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ZnMT对甲基汞致小鼠肝细胞DNA损伤的拮抗研究
目的研究锌金属硫蛋白(ZnMT)对甲基汞致小鼠肝细胞DNA损伤的影响.方法采用单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)技术检测锌诱导机体产生ZnMT及体外给予纯品ZnMT对甲基汞致小鼠肝细胞DNA损伤的影响.结果体内给予小鼠5mg/k的锌剂及在培养基中加入终浓度为0.01μmol/L的纯品ZnMT均可以减轻甲基汞对小鼠肝细胞DNA损伤程度,且损伤程度越轻,拮抗作用越明显.结论 ZnMT可以拮抗甲基汞引起小鼠肝细胞DNA的损伤.
关键词： 锌金属硫蛋白 甲基汞 DNA 单细胞凝胶电泳(SCGE) 拮抗 -
结核分枝杆菌利福平耐药基因突变的研究
目的 评价检测rpoB基因突变在结核分枝杆菌耐利福平(RFP)耐药性测定中的应用价值.方法 采用DNA序列分析法和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)法对91株结核分枝杆菌临床分离株(其中药物敏感株35株,耐RFP或含耐RFP耐多药株56株)rpoB基因核心区域的突变情况进行检测.结果 以结核分枝杆菌H37RV为对照,所有35株药物敏感株的rpoB基因均无突变,用DNA序列分析方法检测56株耐药株中53株发生突变,敏感性为94.6%(53/56),其中常见的突变位点是531位丝氨酸和526位组氨酸.PCR-SSCP检测56株耐RFP分离株中,52株rpoB基因SSCP图谱异常,其敏感性为92.9%(52/56).结论 DNA序列分析对判断结核分枝杆菌耐利福平非常有价值.PCR-SSCP可初步筛选结核分枝杆菌RFP耐药性.
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儿茶素类抗乙型肝炎病毒的效果观察
目的观察儿茶素类抗乙肝病毒和保肝降酶作用.方法用1日龄北京雏鸭制备鸭乙型肝炎病毒(DHBV)模型,设儿茶素类给药组(60、120和240 mg/kg)、阳性药物对照组(Are-AMP)、模型组和阴性对照组.取血清用斑点杂交法(dig标记探针)测DHBV*DNA,用单抗夹心ELISA法测定DHBsAg;检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性观察肝功能变化,并作肝组织病理切片观察形态学改变.结果儿茶素类各给药组鸭血清DHBV*DNA和DHBsAg含量均有降低,与给药前和模型组相比差异有显著性;给药25 d及停药后14 d,鸭血清ALT与AST活性均降低;给药后的肝组织病理变化有明显改善. 结论儿茶素类有抗乙肝病毒、降低转氨酶活性、减轻肝脏病理损伤作用.
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内含子A提高分枝杆菌热休克蛋白65DNA疫苗的免疫原性
目的 探讨以内含子A增强外源抗原在真核细胞中的表达效率及其对DNA疫苗在小鼠中免疫原性的影响.方法 以分枝杆菌热休克蛋白65 (Hsp65)为模式抗原,将其分别克隆入含有内含子A和不含内含子A的真核表达载体pCMV4.0和pVAX1,将表达Hsp65的不同重组质粒瞬时转染人胚肾上皮细胞系293T并免疫接种BALB/c小鼠,应用ELISA分析其所诱导产生的抗原特异性抗体水平及亚类,并以酶联免疫斑点试验(ELISPOT)和胞内细胞因子染色技术(ICS)分析其诱导产生的细胞免疫应答反应.结果 含有内含子A的重组表达质粒pCMV4.0hsp65较之不含内含子A的pVAX1 hsp65在293T细胞中的抗原表达量更高,免疫小鼠6周后诱导产生的抗-Hsp65特异性总IgG抗体水平(3.76 ±0.23对3.15 ±0.22,P＜0.01)和IgG2a/IgG1比值(4.08 ±0.04对2.23±0.12,P＜0.01)也更高,差异有统计学意义；分泌γ-干扰素(IFN-γ)的CD4+T淋巴细胞频率[(2.0±0.058)％对(1.5±0.087)％,t=4.804,P＜0.01]和CD8+T淋巴细胞频率[(0.6±0.058)％对(1.0±0.115)％,t=3.098,P＜0.05]增加,差异有统计学意义,提示其诱导产生了增强的Th1型免疫应答.结论 内含子A可增强分枝杆菌Hsp65在真核细胞中的表达效率并可提高DNA疫苗在小鼠中的免疫原性.
