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肝脏双重动脉血供的应用现状及展望
肝脏双重动脉血供在临床中已成功应用于处理门静脉血栓形成以及辅助性肝移植等特殊情况，但其毕竟改变了正常的生理解剖关系，能否维持肝脏正常结构及功能、促进肝再生尚存在争议。本文综述肝脏双重动脉血供的应用现状及动物实验研究情况，并对今后的研究方向及应用前景进行展望。
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肝结节性再生性增生22例并文献复习
目的 分析总结肝结节性再生性增生(NRH)的诊治经验,以提高临床医师对本病的认识.方法 回顾性分析我院22例NRH患者的临床表现,超声、CT等影像学检查,血常规、肝肾功能、自身免疫相关抗体谱等实验室检查结果,诊断准确率,治疗方法及预后生存等资料.结果 22例NRH中有16例表现为门静脉高压,肝功能轻度受损,6例表现为肝脏单发、多发占位;8例考虑合并自身免疫性疾病,其中系统性红斑狼疮(SLE)、克罗恩病、自身免疫性肝炎各1例,考虑结缔组织病但不能明确具体诊断5例;4例合并血液系统疾病;1例合并消化系统肿瘤.所有患者均行肝楔形活检病理确诊.病理示肝实质弥漫分布增生性小结节,门静脉小分支狭窄或闭塞.术后门静脉高压等症状明显缓解.结论 NRH临床常表现为门静脉高压,并可伴发免疫、血液等系统性疾病,偶可表现为肝脏占位,诊断依靠肝活检,药物治疗主要针对基础病和门静脉高压,手术对门静脉高压疗效确切,患者预后良好.
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肾素-血管紧张素系统的阻断对小鼠肝脏再生及肝功能的影响
目的：探讨应用卡托普利阻断肾素-血管紧张素系统（RAS）后对肝切除术小鼠肝脏再生及肝功能的影响。方法制备肝部分切除术后小鼠模型，实验组予以卡托普利腹腔内注射，分别于术后第1、3、5、7、9天测定肝脏再生情况及肝功能变化，并应用免疫组化方法检测肝组织中IL-6的表达，与对照组比较，应用统计学方法分析RAS阻断对其肝脏再生及肝功能的影响。结果术后第3天开始，RAS阻断可明显增加肝脏体重比（t=7.006，P=0.000），而至第7天，卡托普利反而可以降低肝脏体重比；术后第3天开始，应用卡托普利阻断RAS能够明显降低谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）及胆红素（BIL）的水平，而白蛋白实验组却明显高于对照组（P=0.013），然而血清碱性磷酸酶（ALP）的水平却没有变化，而自第7天开始，ALP表现为降低趋势，而ALT及AST未再出现显著差异。而IL-6在小鼠肝组织中表达，实验组明显低于对照组，二者具有统计学差异（χ2=7.500，P=0.006)。结论 RAS阻断可促进肝切除早期小鼠肝脏再生，并促进肝部分切除术后小鼠早期肝功能的恢复。
关键词： 肾素-血管紧张素系统 肝再生 肝功能 肝切除术 -
重组人肝再生增强因子对大鼠肝部分切除后肝再生的影响
目的 观察原核表达的重组人肝再生增强因子(rhALR)对大鼠肝再生的影响.方法 按Higgins方法进行大鼠34%肝切除.术后4～6h各实验组大鼠经腹腔注射rhALR剂量分别为50 μg、100 μg、200 μg,400μg、800 μg,对照组给生理盐水.术后30h杀鼠取肝,增殖核抗原(PCNA)免疫组化染色和HE染色,进行肝细胞核PCNA阳性细胞计数和有丝分裂计数.结果 rhALR能促进肝部分切除后大鼠肝细胞的有丝分裂和细胞核PCNA的表达,并呈现一定的剂量依赖关系.结论 rhALR能促进在鼠肝再生和肝细胞增殖.
