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缺血/再灌注心肌肌浆网肌钙调控蛋白mRNA表达的变化
目的:研究缺血/再灌注损伤心肌肌浆网四种钙调控蛋白mRNA表达的变化.方法:将SD大鼠分为正常对照组和缺血/再灌注损伤组,采用Langendorff离体灌流技术,全心停灌15 min后行45 min复灌制备缺血/再灌注模型,记录心脏收缩功能各项参数(左室发展压、+dp/dt-max、-dp/dt-max),进行心律失常评分,同时对两组心肌标本进行半定量RT-PCR检测,测定SERCA、PLB、IP3R2和RyR2四种蛋白质的mRNA表达水平的变化.结果:与正常对照组比较,各时间点缺血再灌注心脏左室发展压、+dp/dt-max、-dp/dt-max均显著下降,再灌注阶段的心律失常评分明显增高,同时发现心脏SERCA,IP3R2,RyR2 mRNA表达降低,然而PLB mRNA表达未出现变化.结论:缺血再灌注损伤造成心脏功能减退,心律失常增多,并可诱导心室肌钙调控蛋白SERCA、IP3R2、RyR2mRNA表达下调.
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海马神经元缺血/再灌注后自噬的表达及其作用
目的:研究自噬在大鼠海马神经元缺血缺氧/再灌注过程中的表达及自噬在神经元缺血缺氧/再灌注损伤中的作用.方法:原代培养的大鼠海马神经元经2 h的氧糖剥夺和不同时段的再灌注处理,MTT法检测细胞活性,透射电镜下检测自噬的特异性结构,免疫荧光化学法检测自噬特异性蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3B)的表达.应用自噬抑制荆3-甲基腺嘌呤(3-MA)检测神经元的活性.结果:经氧糖剥夺/再灌注后,海马神经元的活性比未经氧糖剥夺/再灌注组显著地降低.透射电镜和免疫荧光检测,未经氧糖剥夺/再灌注的神经元自噬的发生率极低,氧糖剥夺后和再灌注的不同时间段,均有自噬的发生.应用自噬抑制刑3-MA阻断自噬后,神经元的存活率显著降低.结论:缺血缺氧/再灌注能激活海马神经元的自噬,并可能在缺血缺氧/再灌注过程中起对抗损伤的作用.
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活性氧、NO和线粒体ATP敏感钾通道在TNF-α预处理对缺血/再灌注心肌保护中的作用
目的: 观察TNF-α预处理对缺血/再灌注心脏功能和酶学指标的影响及其可能机制.方法: 采用心脏Langendorff灌流模型.结果:与单独缺血/再灌注组相比,TNF-α(104U/L)预处理明显减弱缺血/再灌注对左室发展压、左室舒张末压、大收缩/舒张速率和左室发展压与心率乘积的抑制作用(P<0.05),并显著降低复灌后冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,增加线粒体中锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性(P<0.05);分别使用抗氧化剂2-MPG(0.3 mmol/L)、一氧化氮合酶抑制剂L-NAME(0.5 mmol/L)或线粒体ATP敏感钾通道抑制剂5-HD(100 μmol/L)预处理,减弱了TNF-α改善缺血/再灌注后心功能、抑制心肌LDH释放和诱导Mn-SOD活性增高的作用.结论: TNF-α预处理具有减轻心脏缺血/再灌注损伤的作用,这一作用可能与其诱导Mn-SOD活性增高有关,活性氧、一氧化氮和线粒体ATP敏感钾通道参与介导TNF-α的心肌保护作用.
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胰高血糖素样肽-2对小鼠小肠缺血/再灌注损伤的保护作用
目的:观察胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对缺血/再灌注损伤小鼠小肠的保护效应.方法:采用肠缺血/再灌注(I/R)模型,将32只小鼠随机分为4组(n=8)假手术(Sham)组、I/R组、I/R+GLP-2保护组和I/R+谷氨酰胺(GLN)阳性对照组.光镜观察小肠黏膜形态学改变.检测小肠绒毛高度和隐窝深度;小肠组织二胺氧化酶(DAO)活性;肠系膜淋巴结(MLN)细菌易位率.结果:与假手术组相比,I/R组部分小肠绒毛坏死脱落,绒毛高度下降,隐窝变浅(P＜0 01);小肠组织DAO活性降低(P＜0.01);MLN细菌易位率增加(P＜0.05).与I/R组比,GLP-2组肠绒毛损害明显减轻,DAO活性回升(P＜0.01),细菌易位率回降(P＜0.05).结论:GLP-2对缺血/再灌注损伤小鼠小肠的形态结构及肠屏障功能具有保护作用.
