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2009年-2011年长沙地区禽流感分布情况监测分析
目的:为做好人感染高致病性禽流感疫情防控工作,在长沙地区选点进行高致病性禽流感病毒(HPAIV)核酸监测,了解其在环境中的分布状况,及时发现人禽流感疫情.方法:2009年至2011年从长沙地区选择3类环境监测点(家禽规模养殖场、家禽屠宰加工厂、城乡活禽市场),共采集环境标本335份,采用荧光PCR方法检测环境标本 (污水、禽类粪便和笼具涂抹)禽流感病毒及其H5亚型病毒核酸.结果:2009、2010、2011年 3年禽流感病毒核酸阳性率平均为42.91%,H5亚型核酸阳性率31.23%,无显著性差异,基本持平,3年中城乡活禽市场高致病性禽流感病毒H5亚型核酸阳性率为高37.70%,其次为家禽屠宰加工厂和家禽规模养殖场,阳性率分别为26.98%和 7.69%;335份环境标本中检出142份禽流感病毒(AIV)核酸阳性,阳性率为42.39%;106份H5亚型AIV阳性,阳性率31.64%;不同环境标本H5亚型AIV标本检出率不同,其中污水标本阳性率高,阳性率56.84%,高于粪便和笼具涂抹样本的阳性率.不同季节高致病性禽流感病毒H5亚型核酸阳性检出率也不同,第一季度的阳性率高,为50.00%,第三季度低为24.17%.结论:长沙地区环境中存在较多的高致病性禽流感病毒H5亚型,应引起高度重视,各监测点应加强其所在场所的环境清理与消毒,减少人禽流感疫情发生的机会.
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酸性氧化电位水对两种严重致病性畜禽病毒灭活效果的研究
目的 研究酸性氧化电位水(EOW)对两种严重致病性畜禽病毒的灭活效果,为畜禽养殖场消毒应用提供依据.方法 采用鸡胚和细胞培养法,对酸性氧化电位水灭活悬液内甲型H5N1高致病性禽流感病毒和猪蓝耳病毒(PRRSV)的效果进行实验室观察.结果 用含有效氯10～ 50 mg/L的具有不同pH值的两种EOW作用1 min,均可有效灭活悬液内甲型H5N1高致病性禽流感病毒,灭活对数值(EID5o) ＞4.00.在相同的作用条件下,亦可有效灭活悬液内PRRSV,灭活率达100％.结论 含有效氯10 mg/L以上的酸性氧化电位水,可快速灭活悬液内甲型H5N1禽流感病毒和猪蓝耳病毒.
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医院收治高致病性禽流感病人消毒管理与感染控制措施
铜陵市人民医院是三级甲等综合性医院,医院感染组织管理和各项制度健全.该院于2005年11月收治1例高致病性禽流感病人,医护人员从未接触过禽流感病人,对其从诊断、治疗到感染预防控制均没有经验的情况下,医院感染管理专职人员为预防高致病性禽流感出现医院感染的可能性,开展了一系列行之有效的消毒和防控措施.
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甲型H1N1流行性感冒疫情暴发的思考
近年来,传染病的"新现"(emergency)与"再燃"(re-emergency)已经逐渐凸显为为重要的公共卫生问题之一.在亚洲,H5N1高致病性禽流感病毒间或性地感染人群、造成病例死亡,并出现人间传播病例,不仅重创了当地的禽类养殖业和旅游业,更引发社会普遍的恐慌;在东部非洲,由于雨季时间延长,使得裂谷热病毒疫情再次上升,更重要的是病毒通过当地的伊斯兰教朝觐者逐渐向中东地区传播,沙特阿拉伯和也门相继报告了确诊病例;在南美洲,黄热病病例的分布范围不断扩大,促使整个大洲不得不共同协调进行监测,同时实施大规模的疫苗接种项目以避免疾病的进一步扩散;在欧洲,蓝舌病病毒的新变种BTV-8使得原本仅存在于南欧的蓝舌病逐渐向北欧蔓延,不仅严重危害家畜养殖,同时也引发了这种改变是由于病毒本身的变异抑或是媒介昆虫改变所导致的新讨论.
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抗H5亚型禽流感病毒单链抗体在毕赤酵母中的分泌型表达和生物活性分析
在本实验室研制出的多株针对H5N1亚型禽流感血凝素单抗中,13D4单抗对所有H5亚型病毒均有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强和识别广的特点,且在小鼠实验中显示了对各种代表株禽流感的感染和发病均具有良好的治疗效果.在此研究基础上,本实验通过基因工程构建含有13D4单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达和纯化.经过竞争法和血凝抑制检测其活性,表明获得的单链抗体具有与原始鼠源抗体相近的反应活性和相同的识别表位.H5N1广谱中和单抗13D4的单链抗体的成功构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础.
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植物内生菌抗病毒活性成分的研究进展
自从1993年首次从短叶红豆杉的韧皮部分分离到一株产紫杉醇的内生真菌后,研究者就开始不断地从内生菌中分离出各种活性代谢产物[1],这其中就包括抗病毒活性代谢产物.乙型肝炎病毒、甲型H1N1和H5N1型高致病性禽流感病毒、人类免疫缺陷病毒( HIV)和严重急性呼吸综合征病毒( SARS-CoV)等引起的病毒性传染病,对人类的健康产生巨大的影响.抗病毒药物已成为全世界新药研发的一个重要课题[2].植物内生菌的次生代谢产物是可以重复利用的资源,可以通过菌种诱变、培养条件改变以及代谢调控等手段进行目标产物的优化,因而在药物研发中发挥了巨大的作用.本文着重论述了国内外新近发现的抗病毒化合物,并按照化学结构官能团进行了如下分类.
