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高效液相色谱法测定祖师麻中3种苯丙素成分的含量
目的 建立以HPLC法同时测定祖师麻中瑞香素、7-OH香豆素、紫丁香苷含量的方法.方法 采用YMC-PackODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以甲醇-0.5%醋酸-水(19:8:1)为流动相;双波长检测,λ1=327 nm,λ2=266 nm;流速为1.0 mL/min;柱温30℃.结果 3个组分均能达到基线分离,各组分的平均回收率在98.41%～100.18%之间.结论 操作简便,结果可靠,重现性好,可作为该药材质量控制的方法.
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转基因何首乌毛状根生物转化瑞香素的研究
目的:利用转基因何首乌毛状根对瑞香素(Ⅰ)进行生物转化研究,对其生物转化产物进行分离、鉴定,并建立其产物的时效曲线图.方法:将瑞香素投入何首乌毛状根悬浮培养体系中,共培养36h后,利用TLC和HPLC进行产物检测,硅胶柱层析法分离纯化,核磁共振技术进行结构鉴定,利用HPLC考察共培养时间对转化产物(Ⅱ)、降解产物含量的影响及分析转化产物降解的原因.结果:瑞香素在何首乌毛状根悬浮培养体系中发生了生物转化反应.分离鉴定出一个产物:瑞香素-8-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ).何首乌毛状根悬浮培养体系转化生成Ⅱ的佳共培养时间为36h,总摩尔转化率为32.11%.蔗糖-水培养基(仅含有蔗糖和水)可以使何首乌毛状根悬浮培养体系转化产率大幅增加,总摩尔转化率达72.44%.初步推断产物(Ⅱ)的降解与MS培养基中金属离子有关.结论:使用何首乌毛状根悬浮培养体系可大量生物合成天然药材中含量极低的活性化合物--瑞香素-8-O-β-D-葡萄糖苷.
关键词： 何首乌毛状根 生物转化 瑞香素 瑞香素-8-O-β-D葡萄糖苷 -
甘草提取物对瑞香素大鼠体内药代动力学特征的影响研究
目的:研究甘草提取物对祖师麻主要活性成分瑞香素大鼠体内药代动力学特征参数的影响,探索其配伍用药的合理性.方法:大鼠分别灌胃给药瑞香素和含有同等剂量瑞香素的甘草提取物,LC-MS分析测定血浆中瑞香素浓度,经DAS2.1.1程序处理数据.结果:甘草提取物能够减小瑞香素t(1/2),t(max)和Ke,增加Ka和AUC(0～∞).结论:甘草能促进祖师麻中瑞香素的口服吸收,减慢其消除,提高其生物利用度.
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LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中瑞香素、西瑞香素和瑞香新素及其药代动力学研究
建立同时测定大鼠灌胃祖师麻提取物后血浆中瑞香素、西瑞香素和瑞香新素的HPLC-MS/MS分析方法,并用于计算3个成分在大鼠体内的药代动力学参数.试验采用6只SD大鼠,口服给予祖师麻提取物(瑞香素、西瑞香素和瑞香新素的给药量分别是88.40,3.24,4.28 mg·kg.-1),以五味子醇甲为内标,用LC-MS/MS测定给药后血浆中药物浓度,绘制血药浓度-时间曲线,并用Kinetica 4.4软件计算相关药代动力学参数.试验结果显示,瑞香素、西瑞香素和瑞香新素的线性范围均为5～1 000 μg·L.-1,方法学考察符合要求.日内、日间变异系数(RSD)均小于15％,精密度和准确度符合生物样品分析要求.瑞香素、西瑞香素和瑞香新素口服给药后的Tmax分别为4,2.92,2 h;Cmax分别为858.96,178.00,36.67 μg·L.-1;AUC0-t分别为10 566.4,905.89,355.11 μg·L.-1·h;半衰期t1/2分别为5.19,3.50,4.95 h;平均驻留时间MRT分别为9.43,6.95,8.27 h.因此,该研究建立的LC-MS/MS分析方法准确灵敏,适于对SD大鼠口服祖师麻提取物后的瑞香素、西瑞香素和瑞香新素的药代动力学研究.
