⅱ蛋白、Beclin-1蛋白表达水平.建立氧化低密度脂蛋白(100 μg/mL)诱导的巨噬细胞株RAW264.7自噬模型,分为模型组、补肾抗衰片组(10％含药血清)和雷帕霉素(10nmol/L)组,另设正常对照组.Western blot技术检测各组细胞LC3Ⅱ、p62、PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达水平.结果 在体研究结果显示,与模型组比较,阿托伐他汀组血清TC、TG、LDL-C水平降低(P＜0.01),HDL-C水平升高(P＜0.01);阿托伐他汀组和补肾抗衰片组主动脉内中膜面积比值降低(P ＜0.05,P＜0.01),主动脉LC3Ⅱ阳性面积百分比、Beclin-1蛋白的表达升高(P＜0.05,P＜0.01).体外研究结果显示,与模型组比较,补肾抗衰片组和雷帕霉素组细胞LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平升高(P＜0.01),p62、PI3K、p-Akt、p-mTOR表达降低(P＜0.01).结论 补肾抗衰片能减轻AS病变程度,上调自噬水平,其机制可能通过抑制PI3 K/Akt/mTOR信号通路,促进巨噬细胞自噬相关.
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PI3K/AKT/mTOR在华支睾吸虫感染小鼠肝纤维化模型中的表达及意义
目的 探讨脂酰肌3激酶一蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)在华支睾吸虫感染小鼠致肝纤维化作用. 方法 6周龄雌性C3H/HeN小鼠随机分为正常对照组和华支睾吸虫感染组,感染组每只小鼠经口灌胃45个华支睾吸虫囊蚴,对照组每只小鼠经口灌入等量的生理盐水,感染28 d后取出小鼠肝脏组织,Masson染色,观察病理变化;免疫组织化学染色检测肝脏组织中α-SMA和p-mTOR蛋白的定位与表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠肝脏组织中α-SMA、COL1和TGF-βmRNA表达水平;Western blot法检测小鼠肝脏组织中TGF-β、α-SMA、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平. 结果 成功建立小鼠肝纤维化模型.与对照组相比,感染组小鼠肝脏的胶原沉积显著增加,α-SMA及p-mTOR阳性细胞数量显著增多(t=-8.374,P＜0.01;t=-9.545,P＜0.01),α-SMA、COL1、TGF-βmRNA(t=-3.553,P＜0.01;t=-3.448,P＜0.01;t=-3.052,P＜0.01)以及α-SMA、TGF-β、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白表达水平显著升高(t=-7.076,P＜0.01;t=-5.054,P＜0.01;t=-6.941,P＜0.01;t=-8.123,P＜0.01;t=-7.445,P＜0.01). 结论 PI3K/AKT/mTOR在华支睾吸虫感染小鼠肝脏高度表达,因此推测该信号通路在华支睾吸虫感染致肝纤维化中发挥重要作用.
关键词： PI3K/AKT/mTOR通路 华支睾吸虫 小鼠 肝纤维化 -
防己诺林碱诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的作用机制
目的 探讨防己诺林碱(FAN)对三阴性乳腺癌(TNBC)的抗肿瘤机制.方法 体外细胞培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231,Alamar-Blue法检测FAN对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的半抑制浓度(IC50);6孔板检测细胞迁移情况;细胞流式技术检测细胞凋亡情况;Western Blot检测磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及磷酸化PI3K、AKT、mTOR蛋白表达.结果 FAN可抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的活力(IC50为6.25μmol/L),抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移能力,且随着FAN浓度升高,抑制作用明显.FAN可以诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡,且随着FAN浓度升高,细胞凋亡率增高,同时FAN还可以下调PI3K、AKT、mTOR及磷酸化PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达,随药物浓度的升高,其蛋白表达降低.结论 FAN可通过下调TNBC MDA-MB-231细胞凋亡PI3K/AKT/mTOR信号通路,抑制TNBC细胞的增殖、迁移,诱导细胞凋亡,可能具有抗肿瘤作用.
