首页 > 文献资料
-
薯蓣皂素对睾丸支持细胞增殖及ESR核质膜异位的影响
目的:研究薯蓣皂素(Diosgenin)促进小鼠睾丸支持细胞(TM4细胞系)增殖作用及机制.方法:采用Brdu标记法检测不同浓度Diosgenin及2.5μM Diosgenin在不同时间对TM4细胞增殖的影响;Western Blot法检测2.5μM Diosgenin干预TM4细胞30 min,细胞质膜及核雌激素受体1(Estrogen receptors 1,ESR1)和雌激素受体2(Estrogen receptors 2,ESR 2)蛋白表达;2.5μM Diosgenin联合1 nM雌激素膜受体拮抗剂ICI或5 nM的Src信号通路的酪氨酸激酶抑制剂PP2干预TM4细胞15 min后,细胞核与质膜中ESR1和ESR2蛋白表达.结果:2.5 μM Diosgenin干预24h时TM4细胞增殖为显著(P＜0.05),15 min时TM4细胞质膜上ESR1与ESR2蛋白表达高(P＜0.05),核表达低(P＜0.05);2.5 μM Diosgenin联合ICI或PP2干预15 min时ESR1与ESR2质膜表达受到明显抑制(P＜0.05),联合PP2干预时,核ESR2表达较单用2.5 μM的Diosgenin干预有所升高(P＜0.05).结论:Diosgenin具有类雌激素样作用,并能促进睾丸支持细胞增殖,且存在一定量效与时效关系;其机制可能与激活依赖于Src诱导的即时和瞬态支持细胞ESR核质膜易位有关.
-
川芎嗪拮抗链霉素耳毒性损伤豚鼠耳蜗支持细胞透射电镜观察
目的 探讨川芎嗪拮抗链霉素耳毒性损伤机制.方法 将18只豚鼠随机分为三组:对照组,链霉素组(SM组),川芎嗪+链霉素组(TMP+ SM组).对照组每日腹腔注射生理盐水2.5 ml/kg;SM组每日腹腔注射硫酸链霉素450mg/kg,同时在对侧腹腔注射生理盐水2.5ml/kg;TMP+SM组每日腹腔注射川芎嗪注射液100mg/kg,同时在对侧腹腔注射硫酸链霉素450 mg/kg.各组皆连续用药10d,并于实验前后分别进行听性脑干电位(ABR)检测以监测耳毒发生.10d后处死并制备耳蜗标本,进行耳蜗支持细胞的透射电镜观察.结果 SM组ABR阈值明显高于对照组(P＜0.01),而TMP +SM组ABR阈值明显低于SM组(P＜0.01).SM组Hensen细胞胞膜模糊,表面微绒毛减少,线粒体嵴缺损;内柱细胞细胞核异染色质边集.而TMP+ SM组Hensen细胞和内柱细胞形态学改变较SM组明显减轻.结论 链霉素耳毒性损伤能造成耳蜗支持细胞的形态学改变,而TMP可以拮抗这一改变的发生.
-
支持细胞波形蛋白及紧密连接结构蛋白在染锰大鼠睾丸中的表达
目的 研究染锰诱导的大鼠睾丸超微结构改变及支持细胞vimentin(VM)和紧密连接OccludinsmRNA和Claudin-11 mRNA表达,探讨锰对支持细胞骨架蛋白和紧密连接蛋白的破坏机制.方法 雄性SD大鼠随机分为空白对照组,低剂量(15 mg/kg MnCl2)和高剂量(30 mg/kg MnCl2)组,8只/组.实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,电镜观察睾丸支持细胞及血睾屏障超微结构,免疫组织化学(SABC)法检测支持细胞VM表达,实时定量PCR反应检测血睾屏障紧密连接Occludins,Claudin-11 mRNA表达.结果 随着染锰时间延长和剂量增加,各组支持细胞数量及VM阳性细胞率、OccludinsmRNA和Claudin-11 mRNA表达水平均显著降低.各组大鼠睾丸支持细胞数量与VM阳性细胞率及OccludinsmRNA和Claudin-1 l mRNA表达水平均成正相关.结论 锰可抑制大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白及紧密连接相关蛋白表达,产生生殖毒性效应.