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蛋白激酶C活化对L-6TG大鼠肌母细胞缺血/再灌注损伤中细胞凋亡的影响
目的:蛋白激酶C(PKC)活化对L-6TG大鼠肌母细胞缺血/再灌注损伤过程中细胞凋亡的影响.方法:将培养的L-6TG大鼠肌母细胞随机分为3组:①正常对照组(C组);②缺血/再灌注组(I/R组);③PMA+缺血/再灌注组(PMA组).观测了细胞内SOD、XOD、Ca2+含量的变化;采用MTT法检测线粒体的功能;利用流式细胞仪和细胞DNA电泳结果检测细胞凋亡情况;采用免疫组织化学的方法检测caspase-3的蛋白表达情况,结合自动图像分析系统对其结果进行定量分析.结果:蛋白激酶C活化可显著降低L-6TG大鼠肌母细胞I/R 4 h后细胞内XOD、Ca2+含量及凋亡细胞百分率,增加细胞内SOD活性及线粒体呼吸功能,DNA电泳无梯状条带出现,caspase-3的表达明显下调.结论:蛋白激酶C活化可明显减轻L-6TG大鼠肌母细胞缺血再灌注损伤后的细胞凋亡的发生,其机制可能与减轻氧化损伤、调节细胞内钙稳态、减轻线粒体损伤、减少caspase-3表达有关.
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缺血/再灌注小鼠海马组织cAMP和腺苷环化酶mRNA水平的变化
目的:观测缺血/再灌注小鼠海马组织环磷酸腺苷(cAMP)和腺苷环化酶(AC)mRNA水平,探讨缺血/再灌注发病的分子生物学机制.方法:通过双侧颈总动脉线结、连续3次缺血-再灌注,制作缺血/再灌注动物模型,并设立假手术组;术后29 d、30 d分别测试学习和记忆成绩;应用放射免疫法检测小鼠海马组织cAMP水平,应用原位杂交技术检测ACmRNA水平.结果:与假手术组比较,模型组学习和记忆成绩均降低(P＜0.05),且海马组织cAMP水平也降低(P＜0.05),海马CA1区AC mRNA阳性神经元面密度明显降低(P＜0.05).结论:海马组织cAMP和AC mRNA水平降低可能参与了缺血/再灌注后学习和记忆障碍的分子生物学发病机制.
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巨噬细胞亚型转变在大鼠肾脏缺血/再灌注损伤中的作用
目的:探讨巨噬细胞在大鼠肾脏缺血/再灌注损伤过程中的亚型转变及意义.方法:将30只雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham,n=6)和缺血/再灌组(IRI,夹闭肾动脉45 min,n=24).IRI组分别于术后0、6、24和72 h取肾组织,每个时相组6只大鼠.用HE染色观察肾组织损伤程度;免疫组化染色检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达;实时定量RT-PCR检测巨噬细胞移动抑制因子(MIF) mRNA的表达;免疫组织荧光染色检测MIF、单核巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及活化巨噬细胞标志物CD68的表达,流式细胞分析检测巨噬细胞M1和M2亚型的分布特征.结果:病理结果显示大鼠肾局部损伤情况和炎症细胞浸润程度在24h时为严重,之后逐渐恢复.PCNA在再灌后表达明显增加,6h达峰值,72 h表达下降.相比于正常组,再灌组大鼠肾组织中MIF的mRNA和蛋白表达明显升高;MCP-1表达则在6h达峰值,随后下降;而CD68阳性的巨噬细胞数量明显增加,24h达峰值,72 h表达下降.更进一步研究发现缺血/再灌注6h时,M1亚型分布达高值;之后随着缺血/再灌注时间延长,M1亚群相对含量开始下调,M2随之升高.结论:在肾脏缺血/再灌注早期,M1巨噬细胞介导的组织损伤发挥主要作用,随后M2型表达逐渐上调,并通过促进细胞增殖修复肾组织损伤.
