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RNA干扰技术失活Rad51基因增加肿瘤细胞放射敏感性的研究
目的 研究RNA干扰技术(RNAi)能否失活Rad51基因,从而使肿瘤细胞的放射敏感性增加.方法 应用Psilencer U6-1.0质粒为载体在人纤维肉瘤HT1080细胞内表达短链干扰RNA(siRNA).RNAi效应在蛋白水平用Western blot方法评价;在细胞水平用成克隆分析及放射诱导的凋亡来评价.结果 所选3个靶序列均起到失活Rad51的作用,放射诱导的Rad51高表达也能被RNAi抑制.成克隆分析表明实验组存活分数在照射2、4、6、8 Gy后,分别是对照组的80.5%、78.6%、69.0%、57.7%(P=0.020);实验组放射诱导的凋亡在放射后0、6、18、24、48 h分别是对照组的1.03、1.43、1.19、1.29、1.33倍(P=0.017).结论 RNAi技术能够使内源性Rad51基因及放射诱导的Rad51高表达失活,从而使人纤维肉瘤HT1080细胞放射敏感性增加;RNAi技术是一种新的研究基因功能和放射增敏的方法.
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线粒体DNA影响细胞的放射敏感性
目的 了解细胞接受辐射后，线粒体DNA(mtDNA)对细胞放射敏感性的影响。 方法 利 用缺乏mtDNA的细胞株(ρ0 细胞)、携带变异mtDNA 的细胞株(syn细胞)和携带正常mt DNA 的细胞株(ρ+ 细胞)进行体外实验研究。3种细胞株经不同剂量伽玛射线照射后，采用集 落 形成实验和流式细胞术等方法，获得3种细胞株的存活曲线(应用LQ模型)，并分析其细胞周 期的变化和比较各种细胞之间凋亡的差异。 结果 3种细胞株的存活曲线表明，ρ0 细胞 株比其它2种细胞株显示对射线有较强的抵抗(F=10.45, P=0.022)。2、5和8?Gy照射之后，ρ0 细胞株的细胞凋亡明显少于其它2种细胞株(F=14.29, P=0.0007; F=4.80, P=0.0293;F = 4.98,P=0.0154)。3种细胞株被照射后细胞周期的变化不明显。 结论 mt DNA可能是影响细胞放射敏感性的一个重要因素。
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改良"彗星"分析法检测实体肿瘤放射敏感性的方法学研究
目的 改进和完善改良"彗星"分析法以更好地用于检测实体肿瘤的放射敏感性.方法 门诊活检标本制成单细胞悬液,冰上照射后立即铺胶制板,在裂解液中裂解50 min,漂洗后进行细胞电泳20 min.PI染色后在荧光显微镜下采图并用专用软件进行图像分析.每例样品均设对照(包括外参对照和自身对照)+m5 Gy照射,并对活检样品的正常细胞和肿瘤细胞进行分类采图.观察指标为细胞DNA含量和尾力矩.结果 影响实验室测定结果与临床肿瘤放射反应相关性的因素主要有:(1)取材较表浅样品中仅有淋巴细胞而无肿瘤细胞,从而导致实验室测定结果与临床肿瘤放射敏感性的吻合性下降;(2)样品中坏死细胞较多,使本底增高,是影响放射敏感性分析的重要因素;(3)增设淋巴瘤细胞作为外参对照可对实验系统误差进行校正,是质量控制不可缺少的环节;(4)对活检样品中正常细胞和肿瘤细胞进行分类采图能提高临床与实验室检测结果的吻合性.结论 实验同时设置内、外参对照和对样品中肿瘤细胞和正常组织细胞进行分类采图,能不同程度提高实验室检测结果与临床肿瘤实际放射反应的吻和性.