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M2蛋白疫苗作为流感广谱疫苗的研究进展
2003年以来,H5N1亚型高致病性禽流感病毒先后在几十个国家暴发,其中有14个国家发现人感染禽流感的病例,甚至出现死亡的情况.时隔不久,2009年3月甲型H1N1流感在墨西哥暴发,这个病毒具有很强的传染性,短时间内在全球迅速蔓延,给世界各国带来了恐慌.
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中国大陆H5N1亚型人禽流感流行病学分析
人高致病性禽流行性感冒,简称人禽流感(hu-man avian influenza),是由禽甲型流感病毒中某些亚型毒株突破种属感染人而引起的一种急性呼吸道传染病.目前常见的亚型有H5N1、H7N7和H9N2,其中以H5N1毒性强.自1997年中国香港首次发现人感染高致病性禽流感病毒H5N1病例以来,目前已有15个国家和地区发生了人禽流感病例.本文在对全球人禽流感流行状况调研的基础上,重点对国内2003～2009年1月中国大陆人禽流感流行状况进行分析.
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流式细胞术检测HPAIV感染小鼠外周血白细胞表面CD54及其受体的表达
目的 研究外周血白细胞表面CD54及其受体CD11 b/CD18在小鼠高致病性禽流感病毒(HPAIV)感染中的作用.方法 18-20 g普通健康昆明小鼠60只,随机分为实验组(HPAIV)和对照组,应用荧光标记的抗小鼠CD54CD11 b、CD18单抗,采用全血直接免疫荧光流式细胞术,对不同时相实验组和对照组小鼠外周血白细胞表面粘附分子(adhesion molecules,AMS) CD11 b、CD18、CD54的表达含量进行测定.结果 实验组小鼠外周血白细胞表面CD11 b、CD18、CD54的阳性细胞百分率(PPC)和/或平均荧光强度(MFI)与对照组比较普遍上调:(P＜0.05或P＜0.01).结论 AMS在HAIV感染中发挥了重要作用.
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HPAIV感染小鼠外周血白细胞表面CD54及其受体的检测
目的研究外周血白细胞表面CD54及受体CD11b/CD18在小鼠高致病性禽流感病毒(highlypathogenic avian influenza virus,HPAIV)感染中的作用.方法18～20 g普通健康昆明小鼠60只,随机分为实验组和对照组,应用荧光标记的抗小鼠CD54、CD11b、CD18单抗,采用全血直接免疫荧光流式细胞术,对不同时相实验组和对照组小鼠外周血白细胞表面粘附分子(adhesion molecules,AMS)CD11b、CD18、CD54的表达含量进行测定.结果实验组小鼠外周血白细胞表面CD11b、CD18、CD54的阳性细胞百分率(PPC)和/或平均荧光强度(MFI)与对照组比较普遍上调(P＜0.05或P＜0.01).结论AMS在HPAIV感染中发挥了重要作用.
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人感染高致病性禽流感病毒A/Fujian/1/2007(H5N1)株基因组序列测定及分析
目的 对福建省分离的高致病性禽流感病毒A/Fujian/1/2007(H5N1)株进行全基因组序列测定,了解病毒序列及进化特征.方法 SPF鸡胚分离法分离A/Fujian/1/2007(H5N1)株病毒,并提取病毒RNA.病毒RNA经通用引物逆转录后,应用特异性引物分别扩增病毒各节段,产物经TA克隆到载体中进行测序并对结果进行排列、拼接成完整的病毒基因组.分析病毒重要位点特征,并参照已发表的病毒序列,对A/Fujian/1/2007(H5N1)株作系统进化分析.结果 应用自行设计的引物,扩增并获得完整的A/Fujian/1/2007(H5N1)株基因组序列.病毒重要位点的分析表明,该株病毒为禽源高致病性禽流感病毒,病毒对达菲敏感而对金刚烷胺类药物则具有耐药性.病毒特征有待进一步的生物学验证.系统进化分析显示,在亚洲各国引起人类感染的高致病性禽流感病毒具有明显的地理分布特征,A/Fujian/1/2007(H5N1)病毒与国内以往毒株属同一进化分支.结论 获得人感染高致病性禽流感病毒A/Fujian/1/2007株全基因组序列,了解病毒重要的氨基酸位点特征以及亚洲人感染病毒间的亲缘关系,为进一步探讨福建省禽流感病毒变异、传播机制等奠定基础.
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高致病性禽流感病毒血凝素基因定点突变及其原核表达
目的改构高致病性禽流感病毒血凝素基因,建立有效的原核表达体系.方法利用位点特异PCR突变技术同义突变HA1基因中的稀有密码子,将改构的HA1基因克隆到pGEX-4T-1载体中建立4T-1-HA1-m+重组表达质粒,然后转入E.coli BL21 DE3中并用IPTG诱导表达HA1-GST融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测目的蛋白,Western印迹分析表达产物的免疫活性.结果改构的HA1基因能够在大肠埃希菌中有效表达,表达产物能与H5N1亚型高致病性禽流感病毒免疫鼠血清特异性结合.结论提示高致病性禽流感病毒血凝素基因经位点特异PCR突变技术改构后,可以在大肠埃希菌中表达出有免疫活性的血凝素蛋白.