-
星形胶质细胞与运动神经元的相关关系
星形胶质细胞作为中枢神经系统中丰富的神经胶质细胞,是中枢神经系统主要的支持细胞,为神经元提供营养支持和保护作用.在肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)发病过程中,退行性病变的神经元以及过度激活的胶质细胞将导致神经元所处微环境恶化,使神经元的损伤进行性加重.因此,研究星形胶质细胞与运动神经元的关系对探讨ALS的发病机制及其干预治疗具有非常重要的意义.
-
锌指蛋白185在小鼠睾丸支持细胞中的表达与定位
目的:检测锌指蛋白185在小鼠睾丸支持细胞中的表达,探讨其与精子发生的关系.方法:提取睾丸和支持细胞总RNA,经半定量RT-PCR法检测ZNF185的转录水平;提取睾丸和支持细胞的蛋白质,利用Westem blot分析ZNF185的表达量;制备支持细胞爬片,采用免疫荧光技术检测ZNF185的定位.结果:(1)半定量RT-PCR结果显示:在睾丸支持细胞中扩增出ZNF185基因条带.(2)Western blot结果显示:ZNF185在支持细胞中的表达量显著低于在睾丸组织中的表达量.(3)免疫荧光结果显示:ZNF185主要定位于支持细胞胞质中.结论:ZNF185可能参与支持细胞结构与功能的调控,进而影响精子发生过程.
关键词： 锌指蛋白(ZNF)185 支持细胞 表达 定位 精子发生 -
高温对原代支持细胞增殖能力和occludin紧密连接蛋白的影响
目的:研究高温对原代大鼠睾丸支持细胞增殖作用和对紧密连接蛋白的损伤机制.方法:体外分离培养雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC),免疫组化FasL鉴定.实验分为对照组(36℃)和实验组(37℃、38℃、39℃).在相应的温度下培养5d后,CCK-8法检测SC增殖作用,Western印迹法检测OCLN表达水平.结果:体外培养SC的纯度＞90％,CCK-8结果显示,细胞增殖活性在36℃时强,37～39℃时逐渐降低；Western印迹显示,36℃时OCLN表达量高；高于36℃时,OCLN表达量随着温度的增加而降低(P＜0.05).结论:高温影响SC增殖活性,破坏了支持细胞紧密连接蛋白的正常表达和血睾屏障的完整性,从而影响正常精子的形成.
-
线粒体通透性转换孔与缺血/再灌注损伤
线粒体在细胞存活和死亡中扮演着重要角色.在生理情况下它是细胞的能量转换器,三羧酸循环、电子传递和氧化磷酸化均在线粒体中进行,支持细胞的存活;在缺血/再灌注情况下则转而促进细胞的坏死和凋亡,角色转变的开关就是线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP).随着"线粒体医学"的不断发展,对缺血/再灌注损伤的机制研究更加深入,抑制MPTP的开放被认为是治疗缺血/再灌注损伤有前途的靶位.
-
大鼠睾丸支持细胞的分离及培养方法
目的简化大鼠睾丸支持细胞的分离培养方法,提高支持细胞的获取量.方法取鼠龄16～22天的Wistar大鼠,去除睾丸被膜,剪碎后用0.25%胰蛋白酶和0.1%胶原酶次第消化.然后将其制成细胞悬液并分装入25cm2的培养瓶中,放置在39℃ 5% CO2的培养箱孵育48h,以利于去除精原细胞.取出后冲洗两次,换液并移入37℃ 5% CO2培养箱进行培养.在此期间每天用倒置显微镜进行观察,并于培养第6天做光镜和电镜观察.结果在大鼠睾丸支持细胞的分离培养中,支持细胞占培养细胞总数的90%以上,大大提高了支持细胞的获取量.结论应用本实验方法获取大鼠睾丸支持细胞获得成功并简化了国内现行的方法,提高了支持细胞的获取量.