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荧光原位杂交法预测肿瘤放射敏感性的初步研究
目的 研究应用荧光原位杂交（FISH）方法 预测人肿瘤细胞放射敏感性及其应用的 可行性。 方法 用3种放射敏感性不同的人肿瘤细胞株［鼻咽鳞癌（CNE）、肺腺癌（SPC）和 乳腺癌（MCF-7）］，常规克隆形成方法测定不同剂量照射后的存活分数和照射后24?h经 秋 水仙素阻断细胞分裂周期，低渗、固定、常规染色体制片后，采用8号染色体涂染探针和FIS H方法测定肿瘤细胞8号染色体诱导的畸变量。 结果 2、4、6?Gy照射后24?h，CNE、SPC和M CF-7细胞诱导生成的残存染色体畸变能够反映细胞的放射敏感性，所有细胞株诱导染色体 畸 变与细胞存活分数分别存在良好相关性（r=0.98），3种细胞株SF2 和相应残存染色体畸变也存在良好相关性（r=0.96）。 结论 采用FISH方法计数照射诱导的残存染色体畸变，可以预 测肿瘤细胞的放射敏感性差异并具有重要的临床意义。
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siRNA抑制肺腺癌细胞DNA-DPKCS表达与放射敏感性关系研究
目的 探讨稳定表达的小干扰RNA(siRNA)抑制DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-DPKCS)表达对非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期及放射敏感性的影响.方法 构建DNA-DPKCS-siRNA莺组质粒转染肺腺癌细胞A549.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,成克隆实验测定细胞存活曲线.结果 建立了与A549细胞同源的DNA-DPKCS低表达细胞系549pRNA-DNA-DPKCS、阴性对照549pRNA-C细胞、空白549pSUPER细胞.与A549细胞相比549pRNA-DNA-DPKCS细胞的DNA-DPKCS mRNA(0.110:1.000;F=80.55,P<0.01)、蛋白表达水平(0.870:2.967;F=63.96,P<0.01)以及DNA-DPKCS活性(0.004:0.266;F=51.62,P<0.01)均显著降低.549pRNA-DNA-DPKCS细胞2 Gy存活分数、平均致死剂量、亚致死性损伤剂量均较A549细胞明显降低(0.25:0.76;F=996.86,P<0.01;1.42:1.62;F=17.41,P<0.05;0.06:1.00;F=68.92,P<0.01).DNA-DPKCS表达受抑后549pRNA-DNA-DPKCS细胞较A549细胞S期和G_2期细胞比例明显减少(24.5%:35.5%;F=4.83,P<0.05和10.7%:11.0%;F=32.04,P<0.01).结论 抑制DNA-DPKCS表达可提高肺腺癌细胞A549的放射敏感性,同时调控细胞周期时相分布.
关键词： 脱氧核糖核酸依赖蛋白激酶催化亚基 核糖核酸干扰 细胞系 肺肿瘤 放射敏感性 -
增殖细胞核抗原和毛细血管间距与宫颈癌放射敏感性的关系
目的 探讨肿瘤内毛细血管间距（ICD）和增殖细胞核抗原（PCNA）与宫颈癌放射敏感性的关系。方法 采用回顾性研究的方法，运用免疫组织化学技术和计算机图像分析方法测定112例单纯放射治疗并随访5年以上宫颈癌患者的PCNA表达和ICD值。结果 本组所有病例均有PCNA表达，PCNA指数分布在0.241～0.903之间，平均为0.542；ICD值在58.47～243.62?μm之间，平均为180.42?μm。结论 本研究表明 PCNA的表达和ICD值与宫颈癌的放射敏感性有关，为寻找能预测宫颈癌放射敏感性的肿瘤标志物、指导临床治疗方案的选择提供了初步的实验依据。
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EGFR反义重组腺病毒联合放射线照射乳腺癌的初步实验研究
目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)反义重组腺病毒AdE5联合放射线对乳腺癌细胞移植瘤的作用.方法 人乳腺癌细胞MDA-MB-231接种于裸鼠右侧背部皮下形成肿瘤后,以EGFR反义重组腺病毒AdE5联合放射线处理,观察其对肿瘤体积、瘤内Ki-67表达、微血管生成(MVD值)的影响.结果 AdE5瘤内注射可抑制肿瘤生长,AdE5联合照射组肿瘤相对生长率明显低于其他对照组(P＜0.01).免疫组化分析发现,AdE5联合放射线后肿瘤内Ki-67的表达及MVD也受到显著抑制(P＜0.01).结论 在此乳腺癌模型上,EGFR反义重组腺病毒AdE5可有效地抑制乳腺癌细胞的在体肿瘤生长,并可以提高乳腺癌细胞移植瘤的放射敏感性.
