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新疆库蚊分离的0507JS11病毒为Brevidensovirus新成员
目的 揭示新疆库蚊分离的0507JS11病毒的基本特征,明确其分类地位.方法 对0507JS11病毒进行细胞感染特点观察、负染电子显微镜(简称电镜)观察、基因组核酸电泳检测、全基因序列测定和系统进化分析.结果 0507JS11病毒可以引起Aedes albopictus C6/36细胞病变;完整病毒颗粒呈20面立体对称,直径20 nm,无包膜;病毒基因组为长3977 nt的单股正链DNA,基因组核酸电泳检测呈大小约4 kbp的DNA条带;病毒基因组编码区包括3个开放读码框(open readingframe,ORF),ORF1和ORF2编码非结构蛋白(non-structural protein,NS),ORF3编码衣壳蛋白(capsidprotein,VP);全基因序列系统进化分析显示病毒位于Brevidensovirus内一个独立进化分支.结论 新疆库蚊分离的0507JS11病毒为Brevidensovirus新成员.
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尖音库蚊复组有机磷抗性相关酯酶B2基因杂合型的分子特征
目的 研究自然种群尖音库蚊复组有机磷抗性相关酯酶B2基因EstB2杂合型的分子特征.方法 采集杭州市自然种群库蚊,提取单蚊DNA基因组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法进行抗性相关酯酶的基因分型.对酯酶B2基因Estβ2型蚊虫的PCR产物,进一步选用Bfm Ⅰ内切酶进行酶切,确定酯酶B2基因Estβ2纯合犁及Estβ2杂合型.本次研究共提取207只单蚊DNA,156份PCR样本阳性,阳性率75.36%(156/207).结果 在156份PCR样本阳性,酯酶B2基因Estβ2型占28.20%(44/156);对该基因型进一步分型,其中Estβ2纯合型占90.90%(30/33),EstB2杂合型占9%(3/33);Estβ2杂合型是以Estβ2和一种亚型杂合(Estβ2/Estβ2<'1>)形式存在.结论 建立了在自然种群尖音库蚊复组中酯酶B2基因分型方法,研究证明了杭州自然种群库蚊存在一种有机磷抗性相关酯酶B2基因Estβ2杂合型.
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杭州市库蚊复组抗性相关酯酶Estβ基因类型和频率及动态分布
目的 了解杭州市尖音库蚊复组有机磷抗性相关酯酶基因类型、频率和动态分布,为蚊虫防制提供对策.方法 采用聚合酶链反应-限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)方法进行抗性相关酯酶的基因分型,对2003-2005年杭州市自然种群库蚊酯酶基因的频率进行动态监测.同时结合酯酶淀粉凝胶电泳技术检测抗性酯酶基因表型监测.结果 连续3年用PCR-RFLP法对酯酶等位基因的分子分型结果表明,杭州市存在4种酯酶基因类型,主要存在世界范围内广泛分布的酯酶Estβ11(50%～54%)纯合型,其次是Estβ2(29%～34%)纯合型,Estβ11/β2(5%～10%)杂合型和一种新的EstβN(3.13%)纯合型等位基因型.用淀粉凝胶电泳分析2005年杭州市库蚊种群的抗性酯酶基因表型,主要是Estβ11型(61%),其次是Estα2/β2型(12%),Estα8/β8型(7%),敏感表型(29%).结论 杭州市自然种群尖音库蚊复组存在多种抗性酯酶基因型,2003-2005年来Estβ11型为主,其次是Estα2/β2型,在2005年发现EstβN,是一个新的酯酶基因型,但是比例较低,仅占3.13%.该新的酯酶基因可否引起新的杀虫药剂的抗性,尚有待进一步的跟踪研究.扩增酯酶基因分子分型与抗性酯酶表型,也都表明了一致性.