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实时荧光定量PCR测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫核糖核酸还原酶基因表达的影响
目的 测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫核糖核酸还原酶(RNR)基因表达的影响. 方法 体外同步培养的恶性疟原虫经瑞香素及其衍生物DA78与DA79 作用后,抽提总RNA,并合成相应的特异性引物,运用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫RNR基因表达的影响. 结果 恶性疟原虫体外经瑞香素及其衍生物作用后的RNR基因扩增标准曲线在105～109拷贝(copies)/ml范围内呈良好的线性关系,R2为0.997 52;瑞香素及其衍生物DA78与DA79对恶性疟原虫RNR作用后,其原始拷贝数分别为81 173.23、124 830.83和74 801.35,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),而瑞香素的铁螯合能力被饱和后,对该基因的表达未产生显著抑制(P＞0.01). 结论 瑞香素类抗疟化合物体外抑制恶性疟原虫RNR的基因表达,RNR可能作为瑞香素类抗疟化合物抗疟作用的候选靶分子之一.
关键词： 瑞香素 疟原虫 恶性 核糖核酸还原酶 实时荧光定量聚合酶链反应 -
瑞香素结构衍生物体内外抗疟活性的研究
目的 通过体外试验和鼠疟(Plamodium berghei)动物模型观察瑞香素结构衍生物的抗疟作用.方法 通过光学显微镜镜检和微量荧光法两种体外筛选系统筛检瑞香素类衍生物对恶性疟原虫(Plamodium falciparum)的体外抗疟作用;对体外筛检抗疟活性高的化合物,采用WHO推荐的"四天抑制试验"测定其对鼠伯氏疟原虫(ANKA株)的抗疟作用.结果 通过体外筛选系统筛选出DA78与DA79两种新型的瑞香素类抗疟化合物,两者的IC50分别为7.6 μmol/L和1.4 μmol/L,其体外抗疟活性与瑞香素在同一统计学水平(P＞0.05);体内试验伯氏鼠疟原虫ANKA株感染鼠,DA78 1、10、50、75 mg/kg·d×4 d剂量组D4减虫率与空白对照组比较差异有显著性(P＜0.01),而DA79 50或75 mg/kg·d×4 d剂量组D4减虫率与对照组相比较差异有显著性(P＜0.05),DA78 10或75 mg/kg·d×4 d剂量组D4减虫率高于同剂量的瑞香素组(P＜0.05).结论 以DA78与DA79为代表的瑞香素类衍生物作为一类新型的抗疟化合物,在体外和体内试验中均显示出一定的抗疟活性,为寻求更有效的抗疟化合物提供了方向和理论依据.
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中药活性成分抗自身免疫性关节炎作用的研究
目的 探讨中药活性成分对胶原诱导的关节炎(collagenⅡ-induced arthritis,CIA)鼠关节滑膜细胞增殖的影响,为自身免疫性关节炎的治疗提供一定的依据.方法 采用MTT法检测不同中药活性成份(雷公藤甲素、瑞香素、紫杉醇、紫草素和槲皮素)对CIA鼠关节滑膜细胞增殖的影响.选用抑制效果好的中药活性成份进一步探讨其对关节滑膜细胞的作用机制,并采用Western Blot检测中药活性成份对细胞促凋亡基因FasL、p53、DR3和PDCD5表达的影响.结果 5种中药活性成分不同浓度时对CIA鼠关节滑膜细胞的增殖均有抑制作用,并均呈现剂量依赖性,其中抑制效果较好的是瑞香素和雷公藤甲素.瑞香素组和雷公藤甲素组DR3、FasL、p53表达水平均明显高于对照组(P＜0.05).瑞香素组中促凋亡基因中p53的表达明显高于雷公藤甲素组(P＜0.05),但2组DR3、PDCD5、FasL差异无统计学意义(P＞0.05).结论 雷公藤甲素、瑞香素、紫杉醇、紫草素和槲皮素对自身免疫性关节炎大鼠关节滑膜细胞的增殖均有抑制作用,并均呈现剂量依赖性,抑制效果较好的是瑞香素和雷公藤甲素.瑞香素和雷公藤甲素均可促进自身免疫性关节炎鼠关节滑膜细胞中促凋亡基因DR3、FasL和p53的表达,从而促进滑膜细胞凋亡,抑制其增殖.
