pH梯度法制备伊立替康脂质体

目的:以pH梯度法制备伊立替康脂质体,研究两种铵盐对伊立替康脂质体主动载药行为的影响.方法:采用薄膜分散-高压乳匀法制备空白脂质体,通过pH梯度法将药物包封入脂质体中,建立铵离子的测定方法;研究pH梯度、孵化温度对脂质体包封率及药物释放的影响.结果:以硫酸铵和磷酸氢二铵建立脂质体膜内外梯度制备的空白脂质体主动载药后,包封率分别为(98.2±1.5)%和(87.6±2.3)%,两种脂质体的包封率均随pH梯度增加而增加,其中以硫酸铵制备的载药脂质体药物的释放较慢.结论:pH梯度法适合制备伊立替康脂质体,pH相同时,铵盐的类型对脂质体主动载药后的包封率和释放均有一定影响.

ΦC31整合酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的:提供ΦC31整合酶研究所需的大量纯化蛋白质及特异性抗体.方法:将编码ΦC31整合酶的ORF插入到pET22b+载体构建表达质粒并转化E.coli B121(DE3),用IPTG诱导表达His-C31整合酶融合蛋白,His-Bind Quick Cartridge纯化表达产物.重组蛋白作为抗原常规免疫家兔制备相应的多克隆抗体,Western blotting确定抗体的特异性,体外线性底物分子内重组检测系统检测抗体的活性.后用该抗体检测了ΦC31整合酶在真核细胞HEK293中的定位和分布.结果:16℃条件下0.2 mmol/L IPTG诱导培养30 h,携带pET22b-ΦC31质粒的E.coli BL21(DE3)在YTG培养基中,可表达出大量的融合蛋白,该蛋白经体外线性底物分子内重组检测系统检验具有较高的活性.使用该融合蛋白免疫新西兰大白兔后.分离兔血清可得到ΦC31整合酶多克隆抗体,Western blotting和荧光免疫细胞组织化学方法证实,该抗体可特异性地识别细菌及细胞表达的ΦC31整合酶蛋白抗原.结论:本实验建立了表达ΦC31整合酶的方法,并成功制备了ΦC31整合酶特异性抗体.

ZLJ-601抗炎作用及其机制研究

目的:考察对甲磺酰基苯乙烯环酮类衍生物ZLJ-601对大鼠急性胸膜炎的作用以及对体外培养巨噬细胞炎症细胞因子释放和吞噬功能的影响,对其抗炎作用机制进行初步研究.方法:将角叉菜胶注入大鼠胸膜腔造成急性炎症模型,观察药物对急性炎症渗出、白细胞游出、炎症介质(PGE2、NO)释放及脂质过氧化产物(MDA)生成的影响.用脂多糖刺激原代小鼠腹腔巨噬细胞,观察药物对其释放细胞因子(IL-1)及NO的影响;利用巨噬细胞吞噬中性红实验考察药物对巨噬细胞吞噬功能的影响.结果:ZLJ-601能显著地抑制急性炎症中的渗出、白细胞游走和PGE2、NO释放,能减少MDA的生成;ZLJ-601在1×10-5、1×10-6mol/L均能抑制脂多糖刺激的巨噬细胞NO的释放,在1×10-5mol/L能抑制IL-1的释放;在1×10-5～1×10-7 mol/L均能增强巨噬细胞吞噬功能.结论:ZLJ-601有较强的抗炎活性,作用机制包括抑制炎症细胞因子及其炎症介质的释放和增强巨噬细胞吞噬功能.

丹参酮B钠盐对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究丹参酮B钠盐对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:应用线栓法可逆性的阻塞大鼠大脑中动脉,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型.复灌24 h后对大鼠进行神经学评分,并测定脑梗死率和含水量.制备脑组织病理切片,观察丹参酮B钠盐时局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织病理学影响;并测定脑组织细胞内Na+,K+-ATPase活力、钙离子含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,观察丹参酮B钠盐对这些生化指标变化的影响.结果:丹参酮B钠盐能使缺血再灌注后大鼠的神经行为明显改善,显著降低脑梗死率和含水量.脑组织切片病理学检查表明丹参酮B钠盐对脑组织细胞缺血再灌注损伤具有明显保护作用;生化指标测定表明丹参酮B钠盐能降低细胞内钙含量、脑组织MDA含量,增加Na+,K+-ATPase、SOD的活力.结论:丹参酮B钠盐对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有很好的保护作用.