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中国库蚊属9个亚属的支序分析
本研究以我国已知的库蚊属9个亚属的形态学和生态学资料为基础 , 应用Hennig 86程序软件进行支序分析,探讨我国库蚊属(Culex)各个亚属间的系统发育关系,支序图分析结果表明:我国库蚊属9个亚属均为独立的自然类群,可稳定地分为两个同源类群:第一类群为真黑蚊亚属(Eum)和族角蚊亚属(Lop),具有胸侧板无鳞簇、幼虫孳生环境单一等典型的祖征性状和雄蚊触须短等新征,属于比较古老的类群;第二类群包括新库蚊亚属(Nex)梅蚊亚属(Mai)路蚊亚属(Lut),库状蚊亚属(Cui) 泰蚊亚属(Tha),包蚊亚属(Bar)和库蚊亚属(Cux)等7个亚属,与第一个类群互为姐妹群,其中包蚊亚属和库蚊亚属具有雄蚊尾器构造高度复杂化的共有新征,属于进化的类群.此外,文中还对真黑蚊亚属、新库蚊亚属、梅蚊亚属、库状蚊亚属和泰蚊亚属的分类地位进行了评述和讨论.
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长春市蚊种分布概况
自1995年以来，对长春市区蚊种及其分布情况进行了连续调查。1 蚊种名录与数量分布在不同地区及滋生场所发现蚊虫3属9种，即按蚊属的中华按蚊，库蚊属的淡色库蚊、凶小库蚊、二带喙库蚊、三带喙库蚊、迷走库蚊，伊蚊属的背点伊蚊、刺扰伊蚊、仁川伊蚊；以淡色库蚊、凶小库蚊数量多，其次是中华按蚊、迷走库蚊、背点伊蚊、刺扰伊蚊，而仁川伊蚊、二带喙库蚊、三带喙库蚊数量较少。2 地区分布凶小库蚊、中华按蚊、迷走库蚊、淡色库蚊、背点伊蚊、刺扰伊蚊地区分布很广泛，市内各区皆有所见，尤以淡色库蚊、凶小库蚊为普遍。主要滋生地则中华按蚊、二带喙库蚊、三带喙库蚊多见于池沼、稻田等清水中；凶小库蚊、迷走库蚊、淡色库蚊多见于宅污、积水中；伊蚊属除在室外积水中繁殖外，常在室内缸、罐、地下室积水中发现。3 季节分布迷走库蚊4月份开始出现，随之其他蚊种相继出现，到6月末形成第一小高峰，8月中、下旬形成全年高峰，8月下旬到9月上旬逐渐下降，到10月上旬又形成第二个小高峰，10月中旬以后开始逐渐下降，11月上旬除越冬成蚊外全部消失(表1)。蚊虫消长指数的调查，是以计算每次获得蚊幼虫的数量为标准，所以成蚊出现高峰的时间可能晚10d左右。每个蚊种的季节消长情况见表2。
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上海地区蚊种一新记录(双翅目:蚊科)
2005年7月下旬,笔者在上海市大金山岛采获一批蚊虫标本,经鉴定其中一雌蚊为库蚊属库蚊亚属的小拟态库蚊,目前为止该蚊种在上海地区未曾有过报道,现将该蚊种记述如下.
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天津地区首次发现骚扰阿蚊
天津市自建国以来在辖区范围内共进行2次蚊种调查,第1次为20世纪60年代中期,共发现库蚊属、按蚊属、伊蚊属和曼蚊属4个属;第2次为80年代中期,发现库蚊属、按蚊属和伊蚊属3个属18种,两次调查中均未发现骚扰阿蚊.2005年10月我们采用全自控电脑捕蚊器在天津蓟县官庄镇西大佛村牛棚前多次捕获多只骚扰阿蚊.