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癌特异性的细胞凋亡诱导因子MDA-7/IL-24的研究进展
黑色素瘤分化相关基因7(melanoma differentiation-associated gene-7,MDA-7)初是由Jiang等[2]利用消减杂交法从β干扰素(IFN-β)和瑞香素(MEZ)诱导的终末分化人类黑色素瘤细胞中克隆到的基因.后来根据其结构序列的同源性,染色体的定位及类细胞因子的特点,被国际人类基因组织(HUGO)重新命名为IL-24.MDA-7/IL-24位于人类染色体的1q32-33,这是一个跨越195kb的基因组区,表达包括IL-10、IL-19、IL-20和IL-24等IL-10细胞因子家族.
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瑞香素对大鼠前脑缺血后β-APP表达的影响
目的 讨论β-淀粉样蛋白前体(β-APP)脑缺血后变化规律并观察瑞香素对其影响.方法 wistar大鼠45只平分为三组:缺血再灌注组( 简称对照组) 分离双侧颈总动脉,无创微动脉夹夹闭双侧颈总动脉15 min,然后恢复血流再灌注60 min;再夹闭15 min,松开动脉夹,恢复血流,缝合切口,术后每日用生理盐水灌胃;假手术组只分离双侧颈总动脉,不予夹闭,余同对照组;缺血再灌注瑞香素治疗组(简称治疗组)手术操作同对照组,每日用瑞香素灌胃.在2周,4周,6周不同的时间点取脑制作β-APP免疫组织化学切片,对β-APP表达阳性细胞计数.结果 在2周,4周,6周不同的时间点,治疗组的阳性细胞数高于假手术组,低于对照组,不同时间点阳性细胞数呈递减趋势.假手术组的β-APP阳性细胞数无明显变化.对照组β-APP阳性细胞数多.结论 瑞香素对阻止β-APP的过度表达有一定的作用.
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瑞香素缓释片中瑞香素含量测定方法的建立与验证
目的 建立一种测定瑞香素缓释片中瑞香素含量的高效液相色谱法(HPLC)并对其进行验证.方法 色谱柱为Agela Venusil C18(4.6 mm ×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.05％磷酸溶液(45:55),流速1.0 ml/min,柱温30℃,检测波长323 nm,进样量10μl.结果 瑞香素在5～45 μg/ml范围内具有良好的线性关系,R2=0.9999,平均回收率为101.17％,RSD为0.3％.结论 该法准确可靠,操作简便,可用于瑞香素缓释片的含量测定.
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在体单向肠灌流模型研究瑞香素的大鼠肠吸收特性
考察药物浓度、肠段、pH及P-gp对瑞香素肠吸收的影响.以酚红为标示物,采用大鼠在体单向肠灌流法研究瑞香素3个剂量组(10、20和40 μg·mL-1)在大鼠的十二指肠、空肠、回肠及结肠的吸收情况.实验结果发现瑞香素在pH 6.0时较为稳定,肠道酶对其代谢影响很小;瑞香素在低、中、高3个浓度下,各小肠段的有效渗透系数(Peff)有上升趋势,且高浓度与低浓度相比,在空肠和结肠的Peff差异显著(P＜0.05),由此可推测在实验浓度范围内,瑞香素在大鼠肠道内的吸收机制可能为被动扩散:瑞香素在小肠内无特定吸收部位,但与结肠相比,小肠有较好吸收,且存在显著性差异(P＜0.05);盐酸维拉帕米的加入对瑞香素4个肠段的吸收均无显著性差异(P＞0.05),由此推断瑞香素可能不是P-gp底物.
