卫氏并殖吸虫基因片段的克隆与鉴定

目的从卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆.方法采用预吸收成虫抗原免疫兔血清(IRS,多抗)筛选阳性克隆,经PCR扩增后测定其插入片段的大小.序列分析后,对筛选的重组子进行双酶切,亚克隆人表达载体pRESETB,并转化大肠杆菌BL-21细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定.结果所筛选的阳性克隆插入片段约800 bp.DNA序列分析显示其为编码半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L的基因序列.Pw-2重组子特异性表达产物约为32 kDa,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异地识别.结论从卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库筛选的重组质粒Pw-2编码属于半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L.

不同温度对钉螺生殖腺一氧化氮合酶基因表达的影响

目的研究不同温度下钉螺生殖腺一氧化氮合酶(NOS)mRNA表达的变化规律.方法钉螺放入不同温度(0℃、15℃、25℃)的培养箱内饲养1个月.用总RNA抽提试剂盒抽提总RNA,参照哺乳动物NOS的保守序列,设计出钉螺NOS的简并引物.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各实验组钉螺生殖腺NOS mRNA的表达量.结果各实验组均有特异性PCR产物条带出现,0℃组和25℃组的NOS mRNA表达量明显高于对照组(P<0.01),15℃组与对照组相比差异无显著性(P>0.05).结论本研究设计的引物是可行的,温度变化可影响钉螺生殖腺NOSmRNA的表达.

复方萘酚喹及其组分单药治疗恶性疟的临床研究

目的对比观察复方萘酚喹(Co-NQ)与组分单药萘酚喹(NQ)和青蒿素(QHS)对恶性疟的疗效和安全性.方法用Co-NQ(总量含NQ 400mg及QHS 1000 mg)、NQ(总量1000 mg)和QHS(总量2 500mg)分别治疗恶性疟患者100例、100例和30例.所有患者住院7 d,随访28 d,观察疗效和安全性.结果Co-NQ、NQ和QHS 3组的平均退热时间分别为(17.5±12.3)h,(32.7±17.7)h和(18.1±9.7)h;平均原虫转阴时间分别为(30.0±8.8)h,(45.5±10.0)h和(29.1±6.0)h;28 d治愈率分别为97.0%,100.0%和66.7%.Co-NQ组临床未见不良反应.结论Co-NQ具有QHS的速效和NQ的持效作用,是一个高效、速效、持效的新复方.

旋毛虫成虫期特异性基因全长cDNA的克隆与序列分析

目的获取编码旋毛虫5日龄成虫(AD5)期特异性基因完整开放阅读框架(open reading frame,ORF)cDNA分子.方法利用地高辛标记的AD5期特异性cDNA片段T671作为探针对AD5 cDNA文库进行核酸杂交筛选,将筛选出的阳性克隆进行测序,利用分子生物学软件进行分析.结果获得1个全长1 132 bp的cDNA分子,该cDNA含有1个1 032 bp完整的ORF,该ORF编码1个343个氨基酸残基组成的多肽,其分子量理论推导值为35.1 kDa,等电点(isoelectric point,IP)为4.8.InterProScan分析显示117～120氨基酸残基(SGYG)为粘多糖结合位点,27～86氨基酸残基为一线虫表皮胶原蛋白N-末端区结构域,153～328氨基酸残基为胶原蛋白螺旋三联体重复区(G-x-y)结构域.Sgnal PV2.0分析显示,在1～43氨基酸区域为信号肽.Blastn同源性分析表明,与其它已知生物基因序列无明显的同源性,为一新的eDNA分子.但与表皮胶原蛋白同源性较高,大于40%.结论筛选获得一个新的编码AD5期特异性基因的完整ORF的cDNA分子.

杂交瘤细胞凝集试验诊断血吸虫病的实验研究

目的用杂交瘤细胞凝集试验(hybridoma cells agglutination test,HCAT)诊断实验日本血吸虫病,并探讨杂交瘤细胞在特异性血清中凝集的机制.方法分泌抗血吸虫31/32 kDa抗原单抗的杂交瘤细胞H226经特定处理后分别与感染日本血吸虫尾蚴10、30和50条的小鼠血清孵育,动态观察感染后不同时间的凝集反应.上述杂交瘤细胞涂片后与日本血吸虫感染兔血清进行间接免疫荧光试验(IFT),以探讨凝集机制.结果杂交瘤细胞在感染鼠血清中呈现凝集反应:感染后2 wk时,50条尾蚴感染组中70%HCAT阳性,至第5周,全部感染小鼠均出现阳性反应.抗原滴度在感染后逐步升高,感染后6 wk时达到高.重度感染鼠的抗原滴度明显高于中、轻度感染鼠.IFT显示,在杂交瘤细胞膜表面呈现特异性的黄绿色荧光,而细胞内未见显色.结论HCAT是一种血吸虫病诊断新方法.