对休止角测定方法的讨论

目的:澄清休止角概念上的模糊,分析固定漏斗法测定引起休止角的系统偏差的原因,提出新的体止角的测定方法.方法:总结了固定漏斗法对休止角测定的影响,分析了固定漏斗法因操作条件改变而引起休止角测定数值系统偏差的原因.对休止角的定义作了一定程度的修正.在建立模型基础上对实验数据进行回归分析,在分析的基础上,提出了新的休止角测定方法.结果:方差分析结果显示固定漏斗法有统计学偏差,回归分析的相关性极显著.结论:固定漏斗法确实存在因测定条件的改变而引起的系统偏差,偏差可利用数学处理得到修正.实验数据分析表明新测定方法有一定的优势.

微波促进固相合成胰高血糖素样肽-1类似物及其降血糖活性

目的:提高胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对二肽激肽酶(DPP Ⅳ)的稳定性.方法:以Rink Amide-MBHA树脂为载体,采用Fmoc/t-Bu正交保护固相合成策略,运用微波照射促进合成GLP-1类似物,后经过反相制备高效液相色谱纯化得到目标多肽纯品.结果:所合成的GLP=1及其类似物的相对分子质量和纯度均经过电喷雾质谱和高效液相色谱确证.降血糖活性研究结果显示,改造后的GLP-1类似物有很好的降血糖活性且作用时间较长.结论:修饰后的GLP-1类似物在保留降糖活性的同时延长了作用时间,这为开发新型抗糖尿病药物提供了基础.

海滨土壤芽胞杆菌的初步鉴定及其次级代谢产物的性质

目的:对从黄海海滨土壤中分离得到的菌株进行鉴定并研究其次级代谢产物的抗菌、抗肿瘤活性和结构信息.方法:分析分离得到的菌株的16s rDNA、形态等特征,确定其种属以及研究其次级代谢产物(BSC)的抗菌以抗肿瘤活性,并对BSC的结构进行了初步分析.结果:根据该株菌的16s rDNA、形态等特征,确定其为芽胞杆菌属,其次级代谢产物BSC具有一定的抗菌抗肿瘤活性,其分子式为C48H94O19.结论:分离得到的菌株为芽胞杆菌属,其次级代谢产物BSC具有一定的抗菌、抗肿瘤活性,是潜在的抗生素类药物.

药物转运体在反式白藜芦醇肠道吸收中的作用

目的:通过体内和体外模型研究多药耐药相关蛋白(Mrp-2)外排底物溴磺肽钠对反式白藜芦醇(trarts-resveratrol,TR)肠道吸收的影响,并对转运体在TR肠道吸收中的作用进行研究.方法:应用离体肠外翻模型,测定不同时间点时肠囊内TR的浓度,寻找TR在肠中吸收的佳部位;观察多种P-糖蛋白及Mrp-2抑制剂对TR吸收的影响;根据离体肠外翻吸收试验结果,选择溴磺肽钠作为促吸收剂,研究不同给药途径的溴磺肽钠时TR在大鼠体内药动学行为的影响.结果:TR在不同肠段均具有很高的通透性(Papp＞1×10-5cm/s),回肠是TR的佳吸收部位.Mrp-2外排抑制剂丙璜舒及底物溴磺肽钠都能够显著增加TR在回肠部位的吸收;p-糖蛋白及Mrp-2共同底物甲氨碟呤也能够增加TR的肠吸收;而P-糖蛋白抑制剂地高辛和维拉帕米无此作用.整体动物实验结果,发现预先给大鼠灌胃溴磺肽钠,可以显著提高TR的口服吸收,TR的生物利用度提高4倍:而溴磺肽钠通过尾静脉注射给药无此作用.结论:Mrp-2参与TR的肠道外排过程,P-糖蛋白对其外排无影响.溴磺肽钠通过灌胃给药途径可增加TR的吸收及生物利用度.