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高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法分析瑞香素在大鼠肠壁的代谢产物
研究瑞香素在大鼠肠壁产生的代谢产物.采用大鼠在体肠灌流模型,分别收集瑞香素0～2 h内的十二指肠、空肠、回肠和结肠灌流液,以液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法分析肠道灌流液中瑞香素的代谢产物.在大鼠十二指肠、空肠、回肠灌流液中共发现瑞香素原形药物和4个代谢产物,分别推测为瑞香素-7-硫酸酯、瑞香素-8-硫酸酯、瑞香素-7-葡糖醛酸结合物和瑞香素-8-葡糖醛酸结合物；而在结肠灌流液中未发现代谢产物.在瑞香素的4个代谢产物中,瑞香素-7-硫酸酯和瑞香素-8-硫酸酯(m/z 257)为首次发现的瑞香素在大鼠体内的Ⅱ相代谢产物,揭示了其在大鼠体内代谢的新途径.
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瑞香素在大鼠肝S9中体外代谢研究
瑞香素给药后在大鼠体内快速代谢消除,但机制仍不清楚.本研究开展瑞香素体外代谢特征分析,鉴定了瑞香素在大鼠肝S9 (RLS9)中的代谢产物结构,测定了不同代谢路径的动力学参数.HPLC-DAD-MS检测发现,瑞香素在RLS9中转化为6个代谢产物,包括7-或8-葡糖醛酸和硫酸酯代谢物、8-甲基代谢物及7-硫酸酯-8-甲基代谢物.动力学分析表明,瑞香素在RLS9的葡糖醛酸化和甲基化反应符合米氏动力学,7-O-磺酸化反应和8-O-磺酸化反应分别符合双位点和底物抑制动力学.3条代谢路径中,清除率大的为磺酸化反应,其次为甲基化和葡糖醛酸化反应.借助体外代谢动力学数据和体外-体内关联方法,预测获得的瑞香素在大鼠体内肝清除率(54.9 mL·min-1·kg-1)与文献报道的大鼠体内总清除率(58.5 mL·min-1·kg-1)接近.结果表明,肝脏是瑞香素在大鼠体内主要代谢位点.磺酸化、甲基化和葡糖醛酸化反应是瑞香素在大鼠肝脏中主要清除路径.
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瑞香素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织的影响
目的:观察瑞香素对佐剂性关节炎(AA)大鼠膝关节滑膜组织和滑液细胞形态学的影响.方法:采用弗式完全佐剂造成大鼠AA模型,造模后d 7开始给药,连续21 d,测量大鼠足跖肿胀度;后一次给药后大鼠脱颈椎处死,抽取关节滑液,观察滑液中细胞形态及数量的变化;并取关节滑膜组织做病理检查,观察滑膜细胞增生的情况.结果:瑞香素能显著抑制AA大鼠后足踝关节原发性和继发性肿胀;能抑制膝关节滑液细胞(主要是滑膜细胞、巨噬细胞和淋巴细胞)的过度增生,抑制滑膜组织增生和滑膜细胞下疏松结缔组织充血.结论:瑞香素对AA大鼠具有一定的治疗作用.
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透皮促进剂对祖师麻膏药透皮吸收的影响
目的:筛选祖师麻膏药的透皮促进剂,提高其透皮利用率.方法:采用TP-3扩散池,选择离体大鼠皮肤为渗透屏障,从接收池取样,用HPLC检测法测定样品中瑞香素的含量,比较氮酮、薄荷脑和冰片对祖师麻膏药透皮吸收的影响.结果:4%的氮酮对瑞香素的促渗透作用强.结论:4%的氮酮明显促进祖师麻膏药中主要有效成分瑞香素的透皮效率.
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金边瑞香鲜花中瑞香素的超临界萃取及条件的优化
目的:研究超临界CO2流体萃取(SFE)法萃取金边瑞香鲜花中有效成份之一瑞香素的佳条件.方法:采用均匀设计方法.以萃取压力、萃取温度、解析压力、解析温度4个因素为考察条件,每个因素设7个水平进行实验.结果:在SFE中佳萃取条件为:萃取压力20MPa,萃取温度39℃,解析压力8MPa,解析温度36℃.结论:本法是一种简便、高选择性、高效率地萃取金边瑞香鲜花有效成份的方法.