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食管腔内超声检查预测食管癌放射敏感性的临床研究
目的 探讨食管腔内超声检查食管癌放疗中肿瘤消退程度能否作为临床预后疗效观测指标,为临床判断不同放射敏感性提供依据.方法 接受首程放疗的51例食管癌患者入组,其中单纯放疗35例,同步放化疗10例,术前放疗或化疗6例.放疗前和放疗38～40 Gy时行食管腔内超声检查,同时测量肿瘤大直径,并根据其变化程度分为缓解组(直径缩小≥50%)和稳定组(直径缩小<50%).结果 随访率为100%.全组中位生存期为24.3个月,2年生存率为47%.缓解组和稳定组2年生存率分别为69%和37%(χ~2=5.78,P=0.016),2年无进展生存率分别为59%和29%(χ~2=3.97,P=0.046).35例单纯放疗的缓解组(11例)和稳定组(24例)2年生存率分别为60%和20%(χ~2=5.84,P=0.016),2年无进展生存率分别为44%和10%(χ~2=4.20,P=0.040).术前放疗或化疗6例中5例为缓解组,其中4例有重度放疗反应,1例有中度放疗反应;1例为稳定组,仅有轻度放疗反应.结论 食管腔内超声检查在食管癌放疗前和放疗中检测肿瘤消退程度是临床有效观测指标之一,对预后判断有明显指导作用.
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"彗星"分析法检测人癌裸鼠移植瘤的放射敏感性
目的探讨"彗星"分析法应用于人实体肿瘤放射敏感性检测的可能性.方法应用"彗星"分析法,以尾力距之比(RTM)作为终指标,检测人肺腺癌、人食管鳞癌和人鼻咽鳞癌等3种人癌裸小鼠移植瘤的放射敏感性.裸小鼠移植瘤组织被消化并稀释成细胞浓度为4×104ml的单细胞悬液后,分成对照组(0Gy)和不同剂量照射组,照射组分别给予2、5、10和15Gy的6MVX射线的冰上照射,照射后立即进行"彗星"分析.结果3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未照射时(0Gy)的尾力矩(TM)差异有显著性意义(F=9.11,P＜0.01).不同剂量(2、5、10和15Gy)照射后,3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未做校正时的TM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为:肺腺癌＞食管鳞癌＞鼻咽鳞癌,显然与临床一般印象不符;而经与对照组进行"本底"校正后的RTM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为:食管鳞癌＞鼻咽鳞癌＞肺腺癌,则符合临床一般印象.结论①应用"彗星"分析法检测实体肿瘤的放射敏感性,尾力矩必须进行"本底"校正,即扣除对照组本底误差后的尾力矩才能很好地反映实体肿瘤的放射敏感性差异.②"彗星"分析法可用于检测人体肿瘤组织的放射敏感性.
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不同p53功能状态鼻咽癌细胞株的放射生物学特性
目的探讨鼻咽癌细胞不同p53功能状态及其放射生物学特性之间的关系.方法采用脂质体介导的转染方法将携带野生型p53基因的真核表达质粒pC53-SN3,空载体质粒pCMV-Neo-Bam分别转染到鼻咽癌细胞CNE1、CNE2中.p53功能检测技术明确细胞转染p53基因前后的p53功能状态.成克隆实验测定细胞存活分数.采用单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线,求出放射生物学参数D0、Dq、N和αβ、α/β、SF2值.结果转染野生型p53基因后鼻咽癌细胞获得正常p53功能.CNE1-pNeo和CNE1-wtp53细胞的D0值分别为1.17、1.08Gy;Dq值分别为2.25、1.21Gy;α值分别为0.13、0.29Gy-1;SF2值分别为0.765、0.326.CNE2-pNeo和CNE2-wtp53细胞的D0值分别为0.92、0.84Gy;Dq值分别为1.45、1.04Gy;α值分别为0.13、0.76 Gy-1;SF2值分别为0.675、0.156.CNE1、CNE2细胞转染野生型p53基因后,D0、Dq、SF2值均减小,α值增大.结论野生型p53基因转染可以提高p53功能缺陷的鼻咽癌细胞的放射敏感性.