关键词： 防己诺林碱 三阴性乳腺癌 PI3K/AKT/mTOR通路 细胞凋亡 -
莪术二酮对增生性瘢痕成纤维细胞的作用及机制探讨
目的 探讨莪术二酮调节增生性瘢痕成纤维细胞增殖、转化、胶原分泌的作用及机制.方法 采用人源增生性瘢痕成纤维(HSF)细胞进行培养,加入不同浓度的莪术二酮进行干预.MTT法检测细胞增殖抑制率,ELISA法检测细胞上清中Ⅰ型胶原蛋白(COL-I)、Ⅲ型胶原蛋白(COL-Ⅲ)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及基质金属蛋白酶1(MMP-1)水平,免疫组化法分析细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,Western blotting法检测细胞内PI3K/Akt/mTOR通路及转化生长因子β1 (TGF-β1) /Smads通路相关分子表达情况.结果 莪术二酮可有效抑制HSF细胞增殖;与对照组比较,不同浓度莪术二酮可明显减少细胞TIMP-1、COL-I及COL-Ⅲ的分泌(P＜0.05、0.01),促进MMP-1合成(P＜0.05、0.01),同时莪术二酮能明显抑制PI3K、Akt、mTOR、Smad3的磷酸化及TGF-β1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达(P＜0.05、0.01),且呈浓度依赖性.结论 莪术二酮可通过下调PI3K/Akt/mTOR及TGF-β 1/Smads信号传导通路,同时抑制HSF细胞增殖、转化,减少胶原分泌,促进胶原酶解,继而有效改善增生性瘢痕的发生与发展.
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PPAR-α对心肌肥大的调控作用及与PI3K/Akt/mTOR通路的关系
目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)对心肌细胞肥大的调控作用及其与PI3K/ Akt/mTOR通路的关系.方法:异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌细胞肥大;Leica图像分析软件测量心肌细胞表面积;qRT-PCR方法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、PPAR-α mRNA表达;Western blot检测Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、P70S6K蛋白表达;PPAR-α RNAi抑制PPAR-α的表达.结果:①心肌细胞肥大时,PPAR-α表达显著下降;非诺贝特(Feno)可上调PPAR-α表达,抑制心肌细胞肥大;Feno对心肌细胞肥大的抑制效应可被PPAR-αRNAi所逆转;②Feno能明显抑制ISO诱导的心肌细胞p-Akt、p-mTOR和p-p70S6K蛋白表达的增加;Feno的上述作用可被PPAR-α RNAi所逆转;③PI3K抑制剂LY294002(LY)或mTOR抑制剂雷帕霉素(RAPA)均能明显抑制心肌细胞肥大,LY或RAPA抑制心肌细胞肥大的效应均可被PPAR-α RNAi所取消.结论:PPAR-α通过负性调控抑制心肌细胞肥大.PPAR-α抑制心肌细胞肥大的作用可能与其抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
关键词： PPAR-α PI3K/AKT/mTOR通路 心肌细胞肥大 大鼠 -
中药布鲁生调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在胶质母细胞瘤增殖、迁移和自噬中的作用
目的:探讨布鲁生调节PI 3 K-AKT-mTOR信号通路对胶质母细胞瘤增殖、迁移和自噬中的影响方法:将U 251胶质母细胞瘤细胞分为A、B、C、D四组,A组:作为对照,B组:布鲁生处理;C组:PI 3 K inhibitor处理;D组:布鲁生与PI 3 K inhibitor处理,MTT法检测U 251胶质母细胞瘤细胞存活;划痕实验检测细胞迁移能力;RT-PCR法检测布鲁生对PI 3 K、AKT、mTOR mRNA的变化,Western blot检测PI 3 K、AKT、mTOR、LC 3-Ⅰ、LC 3-Ⅱ、Beclin-1蛋白的变化.结果:B、C、D三组均显著抑制U 251胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移,但D组抑制效果更显著(P<0.05),B、C、D三组PI 3 K、AKT、mTOR mRNA和蛋白水平表达均下调,LC 3-Ⅰ、LC 3-Ⅱ、Beclin-1 mRNA和蛋白水平表达均上调,且D组与B组和C组具有显著差异性(P<0.05).结论:布鲁生可通过抑PI 3 K/AKT/mTOR信号通路减弱胶质母细胞瘤增殖和迁移,并促进自噬.