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大鼠部分肝切除后肝细胞生长因子激活因子抑制因子1,2的表达
目的 探讨肝细胞生长因子激活因子抑制因子(hepatocyte growth factor activator inhibitor,HAI)1、HAI-2在部分肝切除后的表达特点,分析HAI-1和HAI-2在肝再生中的作用.方法 随机将健康雄性SD大鼠分成对照组和肝切除组,各30只.在肝切除手术前和手术后3 h、12 h、24 h以及48 h时,对比2组HAI-1和HAI-2 mRNA和蛋白的表达变化.结果 手术前2组HAI-1、HAI-2的mRNA及蛋白均呈显著低表达,组间无明显差异(P>0.05);与手术前相比,术后对照组HAI-1、HAI-2的mRNA及蛋白均无明显变化(P>0.05);而肝切除组HAI-1 mRNA和蛋白表达水平先显著升高再逐渐下降,同时间点与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);HAI-2 mRNA和蛋白则无明显变化(P>0.05).结论 HAI-1在部分肝切除肝细胞再生过程中呈持续高表达,其可能参与了肝细胞再生过程,而HAI-2对肝再生过程无明显影响.
关键词： 肝切除 肝再生 肝细胞生长因子激活因子抑制因子 -
粒细胞集落刺激因子促进肝脏再生的机制
肝脏的一个特性即是在受到损伤后会通过自身的再生能力来恢复原有肝脏体积和功能,目前越来越多的证据显示重组人粒细胞集落刺激因子(granulocyte-colony stimulating factor,G-CSF)在促进肝脏再生的过程中有多方面的作用.深入了解G-CSF促进肝脏再生的机制对于其应用于肝损伤患者,促进肝脏再生,提高生存率有着重要意义.本文就G-CSF促进肝脏再生的机制进行综述.
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肝大部分切除或HGF刺激可以引起STAT3和TEC的同时激活
目的:了解STAT3和TEC在肝再生以及HGF刺激的肝干细胞中激活情况,探讨在肝细胞早期增生中STAT3和TEC的活化的相关性.方法:建立小鼠肝大部分切除和HGF刺激肝干细胞(WB F-344)的体内、体外两个试验模型,采用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)、免疫印迹(immunoblotting,IB)的方法检测TEC和STAT3酪氨酸磷酸化激活水平与时间,使用凝胶阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)分析核蛋白与STAT3 DNA特异序列的结合能力.结果:肝大部分切除和HGF刺激下STAT3和TEC的磷酸化水平均快速明显升高,肝大部分切除后10-20 min时二者激活水平均达到高,HGF刺激后10 minTEC激活水平高,30 min STAT3活化水平高.肝大部分切除或HGF刺激下10 min左右,核蛋白与STAT3 DNA特异序列的结合能力明显增强.结论:肝大部分切除和HGF刺激下STAT3和TEC均被快速激活,他们之间可能存在相互作用,共同影响肝细胞早期增生反应.
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肝部分切除大鼠肠源性内毒素血症与肝再生的关系
目的:观察肝部分切除大鼠肠源性内毒素血症的动态变化与肝再生的关系.方法:随机将Wistar大鼠分为正常对照组(NC)、假手术组(SO)和肝大部切除组(PH),测定NC组及SO,PH组术后6,12,24,36,48,72,120,168 h血浆ET浓度,同时动态观察残余肝组织的再生情况.结果:PH组大鼠血浆ET浓度在PH后6-72h升高,期间出现2次峰值,第1次在PH后12h,第2次在PH后48h,明显高于NC组及SO组对应时间点(P＜0.01),72 h后迅速下降至NC组水平.PH后残余肝质量、肝再生率均出现明显的动态变化,但分别与血浆内毒素水平的变化趋势比较,相关系数分别为-0.408(P＞0.05),-0.167(P＞0.05);PH后再生肝组织DNA合成S期肝细胞的数量、PCNA的标记指数均出现显著动态改变,但分别与血浆ET水平的变化趋势比较,相关系数分别为0.062(P＞0.05),0.058(P＞0.05).NC,SO肝组织中上述反映肝再生的指标改变不明显.结论:PH后残余肝再生全程中IETM的变化与肝再生程度的变化无关,提示IETM对肝再生程度没有产生直接影响,但不能否定因IETM所引起细胞因子的释放而导致对肝再生的影响作用.