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银杏提取物对大鼠肺缺血/再灌注损伤的保护作用
目的:观察银杏提取物(EGB)对大鼠体外循环肺缺血/再灌注损伤(I/R)的保护作用.方法:建立离体大鼠肺灌流模型,SD大鼠随机分成假手术组(Sham)、I/R组和EGB组,观察大鼠肺组织形态学改变、分别测定肺组织匀浆及灌流液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量、肺湿干重比(W/D)和平均肺动脉压(MPAP).结果:HE染色显示EGB组肺损伤明显减轻、肺组织湿/干重比和MPAP显著低于I/R组:EGB组肺脏灌流液和组织匀浆中SOD的活性显著高于I/R组,MDA含量则显著低于I/R组.结论:EGB对大鼠肺I/R损伤具有保护作用.
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血红素氧合酶-1 mRNA在离体大鼠心肌缺血预处理中的变化
目的:观察血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA在缺血预适应中的变化.方法:实验动物随机分为对照组(CN)、缺血/再灌损伤组(I/R)、缺血预适应+缺血/再灌损伤组(PC).结果:PC组的心功能恢复率高于I/R组(P<0.05),MDA含量低于I/R组(P<0.05),HO-1 mRNA又高于I/R组(P<0.05).结论:HO-1mRNA表达上调与缺血预适应保护缺血/再灌注损伤心肌有关.
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大鼠脑缺血再灌注时水通道蛋白4表达与血脑屏障通透性变化
目的:研究大鼠脑缺血/再灌注时脑组织中水通道蛋4(AQP4)表达与脑水肿、血脑屏障通透性间关系.方法:采用大鼠大脑中动脉线栓缺血模型,免疫组化法、蛋白印迹法测定AQP4表达,干湿重法测定脑水含量以评价脑水肿,伊文氏蓝(EB)法测定血脑屏障通透性.结果:脑缺血后再灌注4～6 h,AQP4表达上调,至12 h上调显著,48～72 h达高峰.脑水含量、EB含量均与此趋势相一致,且AQP4表达与脑水含量、EB含量呈显著正相关(P＜0.05).结论:AQP4表达参与了缺血性脑水肿的产生,且与BBB通透性改变呈正相关.
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参芪扶正注射液对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用
目的:探讨参芪扶正注射液对家兔心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制.方法:家兔30只,随机分为3组(n=10):对照组、缺血/再灌注损伤(MI/RI)组、参芪扶正注射液组.统一标准喂养,行药物预处理10 min,手术结扎家兔左冠状动脉前降支,建立急性心肌缺血/再灌注模型,观察急性心肌缺血和再灌注状态下心肌组织中酶的变化；心肌细胞凋亡指教和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达.结果:与MI/RI组比较:参芪扶正注射液组丙二醛(MDA)含量明显降低,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和细胞能源Na+,K+-ATP及Ca2+-ATP酶活性明显升高,明显抑制乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的释放(P＜0.05,P＜0.01),心肌细胞Bcl-2表达指数明显升高,细胞凋亡指数和Bax表达指数明显降低(P＜0.01).结论:参芪扶正注射液对心肌缺血/再灌注损伤具有明显的保护作用.
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川芎嗪对脑缺血/再灌注后所致肺损伤的影响
目的:观察川芎嗪对脑缺血/再灌注后肺损伤的影响.方法:采用Pulsinelli等的方法建立大鼠急性全脑缺血/再灌注模型.将Wistar大鼠随机分为三组,即:对照组(Control)、缺血/再灌注组(I/R)、川芎嗪+缺血/再灌注组(TEP+I/R),分别测定各组肺功能(PaO2、PaCO2),肺系数(LI%)、血浆和肺组织中与自由基有关物质的含量.结果:川芎嗪可有效改善脑缺血/再灌注后肺功能,减轻肺水肿,减少胞浆酶的漏出,增加自由基清除酶的活性,抑制组织脂质过氧化的发生.结论:川芎嗪对脑缺血/再灌注后肺损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧自由基和膜保护作用有关.