肝囊型包虫病药物治疗中B超影像动态观察及分类建议

目的在确定肝囊型包虫病B超影像特征及其分布的基础上,系统观察阿苯达唑乳剂治疗期间包虫囊影像变化动态及其与疗效的关系,提出可用于药物治疗中疗效判定的影像分类方法.方法对497例初诊的肝囊型包虫病患者共645个包虫囊的B超影像进行分类,观察不同影像类型在患者群体中的分布.结合212例肝包虫病患者在药物治疗过程中影像变化的规律进行比较分析,探讨影像类型与临床疗效的对应关系.结果将肝囊型包虫病患者包虫囊的B超影像分为6型.各型影像在患者中的分布反映了包虫囊在人体内的自然演变过程.在药物治疗期间包虫囊的影像变化动态与自然演变过程相符.结论本文提出的影像分类反映了包虫囊在人体内经历的从生长发育到衰老死亡的缓慢过程.药物治疗期间包虫囊的影像变化证明药物作用加速了这个过程.影像分类方法可用于腹部包虫病的诊断和药物治疗效果评价.

应用多元回归分析鄱阳湖区影响日本血吸虫病传播的因素

目的分析鄱阳湖区日本血吸虫病传播的影响因素.方法收集1992～1998年鄱阳湖区连续观察3年以上的血吸虫病流行村的血吸虫粪检阳性率、化疗和灭螺药物用量、易感地带面积、家畜感染率、降雨量和气温的数据.采用多元逐步回归的方法进行数据分析.结果经检验回归模型具有统计学显著性,R2=0.735,P<0.01.可接受的变量为:上年度人群感染率的自然对数,人均易感地带面积,家畜感染率,单位易感地带面积,氯硝柳胺的用量(元)和单位感染率吡喹酮用量(元).结论在人群感染率,人均易感地带面积,家畜感染率仍然促进血吸虫病传播的情况下,化疗和灭螺有效地降低了该类地区日本血吸虫病的传播.

华南地区粉尘螨主要变应原Der f 2的cDNA克隆及序列分析

目的克隆并分析华南地区粉尘螨主要变应原Der f 2的cDNA片段.方法广州地区收集、鉴定、培养的粉尘螨,提取总RNA,RT-PCR扩增其Der f 2片段,连接人T载体,测序和分析.结果Der f 2片段长度为558bp,与GenBank公布的Derf2(D10448)的核酸序列比较,在62个核苷酸处插入了87个核苷酸,插人点前后的核酸序列没有差异,按原读码框进行读码显示插入了29个氨基酸,插入点前后的氨基酸序列没有改变.结论获得华南地区粉尘螨的Der f 2 cDNA片段,和已公布的序列相比,有较大差异.

日本血吸虫门脉内童虫表膜抗原组分及其保护性免疫力研究

目的探讨日本血吸虫门脉内童虫表膜抗原(SiHmAg)的免疫特性,观察其抗日本血吸虫(Sj)的保护效果.方法用SDS-PAGE电泳技术分析SjHmAg蛋白组分,酶联免疫电转移印迹(EITB)分析感染兔血清(IRS)和正常兔血清(NRS)对SiHmAg的识别;用完整SjHmAg免疫昆明鼠3次,分别在0、2、4周进行,第6周每鼠经腹部感染40±1条Sj 尾蚴,42天后剖杀,计数虫数及肝卵数.结果用SDS-PAGE电泳获得SjHmAg主带7条,IRS主要能识别SjHmAg 23、33和63 kDa等10个抗原组分;间接ELISA测其抗体滴度>1:6 400,与对照组相比,SjHmAg免疫小鼠的减虫率为16.2%,减卵率为55.4%.结论用SDS-PAGE获得了不同分子量的SjHmAg蛋白,EITB鉴别出具有免疫活性的蛋白分子,且SjHmAg对Sj攻击感染及雌虫生殖似有一定的抗性.