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BMP2 mRNA在大鼠再生肝组织的表达与意义
目的:在基因水平上观察BMP2在肝组织的表达和肝再生过程中的动态变化特征,并结合NF-κB在肝再生过程中的表达变化特征,探讨BMP2对肝再生的影响.方法:健康成年♂Wistar大鼠54只,随机分为3组:正常对照(NC)组,即0 h组(n=6),假手术(SO)组(n=24),肝部分切除术(PH)组(n=24).采用原位杂交和免疫组化的方法分别测定大鼠再生肝脏组织中BMP2 mRNA和NF-κB的表达.结果:BMP2 mRNA表达在SO组与PH组6、12、24 h时间点组间存在统计学差异(灰度值:99.74+6.85 vs 114.41±5.12,130.59±6.74,113.74±7.32,均P<0.05).SO组与NC组无统计学意义.NC组肝组织内NF-κB阴性,SO组术后各时相点未见特异性染色.PH组NF-κB初少量弱阳性表达,术后6、12、24 h,NF-κB表达逐步增强,灰度值降低(96.22±3.12,89.59±3.24,83.72±4.32),有统计学差异(P<0.05).结论:BMP2在正常大鼠肝组织中有表达且在肝再生过程中BMP2表达呈现先减弱后增强的趋势.NF-κB在正常大鼠肝脏组织中无表达,在肝再生过程中NFκB表达逐渐增强.BMP2可能抑制肝再生.
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靶向SMAD3基因的shRNA重组慢病毒对大鼠肝再生的作用
目的:应用大鼠肝大部切除肝再生模型,将前期构建好的靶向SMAD3基因的shRNA重组慢病毒注射入大鼠体内,观察SMAD3 shRNA对大鼠肝再生的影响.方法:将60只♂Wistar大鼠随机分为3组:SMAD3 shRNA组(20只)、shRNA对照组(20只)、生理盐水对照组(20只),通过脾脏注射方法给药,慢病毒给药剂量为1.0×108 TU/只,生理盐水对照组给予等体积500 μL生理盐水.给药96 h后行2/3肝大部切除,构建大鼠肝再生模型;肝大部切除术后96 h各组分别除死大鼠7只,剩余大鼠于144 h处死,收集肝脏标本,Real-Time PCR、免疫组织化学检测肝组织SMAD3表达,免疫组织化学检测肝组织Ki67表达,测定大鼠肝质量/体质量,观察SMAD3shRNA对肝再生的影响.结果:Real-Time PCR检测显示,通过脾脏注射慢病毒,在96、144 h处死时间点,SMAD3shRNA组SMAD3 mRNA分别较shRNA对照组平均下降73％、63％.免疫组织化学检测显示SMAD3蛋白表达明显下降.Ki67免疫组织化学结果显示,肝大部切除术后96、144 h,SMAD3 shRNA组Ki67表达阳性细胞数均明显多于生理盐水对照组及shRNA对照组,表明抑制SMAD3表达后肝细胞增殖活跃.大鼠肝质量与体质量比值显示,SMAD3 shRNA组分别较生理盐水对照组及shRNA对照组有增加趋势(96 h:4.50±0.43 vs 3.97±0.55 vs 3.98±0.40,144 h:4.66±0.54 vs 4.15±0.51 vs4.20±0.34),但没有统计学意义(P＞0.05).结论:SMAD3 shRNA在大鼠体内可一定程度上促进肝细胞增殖,但对肝再生的促进作用尚弱.