关键词： 布鲁生 PI3K/AKT/mTOR通路 胶质母细胞瘤 自噬 迁移 -
基于PI3K/AKT/mTOR通路、HIF-1α、ES观察新风胶囊对佐剂关节炎大鼠滑膜血管新生的影响
目的:观察新风胶囊(XFC)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜PI3K/AKT/mTOR通路的影响.方法:将大鼠随机分成正常对照组、模型对照组、甲氨蝶呤组、雷公藤多苷组、XFC组.采用免疫组化法检测滑膜微血管密度(MVD)表达,酶联免疫吸附法检测白介素(IL)-6、IL-10、HIF-1α、VEGF-A表达,免疫印迹法检测PI3K、AKT1、p-AKT1、mTOR、ES蛋白在滑膜血管中表达.结果:模型对照组滑膜组织MVD计数升高,血清IL-6、VEGF、HIF-1α和滑膜PI3K、AKT1、p-AKT1、mTOR、ES表达显著升高,血清IL-10表达量降低;治疗后,XFC组MVD呈高计数量,HIF-1α、 IL-6、VEGF-A表达降低,滑膜PI3K、p-AKT1、mTOR、ES蛋白表达降低,血清IL-10升高.结论:XFC通过调节PI3K/AKT/mTOR信号通路、HIF-1α、ES表达改善AA滑膜血管新生.
关键词： 佐剂关节炎 血管新生 PI3K/AKT/mTOR通路 新风胶囊 -
白藜芦醇对人肝癌HepG2细胞增殖及自噬作用的影响
目的 观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对人肝癌细胞HepG2增殖及自噬作用的影响,探讨其可能的抗肿瘤机制.方法 用不同浓度的Res作用HepG2细胞24、48和72 h后,采用CCK-8法检测Res对细胞增殖的影响,丹酰尸胺(monodancyldadverine,MDC)染色法检测Res对HepG2细胞自噬体形成的影响;用20 μmol/L Res和20 μmol/LRes+5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)分别作用HepG2细胞24h,Western blot法检测自噬相关基因Beclin 1、LC3和P62的表达情况,同时检测PI3K/Akt/mTOR通路中,PI3K、p-Akt(Akt)和p-mTOR(mROR)的表达情况.结果 Res作用HepG2细胞后,能够明显抑制细胞增殖,呈剂量-时间依赖性;可促进HepG2细胞内自噬体的形成.Western blot结果显示,Res作用HepG2细胞后,可提高LC3Ⅱ/Ⅰ的比值,促进Beclin 1的表达,降低作用底物P62的表达,而3-MA作用细胞后,LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值、Beclin 1的表达水平均下降,P62的表达水平上调;Res还可显著降低细胞中PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达.结论 Res可诱导自噬抑制HepG2细胞的增殖,其机制可能与Res抑制PI3K/Akt/mTOR通路,进而上调自噬相关Beclin 1和LC3的表达以及下调P62的表达有关.
关键词： 白藜芦醇 肝癌细胞 增殖 自噬 PI3K/AKT/mTOR通路 -
硫化氢对Aβ25-35诱导的小鼠Neuro-2a细胞自噬的影响
目的 探讨硫化氢(H2S)对Aβ25-35诱导的小鼠成神经细胞瘤细胞Neuro-2a自噬的影响及其潜在机制.方法 将Neuro-2a细胞随机分为空白对照组、Aβ25-35处理组、Aβ25-a5+NaHS组、Aβ25 35+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、NaHs组及Aβ25-35+ NaHS+ LY294002组.Aβ25-35+ NaHS组和Aβ25-35+ 3-MA组细胞分别用NaHS和3-MA预处理2h后均加用Aβ25-35继续处理24 h;Aβ25-35+ NaHS+ LY294002组除加入NaHS预处理外需在Aβ25-35处理前0.5h加入特异性PI3K/Akt通路抑制剂LY294002.采用MTT法观察各组细胞存活率,蛋白质印迹法检测自噬蛋白Beclin-1、微管相关蛋白(LC3)及P62的表达,免疫荧光法检测LC3的表达及分布,透射电镜法观察自噬体的形成.结果 (1)与空白对照组相比,Aβ25-35作用细胞后细胞存活率降低(P＜0.05),Beclin-1及LC3-Ⅱ表达增加,P62表达降低(P＜0.05),荧光显微镜及电镜下可见细胞自噬体明显增多.(2)与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+3-MA组和Aβ25-35+NaHS组细胞存活率均增高(P＜0.05),Beclin-1及LC3-Ⅱ表达降低,P62表达增高(P＜0.05),自噬体减少.(3)Aβ25-35+NaHS组p-Akt和p-mTOR的表达高于Aβ25-35组(P＜0.05),而加入LY294002后,Aβ25-35+NaHS+ LY294002组细胞p-Akt和p-mTOR表达与Aβ25-35+ NaHS组相比降低(P＜0.05).结论 外源性H2S能对抗Aβ25-35的细胞毒性,可能与活化PI3K/Akt/mTOR途径抑制Aβ25-35引起的细胞自噬相关.