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日本血吸虫DNA疫苗的构建及其保护性免疫
目的制备日本血吸虫裸露DNA疫苗(pBK-Sj14-3-3),观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用.方法以RT-PCR方法扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入真核表达载体pBK;提取、纯化重组质粒pBK-Sj14-3-3,肌肉注射法接种BALB/c小鼠;日本血吸虫尾蚴攻击感染后,剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,观察pBK-Sj14-3-3对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的影响.结果 1%琼脂糖凝胶电泳显示,RT-PCR扩增产物与EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切重组质粒得到的插入片段大小相同,约为765 bp,核苷酸序列测定证实插入片段为Sj14-3-3;免疫注射pBK-Sj14-3-3后,14-3-3组平均每只小鼠获检成虫数为22.9±9.6,与对照组成虫数(31.3±7.3)比较,14-3-3组小鼠平均成虫负荷下降了27%.经5%氢氧化钾消化后,14-3-3组平均每克肝组织虫卵数为16 600±5 904,每对成虫平均虫卵数为4 769±1 156,与对照组平均每克肝组织虫卵数(77 875±4 326)和每对成虫平均虫卵数(9 723±2 074)比较,减卵率为79%,每对成虫减卵率为51%.肝脏虫卵肉芽肿平均直径下降了29%.结论 DNA疫苗pBK-Sj14-3-3构建成功,且在小鼠抗血吸虫感染中有一定的免疫保护作用,是日本血吸虫病潜在的疫苗候选分子.
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新疆库蚊分离的0507JS11病毒为Brevidensovirus新成员
目的 揭示新疆库蚊分离的0507JS11病毒的基本特征,明确其分类地位.方法 对0507JS11病毒进行细胞感染特点观察、负染电子显微镜(简称电镜)观察、基因组核酸电泳检测、全基因序列测定和系统进化分析.结果 0507JS11病毒可以引起Aedes albopictus C6/36细胞病变;完整病毒颗粒呈20面立体对称,直径20 nm,无包膜;病毒基因组为长3977 nt的单股正链DNA,基因组核酸电泳检测呈大小约4 kbp的DNA条带;病毒基因组编码区包括3个开放读码框(open readingframe,ORF),ORF1和ORF2编码非结构蛋白(non-structural protein,NS),ORF3编码衣壳蛋白(capsidprotein,VP);全基因序列系统进化分析显示病毒位于Brevidensovirus内一个独立进化分支.结论 新疆库蚊分离的0507JS11病毒为Brevidensovirus新成员.
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汽油对皮肤细胞DNA、蛋白质及皮脂合成能力的影响
目的研究溶剂汽油对皮肤细胞的损害作用机制.方法采用皮肤角蛋白细胞和成纤维细胞原代培养技术,以及3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)、3H-脯氨酸(3H-Pro)、3H-亮氨酸(3H-Leu)和14C-亚油酸掺入实验方法,观测溶剂汽油对皮肤细胞DNA、蛋白质及皮脂合成能力的影响.结果接触0.01%的溶剂汽油后,角蛋白细胞的3H-TdR、成纤维细胞的3H-TdR和3H-Pro的掺入受到明显抑制,抑制率分别为68.5%、45.1%和40.6%;而在接触0.001%溶剂汽油时,角蛋白细胞的3H-Leu和14C-亚油酸的掺入就已表现出显著性降低,抑制率分别为20.2%和41.2%.皮肤细胞的掺入抑制率与接触溶剂汽油的剂量有关.结论溶剂汽油对皮肤细胞具有一定的毒效应,可干扰皮肤细胞的正常生理代谢过程,影响其DNA、蛋白质及脂质合成能力,使皮肤各项生理功能受到影响,这可能是溶剂汽油造成皮肤损害的机制之一.与成纤维细胞相比,角蛋白细胞更易受到溶剂汽油的影响.