左旋和右旋奥硝唑对小鼠中枢神经系统毒副作用的比较研究

目的:研究静脉注射左旋和右旋奥硝唑对小鼠中枢神经系统的毒副作用是否存在差异.方法:通过催眠作用、对催眠剂量硫贲妥钠的睡眠协同作用和对自发活动的影响考察奥硝唑光学对映体的中枢镇静作用,通过二甲弗林、士的宁、异烟肼和氨基硫脲引起的惊厥观察光学对映体的抗惊厥作用.结果:右旋奥硝唑(160 mg/ks,iv)具有催眠作用,同时剂量依赖性地延长硫贲妥钠的睡眠时间和抑制自发活动.左旋奥硝唑镇静作用较弱.左旋和右旋奥硝唑对二甲弗林、士的宁、异烟肼和氨基硫脲4种致惊荆引起的惊厥具有不同程度的拮抗作用.右旋奥硝唑(80,160 mg/kg,iv)明显抑制二甲弗林和氨基硫脲引起的惊厥,而左旋体抗惊厥作用很弱.结论:左旋和右旋奥硝唑对小鼠神经系统的作用存在差异,右旋体的中枢抑制作用比左旋体强.

LC-MS法测定大鼠血浆中长春瑞滨浓度及其药动学研究

目的:建立生物样本中长春瑞滨的LC-MS测定方法,研究长春瑞滨大鼠体内的药动学过程.方法:生物样本经乙酸乙酯萃取后,用LC-MS法测定长春瑞滨浓度.色谱柱为Shimadzu ODS(150 mm ×2.0 mm,5 μm),以梯度洗脱方式进行色谱分离,流速为0.2 mL/min,采用电喷雾(ESI)离子源以正离子方式检测.大鼠尾静脉注射长春瑞滨乳剂,剂量为2.0、4.0和8.0 mg,/kg,采用DAS 2.0计算药动学参数.结果:内源性杂质不干扰长春瑞滨的测定,且未出现明显的基质效应;线性范围为0.01～5.0 μg,/mL(r=0.999 4),回收率大于90%,低检测限为0.002 μg/mL(S/N＞3);精密度及准确度均符合生物样本测定要求.大鼠静脉注射长春瑞滨后,广泛分布于各组织中;在研究的荆量范围内,AUC与剂量间均呈良好的线性关系.结论:本实验建立的血药浓度测定方法简便、灵敏、特异,适用于大鼠血浆中长春瑞滨浓度的测定及药动学研究.

IGFBP-6在维甲酸诱导的软骨细胞凋亡中的表达

目的:对维甲酸诱导的软骨细胞凋亡病理过程中胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)的表达规律进行研究.方法:1×10-6mol/L的全反式维甲酸(ATRA)作用体外培养兔的软骨细胞株,观察软骨细胞中Ⅱ型胶原的合成变化,检测软骨细胞株细胞凋亡率.采用实时定量PCR和Western印迹杂交分析软骨细胞中IGFBP-6 mRNA和蛋白质的表达.结果:ATRA(1×10-6mol/L)作用软骨细胞24 h,ATRA抑制了软骨细胞中Ⅱ型胶原的合成,并使软骨细胞凋亡率增加了250%(P＜0.05).ATRA使软骨细胞中IGFBP-6 mRNA和蛋白质的表达分别增加了140%和195%(P＜0.05).结论:维甲酸可能通过负性调控靶基因IGFBP-6的基因转录和翻译,发挥对软骨细胞的促凋亡作用.

近红外漫反射光谱法在毒品同一来源认定中的应用

目的:建立毒品同一采源认定的新方法.方法:应用近红外光谱积分球和光纤漫反射技术结合化学计量学方法进行处理,对不同途径缴获的毒品进行系统聚类分析.结果和结论:聚类分析技术对不同途径缴获毒品的来源进行了鉴别,该法简便、快速、准确,为毒品同一来源认定提供了一种新的方法.