-
镉致大鼠前体精原干细胞-支持细胞共培养系损伤的形态变化
[目的]通过对大鼠前体精原干细胞-支持细胞共培养系进行镉染毒,探讨镉对前体精原干细胞和支持细胞共培养系早期效应的形态学变化. [方法]从3天龄的SD大鼠睾丸中分离前体精原干细胞和支持细胞并进行24 h共培养后,再分别给予0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L的氯化镉(CdCl2)染毒12h,然后用碱性磷酸酶和油红O染色分别鉴定前体精原干细胞和支持细胞,观察不同细胞的形态,并用原位末端标识法(TUNEL方法)进行细胞凋亡的原位检测.[结果]2.5μmol/L CdCl2染毒未显著改变共培养中精原干细胞和支持细胞的形态.5.0μmol/L以上浓度CdCl2染毒可致支持细胞(由油红O染色确认)的结构呈现明显变化,具有浓度依赖趋势,用TUNEL法检测发现前体精原干细胞和支持细胞均发生凋亡,和对照组相比差别有统计学意义. [结论]CdCl2染毒12h可诱导支持细胞的形态改变,以及前体精原干细胞和支持细胞的凋亡.
-
p,p'-DDE、β-BHC对大鼠支持细胞FasL mRNA表达及NF-κB活性的影响
[目的]研究有机氯农药DDT和六六六的代谢产物(p,p'-DDE)和β-BHC及联合染毒对离体培养大鼠支持细胞(sertoli cell)FasL mRNA表达及NF-κB活性的影响. [方法]分离大鼠睾丸支持细胞进行原代培养2d,以DMSO为溶剂对照,分别以终浓度为10、30、50μmol/L的p,p'-DDE、β-BHC及联合染毒支持细胞24h,应用RT-PCR法研究支持细胞FasL mRNA的表达;用激光共聚焦显微镜检测NF-κB的转位激活状况. [结果]10、30、50μmol/L的p,p'-DDE、β-BHC及其联合染毒支持细胞后,FasL mRNA表达升高,50μmol/L剂量组与对照组差异有统计学意义(P＜0.05),各组内低、中剂量组与高剂量组差异有统计学意义(P＜0.05);NF-κB活性明显增强.[结论]支持细胞经p,p'-DDE、β-BHC及其联合染毒后,FasL mRNA表达明显升高,NF-κB的活性随染毒剂量的增加而增强,且联合作用比单独作用更加明显.
-
壬基酚母鼠染毒对仔鼠睾丸支持细胞功能的影响
[目的]研究壬基酚(NP)对性成熟期F1雄性SD大鼠睾丸支持细胞功能的影响机制. [方法]设50、100、200mg/kg NP 3个剂量染毒组和1个对照组,对母鼠从妊娠第7天至断乳期灌胃染毒,产后55天处死雄性子代,取睾丸固定制片后,分别作病理组织学观察,作波形蛋白(vimentin)、广谱钙黏附蛋白(pan-cadherin)、信号转换和转录激活因子3(STAT3)的免疫组化分析和雄激素结合蛋白(ABP)、白细胞介素-6(1L-6)的原位杂交试验. [结果]睾丸组织病理学检查显示,各剂量染毒组发育异常的生精小管数增多,支持细胞数量减少;200mg/kg组波形蛋白、广谱钙黏附蛋白的表达低于对照组(P<0.05);各染毒组STAT3的表达与对照组相比差异无统计学意义;100mg/kg和200mg/kg组ABP mRNA和IL-6mRNA的表达低于对照组(P<0.05). [结论]200mg/kg NP可抑制性成熟期F1雄性sD大鼠支持细胞的波形蛋白、广谱钙黏附蛋白、IL-6、ABP的表达,影响支持细胞功能.