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鲑鱼鱼白DNA对小鼠胸腺作用的差异表达基因筛选
目的探讨鲑鱼鱼白DNA(salmon milt DNA,SMD)对小鼠胸腺增龄性萎缩的作用及作用机制.方法 10月龄雌性BALB/C小鼠按体重随机分为高剂量组(333.33 mg*kg-1*d-1)、低剂量组(166.67 mg*kg-1*d-1 )和对照组(0 mg*kg-1*d-1 ).喂饲5周后,测定胸腺脏器指数;组织切片后以Image-Pro Plus专业图像分析系统(4.0版)进行胸腺细胞计数和皮质厚度测量,所得数据经SAS统计软件分析.应用基因芯片技术在对照组和高剂量组胸腺组织中筛选差异表达的基因片段、RT-PCR鉴定部分片段.结果 SMD对小鼠的体重、胸腺重量和胸腺指数均无影响;高剂量组小鼠的胸腺皮、髓质细胞数量与对照组经统计学分析相比均显著增多;低剂量组的胸腺皮、髓质细胞数量与对照组相比经统计学分析差异均不显著;高、低剂量组的胸腺皮质平均厚度经统计学分析均显著高于对照组;经基因芯片技术初筛出112条差异表达的基因片段;Genebank登录号为Aw209102、U23789、X80232的3条上调表达的基因片段,经RT-PCR鉴定,在高剂量组确实存在上调表达.结论 SMD有通过促进细胞增殖相关基因的表达并同时促进发育、分化相关基因表达而逆转胸腺增龄性萎缩的可能.
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壳聚糖-DNA疫苗预防空肠弯曲菌感染的实验研究
目的 研究壳聚糖-DNA疫苗预防空肠弯曲菌感染的效力.方法 采用壳聚糖分别包裹空肠弯曲菌主要外膜蛋白和黏附蛋白编码基因cadF和peblA的真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-cadF和pcDNA3.1(+)-peblA,制备壳聚糖-DNA疫苗.以未干预、空质粒、单纯壳聚糖组为对照,分别将含60 μg DNA的不同效价疫苗于实验开始的0、7、14和21 d滴鼻免疫BALB/c小鼠,末次免疫后8周采用空肠弯曲菌HS:19重复攻击的方式进行灌胃攻击.攻击后,对该疫苗的临床保护效率和防御空肠弯曲菌感染的效应进行评价.结果 空肠弯曲菌壳聚糖-DNA疫苗滴鼻免疫小鼠后,不仅诱导了高水平的血清IgA和IgG抗体,而且诱导了高水平的黏膜IgA抗体,末次免疫后第4周其P/N值分别达20.58、30.13和6.87,末次免疫后第8周其肠壁SIgA免疫组织化学染色显示呈"+++"反应.并且,其诱导的特异性免疫应答能有效保护免疫后小鼠免遭空肠弯曲菌的感染攻击,其疫苗的有效性高达93.70.结论 壳聚糖-DNA疫苗能有效预防空肠弯曲菌的感染攻击.
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淋病奈瑟菌主要外膜蛋白DNA疫苗的构建及免疫效果观察
目的 克隆淋病奈瑟菌孔蛋白IB型(PIB)基因并构建其真核表达载体pCI-PIB,了解pCI-PIB免疫接种后诱导小鼠特异性体液和细胞免疫反应的效果.方法 采用聚合酶联反应(PCR)扩增淋病奈瑟菌主要外膜蛋白PIB全长基因片段(960 bp),构建表达PIB的真核表达载体pCI-PIB.pCI-PIB肌内注射免疫BALB/c小鼠65只,100μg/次/只,亲和素-生物素-过氧化酶复合物(ABC)法检测其中10只pCI-PIB免疫小鼠肌细胞中PIB的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)和特异性淋巴细胞增殖反应(MTT)法检测余下pCI-PIB免疫小鼠的特异性体液和细胞免疫应答效果.采用玻片凝集试验和补体溶菌试验检测pCI-PIB免疫小鼠血清的抗菌活性.结果 PCR可扩增出预期大小的全长PIB基因片段(960 bp),与报道PIB基因序列(GenBank No:AF090801)比较,重组质粒pCI-PIB中目的 插入片段的核苷酸序列同源性可达99.28%.免疫小鼠的肌细胞能摄取pCI-PIB并表达PIB.pCI-PIB免疫小鼠的血清中可产生较高效价的特异性IgG(1:4000),并产生特异性T细胞增殖反应,增殖指数(4.031)明显高于对照组(1.127)(t=71.71,P＜0.05).pCI-PIB免疫小鼠血清及阴道冲洗液均有凝集淋病奈瑟菌的作用,在补体参与下可杀灭细菌.结论 本研究成功地构建了淋病奈瑟菌PIB基因重组真核表达载体pCI-PIB.pCI-PIB接种小鼠后可有效地引起特异性体液和细胞免疫反应,具有作为淋病奈瑟菌候选DNA疫苗的应用前景.