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Rb94对人肺腺癌细胞系A549放射增敏作用的实验研究
目的 构建人视网膜母细胞瘤基因(Rb94)真核表达载体,观察其对人肺腺癌细胞系A549的放射增敏作用并探讨其机制.方法 构建重组表达质粒pIPES-Rb94,经脂质体转染A549细胞、G418筛选获得稳定转染的细胞系.细胞计数法绘制生长曲线、计算细胞倍增时间;实时RT-PCR检测hTERT、Bcl-2mRNA的表达;成克隆实验检测pIRES-Rb94对A549细胞放射敏感性影响,计算放射增敏比(SER);流式细胞仪分析细胞周期.结果 成功构建pIRES-Rb94质粒,转染A549细胞后获得稳定转染细胞系pIRES-Rb94-A549.与A549细胞相比,pIRES-Rb94-A549细胞倍增时间延长(31.5h:39.5 h;t=5.15,P<0.01);hTERT、Bcl-2 mRNA表达下降(0.02:1.00;t=18.99,P<0.01;0.01:1.00;t=13.73,P<0.01);G2+M期细胞增加(35.91%:4.53%;t=36.78,P=0.00),G0+G1期和S期细胞减少(47.02%:74.07%;t=11.71,P=0.00和17.07%:22.32%;t=2.30,P<0.05);由D0值计算的SER为1.30.结论 Rb94对A549细胞具有明显放射增敏作用,其机制可能是G2+M期阻滞作用以及下调hTERT、Bcl-2 mRNA表达,并可能通过调节细胞周期来影响细胞增殖.
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锰超氧化物歧化酶和E-钙黏蛋白在鼻咽癌组织中的表达及意义
目的 观察锰超氧化物歧化酶(MnSOD)和E-钙黏蛋白(E-Cad)在鼻咽癌组织中的表达及其生物学意义.方法 应用免疫组织化学S-P法,对60例鼻咽癌组织中MnSOD及E-Cad的表达水平进行检测和评价.结果 MnSOD强阳性表达率全组的为47%(28例),淋巴结阳性者(51例)中的为49%(25例),淋巴结阴性者(9例)中的为33%(3例)(x2=0.76,P=0.382).E-Cad强阳性表达率全组的为47%(28例),淋巴结阳性者中的为43%(22例),淋巴结阴性者中的为78%(7例)(x2=3.69,P=0.047).随T、N分期增加MnSOD表达水平上升,且仅与转移淋巴结大小呈正相关(r=0.46,P=0.002),与淋巴结转移区域无关(r=0.22,P=0.116);MnSOD高表达时放射敏感性低、疗效差.E-Cad表达越低N分期越晚,其表达水平与淋巴结转移区域呈负相关(r=0.33,P=0.020),但与T分期、转移淋巴结大小及放射敏感性无关(r=-2.19,P=0.093;r=-0.07,P=0.623;r=-0.18,P=0.170).多因素分析显示MnSOD、E-Cad表达水平升高与预后生存有关(x2=4.45,P=0.035;x2=5.12,P=0.024).结论 MnSOD高表达可能促进肿瘤生长,降低鼻咽癌放射敏感性.ECad高表达可抑制癌细胞淋巴转移,但与肿瘤生长、浸润无关.MnSOD、E-Cad表达水平有可能影响鼻咽癌预后.