氧化/还原修饰肝素对高糖诱导肾小球系膜细胞凋亡及其信号转导途径的影响

目的:考察化学修饰的非抗凝肝素(高碘酸氧化/硼氢化钠还原修饰肝素,OR-Heparin)对高糖诱导的人肾小球系膜细胞凋亡的保护作用及其可能的机制.方法:肾小球系膜细胞经高糖或高糖+OR-heparin作用24 h,Hoechest 33258染色、Annexin V-PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白(p53,Bcl-2,Bax,cytosdic cytochrome C)的表达,Cy3-标记抗体荧光显微镜观察NF-KB的转录激活,比色法测定Caspase-3酶活.结果:氧化/还原修饰的肝素显著降低高糖诱导的肾小球系膜细胞的凋亡,同时抑制凋亡相关蛋白的表达以及NF-KB的转录激活.结论:氧化/还原修饰肝素可以通过抑制凋亡相关蛋白的表达来抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡,这可能与抑制NF-kB转录激活相关.

尖吻蝮蛇血凝酶N末端序列测定及其止血活性分析

目的:测定尖吻蝮蛇血凝酶N末端氨基酸序列,并对其止血活性进行分析.方法:采用Edman法测定尖吻蝮蛇血凝酶N末端氨基酸序列,采用毛细管电泳估算其等电点,根据纤维蛋白出现时间和全血凝时间研宄其止血活性.结果:尖吻蝮蛇血凝酶N末端氨基酸序列为VIGGNECDTNEEHFL,等电点为6.59,使用后能明显缩短纤维蛋白出现时间和全血凝时间.结论:尖吻蝮蛇血凝酶具有较强的止血活性.

一氧化氮供体型双水杨酸酯衍生物的合成及降血糖活性

目的:研究一氧化氮(NO)供体型双水杨酸酯衍生物的合成和降血糖活性,寻找治疗糖尿病的有效药物.方法:以双水杨酸酯为先导化合物,通过各种连接基团,将硝酸酯类NO供体与双水杨酸酯的2'位羧基连接,分别制得目标物2a-2e、4a、4b、6a、6b.应用COD-POD法测定目标物增加HepG2细胞耗糖量的作用,应用Griess法测定目标物体外NO释放量.结果:合成了9个目标物,其结构经IR、1H NMR、MS等确证;所有目标物均有不同程度的降血糖活性,其中化合物2a、2b、4b的活性优于双水杨酸酯.结论:NO供体型双水杨酸酯衍生物可能通过释放NO,增强了双水杨酸酯的降血糖活性.其中,化合物2a的活性较强,值得进一步研究.

肿瘤信号转导通路及相关药物研发的现状与展望(下)

随着对肿瘤细胞信号转导通路研究的不断深入,人们对肿瘤细胞内部迷乱的信号转导机制以及它们对肿瘤生长、凋亡、转移等的影响已越来越了解.寻找能对肿瘤细胞信号转导进行调控的化合物从而达到抗肿瘤目的,已经成为全球生物医药领域研究的热点之一.本文就肿瘤发展进程相关的信号转导通路及人为干预的新研究进展作一综述.

聚乙二醇化技术在药物转运系统中的研究进展

聚乙二醇化技术又称为PEG修饰技术,是目前分子变构化学中重要的技术之一.经过近几十年的发展,PEG化技术不仅在蛋白质类药物的开发中得到普遍的应用,而且已扩展到新型药物栽体、控释制剂等各个领域.本文从PEG化蛋白质类药物、PEG化疏水性药物、PEG化纳米共聚物给药系统以及PEG化脂质体等方面对近年来PEG化技术在药物转运系统中的应用及研究进展进行了综述.

新进展

新动向

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新药研究中的非临床药物依赖性研究与评价

药物依赖性试验是评价一个药物可能被滥用潜力的重要手段,本文简要介绍了药物依赖性的研究与评价方法,并通过我国新药研究现状,分析了申报资料中存在的问题,介绍了当前新药申报过程中对药物依赖性研究的相关要求.

大环内酯类抗生素申报肠溶制剂立题合理性评述

针对大环内酯类抗生素申报肠溶制剂时立题依据方面存在的问题,通过比较国内外已上市大环内酯类抗生素肠溶制剂现状,结合新药审评中的思考和实例分析,对该类抗茵药物开发肠溶制剂立题合理性进行评述.