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由小鼠肺组织病理学改变评价结核DNA疫苗的保护效力
目的评价结核分支杆菌MPT64和ESAT6 DNA疫苗的保护效力.方法将BAL B/c小鼠随机分为5组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、MPT64 DNA疫苗(D)和ESAT6 DNA疫苗(E)免疫小鼠.后一次免疫3周后以结核分支杆菌H37Rv 腹腔内攻击小鼠.攻击5或10周后,观察肺组织病理改变.结果结核分支杆菌攻击5周后,A和B组小鼠肺组织病变表现为以渗出性反应为主的混合性组织反应 ;C组表现为以上皮样细胞肉芽肿和肺泡壁结核性肉芽组织中度增生为主的增殖性组织反应 ;D组3只和E组1只小鼠与A、B组表现相似,D组2只和E组4只小鼠与C组表现相似.结核分支杆菌攻击10周后,A、B和D组肺病变主要表现为由许多泡沫样巨噬细胞、淋巴细胞和少量上皮样细胞组成的结核性肉芽肿及肺泡壁结核性肉芽组织中度增生、增厚;C和E组均表现为上皮样细胞和淋巴细胞组成的结核性肉芽肿及肺泡壁结核性肉芽组织中到重度增生、增厚.各组小鼠均未见干酪样坏死.结论[ HT5"SS〗结核分支杆菌MPT64和ESAT6 DNA疫苗能增强机体免疫力,ESAT6 DNA疫苗的保护效力比MPT64 DNA疫苗强 ,但均未超过卡介苗.
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毒理蛋白质组学与人类健康危险度评价
人类生存环境中存在多种有毒物质,很多相互作用的因素都能对某种环境暴露下的人体健康造成影响.多数毒性反应都涉及到DNA、RNA、蛋白质、代谢产物及它们之间复杂的相互作用.为进行人类健康危险度评价,我们必须了解毒物毒性作用机制及作用方式.
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肠道病毒71型外壳蛋白VP2基因重组表达及活性鉴定
目的 克隆表达肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP2,鉴定重组蛋白免疫活性,为EV71血清学检测试剂和疫苗研究提供依据.方法 利用PCR技术从EV71/Henan/106/2009河南分离株基因组扩增VP2基因,经酶切连接到表达载体pMAL-c2X中,转化大肠杆菌(E.coli TB1);用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,并对重组蛋白进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白分析鉴定其免疫活性;建立ELISA检测EV71 IgM抗体方法,检测手足口病患儿急性期中和抗体阳性血清60份,其中阳性52份,阴性8份;检测临床诊断手足口病患儿急性期血清标本88份.结果 PCR方法扩增的VP2基因长度约为762 bp;经酶切鉴定插入到表达载体的基因片段与预期目的片段相一致;SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为71 500;经大肠杆菌高效表达和纯化获得了重组蛋白EV71-VP2,通过Western blotting分析,该重组蛋白与手足口病患者血清反应产生特异杂交带;建立ELISA检测方法的灵敏度为87％,特异度为83％.在临床诊断的88份手足口病患儿急性期血清标本中,抗EV71-IgM阳性48份,阳性率为55％.结论 本研究成功克隆并构建了EV71 VP2基因高效原核表达系统,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为EV71诊断试剂的研究奠定了基础.