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靶向沉默ATM基因对人肺腺癌A549细胞放射敏感性影响
目的 探讨质粒介导RNA干扰抑制ATM基因表达对人肺腺癌A549细胞放射敏感性影响.方法 构建ATM基因小分子干扰RNA (siRNA)真核表达质粒pSilencer2.1-ATM并转染A549细胞(阳性组),转染pSilencer2.1-nonspecific质粒为阴性组,未转染为对照组.RT-PCR和蛋白印迹法分别检测ATM基因mRNA及蛋白表达,细胞克隆形成实验观察细胞放射敏感性变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果 成功构建了ATM基因siRNA真核表达质粒.RT-PCR和蛋白印迹法证实阳性组细胞ATM基因表达下调,阳性组、阴性组的放射增敏比(D0值比)分别为1.50、1.01,流式细胞仪检测显示阳性组G1、G2 +M期细胞比例减少[51.27％∶ 61.85％ (P =0.012)、6.34％∶ 10.91％(P=0.008)],细胞凋亡率则高于对照组、阴性组[49.31％∶ 13.58％ (P=0.000)、49.31％∶ 13.17％(P=0.000)].结论 ATM基因沉默可增加A549细胞的放射敏感性,其机制可能与细胞周期变化及凋亡有关.
关键词： 毛细血管扩张共济失调突变基因 RNA干扰 细胞系 肺腺癌 放射敏感性 -
RNA干扰抑制UHRF1基因表达对食管癌细胞放射增敏作用的研究
目的 研究RNA干扰抑制UHRF1表达对食管癌细胞系(TE-1)放射敏感性的影响及作用机制.方法 以慢病毒感染方法将UHRF1基因的短发夹状RNA (shRNA)转入TE-1细胞,并分为未转染组、转染NC-shRNA组、转染UHRF1-shRNA组,前二者为对照组.采用RT-PCR和蛋白印记法检测转染前后细胞UHRF1的mRNA和蛋白表达,成克隆法、流式细胞术及蛋白印记法检测转染UHRF1-shRNA联合X线照射对TE-1细胞放射敏感性、周期、凋亡及DNA损伤标识蛋白γ-H2 AX的影响.结果 转染UHRF1-shRNA后TE-1细胞UHRF1的mRNA和蛋白表达受抑(0.11、0.96、0.98,F=124.21,P=0.000;0.10、0.89、0.94,F=125.25,P=0.000).X线照射后转染UHRF1-shRNA组放射增敏比分别为1.53(D0值比)和1.95(Dq值比).X线照射可引起TE-1细胞G2+M期阻滞、凋亡率和γ-H2 AX表达增加,与对照组相比转染UHRF1-shRNA组照后24的G2 +M期阻滞显著降低(F=500.15,P=0.000)、凋亡率和γ-H2 AX残存量明显升高(F=100.10、61.00,P=0.000、0.000).结论 RNA干扰可有效抑制TE-1细胞UHRF1表达,增强细胞放射敏感性,其增敏机制与周期调控、凋亡及DNA损伤修复有关.
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敲降HER-2和TOP2A增强乳腺癌细胞放射敏感性研究
目的 研究HER-2和TOP2A对乳腺癌细胞系SK-Br-3的放射敏感性影响,并探讨二者联合作用,为临床研究奠定基础.方法 分别构建表达HER-2或TOP2A siRNA的重组质粒,并使用lipofectamine 2000将其转染至乳腺癌细胞SK-Br-3中,敲降HER-2和TOP2A的基因表达.2d后利用蛋白印迹法检测干扰效果,利用流式细胞仪和MTT法分别检测放射处理后细胞凋亡和增殖变化,并检测凋亡和增殖相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Ki-67表达变化.克隆形成实验检测放射敏感性.结果 在乳腺癌细胞SK-Br-3中敲降HER-2和TOP2A的表达,放射处理后细胞凋亡率升高,增殖率降低.凋亡标志蛋白活化的Caspase-3表达升高,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达降低.细胞增殖标志蛋白Ki-67表达降低.同时敲降HER-2和TOP2A两个基因时促进凋亡和抑制增殖及克隆形成的作用增强,表明这两个基因存在协同效应.结论 敲降HER-2和TOP2A基因在乳腺癌细胞SK-Br-3中的表达后,乳腺癌细胞的放射敏感性提高,细胞凋亡率升高,细胞增殖率降低,克隆形成率降低,且2基因存在协同效应,作用机制可能与Caspase-3、Bcl-2有关的凋亡通路及细胞增殖蛋白Ki-67有关.