-
P,P'-DDE对睾丸支持细胞雄激素结合蛋白表达的影响
[目的]研究雄激素结合蛋白在p,p'-DDE致雄性大鼠生殖内分泌干扰过程中的作用机制.[方法]对大鼠睾丸支持细胞离体原代培养4～5 d;设溶剂(DMSO)及阴性对照,以终浓度为30、50、80、100μmol/L的p,p'-DDE作用于支持细胞24h,计数200个细胞,计算支持细胞存活率;分别以浓度为10、30、50μmol/Lp,p'-DDE作用于支持细胞24h,运用一步法RT-PCR检测支持细胞内雄激素结合蛋白基因mRNA水平.[结果]p,p-DDE在50 μmol/L及以下浓度作用24 h后,支持细胞存活率＞90%,而80 μmol/L组仅45%;染毒24 h后,对照组及10、30、50 μmol/L的p,p-DDE组支持细胞内雄激素结合蛋白mRNA灰度比值分别为0.3140±0.102 0、0.392 0±0.094 9、0.583 7±0.122 1、0.649 0±0.171 8,随p,p'-DDE所给浓度的增高而逐渐升高,且30、50 μmol/L组与对照组差异存在显著性(P＜0.05),呈剂量依赖关系.[结论]p,p-DDE作用于睾丸支持细胞后,雄激素结合蛋白基因转录水平可明显升高,从而表达增强,促进雄激素结合蛋白的生成,代偿性地维持生精过程.
-
丙烯腈对原代双室培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性
[目的]研究丙烯腈(ACN)对原代双室培养的大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,Sc)的毒性,以探讨ACN诱导雄性生殖毒性机制.[方法]用已分离纯化的大鼠睾丸SC为材料,用原代双室培养方法,加和不加S9,以浓度为0、0.5、5.0、25.0μg/ml ACN染毒,于4、12、24、48 h后检测跨细胞上皮电阻(TER);染毒24、48 h后检测转铁蛋白(Trf)浓度,评价ACN体外染毒对大鼠睾丸SC的损伤.[结果]ACN浓度≥5.0μg/ml时,对TER的形成有明显抑制作用;5.0 μg/ml培养48 h、25.0μg/ml培养12 h后对已形成的TER引起下降;加S9(+S9)与不加S9(-S9),TER值接近(如25.0 μg/ml组培养12 h后+S9组为480.3,-S9组为486.3),无明显差异.浓度为25.0μg/ml时,ACN染毒引起外室Trf浓度升高,明显高于对照及其他组(P<0.05),内室Trf浓度变化不明显,因此内室与外室之间Trf浓度差值缩小.[结论]结果表明ACN对双室培养的SCTER的形成有抑制作用,对已形成的TER有降低作用;提示ACN可能对SC形成的紧密连接和"血睾屏障"有影响.
-
原代睾丸支持细胞分离纯化及双室培养模型的建立
[目的]通过建立双室培养模型,为探讨毒物或药物对睾丸支持细胞作用机制提供一个合适的体外研究方法.[方法]18 d龄雄性SD大鼠,脱颈椎处死后,无菌条件下取睾丸组织,经胰蛋白酶和胶原酶二步消化后获得支持细胞,经接种、纯化和鉴定,获得纯度＞95%支持细胞.培养液A为DMEM培养基和F12培养基按照1:1比例用去离水配制,每升培养基中含有20万单位青霉素和0.2 g链霉素,用2%的碳酸氢钠调整pH值为7.2左右.培养液B为培养液A中加入维生素A、E(200 ng/ml)和胰岛素(2 μg/ml).培养液C为B培养液中再加入卵泡刺激素(100ng/ml)和睾丸酮(10-8mol/L).将制备好的支持(Sertoli)细胞混悬液按2.5×106个/ml浓度接种于24孔培养板内,培养条件为35℃(睾丸细胞的适宜温度),2%CO2恒温静止培养.测定3种不同培养液中培养的支持细胞形成的跨细胞上皮电阻值(transepithelial electrical resistance,TER).[结果]培养液加入维生素A、E和胰岛素后,支持细胞形成的TER有所升高,而培养液在加入睾丸酮和卵泡刺激素后,Sertoli细胞形成的TER则显著升高.培养第1天3种培养液中培养的Sertoli细胞形成的TER分别为33.85、31.38和34.26Ω.cm2,培养第13天分别为198.53、289.91和707.50 Ω/cm2.[结论]Sertoli细胞双室培养模型可模拟体内状态的"血睾屏障",为体外研究雄性生殖毒性机制提供一个合适模型.