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粒细胞集落刺激因子促进大鼠移植肝的再生作用
目的:探讨部分肝移植后,粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)对部分肝移植物再生的促进作用.方法:采用改良"二袖套法"建立SD大鼠50%部分肝移植模型,受体鼠随机分为实验组和对照组,术后分别注射(sc)G-CSF和相同体积的生理盐水5 d.观察大鼠移植肝存活时间.术后1,3,5,7和14 d取血清和移植肝脏,测移植物与受体质量比(graft-recipient weight ratio,GRWR),检测血清生化指标,并采用免疫组织化学方法观察肝内的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达.结果:实验组移植肝存活率较对照组高(90%vs60%,x2=5.03,P＜0.05),术后第3-5天,实验组GRWR较对照组明显增加(P＜0.05).两组肝再生均于移植后3 d达高峰.与对照组相比,实验组肝坏死灶少,AST,ALT水平低(3 d:t=17.61,P＜0.05;t=20.16,P＜0.05;5 d:t=15.64,P＜0.05;t=23.08,P＜0.05),白蛋白水平高(3 d:36.2±4.7 vs 29.5±3.4,P＜0.05;5 d:43.2±4.1 vs 33.8±3.9,P＜0.05),PCNA表达升高(t=23.08,P＜0.05).结论:大鼠部分肝移植后G-CSF可以促进肝细胞再生,减轻肝损伤.
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粒细胞集落刺激因子促进小鼠肝再生的作用
目的:探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)促进肝大部切除小鼠肝再生的作用.方法:建立小鼠肝大部分切除(约70%)模型,将肝切除小鼠随机分为3组.单纯肝切除组:肝切除后24 h,腹腔注射生理盐水5 d:G-CSF+肝切除组:rhG-CSF 150 μg/(kg·d)腹腔注射5 d,24 h后进行肝切除:肝切除+G-CSF组:肝切除术后24 h,rhG-CSF 150 μg/(kg·d)腹腔注射5 d.于术后7 d取血清和肝组织,用全自动生化分析仪检测血清肝功能指标,并采用免疫组织化学方法观察肝内的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)的表达及BrdU阳性细胞.结果:肝切除+G-CSF组和G-CSF+肝切除组Brdu及PCNA表达及BrdU阳性细胞明显升高,与对照组比较差异均具有统计学意义(PCNA:74.08%±8.86%,68.91%±9.64% vs 57.36%±13.37%,均P<0.05);肝组织病理检查发现G-CSF+肝切除组27%(3/11)小鼠肝组织出现了不同程度的炎症反应,肝功生化学也显示血清ALT及AST升高,且其差异有统计学意义(均P<0.05).结论:G-CSF具有明显促进肝大部切除小鼠肝再生的作用,但也容易诱发肝脏炎症反应.
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胞外基质Matrilin-2在肝再生中与大鼠卵圆细胞的关系
目的:探讨肝脏胞外基质Matrilin-2在肝再生中与卵圆细胞的关系及作用.方法:采用改良的Soft-Farber建立大鼠肝脏卵圆细胞增殖模型,对照组灌喂生理盐水.分别取术后2、4、6、9、12、15 d大鼠肝组织,采用免疫组织化学以及Western blot的方法动态观察大鼠卵圆细胞增殖模型中肝脏胞外基质成分Matrilin-2的变化与卵圆细胞的关系.结果:肝脏部分切除术(partial hepatectomy,PH)后第2天,卵圆细胞开始向门静脉周围区域增殖,Matrilin-2主要出现在门静脉周围的肝窦状隙内;术后第9天,卵圆细胞进一步向肝实质内增殖,Matrilin-2表达增加;术后第12天,随着卵圆细胞分化为小肝细胞结节,大多数Matrilin-2位于结节周边,少数出现在结节内.Matrilin-2的含量自肝切除后第2天开始升高,第9天达到高峰,第12天后逐步恢复生理水平.结论:肝脏胞外基质成分Matrilin-2与卵圆细胞介导的肝脏再生存在紧密联系并发挥重要的调控作用.
关键词： 卵圆细胞 肝脏部分切除 肝再生 Matrilin-2 -
Tec酪氨酸蛋白激酶的大鼠组织分布及参与的信号途径
目的:研究Tec在大鼠组织中分布特异性,以及在大鼠肝细胞中Tec可能参与的信号途径.方法:从大鼠心、肝、脾、肺、脑、胸腺和肌肉组织中提取RNA,用Northern blot方法检测Tec在大鼠中的组织分布,在WBF-344细胞中共转染Tec-pSRα真核表达载体与荧光素酶报道基因,再用HGF刺激细胞,用微量发光检测仪检测发光值.结果:Tec在大鼠肝脏与肾脏组织中特异性高表达,在肝干细胞中对HGF介导下的Elk信号分子活化的报告质粒中荧光素酶的表达有明显增强(2-3倍)作用.结论:Tec在大鼠肝脏高表达,Tec可能参与HGF介导Erk途径,可能与肝细胞增殖的信号调控有关.