关键词： HER-2基因 TOP2A基因 SK-Br-3细胞系 放射敏感性 -
修复基因XRCC3和HOGG1单核苷酸多态性与食管鳞癌放射敏感性相关性研究
目的 研究DNA修复基因X线交错互补修复组-3(XRCC3)、人类8-羟基鸟嘌呤糖苷酶-1(HOGG1)单核苷酸多态性与食管鳞状细胞癌放射敏感性关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法 检测199例食管鳞状细胞癌患者外周血XRCC3、HOGG1基因单核苷酸多态性,结合临床资料分析XRCC3 Thr241 Met、HOGG1 Ser326拍Cys单核苷酸多态性与放疗近期疗效和不良反应的关系.结果 199例食管鳞癌患者根治性放疗有效率为81.4%,其中携带XRCC3 Thr/Met基因型的高于rI'IIr/,I'hr型的(91.5%:77.1%,x.=5.67,P=0.017),携带HOGGlSet/Ser、Ser/Cys、Cys/Cys型的相似(74.1%、84.2%、83.9%,X2=2.64,P=0.268).携带XRCC3 Thr/Met基因型的放射性食管损伤发生率高于,Thr/Thr型的(35.6%:20.O%,X2=5.44,P=0.020),携带HOGG1 Ser/Ser、Ser/Cys、Cys/Cys型的相似(24.1%、24.6%、25.8%,0=0.03,P=0.984).Logistic多因素分析显示XRCC,基因多态性是影响放疗近期疗效及急性放射性食管损伤发生的独立因素(X2=16.12、4.43,P=0.009、0.035),而HOGG1基因多态性与其无关(X2=3.74、0.58,P=0.053、0.445).结论 XRCC3 Thr/Met基因单核苷酸多态性与食管癌放射敏感性相关,有可能作为预测放疗近期疗效和不良反应的参考指标之一.
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siRNA干扰EGFR表达对食管鳞癌和腺癌细胞放射敏感性影响
目的 探讨siRNA干扰EGFR表达对食管鳞癌和腺癌放射敏感性的影响.方法 以食管鳞癌、腺癌细胞系ECa-109、OE-19作为研究对象.脂质体转染化学合成的不同EGFR-siRNA和阴性-siRNA,通过RT-PCR及蛋白印迹法检测转染前后EGFR表达情况,CCK8法分析转染对细胞增殖活性影响.设ECa-109、OE-19细胞空白对照组(O1、O2组)、单纯照射组(R1、R2组)及EGFR-siRNA照射组(E-R1、E-R2组),单次照射0、2、4、6、8 Gy.克隆形成实验计算细胞存活分数及放射增敏比(SERD0值比),流式细胞仪检测EGFR-siRNA联合放射对细胞周期分布和细胞凋亡率影响,单次照射6 Gy.结果 EGFR-siRNA可明显下调两种细胞EGFR表达,且转染对细胞增殖抑制率＜5％(4.9％、4.5％).克隆形成实验结果显示E-R1、E-R2组细胞SF值低于O1、O2组,SERDo值比分别为1.40、1.01.流式细胞术结果显示E-R1组比E-R2组照后G2+M期比例增加、S期比例下降(P=0.016、0.028),细胞凋亡率也增高(P=0.007).结论 与食管腺癌细胞相比,干扰EGFR表达显著提高了食管鳞癌细胞的放射敏感性.