-
镉对培养大鼠睾丸支持细胞的损伤及黄芪的拮抗作用
目的:探讨镉对培养大鼠睾丸支持细胞的损伤及黄芪的保护作用.方法:对照组和经镉、镉加黄苠处理的原代培养大鼠睾丸支持细胞用于波形蛋白、E-钙黏蛋白免疫组织化学检测、细胞内钙离子浓度测定及电镜观察.结果:镉处理后2种蛋白阳性产物表达较对照组减弱.镉加黄芪组阳性产物较对照组减弱但明显强于镉组.对照组、镉和镉加黄苠组细胞内钙离子浓度分别为(81.773±3.711)、(161.6024±1.978)和(104.278±1.963).镉处理后支持细胞超微结构受损明显,部分细胞核异染色质凝聚或核碎裂,胞质空泡化.镉加黄芪组细胞破坏较轻.结论:镉对培养支持细胞具有明显的毒性作用,而黄苠可以拮抗镉对支持细胞的损伤.
-
实验性隐睾术后大鼠睾丸生精上皮酶的动态变化
目的:研究热作用对睾丸生精过程影响中AKP、ACP和SDH活性的变化,探讨其生物学意义,为男性抗生育提供形态学资料.方法:人工隐睾术后1～70天取出大鼠睾丸,冰冻切片,显示AKP、ACP和SDH活性,光镜观察.结果:术后曲细精管界膜AKP活性减弱,直到晚期仍较弱;支持细胞术后1～10天酶增强,随后减弱,50天始为微弱反应;各级生精细胞反应不一.术后界膜ACP阴性;支持细胞酶增强,晚期仍较强;生精细胞酶反应不一.术后界膜SDH为阳性;支持细胞早期反应较强,3天始减弱,到晚期仍较弱;生精细胞酶减弱,15天始为阴性.结论:隐睾术后热作用影响生精过程,使AKP、ACP和SDH有明显变化,因各级生精细胞对热作用的反应性与耐受性不同,使以上三种酶反应强弱不一.
-
43℃热处理对体外培养的猴支持细胞中热休克蛋白105,70和60表达的影响
目的:研究热处理对原代培养的猴支持细胞中热休克蛋白(Hsps)105、70和60表达的影响,并分析可能的信号通路.方法:分离青春期恒河猴睾丸的支持细胞,以Western blot、实时定量PCR和免疫荧光化学法分析43℃热处理对三个热休克蛋白mRNA和蛋白表达的影响.结果:Hoechst 33342染核实验表明热处理后支持细胞并未发生凋亡.Hsp105在未处理的支持细胞有基础表达,热处理后12h其mRNA和蛋白水平升高了约20倍.未处理的支持细胞不表达Hsp70,但热处理显著诱导了它在胞浆中的表达.Hsp70表达的变化时相与Hsp105相似.与Hsp105和Hsp70相比,Hsp60在热处理后的变化要小得多,43℃处理后12h-48h,其蛋白水平仅为对照的1.5倍左右.胞外信号调节激酶(extracellular regulated kinase,ERK)1/2的抑制剂U0126或磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide kinase-3,PI3K)抑制剂LY294002可部分阻断热处理对Hsp105和Hsp70的诱导作用.结论:这些结果表明ERK和/或PI3K信号通路可能介导热诱导的猴支持细胞热休克蛋白的表达,但这三种热休克蛋白的表达模式并不相同.该结果提示它们在支持细胞中可能有不同的调节功能.