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热应激对大鼠在体心肌缺血/再灌注性心律失常及抗氧化酶的影响
目的:探讨热应激对大鼠在体心肌缺血/再灌注性心律失常及抗氧化酶的影响.方法:大鼠热应激后,建立心肌缺血/再灌注损伤模型,观察大鼠在缺血5 min、10 min和再灌注10 min、20 min和30 min后心律失常发生情况,动态Ⅱ导联心电图监测室性早搏(PVB)、室性心动过速(VT)及心室颤动与扑动(VF)的发生率和血中超氧化物歧化酶(SOD)活性、活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)含量的变化.结果:热应激预处理后,缺血10 min时,能明显改善PVB的发生率(P＜0.01);可明显减少再灌注10 min和20 min时VT、VF(P＜0.01)的发生率;能明显提高再灌注10 min时血中SOD活性(P＜0.01),降低MDA和ROS的含量(P＜0.01).结论:热应激预处理能明显降低大鼠在体心肌缺血/再灌注性心律失常的发生率,可提高血中SOD活性,降低MDA扣ROS的含量.
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大鼠肢体缺血/再灌注后的心肌损伤和NO的保护效应
目的:探讨大鼠肢体缺血/再灌注(LI/R)后心肌的损伤性变化及NO的保护效应.方法:制备LI/R动物模型,将Wistar大鼠随机分为4组(n=10):C(control)组、I/R组、L-Arg组和L-NAME组.用生物化学方法测定大鼠血浆CK、CK-MB及NO水平,测定心肌组织XOD、SOD、MDA含量.用BL-420生物机能实验系统监测大鼠MAP、LVSP、±dp/dtmax等.结果:LI/R后,血浆CK、CK-MB水平均明显升高(P＜0.01);心肌组织SOD活性降低而MDA、XOD含量增加(P＜0.01或P＜0.05);MAP、LVSP、dp/dtmax、-dp/dtmax均降低(P＜0.01或P＜0.05);血浆NO水平在L-Arg组明显升高(P＜0.01),在L-NAME组显著降低(P＜0.05).结论:大鼠LI/R可引起心肌损伤,机体的氧化应激状态可能是其发生机制之一;提高体内NO水平可在一定程度上减轻LI/R后心肌损伤的程度.
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Cariporide和还原型谷胱甘肽药物后适应对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用
目的:观察钠氢交换阻断剂cariporlde和抗氧化剂还原型谷胱甘肽(GSH)建立的药物后适应对心肌缺血/再灌注损伤的保护效应.方法:建立在体大鼠心肌缺血/再灌注模型,观察不同实验组间心梗面积和心肌酶学变化.结果:cariporide和GSH药物后适应可以减小心肌梗死面积,降低血浆磷酸肌酸激酶(CK)及丙二醛(MDA)的含量.结论:在心肌再灌注的开始,一次性给予钠氢交换阻断剂cariporide或抗氧化剂GSH,可减轻缺血/再灌注损伤,是两种有效的药物后适应干预.
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异丙酚对局灶性脑缺血/再灌注星形胶质细胞GFAP表达的影响
目的:探讨异丙酚对局灶性脑缺血/再灌注后星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法:大脑中动脉插线法制作大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型.观察脑缺血2 h再灌注24 h后神经功能损害改变并评分,并采用免疫荧光组织化学法检测大鼠齿状回GFAP蛋白的表达.结果:缺血/再灌注后可诱导大鼠齿状回GFAP表达明显增强,异丙酚可抑制缺血/再灌注后GFAP的表达,明显改善大鼠神经功能损害(P<0.05或0.01).结论:异丙酚通过抑制脑缺血后星形胶质细胞GFAP的过度表达发挥抗脑缺血损伤保护神经元作用.
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缺血后适应对局灶性脑缺血/再灌注大鼠p38表达的影响
目的:探讨缺血后适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后p38表达的影响.方法:将30只雄性SD大鼠随机分为3组(n=10):假手术组(sham组)、缺血/再灌注(I/R)组和缺血后适应(IP)组.利用TUNEL法观察神经细胞凋亡的变化,应用Western blot检测大鼠局灶性脑I/R损伤后p38蛋白表达水平的变化.结果:大鼠脑缺血/再灌注后凋亡细胞数量和p38蛋白表达水平均显著升高,而IP组凋亡细胞敷量和p38蛋白表迭水平均显著低于IR组(P<0.01).结论:缺血后适应可抑制大鼠脑缺血/再灌注后细胞凋亡的发生,此作用可能与下调p38蛋白表达有关.