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小干扰RNA沉默Bcl-2表达增强食管癌细胞放射敏感性研究
目的 探讨Bcl-2基因的特异性小干扰RNA (siRNA)对食管癌细胞(EC9706细胞)Bcl-2蛋白表达和凋亡的影响及放射增敏作用。方法 化学合成Bcl-2基因的siRNA,通过脂质体转染法转入EC9706细胞。流式细胞仪检测转染前后Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡,成克隆分析siRNA联合X线照射对EC9706细胞的放射敏感性影响。结果 Bcl-2 siRNA1、Bcl-2 siRNA2、Bcl-2 siRNA3转染后Bcl-2蛋白在EC9706细胞中的阳性表达率分别为25.13％、38.87％、30.55％,较对照组的84.28％明显下降(t =4.01、3.04、3.64,P均＜0.05)。Bcl-2 siRNA1转染组凋亡率为33.86％,明显高于空白对照组的5.51％(t=6.55,P＜0.01)和阴性siRNA1转染组的5.59％(t=6.54,P＜0.01);Bcl-2 siRNA1联合X线照射的细胞凋亡率为56.76％,明显高于单纯照射组的24.51％(t=3.59,P＜0.05)。成克隆分析的Bcl-2 siRNA1转染加照射组D0、Dq、SF2值均低于单纯照射组,放射增敏比为1.33(D0值之比)。结论 Bcl-2基因的特异性siRNA可明显增强EC9706细胞的放射敏感性,具有良好临床应用前景。
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miR-485-3p通过调控ATR信号通路增强MGC803细胞放射敏感性研究
目的 研究miR-485-3p对胃癌细胞MGC803放射敏感性影响及其可能作用机制.方法 将miR-485-3p mimic或ATR siRNA转染MGC803细胞后X线照射,MTT、克隆形成实验和凋亡实验观察细胞生物效应(表达检测照射6 Gy,克隆形成实验0、2、4、6、8、10 Gy).分别用RT-PCR和蛋白印迹法检测miR-485-3p和ATR表达水平,DIANA、TargetScan和miRanda软件预测和双荧光素酶实验验证miR-485-3p对ATR靶向作用.结果 MGC803细胞放射后miR-485-3p表达下调.miR-485-3p过表达降低了细胞增殖和存活分数,增加了细胞凋亡率.经靶基因预测软件发现ATR可能是miR-485-3p靶基因,双荧光素酶实验进一步验证了ATR是miR-485-3p直接靶点.miR-485-3p负调控ATR表达,转染ATR siRNA抑制ATR信号通路后放射敏感性升高.结论 miR-485-3p可能靶向ATR,通过抑制ATR信号通路活性调节MGC803细胞放射敏感性.
关键词： miR-485-3p ATR通路 细胞系 肿瘤 放射敏感性 -
OCT-4在宫颈癌内表达情况及沉默表达后对宫颈癌Siha细胞放射敏感性影响
目的 研究OCT-4在宫颈癌组织中表达情况及沉默表达后对人鳞状宫颈癌Siha细胞放射敏感性的影响和机制.方法 利用RT-PCR和蛋白印迹法检测20例宫颈癌患者癌组织中OCT-4基因mRNA和蛋白表达水平.OCT-4-SiRNA转染构建OCT-4沉默表达Siha细胞系并进行检测(OCT-4 SiRNA组),并设置未转染对照组和NC转染对照组.MTT和克隆实验检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡和细胞周期情况,蛋白印迹法检测各组细胞中cleaved-caspase-3和p-Akt水平.多组间比较行单因素方差分析,两组间比较行成组t检验.结果 随着宫颈癌患者放疗敏感性降低OCT-4基因mRNA(P=0.011、0.009、0.003、0.001)和蛋白表达水平(P=0.008、0.005、0.002、0.001)逐渐升高.与未转染对照组和NC转染对照组相比,OCT-4-SiRNA沉默表达组Siha细胞经不同剂量X射线照射后的细胞增殖抑制率上升(P=0.009、0.003、0.001、0.001);克隆形成能力显著降低(P=0.008、0.005、0.001、0.001),细胞凋亡上升并阻滞细胞在G1期,细胞中cleaved-caspase-3水平上升而p-Akt水平下降.结论 OCT-4表达水平与宫颈癌患者放疗敏感性相关,而沉默OCT-4表达能提高Siha细胞放射敏感性,并通过促进cleaved-caspase-3而抑制p-Akt水平发挥作用.