日本血吸虫感染小鼠肝脏IL-2、TNF-α的表达及注射该因子后对肝纤维化的影响

目的探讨小鼠感染日本血吸虫后不同时期肝脏白细胞介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达水平及注射该因子后对肝纤维化的干预.方法小鼠感染血吸虫尾蚴后分3组,每组16只,其中2组于感染6 wk后分别隔日注射(ip)IL-2和TNF-α连续4 wk,另设未感染正常鼠为对照组,采用ABC免疫组织化学技术,利用多媒体病理图文定量分析,动态观察相关因子活性.结果感染未处理组小鼠肝脏中IL-2和TNF-α含量随感染时间(8、11、14、18wk-)延长而缓慢下降,而感染6 wk后经腹腔注射IL-2或TNF-α组小鼠则随着相应因子的补充而显著上升,末次注射后1～8 wk,肝内IL-2或TNF-α水平明显高于感染组和正常对照组(P<0.01),肝组织肉芽肿炎症反应及纤维化程度较对照组减轻.结论小鼠6 wk后(成虫排卵后)给予外源性IL-2或TNF-α注射,能诱导相应细胞因子表达增强,并有减轻肝脏炎症和肝纤维化的表现.

瑞香素对体外培养恶性疟原虫超氧化物歧化酶活性及DNA合成的影响

目的研究瑞香索(DPNT)对体外培养恶性疟原虫超氧化物歧化酶(SOD)活性及DNA合成的影响.方法在恶性疟原虫FCC1株体外培养体系中,以SOD试剂盒检测瑞香素、瑞香素铁盐及去铁胺(DFO)对疟原虫SOD活性的影响.疟原虫培养同步化,利用荧光素Hoechest33258测定在瑞香素和去铁胺作用下疟原虫不同发育阶段(环状体和滋养体)的DNA合成水平.结果与未加药对照组比较,经瑞香素作用后疟原虫总SOD下降约60%(P<0.01),而相应的经去铁胺作用后,疟原虫的总SOD仅下降约22%(P>0.05).瑞香素铁螯合能力被遮蔽后,几乎失去对疟原虫SOD的影响.同步培养的滋养体阶段疟原虫,在瑞香素作用下DNA合成率明显低于对照组.结论在体外瑞香素可显著降低疟原虫SOD活性,并影响滋养体阶段疟原虫的DNA合成.

不同宿主感染血吸虫后的自愈现象

有些动物,在感染血吸虫一段时间后虫荷会急剧减少,这种虫体自然的清除,即所谓的自愈现象(selfcure)在自然界很普遍,从小型的啮齿类动物到大型的家畜类哺乳动物、灵长类和人类都具有不同程度的自愈能力.

曼氏迭宫绦虫裂头蚴肛周寄生一例

患者,男,63岁,农民,安徽省凤台县人.因肛周脓肿就诊.体检:T 37.3℃,BP11/7.5 kPa.实验室检查:RBC 4.5×1012/L,Hb 145 g/L,WBC11×109/L,中性粒细胞71%,淋巴细胞24%,嗜酸粒细胞5%.安徽理工大学医学院附属医院痔瘘科手术切除脓肿,取出一乳白色体节不明显的带状虫体.

输入性疟疾一例报道

患者,男,42岁,黑龙江省大庆市人,2002年4月赴加纳经商3个月.归国后自感周身不适、乏力、食欲不振,继而冷感约1 h后开始发热,高达38℃左右,持续4～5 h后大量出汗,体温随之降至正常,但症状反复发作.来我室就诊,首次查耳血涂片疟原虫阴性.

恶性疟伴黑尿热九例临床分析

恶性疟是非洲常见的传染病之一,黑尿热是疟疾患者的一种严重并发症,具有血红蛋白尿、溶血性黄疸、高热等特点.作者于2001年8月至2003年1月在马里共和国马尔格拉医院收治9例患儿,现报道如下.

肝泡型棘球蚴病263例17年诊治回顾

宁夏回族自治区是肝泡型棘球蚴病(liver alveolar echinoccosis,LAE)的高发区,主要分布在南部山区西吉县各乡镇.本文就17年来263例LAE诊治情况作一回顾报道.

成都市武侯区血吸虫病流行病学调查

武侯区位于成都市西南部,总面积76.65 km2,总人口为41.48万.区内地势平坦,气候温和,都江堰水系自流灌溉,沟渠纵横,适宜钉螺孳生.