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瑞香素治疗大鼠肺孢子虫肺炎的实验研究
目的 观察瑞香素对大鼠肺孢子虫肺炎(PCP)的治疗效果.方法 皮下注射醋酸泼尼松龙建立PCP大鼠模型.将受试大鼠随机分为正常对照组(A)、未治疗对照组(B)、TMP-SMZ对照组(C)、瑞香素治疗组(D)和青蒿素对照组(E)5组.各组从第7周开始灌服相应药物5 d,停药后观察1周,用肺质量/体质量比和肺组织虫荷量考核疗效.结果 PCP大鼠6周内的病死率为16.7%;满6周者抽样进行病原、病理检查证实均已成功诱导PCP.A、B、C、D、E组受试大鼠的平均肺质量/体质量比分别为0.75、1.05、0.77、0.77和0.85,B～E 4组受试大鼠肺组织虫荷量分别为1 490、74、339和219个/mg.统计学分析显示,经瑞香素治疗的大鼠平均肺质量/体质量比、肺虫荷量均明显低于未治疗对照组(分别为P＜0.05和P＜0.01),效果虽不如TMP-SMZ,但与青蒿素疗效相似(P＞0.05).结论 瑞香素对大鼠PCP有显著疗效,效果与青蒿素接近.
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瑞香素对急性血瘀大鼠血液流变学的影响
目的 研究瑞香素对志性血瘀大鼠血液流变学的影响.方法 40只大鼠随机分为CMC-Na正常对照组,急性血瘀模型组和瑞香素大,中、小剂量组,瑞香素大、中、小剂量组分别灌胃瑞香素200,100、50mg/kg;正常组及模型组灌服等量0.2%CMC-Na溶液,给药后第3天遣模,检测血液流变学指标:全血低切、中切及高切粘度,缸细胞压积(Hct),缸细胞变形指数.结果 血瘀模型组在高、中、低切变半的全血粘度较正常对照组明显升高(P<0.01),而使用瑞香素大、中剂量组的全血粘度均下降,较血瘀模型组有显著性改善(P<0.05或P<0.01);血瘀模型血浆粘度较正常对照组明显升高(P<0.01),与全血粘度类似,瑞香素大、中剂量组的血浆粘度较丘瘀模型组有显著性改善(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,血瘀模型组缸细胞压积明显升高(P<0.01),除了低剂量组不能显著减低升高的红细胞压积外,高、中剂量组均可显著降低血瘀模型的红细胞压积.结论 瑞香素对急性血瘀大鼠全血和血浆粘度以及红细胞压积具有明显降低作用,通过改善血液漉变学指标,从而使血瘀状况有所改善.
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HPLC法测定穿王消炎片中西瑞香素的含量
目的：建立穿王消炎片中瑞香素含量测定的方法。方法采用Agilent Eclipse SB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，以甲醇-0.1%磷酸(40∶60)为流动相，检测波长345nm，流速1.0ml.min-1，柱温35℃。结果瑞香素在4.9325～49.3250μg.ml-1浓度范围内线性关系良好，r=0.9994，平均回收率为99.03%，RSD为1.76%。结论方法简便、结果准确，可用于穿王消炎片的质量控制。
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瑞香素对垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血保护作用的研究
目的:观察瑞香素对垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的保护作用.方法:采用大鼠舌下静脉注射垂体后叶素造成急性心肌缺血模型,心电图检测观察注射垂体后叶素后不同时间点的第Ⅱ导联心电图ST波变化百分率(%),测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,并观察各项指标的变化.结果:瑞香素能明显对抗垂体后叶素引起的急性心肌缺血的心电图变化.提高血清SOD活性、降低CK-MB和MDA含量.结论:瑞香素具有显著对抗垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的作用.