关键词： 阿尔茨海默病 硫化氢 自噬 β淀粉样蛋白 PI3K/AKT/mTOR通路 -
自噬在调控乳腺癌化疗耐药中的作用研究进展
乳腺癌化疗药物耐药性产生的机制复杂.自噬是将细胞内受损、变性或衰老的蛋白质以及细胞器运输到溶酶体进行消化降解,以胞质内出现自噬体为特征的细胞“自我消化”的一系列生化过程,是在正常细胞和病理状态细胞中普遍存在的生理机制.近年来研究发现,自噬与乳腺癌的化疗耐药密切相关.本文就自噬与乳腺癌化疗耐药的相互作用及分子机制进行综述,探讨将自噬作为逆转乳腺癌化疗药物耐药性靶点的可能性.
关键词： 自噬 乳腺癌 化疗耐药 PI3K/AKT/mTOR通路 -
乳腺癌中AR的表达及其对不同乳腺癌细胞株的影响
目的 分析雄激素受体(androgen receptor,AR)在不同分子分型乳腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并初步探讨AR抑制剂比卡鲁胺在不同AR表达量乳腺癌细胞株中的影响.方法 采用免疫组化SP法检测127例乳腺癌组织中AR的表达,并分析其与各临床病理特征的关系.采用免疫荧光和Western blot法检测MDA-MB-231、MDA-MB-453、MCF-7乳腺癌细胞株中AR的表达,用不同浓度的雄激素抑制剂比卡鲁胺作用于以上3株乳腺癌细胞株,用MTT法分别绘制细胞株6天的生长曲线,后予30 μmnol/L的比卡鲁胺持续作用以上3株细胞6天,用Western blot法检测用药前后AKT及AR的表达量.结果 AR在127例乳腺癌组织中的阳性率为64.29％,其中在三阴型乳腺癌(trip-negative breast cancer,TNBC)中的阳性率为44.68％,在4种分子分型乳腺癌中阳性率低,其差异有统计学意义(P＜0.05),AR的表达与组织学分级及患者月经状态具有明显相关性(P =0.026,P=0.048),但与临床分期、患者年龄、淋巴结状态、肿瘤大小等病理参数无关.MTT实验显示,与对照组相比,AR强阳性细胞株MDA-MB-453在给予30μmol/L比卡鲁胺作用5天后,细胞生长受到明显抑制.Western blot结果提示,用药后MDA-MB-453中AKT的表达显著降低(0.651 4±0.134 8 vs0.461 1±0.0759 3,P=0.049).结论 AR可以作为乳腺癌治疗的靶点,AR抑制剂比卡鲁胺对AR强阳性乳腺癌细胞株有明显抑制作用,其机制可能是通过AR介导,从而抑制PI3K/AKT/mTOR通路发挥作用.