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三带喙库蚊和致倦库蚊胸腔接种乙型脑炎病毒减毒活疫苗SA14-14-2株的研究
目的通过实验掌握SA14-14-2乙脑减毒活疫苗株对蚊虫的敏感性,对该疫苗的特性和安全性进行确定.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,将乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株(Nak)悬液做10倍系列稀释,以100～10-9(共10个稀释滴度)胸腔接种两种库蚊,感染后分别于8天和12天每组取10只蚊虫,研磨制成悬液,应用空斑实验方法检测蚊虫体内的病毒存在情况和病毒滴度.结果接种疫苗株后两种库蚊在100～10-3稀释滴度下发生感染,在1014～10-9稀释滴度时未发生感染;被感染的三带喙库蚊高PFU为4.48 logPFU/ml,致倦库蚊为5.63 logPFU/ml.接种野毒株后,致倦库蚊在100～10-5稀释滴度时发生感染,高PFU为6.59logPFU/ml;三带喙库蚊在100～10-4稀释滴度时发生感染,其高PFU为5.74 logPFU/ml.结论蚊虫经胸腔接种SA14-14-2株后,该疫苗病毒能在三带喙库蚊和致倦库蚊体内繁殖.
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2013年石家庄市流行性乙型脑炎暴发疫情的流行病学分析
目的 分析2013年石家庄市流行性乙型脑炎(简称乙脑)暴发疫情患者的流行病学和临床特征,为乙脑疫情的早期预警提供依据.方法 收集本次乙脑暴发疫情患者临床资料和随访资料.于本次疫情暴发期间(2013年10月中旬)选择藁城市、无极县、平山县和井陉县有乙脑病例发生的村进行健康人群血清乙脑抗体检测.收集2003年石家庄市乙脑抗体检测资料作为历史对照.在疫情发生县采用诱蚊灯法进行蚊种监测,收集成蚊进行计数和分类鉴定.结果 2013-08-26至11-05,石家庄市医疗机构共报告乙脑患者121例,其中农村101例(83.5％),市区20例(16.5％);男女性别比为0.92∶1;20岁及以上患者占全部患者的79.3％ (96/121);职业以农民为主,共73例(60.3％).患者发病后中位就诊时间为2d,发病后中位诊断时间为17 d.94例采集血清进行乙脑病毒IgM抗体检测,其中阳性79例,阳性率为84.0％.50.0％及以上的患者表现有急性起病、发热、精神萎靡、意识障碍.随访到的105例患者有后遗症35例(33.3％),死亡11例,病死率为10.5％.6例(5.0％)有乙脑疫苗接种史.2013年石家庄市健康人群乙脑抗体阳性率为13.4％ (114/850),低于2003年的30.9％(122/395)(P＜0.05);其中2013年10岁～及20岁～健康人群乙脑抗体阳性率低于2003年(P＜0.05).2013年监测到的641只蚊中,淡色库蚊600只(93.6％),骚扰阿蚊25只(3.9％),帕氏按蚊16只(2.5％).结论 2013年石家庄市乙脑暴发疫情呈现成年人患者增多的特点,后遗症和死亡风险较高,健康人群乙脑抗体阳性率较低.需密切关注人群抗体水平、蚊媒密度变化,加强乙脑疫情监测,及早发现流行态势以有效控制疫情.
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昆虫生长调节剂S-31183对淡色库蚊生殖和生活习性影响的实验研究
目的研究昆虫生长调节剂S-31183在实验室条件下对淡色库蚊成虫吸血和产卵及卵的孵化的影响.方法在实验室中,用S-31183作用于雌、雄成虫后,观察其对成虫吸血、产卵和卵孵化的影响.结果成虫以分子质量数低于0.1×10-9浓度的S-31183饲喂后,雌虫产卵率和对照组差异无显著性,在浓度达 1×10-6时,雌虫产卵增加,亚致死量的S-31183作用幼虫后,发育为成虫的雌虫产卵率下降,虫卵孵化率也较对照组降低.结论高剂量的S-31183影响成虫的产卵和卵的孵化.
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广东省班氏丝虫病防治后期人群和媒介感染情况观察
目的探索人群微丝蚴率降至1%以下,终止防治措施后人群和媒介感染情况.方法终止防治措施后,1988～2000年在原广东省班氏丝虫病流行区抽查30%以上流行镇,重点村居民夜间采血120 μl血检微丝蚴,在血检点捕集致倦库蚊解剖,观察自然感染情况;选定10个县原丝虫病流行较严重的村,纵向观察人群和媒介感染情况.结果 1988年人群微丝蚴率为0.33%(575/172 631),此后人群微丝蚴率和致倦库蚊自然感染率逐年下降,1997年后无微丝蚴血症者;1992～2000年共解剖致倦库蚊248 115只,无发现自然感染幼丝虫;1988～1995年纵向观察,1988年人群微丝蚴率和蚊自然感染率分别为0.14%和0.07%,1994年后两者均为0.结论班氏丝虫病经防治后,人群微丝蚴率降至1%以下则可阻断传播,10年后人群微丝蚴血症消失.