-
转染Cox7a2重组质粒对大鼠支持细胞分泌功能和ERK磷酸化水平的影响
目的：观察大鼠睾丸支持细胞转染细胞色素C氧化酶7a2（Cox7a2）重组质粒后对支持细胞分泌功能及细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化水平的影响。方法培养原代大鼠睾丸支持细胞，将细胞分为空白对照组、空载体组、重组质粒组。将pEGFP-C1-Cox7a2重组质粒转染支持细胞24h后，收集细胞上清液，采用酶联免疫法，测定转铁蛋白（TF）、白细胞介素-1（interleukin-1, IL-1）β、白细胞介素-6（IL-6）含量。Western blot检测ERK的磷酸化水平。结果重组质粒组TF为（14.11±0.45）pmol/mL，显著低于空白对照组（24.3±0.64）pmol/mL和空载体组（25.16±0.42）pmol/mL（P＜0.01）。重组质粒组IL-1β、IL-6水平分别为（157.14±12.69）pg/mL、（0.79±0.04）pg/mL，显著高于空白对照组（33.05±1.92）pg/mL、（0.25±0.01）pg/mL和空载体组（40.46±6.69）pg/mL、（0.37±0.03）pg/mL，差异均具统计学意义（P＜0.01）。与空白对照组和空载体组相比，重组质粒组ERK1/2磷酸化水平明显增高（P＜0.01）。结论转染Cox7a2重组质粒后损害了大鼠睾丸支持细胞的分泌功能，提高ERK1/2磷酸化水平。
-
高温致体外大鼠睾丸支持细胞凋亡的初步研究
目的：通过观察高温对体外大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响，探讨高温在男性生殖功能降低或不育中的作用机制。方法分离培养大鼠睾丸支持细胞（Sertoli cell，SC）并鉴定。实验分为实验组（39℃下培养2h、4h、8h、12h及24h）和对照组（36℃）。CCK-8法检测 SC增殖活性，流式细胞仪检测SC凋亡率，RT-PCR检测Fas/Fasl及Bax/Bcl-2基因转录水平。结果本实验中， SC纯度达到96.15%；随高温时间的延长，SC增殖活性逐渐降低（P ＜0.05）；凋亡率呈现先升高后降低的趋势，在高温作用下8h凋亡率高（P ＜0.05）； Fas、Fasl、Bax基因转录水平逐渐升高（P＜0.05），Bcl-2基因转录水平逐渐下降（P＜0.01），且呈时间效应依赖关系。结论高温导致SC增殖能力降低，并可能通过“死亡受体”和“线粒体”两条信号传导途径导致SC凋亡，破坏生精微环境，进而导致男性生殖功能降低甚至不育。
-
无精子症患者睾丸穿刺中评价支持细胞意义
目的 评价无精子症患者睾丸穿刺中检测支持细胞指数的意义.方法 采用Johnson评分法评价睾丸活检组织生精情况;采用瑞-姬染色,人工判读睾丸穿刺液涂片中各期生精细胞和支持细胞,并对其进行分类计数.结果 睾丸活检组织随着Johnson评分降低,支持细胞形态结构越不规则;睾丸穿刺中生精正常组9例,支持细胞指数范围均在20%～40%之间;生精障碍组15例,其中11例支持细胞指数范围在80%～150%,4例支持细胞指数范围在30%以下;生精阻滞组9例,支持细胞指数范围均在150%～500%之间,1例为15%.结论 生精正常组与生精障碍组、生精阻滞组的支持细胞指数差异明显,无精子症患者睾丸穿刺报告中支持细胞指数具有重要意义.