关键词： 乳腺肿瘤 AR PI3K/AKT/mTOR通路 比卡鲁胺 -
Fat-1基因过表达抑制宫颈癌Hela细胞生长机制研究
目的:探讨fat-1基因对宫颈癌Hela细胞生长的影响,并研究PI3 K/Akt/mTOR通路是否参与fat-1对Hela细胞生长的调控作用.方法:构建真核表达载体(p-EG-FP-fat-1),并转染人宫颈癌Hela细胞,使其过表达fat-1基因,为fat-1组,以转染空载质粒的Hela细胞为阴性对照组,以未经任何处理的Hela细胞为空白对照组.采用气相色谱法检测fat-1基因对 ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)和 ω-6多不饱和脂肪酸(ω-6PUFA)含量的影响;采用MTT和Hoechst实验检测fat-1基因对细胞增殖和凋亡的影响;采用Tr-answell和细胞划痕实验检测fat-1基因对细胞侵袭和迁移的影响;采用Western blot检测fat-1基因对PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达情况的影响.结果:Fat-1组细胞中fat-1基因表达水平高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01).Fat-1组细胞中 ω-3PUFA含量高于空白对照组和阴性对照组,ω-6PUFA含量和 ω-6PUFA/ω-3PUFA比例均低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.01).Fat-1组细胞的增殖、侵袭和迁移能力均低于空白对照组和阴性对照组,Fat-1组细胞凋亡水平高于空白对照组和阴性对照组(P均<0.01).Fat-1组细胞中p-PI3K、p-Akt和p-mTOR表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01).结论:Fat-1基因可通过增加细胞内 ω-3PUFA含量,靶向作用于PI3K/Akt/mTOR通路,抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡.
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Mel-18在子宫内膜癌中的表达及临床意义
目的:探讨黑色素瘤蛋白(Mel-18)在子宫内膜癌(EC)中的表达及其在肿瘤细胞恶性生物学行为中的作用及机制.方法:免疫组化染色法(IHC)和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测Mel-18在EC组织及正常子宫内膜组织中的表达.小干扰(siRNA)及腺病毒下调或上调Mel-18在EC细胞系中的表达,MTT法检测Mel-18对EC细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验检测Mel-18对EC细胞迁移能力的影响;Western blot法检测相关目的蛋白的表达.结果:IHC和RT-qPCR结果显示,Mel-18在EC组织中显著高表达(P<0.05);腺病毒上调Mel-18在EC细胞系中的表达后,细胞的增殖、迁移能力升高,PI3K/Akt/mTOR信号转导通路表达升高;siRNA下调Mel-18表达抑制细胞的增殖、迁移能力,PI3K/Akt/mTOR信号转导通路表达降低.结论:Mel-18在EC中高表达,在EC的发生发展中可能起到促癌基因的作用,可通过活化PI3K/Akt/mTOR信号转导通路促进EC细胞增殖、迁移能力.
关键词： 子宫内膜癌 多梳族蛋白 Mel-18 PI3K/AKT/mTOR通路 -
食管鳞癌Eca109细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路对LSD1的调控作用
目的:探讨食管鳞癌Eca109细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路对LSD1的调控作用.方法:用不同浓度的PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂LY294002(0.5、1.0、5.0、10.0、20.0和50.0μmol/L)、RAD001(0.05、0.50、5.00、10.00、20.00和50.00μmol/L)分别处理Eca109细胞24、48 h,采用CCK-8实验检测细胞增殖;然后分别用0、10、20μmol/L LY294002或RAD001处理Eca109细胞24 h或20μmol/L LY294002或RAD001处理不同时间(0~72 h),采用Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路因子、LSD1及组蛋白H3K4me2表达的变化.结果:LY294002、RAD001处理后,食管鳞癌细胞增殖受抑,且随浓度的增加,抑制作用有增强的趋势(P<0.05);LY294002抑制Eca109细胞中p-p70S6K的表达,上调Raptor、Rictor、p-Akt(Ser473)以及组蛋白H3K4me2的表达;而RAD001抑制了Raptor、Rictor、p-p70S6K表达,增加p-Akt(Ser473)的表达,并且下调LSD1表达,上调组蛋白H3K4me2的表达(P<0.05).结论:PI3K/AKT/mTOR信号通路对LSD1存在调控作用.