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白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列测定与分析
[目的] PCR法扩增与测定白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞内共生菌Wolbachia 16S rRNA序列,分析其种系发生关系及传播方式.[方法] 从单只雌蚊中提取DNA,PCR法扩增16S rRNA 序列,扩增产物进行克隆及测序.[结果] 从白纹伊蚊和致倦库蚊分别扩增出Wolbachia 16S rRNA序列,并克隆入pGEM-T载体,测序证明两序列长度分别为897 bp.[结论] 成功克隆了白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列.测序和同源性分析表明,它们之间的同源性为99.9%,提示Wolbachia在白纹伊蚊和致倦库蚊可能存在水平传播的方式.
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蚊虫细胞色素P450基因系列研究
报告中山医科大学寄生虫学教研室医学昆虫学室近5年来有关蚊虫细胞色素P450基因(CYP450)系列研究结果,包括:①通过简并引物PCR分别从致倦库蚊、白纹伊蚊及中华按蚊中获得3个、2个、2个CYP4家族成员基因片段;通过简并引物PCR及RT-PCR从白纹伊蚊中获得16个CYP6家族成员基因片段;②利用cDNA末端快速扩增(RACE)法获得了白纹伊蚊CYP6家族3个新的全长cDNA序列及7个超过其全长一半以上的cDNA序列.GenBankaccessionnumber分别为AF283836-AF283838(全长cDNA序列)和AF284782-AF284783(非全长cDNA序列),被国际P450命名委员会正式命名为CYP6N3v1-v3(全长cDNA序列)和CYP 6N3v4、CYP6N4v1-v6,并证实这些新基因同时存在于白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株及敏感株中;③运用基因步移方法从白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株中扩增出CYP6N3上游3 076 bp调控序列;④对白纹伊蚊CYP 6N3、CYP6N4非翻译区序列功能分析显示:昆虫CYP450与其它真核mRNA翻译起始及终止机制相似,但具有多态性的特点;⑤对白纹伊蚊CYP6N3上游启动子区序列特征与功能分析显示:蚊虫中CYP450转录起始存在着复杂性;⑥证实蚊虫中CYP6存在多样性,并分析讨论了此种多样性形成的可能机制;⑦分析讨论了蚊虫细胞色素P450 CYP6家族分子进化机制;⑧阐明了下一步研究的目标.
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环带库蚊ISSR-PCR反应体系的建立及优化
目的:建立及优化适宜环带库蚊(Culex annulus)ISSR-PCR的反应体系,为环带库蚊遗传多样性研究奠定技术基础.方法:选用引物IS01,应用正交试验及单因素试验对的ISSR-PCR反应体系中的BSA、模板DNA、Mg2+、引物、dNTP、Taq DNA聚合酶浓度6个关键因素进行优化筛选.结果:20 μL反应体系中佳因素为BSA 2.0 g/L、DNA模板1.00×10-4mg/L、Mg2+2.0 mmol/L、引物1.0 μmol/L、dNTP0.15 mmol/L、TaqDNA聚合酶0.20 5U/μL.结论:优化后的反应体系适于环带库蚊的ISSR-PCR扩增.
关键词： 库蚊属 ISSR-PCR反应体系 遗传多样性 -
致倦库蚊Cecropin基因克隆及序列分析
目的:克隆致倦库蚊Cecropins基因序列,并进行生物信息学分析.方法:选取致倦库蚊成虫,提取其DNA并以此为模板,设计一对引物,采用PCR技术扩增出Cecropins基因,应用相关生物信息学软件分析其序列.结果:克隆出致倦库蚊Cecropins基因,并测定其扩增产物序列,经同源对比确认,进行了相关序列分析.结论:获得致倦库蚊Cecropins基因序列,基因长度为259 bp,与尖音库蚊一致性为97%.