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核酸内切酶改良型彗星实验用于检测遗传毒物致DNA氧化损伤
目的 建立核酸内切酶改良型体外彗星实验方法,并应用该方法检测DNA氧化损伤.方法 分别应用苯并[a]芘[B(a)P,20 μmol/L]、甲基磺酸甲酯[MMS,25 μg/ml]、秋水仙素(COL,5 mg/L)和长春新碱(VCR,0.5 mg/L)处理人支气管上皮(16HBE)细胞.采用噻唑蓝(MTT)实验评估细胞生存率,常规彗星实验和内切酶改良型彗星实验分别检测DNA损伤和氧化损伤,流式细胞术检测细胞内活性氧改变.结果 MTT实验显示,B(a) P、MMS、COL、VCR染毒后可引起较高水平的细胞内活性氧升高,4个组的细胞生存率分别为:(59.69±2.60)％、(54.33±2.81)％、(53.11±4.00)％、(51.43±3.92)％.常规彗星实验及甲酰胺嘧啶-DNA-糖基化(formamidopyrimidine-DNA-glycosylase,FPG)酶彗星实验均检测到B(a)P、MMS、COL、VCR引发的DNA损伤.FPG酶彗星实验中,Olive尾矩改变明显,缓冲液组的B(a) P、MMS、COL、VCR组Olive尾矩分别为22.99±17.33、31.65±18.86、19.86 ±9.56和17.02 ±9.39,FPG酶处理后Olive尾矩分别为34.50±17.29、43.80±10.06、33.10±12.38和28.60±10.53,较缓冲液组分别增加58.94％、38.48％、66.86％和68.21％(t值分别为3.91、3.89、6.66和3.87,P值均＜0.05).相关性分析显示,Olive尾矩与细胞内活性氧也有较好的相关性(r=0.77,P＜0.05).结论 FPG酶改良型彗星实验可以有效的检测遗传毒物所致的DNA氧化损伤改变.
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HIV-1B｀/C、A/E重组亚型pol基因DNA疫苗的构建及其免疫原性研究
目的 构建表达中国B｀/C和A/E重组亚型HIV-1 pol基因的DNA疫苗,并比较其免疫原性.方法 按哺乳动物密码子使用频率对HIV-1 CN54( BVC重组亚型)与AE2f( A/E重组亚型)的pol基因进行序列优化,构建DNA疫苗,通过Western blotting验证其体外表达效率.通过肌肉注射途径免疫小鼠,然后无菌分离小鼠脾淋巴细胞并分别在Consensus B Pol和HIV-I AE2f Pol肽库刺激下,采用酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测抗原特异性IFN-γ的分泌情况,观察比较两个DNA疫苗免疫原性特征.结果 DNA测序结果表明两个pol基因重组质粒构建正确,且两个DNA疫苗均能在体外有效表达.Consensus B Pol肽库刺激后,pSVAE-Pol活化的总T细胞免疫反应为(636±178)个斑点形成细胞数/106个脾淋巴细胞,pSVCN-Pol活化的总T细胞免疫反应为(468±265)个斑点形成细胞数/106个脾淋巴细胞(P=0.412)；HIV-1 AE2f Pol肽库刺激后,pSVAE-Pol活化的总T细胞免疫反应为(1378±611)个斑点形成细胞数/106个脾淋巴细胞,pSVCN -Pol活化的总T细胞免疫反应为(713±61)个斑点形成细胞数/106个脾淋巴细胞(P =0.134).将总T细胞反应按肽池分解后发现,pSVAE-Pol活化的特异性T细胞反应主要集中于Pol1肽池；而pSVCN-Pol除了能够活化针对Pol 1的T细胞反应之外,也可以较好地活化针对Consensus B Pol 2肽池的T细胞反应.结论 两个亚型Pol DNA疫苗中以AE-Pol的免疫原性更强,但其所活化的T细胞表位识别谱不及CN-Pol广泛.HIV-1疫苗可能需将两者结合在一起.
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乙型肝炎病毒外膜大蛋白、DNA、前S1抗原检测用于评价乙型肝炎病毒复制状况的对比分析
目的 对比分析乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)、乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)和前S1抗原(Pre S1-Ag)评价慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中乙型肝炎病毒复制状况的有效性.方法 收集2013年6月至2015年3月在合肥某医院就诊的482例CHB患者的血清标本,采用ELISA法检测HBV-LP、乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)和Pre S1-Ag;实时荧光定量PCR检测HBV-DNA.比较HBV-DNA、HBV-LP、Pre S1-Ag阳性率的差异,采用Spearman秩相关分析HBV-DNA拷贝数的对数值和HBV-LP的吸光度值相关性.结果 482例CHB患者HBV-DNA、HBV-LP和Pre S1-Ag阳性率分别为67.22%(324/482)、73.86%(356/482)和37.34%(180/482)(P<0.01);339例HBeAg阴性CHB患者的3项指标阳性率分别为54.57%(185/339)、64.90%(220/339)和27.73%(94/339)(P<0.01).在HBeAg阴性患者中,185例为HBV-DNA阳性,HBV-LP阳性率为90.81%(168/185),高于Pre S1-Ag[39.46%(73/185)](P<0.01);154例患者HBV-DNA阴性,其HBV-LP阳性率为33.77%(52/154),也高于Pre S1-Ag的13.64%(21/154)(P<0.01).HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性患者HBV-DNA、HBV-LP、Pre S1-Ag阳性率分别为97.04%(131/135)、94.81%(128/135)和60.00%(81/135)(P<0.01);HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性患者3项指标阳性率分别为53.74%(122/227)、63.88%(145/227)和27.31%(62/227)(P<0.01);HBsAg、HBcAb阳性患者3项指标的阳性率分别为55.79%(53/95)、67.37%(64/95)和28.42%(27/95)(P<0.01).HBV-LP的吸光度值随着HBV-DNA拷贝数的对数值增加而呈上升趋势(Spearman秩相关系数=0.908,P<0.01).结论 HBV-LP与HBV-DNA载量对数值之间的相关性良好,可作为HBV-DNA和HBV-M检测的有效补充,较Pre S1-Ag更能反映CHB患者的病毒复制状态.