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促红细胞生成素通过JNK通路对再灌注损伤肺细胞凋亡的影响
目的:探讨促红细胞生成素(EPO)后处理是否通过抑制C-Jun氨基末端激酶(JNK)活化来减轻再灌注损伤肺细胞的凋亡.方法:雄性SD大鼠40只,随机分成5组(n=8):对照组(C组)、肺缺血/再灌注组(I/R组)、促红细胞生成素干预组(EPO组)、促红细胞生成素+溶剂对照组(P组)、促红细胞生成素+ SP600125组(SP组).各组分别于再灌注2h留取左肺组织,电镜检测超微结构损伤;免疫组化法测定Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果:与C组相比,I/R组肺组织超微结构损伤明显,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P＜0.01);EPO组、P组、SP组与I/R组相比,组织损伤有所减轻,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显升高,Bax蛋白表达明显降低(P＜0.01);SP组与EPO组相比,组织损伤明显减轻,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显升高,Bax蛋白表达明显降低(P＜0.01).结论:I/R通过激活JNK导致大鼠肺泡结构严重破坏,肺内细胞大量凋亡;EPO可通过抑制JNK的激活而减轻I/R损伤.
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一种用于研究骨骼肌缺血/再灌注损伤的细胞模型
目的:复制L-6TG大鼠肌母细胞缺血/再灌注损伤的细胞模型.方法:将培养的L-6TG大鼠肌母细胞随机分为2组:①正常对照组(C组),②缺血/再灌注组(I/R组),观测了培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、Ca2+含量的变化;采用MTT法检测线粒体的功能;在光镜下观察细胞的形态学改变.结果:与对照组相比,L-6TG大鼠肌母细胞IR 4h后培养上清中LDH、细胞内XOD、Ca2+含量明显增加,细胞内SOD及线粒体呼吸功能明显降低,细胞严重受损,明显圆缩,并有脱落现象.结论:应用模拟缺血液和再灌液可成功复制L-6TG大鼠肌母细胞缺血/再灌注损伤的细胞模型.
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茶多酚通过下调JNK磷酸化抑制心搏骤停大鼠的神经细胞凋亡
目的 探讨茶多酚(TP)对心搏骤停(CA)大鼠心肺复苏(CPR)后脑组织c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)磷酸化和凋亡相关因子表达的影响.方法 按随机数字表法将健康雄性SD大鼠分为假手术(Sham)组(n=6)、CA组(n=12)、TP组(n=12).CA组和TP组经食道交流电刺激诱发心室纤颤(室颤), CA 5 min后行CPR,待自主循环恢复(ROSC)后即刻分别静脉注射10 mg/kg生理盐水(CA组)或TP(TP组),于ROSC后12、72h各取6只大鼠脑皮质备检;Sham组不诱导室颤,于72h取脑皮质备检.采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测脑组织磷酸化JNK1/2(p-JNK1/2)、JNK1/2、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (caspase-3)及凋亡基因Bax、Bcl-2的表达;原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况;免疫荧光双染检测p-JNK/TUNEL双阳性细胞数.结果 与Sham组比较,CA组脑组织JNK磷酸化水平增高,caspase-3、Bax表达增加,Bcl-2表达降低,ROSC 72h镜下观察凋亡细胞明显增多.与CA组比较,TP组ROSC后12、72h JNK磷酸化水平明显下降(p-JNK1/2与JNK1/2比值:3.200±0.060比5.700±0.210,1.400±0.060比5.400±0.090,均P<0.05),caspase-3、Bax表达明显下调〔caspase-3(灰度值):42.00±5.23比54.00±7.84, 38.74±4.60比58.68±7.19;Bax(灰度值):38.04±6.21比68.76±6.08,58.84±7.99比70.03±7.36,均P<0.05〕, Bcl-2表达明显上调(灰度值:37.36±3.11比28.47±7.46,48.78±6.55比29.54±3.13,均P<0.05),72h细胞凋亡率明显降低〔(31.14±4.51)%比(45.87±3.95)%,P<0.01〕,p-JNK/TUNEL双阳性细胞与TUNEL细胞比值明显降低(10.00±0.85比52.70±3.05,P<0.01).结论 TP抑制CA大鼠CPR后的神经细胞凋亡与其抑制JNK1/2磷酸化有关.