关键词： 库蚊属 基因cecropin 基因顺序 -
中国库蚊雌性尾器的分类学研究
目的:探索我国库蚊雌性尾器的分类学价值.方法:常规方法制备我国库蚊属52种雌性尾器玻片标本,并分析比较.结果:制定了我国库蚊属亚属检索表.结论:雌性尾器可作为我国库蚊属的亚属和某些种团的分类特征.
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致倦库蚊幼虫中枢神经系统的乙酰胆碱酯酶定位观察
目的:观察致倦库蚊幼虫中枢神经系统结构.方法:用硫代胆碱整体染色法定位乙酰胆碱酯酶.结果:致倦库蚊幼虫中枢神经系统是由脑和位于消化道腹面的腹神经索构成.脑较发达,包括前脑、中脑和后脑;腹神经索包括食道下神经节,3对胸神经节和8对腹神经节.结论:乙酰胆碱酯酶组化定位法可清楚显示致倦库蚊幼虫的神经系统结构.
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大链壶菌对三属蚊幼虫的比较灭蚊实验
目的:观察并比较大链壶菌对致倦库蚊、白纹伊蚊和中华按蚊幼虫的实验感染和杀灭情况.方法:在相同实验条件下用生物测定的方法分别观察、比较三属蚊幼虫实验组及对照组的死亡率和校正死亡率,同时比较蚊幼虫被大链壶菌感染后6、24、48、72 h各时段的死亡率.结果:平均死亡率致倦库蚊和白纹伊蚊幼虫实验组明显高于对照组,而中华按蚊幼虫两组无明显差别.三属蚊幼虫的平均校正死亡率两两有差别.平均死亡率致倦库蚊幼虫以感染后6、24、48 h较高,白纹伊蚊幼虫以感染后48 h较高.未观察到中华按蚊幼虫被大链壶菌感染的征象.结论:致倦库蚊和白纹伊蚊幼虫对大链壶菌易感染,中华按蚊幼虫不易感染.
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我国三带喙库蚊的随机扩增多态性DNA研究
目的: 探讨我国4省三带喙库蚊的遗传多态性.方法: 分别用8种随机引物对采自我国广东、福建、海南和贵州的12只三带喙库蚊的基因组DNA进行聚合酶链反应(PCR)扩增,1.5%琼脂糖凝胶电泳检测结果.用PHYLIP软件包中的NEIGHBOR程序对随机扩增多态性DNA数据进行聚类分析,然后用软件TREEVIEW绘制出系统发育树.结果: 8种随机引物共扩增出RAPD片段270个,RAPD谱带均为单型.系统发育树显示,海南的2只三带喙库蚊聚为一枝,而其余标本中同一省份的标本均未能聚为独立的分枝.结论:三带喙库蚊个体间的遗传变异较大;不同省份三带喙库蚊的变异具有交叉.
关键词： 库蚊属 聚合酶链反应 聚类分析 三带喙库蚊 随机扩增多态性DNA -
三地理株白纹伊蚊与致倦库蚊贵州株蛋白质分析
目的:比较海南、北京、贵州三地理株白纹伊蚊和贵州株致倦库蚊蛋白质含量的差异.方法:用凯氏定氮法测定羽化后第5天白纹伊蚊和致倦库蚊(雌蚊)蛋白质含量,并比较地理株和种间的差异.结果:海南株蛋白质分别与北京株及贵州株蛋白质有显著差异(P＜0.01),但北京株与贵州株之间无显著差异(P＞0.05);贵州株和北京株白纹伊蚊与贵州株致倦库蚊之间无显著差异(P＞0.05);海南株白纹伊蚊与贵州株致倦库蚊之间有显著差异(P＞0.01).结论:不同地理株白纹伊蚊蛋白质含量可有差异,同一地区的不同蚊种之间蛋白质可无差异.