关键词： Tec酪氨酸蛋白激酶 肝再生 信号转导 -
移植雄性骨髓的雌性小鼠肝组织肝再生相关基因的信号通路
目的:探讨骨髓形成肝细胞的分子机制.方法:采用移植♂骨髓的♀小鼠模型,♀Balb/c小鼠随机分为模型组和正常对照组,选用小鼠基因表达谱寡核苷酸芯片,利用反转录酶合成掺有荧光标记的cDNA探针,将探针与基因表达谱芯片杂交观察小鼠肝组织基因表达谱的变化,筛选样本之间杂交信号比值有差异表达的基因.采用生物信息学方法分析模型组中小鼠肝组织再生相关基因的信号通路变化规律.结果:♀小鼠在移植♂骨髓6 mo后肝组织的基因表达谱显著不同,对照组相对于正常组的差异表达基因有865条,已知功能基因有447条,其中上调基因92条,下调基因355条.与肝再生相关基因信号通路涉及HGF,TGF-β,Focal Adhesion,JAK-Stat,VEGF等信号通路,他们相关基因的上调表达促进肝细胞的增殖分化.TGF-β信号通路中相关基因下调,抑制信号通路的激活,减弱肝再生的负性作用,利于肝细胞的增殖分化.结论:♀小鼠移植♂骨髓后的肝组织基因表达谱显著变化,有可能通过其肝再生相关基因的信号通路激活或抑制调节肝再生.
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TGF-β1对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响
目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响.方法:MTT法检测TGF-β1对细胞增殖的影响:将BRL-3A细胞分为6组,分别给予不同浓度的TGF-β1(0、2、4、6、8、10μg/L),检测各组细胞24、36、48 h时的增殖活性；进一步将BRL-3A细胞分为TGF-β1处理组和对照组,分别给予和不予TGF-β1(8μg/L),进行如下检测:流式细胞仪检测两组细胞24、36、48 h时的凋亡情况和细胞周期分布；实时定量RT-PCR检测两组细胞24、36、48 h时Cyclin E、Cdk-2、EGF、HGF、Bcl-2、c-Myc、MMP9、NF-κB基因的表达变化.结果:MTT结果显示,各浓度TGF-β1组在24、36、48 h时的细胞增殖活性差异无统计学意义；流式细胞仪分析结果显示,TGF-β1处理组24、36、48 h时的细胞凋亡率和细胞周期分布与对照组间的差异均无统计学意义；实时定量RT-PCR发现,TGF-β1处理组相对于对照组,Cyclin E mRNA、Cdk2 mRNA、EGF mRNA在24 h时分别下调至0.194±0.103、0.181±0.064、0.634±0.116倍,36 h时分别下调至0.379±0.173、0.457±0.123、0.619±0.112倍,48 h时分别上调至1.956±0.215、2.17±0.471、7.66±0.437倍；HGF mRNA在24、36、48 h时均明显下调,分别至0.152±0.068、0.146±0.053、0.158±0.061倍；Bcl-2mRNA在24、36 h时无统计学差异,48 h时上调至1.567±0.115倍；c-Myc mRNA、MMP9mRNA、NF-κBmRNA在3个时刻均上调,24h时分别至1.742±0.389、3.484±0.411、1.625±0.369倍,36 h时分别至2.292±0.361、1.563±0.323、1.486±0.494倍,48 h时分别至2.499±0.475、2.233±0.493、3.612±0.364倍.以上基因表达差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:大鼠肝细胞系BRL-3A对TGF-β1促凋亡和细胞周期阻滞作用的敏感性低下,可能与非Smads途径的激活,NF-κB、Bcl-2、c-Myc、MMP9表达的上调有关.