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燕窝DNA提取方法研究
燕窝为宜药宜膳的珍贵药材,其质量与产地和出产环境密切相关.现有的燕窝鉴别方法可在一定程度上鉴别燕窝与其伪品,但无法确定燕窝的基原和产地等质量问题.DNA分子标记技术可以有效地解决这个难题,即从燕窝中得到高质量的DNA以用于后序的PCR和测序.由于燕窝中存在较多内源及外源性污染,其DNA提取技术的难点主要在于摆脱燕窝中的唾液酸糖蛋白干扰和外源性DNA的污染.本文针对燕窝DNA提取方法的优化进行了研究,采用高盐的SDS裂解燕窝样品,氯仿和CTAB去蛋白,低温异丙醇沉淀DNA技术.成功建立了一种简便、高效、稳定的燕窝DNA提取方法.采用本法得到的燕窝DNA可以成功用于燕窝遗传树的建立,而相关燕窝的基原也从而得到了确定.
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不同产地连翘新鲜果实DN A提取方法和质量评价研究
目的：建立连翘新鲜果实中高质量DNA的提取方法，为从分子水平研究和评价连翘药材质量奠定基础。方法采用改良的CTAB法提取连翘的总DNA，应用琼脂糖凝胶电泳法、分光光度法与PCR法对连翘DNA产率和质量进行检测评价。结果14批连翘药材核酸蛋白仪测定值A260/A280均在1．7～1．9之间，改良CTAB法提取的连翘总DNA浓度较大，干扰较小，较高质量的DNA可进行PCR扩增，1％琼脂糖凝胶电泳之后用紫外成像仪观察结果正常。结论改良CTAB法适合连翘新鲜果实中DNA的提取，方法简单可靠。
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人骨形成蛋白-7成熟肽在大肠杆菌中的高效表达
目的:利用大肠杆菌高效表达人骨形成蛋白-7(human bone morphogenetic protein-7,hBMP-7)成熟肽.方法:将编码hBMP-7成熟肽cDNA的基因片段克隆入受控于PRPL启动子的温控型大肠杆菌表达载体pDH,构建成的重组质粒pDHB-7 m以大肠杆菌DH5a为宿主菌进行温度诱导表达.结果:含重组质粒的工程菌经42℃诱导表达后在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上显现出一条新蛋白区带,分子量约为16 ku,表达量占菌体总蛋白的20%～25%,以包涵体形式存在,经简单纯化处理,得到纯度高于80%的人骨形成蛋白-7成熟肽.结论:hBMP-7成熟肽在大肠杆菌中得到高效表达,为深入研究其生物学活性和临床应用奠定了基础.
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"肾藏精"藏象理论探析
"骨藏精"是中医藏象理论的重要组成部分.本文重点阐述"肾藏精"的"象"表征信息;肾藏精主生长发育、生殖,生髓主骨、通脑,起亟、主外等生理效应;"肾藏精"的神经-内分泌-免疫网络(NEI)、中心法则、DNA、干细胞等生物学基础;"从肾论治"相关疾病细胞、分子水平的生物学机制."肾藏精"如何调控基因差异表达、干细胞定向分化尚需进一步深入探索.
关键词： 肾藏精 神经-内分泌-免疫网络 中心法则 DNA 干细胞