唐山市脑囊尾蚴病60例临床分析

脑囊尾蚴病是猪带绦虫(Taenia solium)的囊尾蚴寄生在人颅内所致,是神经系统较为常见的疾病.现将唐山市发生的60例脑囊尾蚴病分析如下.

血清转化生长因子β1检测对血吸虫病肝纤维化的诊断和疗效评估的价值

转化生长因子β1(TGFβ1)是肝纤维化形成过程中重要的细胞因子之一.TGF β1主要存在于炎症和纤维化部位,在不同肝病患者肝脏中的表达均显著增高[1].

吡喹酮、阿苯达唑单独及其联合治疗脑囊尾蚴病疗效的对比观察

脑囊尾蚴(囊虫)病是我国北方地区中枢神经系统常见的寄生虫疾病,抗囊虫药物吡喹酮、阿苯达唑广泛用于临床,对脑囊尾蚴病的治疗起重要作用.

新疆株细粒棘球绦虫不同发育阶段95抗原基因克隆及序列分析

目的研究细粒棘球绦虫95抗原(Fg95)基因在新疆株细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达及其基因序列差异.方法根据Eg95基因序列设计引物,用PCR方法分别从新疆株细粒棘球绦虫3个不同发育阶段(原头蚴、六钩蚴和成虫)所构建的cDNA文库中克隆获得Eg95目的基因,将其克隆至pUCm-T载体、测序并进行序列分析.结果从3个不同发育阶段的新疆株细粒棘球绦虫cDNA文库中均克隆出Eg95基因,其基因片段长度为402 bp,同源性比对分析(BLAST)结果表明,所克隆的新疆株Eg95基因与GenBank中的Eg95基因序列一致.结论Eg95基因在新疆株细粒棘球绦虫不同发育阶段均有表达,其基因序列无差异.

晚期日本血吸虫病患者肝组织基质金属蛋白酶2和9的表达

目的研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在晚期日本血吸虫病患者肝组织中的表达及意义.方法26例晚期日本血吸虫病患者肝活检标本和5例正常人肝标本行常规病理检查,用MMP-2、MMP-9和Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)单克隆抗体进行免疫组织化学染色进行定量和定位研究.结果MMP-2主要表达在肝细胞浆、肝细胞膜和肝窦,肌成纤维细胞和血管内皮细胞也有表达.MMP-9主要表达在肝星状细胞、肝窦和肌成纤维细胞,偶见肝细胞浆和胆管上皮细胞表达.晚期日本血吸虫病患者肝组织MMP-2、MMP-9和C-Ⅳ的表达明显高于正常人(P<0.05),随着汇管区炎症活动度和肝纤维化程度的升高,MMP-2的表达也明显增强(P<0.01),MMP-9的表达无明显改变(P>0.05),C-Ⅳ表达与MMP-2呈同步关系.结论MMP-2与日本血吸虫病肝纤维化的发生、发展有关,MMP-9表达与日本血吸虫病肝纤维化的发生有关.

湖北钉螺细胞原代培养的初步研究

目的研究湖北钉螺组织细胞的原代培养.方法无菌处理并解剖钉螺成螺及螺胚,分别获得软体、肝脏、外套膜及胚胎组织.将软体、肝脏及胚胎组织剪碎,用0.25%胰蛋白酶和0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)混合液4℃下消化数小时,所得细胞按三宅的湿润系统固定法接种于钉螺的外套膜组织.培养液为1/2浓度的RPMI 1640含20%小牛血清附加常量抗生索(青霉索100 IU/ml,链霉索100 μg/ml),温度为27℃一28℃,pH 7.2～7.4.结果钉螺的胚胎组织冷消化后,获大量游离细胞.接种培养5 d,见有贴壁细胞,扁平状,多边或不规则形,大小约为(15～20×12～15)μm.培养细胞以悬浮状为主,直径为8～12 μm,少数为30～35 μm.生长良好,可传代培养.结论钉螺胚胎细胞可进行原代培养及传代.

中华预防医学会慰问信

寄生虫病防治的重要策略--健康促进

当前,我国寄生虫病是一个严重的影响健康的社会问题,其特点是种类多、分布广、感染高、危害大.如血吸虫病仍继续流行于7个省的大山区和湖沼地区.

严重急性呼吸综合征--挑战与征服

严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS),又称传染性非典型肺炎,目前认为是由SARS冠状病毒引起的急性呼吸系统传染病,其病死率可能高达15%.WHO估计SARS的病死率根据感染年龄的不同在0～50%之间[1].