关键词： 食管鳞癌 PI3K/AKT/mTOR通路 LSD1 H3K4me2 -
PI3K-Akt-mTOR通路与鼻咽癌发生、发展关系的研究进展
PI3K-Akt-mTOR信号通路不仅与细胞的增殖、存活及迁移关系密切,其在肿瘤的发生、发展过程中也起到重要的作用.近年来,以该通路作为抗肿瘤治疗的靶点已成为研究的热点.PI3 K/AKT/mTOR信号通路的异常激活及其所涉及的关键基因在鼻咽癌的发生、侵袭、转移和促进血管生成等方面发挥着重要的作用.因此,PI3 K/AKT/mTOR信号通路有望作为治疗鼻咽癌的药物靶点.
关键词： 鼻咽癌 PI3K/AKT/mTOR通路 细胞信号 -
川芎嗪对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠肺纤维化和炎症反应的调节作用
目的:探索川芎嗪对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠肺纤维化和炎症反应的影响及其机制.方法:大鼠随机分为5组:对照组、LPS模型组、LPS+川芎嗪(50,100,200mg·kg-1)组.苏木素伊红(HE)染色观察肺组织病变.Masson染色分析肺纤维化.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素(interleukin,IL)-6,IL-1β,肿瘤坏死因子(tTNF-α)和IL-18水平.蛋白印记检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),转化生长因子β1(TGF-β1),Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ),Ⅲ型胶原蛋白(collagen typeⅢ),PI3K,P-PI3K,AKT,P-AKT,mTOR和P-mTOR的蛋白水平.结果:LPS模型组大鼠肺组织湿/干重之比高于对照组(P＜0.01).与LPS模型组相比,LPS+川芎嗪(100,200mg·kg-1)组大鼠肺组织湿/干重之比降低(P＜0.01).川芎嗪处理可改善LPS模型组大鼠肺组织病变及纤维化.LPS模型组大鼠α-SMA,TGF-β1,collagen typeⅠ和collagen typeⅢ表达高于对照组(P＜0.01).与LPS模型组相比,LPS+川芎嗪(50,100,200 mg· kg-1)组大鼠α-SMA、TGF-β1、collagen typeⅠ和collagen typeⅢ表达降低(P＜0.01).与对照组相比,LPS模型组大鼠IL-6、IL-1β、IL-18和TNF-α水平升高(P＜0.01).LPS+川芎嗪(50,100,200mg·kg-1)组大鼠IL-6、IL-1β、IL-18和TNF-a水平低于LPS模型组(P＜0.01).LPS模型组大鼠P-PI3K/PI3K,P-AKT/AKT和P-mTOR/mTOR比值高于对照组(P＜0.01).与LPS模型组相比,LPS+川芎嗪(50,100,200mg·kg-1)组大鼠P-PI3K/PI3K,P-AKT/AKT和P-mTOR/mTOR比值下降(P＜0.01).结论:川芎嗪可通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路活化减轻内毒素诱导的急性肺损伤大鼠肺纤维化和炎症反应.
关键词： 急性肺损伤 川芎嗪 纤维化 炎症反应 PI3K/AKT/mTOR通路 -
泮托拉唑通过PI3K/Akt/mTOR信号通路逆转K562/A02化疗多药耐药的作用
目的:探讨泮托拉唑对白血病耐药细胞K562/A02化疗耐药的影响,探讨PI3K/Akt/mTOR信号途径在此过程中的作用以及P-gp、MRP1蛋白的表达.方法:取对数生长期细胞,采用不同浓度泮托拉唑预处理(终浓度分别为50,100,200μg/ml)K562/A02细胞,培养24 h,采用台盼蓝染色测定泮托拉唑对K562/A02细胞生长影响;流式细胞术检测各组细胞的凋亡作用,RT-PCR和Western Blot方法检测各组细胞p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P-gp、MRP1基因的表达.结果:泮托拉唑预处理K562/A02细胞24 h,当终浓度为50,100,200 μg/ml时,台盼蓝染色可见蓝染细胞,且随着浓度的增加,蓝染细胞增多.流式细胞术结果显示,阴性对照组K562/A02细胞凋亡率较低(3.26±0.12％),泮托拉唑(终浓度分别为50,100,200 μg/ml)处理K562/A02细胞24 h后,凋亡率有所增加,分别为(15.79±1.03)％,(20.31±1.89)％,(41.72±2.57)％,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,50μg/ml泮托拉唑预处理24 h可显著抑制K562/A02细胞内的p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P-gp、MRP1 mRNA和蛋白水平的表达(P＜0.05),抑制作用随药物浓度的升高而增强,呈浓度依赖性(P＜0.05).当浓度升至200 μg/ml时,泮托拉唑对K562/A02细胞内p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-gp、MRP1基因抑制作用为明显,与对照组相比,各基因mRNA水平的表达分别下降了(71.37±2.06)％,(62.29±4.17)％,(48.56±3.95)％,(52.05±4.26)％,(83.21±2.78)％;各基因蛋白水平的表达分别下降了(50.93±4.09)％,(45.64±4.75)％,(42.77±3.33)％,(39.29±2.34)％,(69.87±3.51)％,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:泮托拉唑可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而抑制P-gp和MRP1蛋白表达,以增强肿瘤细胞的化疗敏感性,逆转其对化疗药物的MDR.