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ω-3多不饱和脂肪酸对大鼠肝切除术后肝脏紧密连接及肝再生的影响
目的:探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)对大鼠肝切除术后肝脏紧密连接和肝脏再生的影响.方法:采用大鼠70％肝切除模型,♂ SD大鼠80只随机分为假手术组、70％肝切除对照组、小剂量ω-3PUFA组(1 mL/kg)和大剂量ω-3PUFA组(2mL/kg).检测术后l、2、3、5d血清总胆汁酸、总胆红素、ALT和白蛋白值.Western blot检测肝脏紧密连接蛋白Occludin,Claudin-3和ZO-1表达及反映肝再生的PCNA表达.激光共聚焦显微镜下观察肝脏紧密连接结构变化.结果:术后1d,与对照组相比较,ω-3PUFA组血清总胆汁酸(181.2±63.9,166.7±68.9 vs228.9±37.7),总胆红素(13.5±8.8,7.6±0.1vs 25.9±15.3)和ALT( 1042.2±179.7,901.4±182.3 vs 2703.9±130.0)均显著降低(P＜0.05),白蛋白(27.2±1.1,29.8±0.9 vs 30.5±1.2)无明显变化.术后2d,与对照组相比较,ω-3PUFA组血清总胆红素(6.8±9.2,6.1±2.0 vs 17.7±1.1)和ALT(452.8±258.5,499.8±155.9 vs1466.5±30.2)均显著降低(P＜0.05),白蛋白(26.8±0.4,27.7±1.0 vs 25.7±0.6)无明显变化.ω-3PUFA组术后1、2、5d肝脏紧密连接(Occludin,Claudin-3,ZO-1)的表达显著增加(P＜0.05),术后1、2、3、5d肝脏再生程度明显增加(P＜0.05).激光共聚焦显示ω-3PUF A组肝脏紧密连接结构恢复.结论:ω-3PUFA可以促进大鼠肝切除术后肝脏紧密连接的稳定高表达,保护其结构,并促进肝再生,保护肝功能.
关键词： ω-3多不饱和脂肪酸 肝脏紧密连接 肝再生 -
骨髓造血干细胞与肝再生的相关性研究
感染、中毒等引起的急慢性肝损伤治疗是临床医学领域的世界性难题,干细胞的研究为肝再生提供了全新的思路.肝再生的细胞学机制涉及肝细胞、肝干细胞和骨髓干细胞等.新近发现骨髓造血干细胞具有向肝细胞转化的潜能,可以在体内外被诱导分化为肝样细胞,移植到肝损伤动物体内可以修复肝组织损伤,这为肝再生研究开辟了新的途径.对骨髓造血干细胞参与肝细胞再生的深入研究,有可能找到肝损伤治疗的有效措施.
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VEGF与肝脏疾病的关系
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),作为一种多功能因子,在组织细胞分化成熟的过程中,发挥着很大的作用.不论是在术后促进肝细胞再生,还是抑制慢性乙型肝炎、肝硬化的发展、肿瘤的诊断与治疗、肝脏移植的排斥反应等方面,VEGF通过与各自组织细胞之间的相互作用,与肝脏疾病的发生、进展和结局密切相关.本文就以肝脏为对象,简要介绍血管内皮生长因子及其在肝脏的再生、硬化、肿瘤及移植等方面的进展情况.
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FXR促进肝脏再生作用的研究进展
肝脏具有再生的能力是众所周知的,他在部分切除或损伤后通过代偿增生的方式能够实现自我再生.法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)是配体激活转录因子的核激素受体超家族中的一员,胆汁酸是FXR的内源性配体.作为一种代谢调节因子,FXR在调节胆汁酸、脂质和葡萄糖的代谢中起到了至关重要的作用.近来,研究发现胆汁酸与其受体FXR结合激活细胞间的信号转导对肝再生起重要作用,胆汁酸/FXR信号通路是正常肝再生所必需的.此外,FXR能促进肝脏损伤后的修复,且FXR的活化能够减轻年龄相关性的肝脏再生缺陷.这些新的发现提示FXR介导的胆汁酸信号在正常肝再生中是一个不可或缺的组成部分,同时也突出了FXR配体对促进部分肝移植或肝癌切除术后的肝脏再生的潜在应用.这篇综述概述了FXR的基本资料和对肝脏再生作用的研究进展.