关键词： 泮托拉唑 白血病 多药耐药 PI3K/AKT/mTOR通路 P糖蛋白 -
阿伐他汀通过PI3K/Akt/mTOR途径调节白血病细胞自噬的作用及机制
目的:研究阿伐他汀对白血病细胞K562自噬的影响及相关信号机制.方法:取对数生长期的K562细胞,分为阴性对照组、阿伐他汀组、阿伐他汀+PI3K抑制剂(LY294002)组、阿伐他汀+mTOR抑制剂(雷帕霉素)组.共培养24 h后,采用吖啶橙染色观察细胞自噬体的变化,Western Blot检测Ⅱ型自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)和自噬血管基因Beclin-1的表达,RT-PCR和Western Blot检测磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达.结果:与阴性对照组相比,阿伐他汀抑制白血病细胞K562自噬体的形成(P＜0.05),下调LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达(P＜0.05).与阿伐他汀组相比,阿伐他汀+PI3K抑制剂(LY294002)组LC3-Ⅱ和Bec-lin-1的表达增加(P＜0.05);阿伐他汀+mTOR抑制剂(雷帕霉素)组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达增加(P＜0.05).与阿伐他汀组相比,阿伐他汀+PI3K抑制剂(LY294002)组p-Akt和p-mTOR基因的mRNA和蛋白表达水平均下降(P＜0.05);阿伐他汀+ mTOR抑制剂(雷帕霉素)组p-Akt和p-mTOR基因的mRNA和蛋白表达水平均下降(P＜0.05).结论:阿伐他汀可以抑制白血病细胞K562自噬,推测其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
关键词： 阿伐他汀 白血病 自噬 PI3K/AKT/mTOR通路 -
基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨半夏泻心汤对PLGC大鼠黏膜微环境的影响
目的:对胃癌前病变(Precancerous Lesion of Gastric Cancer,PLGC)模型大鼠从整体、细胞及分子水平的指标进行观察,分析其胃黏膜微环境的特点,并初步探讨半夏泻心汤对其胃黏膜的作用机制.方法:清洁级雄性SD大鼠70只,随机分成3组:模型组50只,造模加中药干预组10只,空白组10只.采用改良MNNG+复合法制备PLGC大鼠模型,于造模中期第10周、造模结束期第20周,各组随机抽取5只大鼠,分别从整体水平、细胞水平及分子水平检测半夏泻心汤对其胃黏膜微环境的影响.结果:1)启动子PTEN,造模加中药干预组较模型组表达高,但仍低于空白组;2)调控器PI3K/Akt/mTOR信号通路,PI3K、Akt、mTOR的表达造模加中药干预组较模型组低,但仍高于空白组;3)效应子HIF-1α及其下游基因,造模加中药干预组较模型组表达低,但仍高于空白组;上述结果差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:中药半夏泻心汤通过影响PLGC大鼠胃黏膜组织微环境变化的3个关键环节,即PI3K/Akt/mTOR信号通路中的启动子、调控器及效应子,从而影响并阻断PLGC的发生发展.
关键词： 胃癌前病变 半夏泻心汤 PI3K/AKT/mTOR通路 黏膜微环境 实验研究
